Submitted by Pedro Silva Filho (pfsilva@ipen.br) on 2017-11-22T13:29:20Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2017-11-22T13:29:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Diabrotica speciosa (Germar, 1824), causa danos diretos por alimentação e indiretos como vetor de vírus para diversos grupos de plantas. A principal forma de controle são os agroquímicos, portanto visando o manejo populacional sem impacto ambiental, o presente trabalho teve como objetivo determinar a dose de radiação gama que proporciona a esterilidade de machos, o seu consumo foliar e as alterações histológicas em suas gônadas. Os adultos foram submetidos à radiação gama (60Co) no terceiro dia após a emergência nas doses de 0, 25, 50, 75 e 100 Gy a uma taxa de 0,808 KGy/hora, totalizando 20 repetições/ dose. A dose esterilizante baseou-se na fertilidade de fêmeas sexualmente maduras acasaladas por machos irradiados. Os casais foram individualizados em \"arenas\" e alimentados com folíolos de feijão (Phaseolus vulgaris L.) com gaze preta umedecida para oviposição. Os ovos foram tratados e dispostos em recipientes plásticos forrados com papel de filtro. Após a eclosão, as larvas foram transferidas para um recipiente maior com tampa telada contendo vermiculita fina e plântulas de milho (Zea mays L.) que foram substituídas a cada 10 dias, até a emergência do adulto. Após o 4º dia de irradiação disponibilizou-se um disco foliar de 3,2 cm de diâmetro por 24 horas, para cada casal. Os discos foram digitalizados e analisados no software ImageJ. Para avaliação das gônadas foram utilizados 3 machos por dose com 8 dias de idade dissecados em PBS e através da técnica de Hematoxilina Eosina as laminas foram avaliadas em microscópio óptico. Verificou-se que a esterilidade dos machos ocorreu a partir de 75 Gy e sua longevidade média foi de 12,5 dias. O consumo da área foliar dos casais constituídos por um macho estéril foi de 42,9% e a analise histológica testicular demonstrou desorganização nos tecidos e lacunas entre as células germinativas nas maiores doses de 75 Gy e 100 Gy. / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

O presente trabalho teve como objetivos verificar os efeitos da radiação gama em grãos de milho contaminados artificialmente com Aspergillus flavus Link produtor de aflatoxinas; demonstrar a aplicação da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) no diagnóstico de A. flavus, bem como verificar o efeito da radiação no perfil das bandas de DNA. Vinte amostras de grãos de milho com 200 g cada foram irradiadas individualmente com 20 kGy, para eliminar a contaminação microbiana. Em seguida, as amostras foram inoculadas com A. flavus toxigênico (1 x 106 esporos / ml), incubadas por 15 dias a 25 °C em ambiente com umidade relativa ao redor de 97,5% e irradiadas com 0; 2; 5 e 10 kGy. As amostras, 5 para cada dose de irradiação, foram analisadas individualmente quanto ao número de células fúngicas, atividade de água, teste de viabilidade (diacetato de fluoresceína e brometo de etídio), PCR e detecção de aflatoxinas (AFB). Os resultados demonstraram que as doses utilizadas foram efetivas na redução do número de Unidades Formadoras de Colônias (UFC/g), principalmente as doses de 5 e 10 kGy. Em adição, o teste de viabilidade mostrou uma diminuição de células viáveis com o aumento das doses de irradiação. A redução de AFB1 e AFB2 foi mais eficiente com o emprego de 2 kGy, comparativamente à dose de 5 kGy, enquanto a dose de 10 kGy degradou totalmente as aflatoxinas. Além disso, observou-se que AFB2 apresentou-se mais radiosensível. O emprego da técnica de PCR revelou a presença de bandas de DNA em todas as amostras. / The aim of this present study was to verify the effects of gamma radiation on the growth of Aspergillus flavus Link aflatoxins producer; to demonstrate the application of Polymerase Chain Reaction (PCR) technique in the diagnostic of A. Flavus, as well to verify the effect of radiation in the profile of DNA bands. Twenty samples of grains maize with 200 g each were individually irradiated with 20 kGy, to eliminate the microbial contamination. In following, the samples were inoculated with an toxigenic A. flavus (1x106 spores/ml), incubated for 15 days at 25 °C with a relative humidity of around 97,5% and irradiated with 0; 2; 5 and 10 kGy. The samples, 5 to each dose of irradiation, were individually analyzed for the number of fungal cells, water activity, viability test (fluorescein diacetate and ethidium bromide), PCR and aflatoxins (AFB) detection. The results showed that the doses used were effectives in reducing the number of Colony Forming Units (CFU/g) mainly the doses of 5 and 10 kGy. In addition, the viability test showed a decrease of viable cells with increase of irradiation doses. The reduction of AFB1 and AFB2, was more efficient with the use of 2 kGy in comparison with the dose of 5 kGy, while the dose of 10 kGy, degraded the aflatoxins. Thereby, it was observed that AFB2 showed to be more radiosensitive. The use of PCR technique showed the presence of DNA bands, in all samples

O presente estudo analisou os efeitos da radiação gama na sobrevivência de fungos em plantas medicinais embaladas, adquiridas do comércio atacadista e varejista, em diferentes períodos (0 e 30 dias) após o tratamento por irradiação. Cinco tipos de plantas medicinais [Peumus boldus, Cameilia sinensis, Maytenus ilicifolia, Pauilinia cupana and Cássia angustifolia), foram coletadas de diferentes municípios do Estado de São Paulo e submetidas ao tratamento por irradiação, utilizando-se uma fonte 60Co (tipo Gammacell 220), com doses de 5,0 kGy e 10 kGy e taxa de dose de 3,0 kGy/h. Amostras não irradiadas (grupo controle) foram usadas na contagem de fungos e diluições seriadas de 10-1 a 10-6 das amostras foram semeadas em duplicata e plaqueadas usando o método de cultura em superfície, em ágar Dicloran Glicerol 18% (DG18) e contadas após cinco dias a 25°C. O grupo controle revelou a presença dos gêneros Aspergilius e Penicillium, os quais são conhecidos como fungos toxigênicos e poucas amostras do grupo controle estavam dentro dos limites seguros, estabelecidos pela Organização Mundial de Saúde (OMS, 1998) para plantas medicinais. Em resposta a resistência do tratamento por ionização, na dose de 5 kGy, foi obsen/ado que os gêneros Aspergilius, Piioma e Syncephalastrum foram radiorresistentes, após o processo (dia 0 e 30° dia). O tratamento por radiação gama foi efetivo na descontaminação de todas as amostras de plantas medicinais, após 30 dias, com a dose de 10 kGy e mantidas em condições de vedação. Não foram detectadas aflatoxinas nas amostras do grupo controle, ainda que estas amostras estivessem intensamente contaminadas com Aspergilius flavus. / This present study evaluated the effect of gamma radiation on the fungal survival in packed medicinal plants, purchased from wholesale and retail market, in different period (0 and 30 days) after the treatment. Five kind of medicinal plants (Peurnus boldus, Camellia sinensis, Maytenus ilicifolia, Pauilinia cupana and Cassia angustifolia), were collected from different cities of São Paulo State, and submitted to irradiation treatment using a 60Co source (type Gammacell 220) with doses of 5,0 kGy and 10 kGy and at dose rate of 3.0 kGy/h. Non-irradiated samples (control group) were used for fungal counts and serial dilutions from 10-1 to 10-6 of the samples were seeded in duplicates and plated using the surface culture method in Dichloran 18% Glycerol Agar (DG 18) and were counted after five days at 25°C. The control group revealed the presence of genera Aspergillus and Penicillium, which are known as toxigenic fungi and a few samples of control group were within the safety limits of World Health Organization (WHO, 1998) to medicinal plants. In response to resistance of ionizing treatment, in the dose of 5 kGy, it was obsen/ed that the genera Aspergillus, Phoma and Syncephalastrum were radio-resistant after the process (day 0 and 30° day). The treatment by gamma radiation was effective in decontamination of all irradiated samples of medicinal plants, after 30 days, with the dose of 10 kGy and kept of veiled conditions. It was not detected aflatoxins in samples of control group, even though these samples were heavily contaminated with Aspergillus flavus.

A Doença de Chagas é um dos maiores problemas de saúde pública na América do Sul causando um elevado prejuízo à população. A despeito dos inúmeros esforços para o seu controle, a doença não tem cura e apresenta problemas científicos ainda não esclarecidos. Considerando-se que vários pesquisadores têm usado a radiação ionizante para modificar protozoários ou propriedades imunológicas de biomoléculas, neste trabalho foram estudados aspectos da resposta imunológica induzida em camundongos, resistentes e suscetíveis ao T. cruzi, utilizando formas irradiadas deste parasita. Doses baixas de radiação preservaram a capacidade reprodutiva e de invasão celular. Animais resistentes e suscetíveis, imunizados com os parasitas tratados por radiação, produziram anticorpos específicos. Após o desafio, os animais apresentaram baixa parasitemia, com exceção dos grupos imunizados com parasitas que receberam apenas altas doses de radiação. A seleção de formas tripomastigotas foi obtida irradiando-se os parasitas com baixas doses, o que promoveu aprimoramento da qualidade da resposta imune, a exemplo do que se observa quando da utilização de complemento. Estes dados evidenciam a importância da seleção das formas tripomastigotas para a imunização contra o T. cruzi e apontam a radiação ionizante como alternativa para este fim, uma vez que quando a seleção é feita utilizando-se complemento, depara-se com a dificuldade de sua remoção, colocando em risco o processo de imunização por introduzir substancias estranhas ao organismo. / Chagas\'s disease is one of the major public health problems in South America, promoting high prejudice to the local population. Despite the massive efforts to control it, this disease has no cure and presents puzzling unsolved questions. Considering that many researchers have used ionizing radiation to modify protozoans or biomolecules, we investigated the immunological response aspects of susceptible and resistant mice using irradiated parasites. Low radiation doses preserved the reproductive and invasive capacities of the parasite. Both susceptible and resistant animals, after immunization with irradiated parasites produced specific antibodies. After a challenge, the animals presented low parasitaemia, excepting those immunized with the antigen irradiated with higher doses. Using low radiation doses, we were able to selectively isolate trypomastigotes, leading to an improvement in the quality of the immune response, as previously reported when performing complement system assays. These data highlight the importance of selecting trypomastigote forms for immunization against T. cruz; and point towards ionizing radiation as an alternative to achieve this selection, since when this procedure is performed using complement, the subsequent steps are impaired by the difficulties to remove this component from the system.

Neste estudo, foi determinado o dano celular em linfócitos periféricos após exposição ao 153Sm-EDTMP (Samário-153 etilenodiaminotetrametilenofosfonato) por meio da técnica de análise de micronúcleos e coloração diferencial. O 153Sm-EDTMP é um radiofármaco utilizado para alívio da dor em pacientes com metástase óssea. A análise da freqüência de micronúcleos em amostras sangüíneas de pacientes obtidas uma hora após a administração endovenosa do radiofármaco (41 MBq/kg) mostrou que não houve diferença estatística em relação aos valores basais em células binucleadas. Porém, a análise da distribuição do dano em células mononucleadas mostrou que os pacientes sem tratamento radioterápico prévio apresentaram um aumento significativo na freqüência de células com um micronúcleo e aqueles com tratamento radioterápico prévio, nas células com dois ou mais micronúcleos. Os experimentos in vitro realizados com exposição de sangue total a três concentrações radioativas de 153Sm-EDTMP (0,370; 0,555 e 1,110 MBq/mL) por uma hora mostraram um aumento na freqüência de micronúcleos e de células necróticas e apoptóticas com o aumento da dose de radiação. Foram construídas curvas dose-resposta para os indivíduos sadios e para os pacientes com metástases óssea sem prévio tratamento radioterápico. A comparação das curvas mostrou que os pacientes apresentaram uma radiossensibilidade mais alta que os indivíduos sadios tanto quanto a porcentagem de células com micronúcleos como de células mortas (necróticas e apoptóticas). / In this study the cellular damage in peripheral lymphocytes after exposure to 153Sm-EDTMP (Samarium-153 ethylenediaminetetrametylenephosphonate) was determined using the technique of micronuclei analysis and differential coloration. 153Sm- EDTMP is a radiopharmaceutical used for pain relief in patients with bone metastases. The analysis of the frequency of micronuclei in patient blood samples obtained one hour after endovenous administration of radiopharmaceutical (41 MBq/kg) showed no statistical difference in relation to basal values in binucleated cells. However the analysis of damage distribution in mononucleated cells, showed that the patients without previous radiotherapic treatment presented a significant increase in the frequency of cells with one micronucleus and in those who had taken previous radiotherapic treatment, in cells with two or more micronuclei. The in vitro experiments conducted with the exposition of total blood to three radiation concentrations of 153Sm-EDTMP (0.370, 0.555 and 1.110 MBq/mL) during one hour showed an increase in the frequency of micronuclei and necrotic and apoptotic cells with increasing radiation dose. Dose-response curves for healthy donors and patients with bone metastasis without previous radiotherapic treatment were constructed. The comparison of the curves showed that patients presented higher radiosensitivity, either micronuclei or dead cell (necrotic or apoptotic) percentages, than healthy donors.

O presente estudo analisou os efeitos da radiação gama na sobrevivência de fungos em plantas medicinais embaladas, adquiridas do comércio atacadista e varejista, em diferentes períodos (0 e 30 dias) após o tratamento por irradiação. Cinco tipos de plantas medicinais [Peumus boldus, Cameilia sinensis, Maytenus ilicifolia, Pauilinia cupana and Cássia angustifolia), foram coletadas de diferentes municípios do Estado de São Paulo e submetidas ao tratamento por irradiação, utilizando-se uma fonte 60Co (tipo Gammacell 220), com doses de 5,0 kGy e 10 kGy e taxa de dose de 3,0 kGy/h. Amostras não irradiadas (grupo controle) foram usadas na contagem de fungos e diluições seriadas de 10-1 a 10-6 das amostras foram semeadas em duplicata e plaqueadas usando o método de cultura em superfície, em ágar Dicloran Glicerol 18% (DG18) e contadas após cinco dias a 25°C. O grupo controle revelou a presença dos gêneros Aspergilius e Penicillium, os quais são conhecidos como fungos toxigênicos e poucas amostras do grupo controle estavam dentro dos limites seguros, estabelecidos pela Organização Mundial de Saúde (OMS, 1998) para plantas medicinais. Em resposta a resistência do tratamento por ionização, na dose de 5 kGy, foi obsen/ado que os gêneros Aspergilius, Piioma e Syncephalastrum foram radiorresistentes, após o processo (dia 0 e 30° dia). O tratamento por radiação gama foi efetivo na descontaminação de todas as amostras de plantas medicinais, após 30 dias, com a dose de 10 kGy e mantidas em condições de vedação. Não foram detectadas aflatoxinas nas amostras do grupo controle, ainda que estas amostras estivessem intensamente contaminadas com Aspergilius flavus. / This present study evaluated the effect of gamma radiation on the fungal survival in packed medicinal plants, purchased from wholesale and retail market, in different period (0 and 30 days) after the treatment. Five kind of medicinal plants (Peurnus boldus, Camellia sinensis, Maytenus ilicifolia, Pauilinia cupana and Cassia angustifolia), were collected from different cities of São Paulo State, and submitted to irradiation treatment using a 60Co source (type Gammacell 220) with doses of 5,0 kGy and 10 kGy and at dose rate of 3.0 kGy/h. Non-irradiated samples (control group) were used for fungal counts and serial dilutions from 10-1 to 10-6 of the samples were seeded in duplicates and plated using the surface culture method in Dichloran 18% Glycerol Agar (DG 18) and were counted after five days at 25°C. The control group revealed the presence of genera Aspergillus and Penicillium, which are known as toxigenic fungi and a few samples of control group were within the safety limits of World Health Organization (WHO, 1998) to medicinal plants. In response to resistance of ionizing treatment, in the dose of 5 kGy, it was obsen/ed that the genera Aspergillus, Phoma and Syncephalastrum were radio-resistant after the process (day 0 and 30° day). The treatment by gamma radiation was effective in decontamination of all irradiated samples of medicinal plants, after 30 days, with the dose of 10 kGy and kept of veiled conditions. It was not detected aflatoxins in samples of control group, even though these samples were heavily contaminated with Aspergillus flavus.

A Doença de Chagas é um dos maiores problemas de saúde pública na América do Sul causando um elevado prejuízo à população. A despeito dos inúmeros esforços para o seu controle, a doença não tem cura e apresenta problemas científicos ainda não esclarecidos. Considerando-se que vários pesquisadores têm usado a radiação ionizante para modificar protozoários ou propriedades imunológicas de biomoléculas, neste trabalho foram estudados aspectos da resposta imunológica induzida em camundongos, resistentes e suscetíveis ao T. cruzi, utilizando formas irradiadas deste parasita. Doses baixas de radiação preservaram a capacidade reprodutiva e de invasão celular. Animais resistentes e suscetíveis, imunizados com os parasitas tratados por radiação, produziram anticorpos específicos. Após o desafio, os animais apresentaram baixa parasitemia, com exceção dos grupos imunizados com parasitas que receberam apenas altas doses de radiação. A seleção de formas tripomastigotas foi obtida irradiando-se os parasitas com baixas doses, o que promoveu aprimoramento da qualidade da resposta imune, a exemplo do que se observa quando da utilização de complemento. Estes dados evidenciam a importância da seleção das formas tripomastigotas para a imunização contra o T. cruzi e apontam a radiação ionizante como alternativa para este fim, uma vez que quando a seleção é feita utilizando-se complemento, depara-se com a dificuldade de sua remoção, colocando em risco o processo de imunização por introduzir substancias estranhas ao organismo. / Chagas\'s disease is one of the major public health problems in South America, promoting high prejudice to the local population. Despite the massive efforts to control it, this disease has no cure and presents puzzling unsolved questions. Considering that many researchers have used ionizing radiation to modify protozoans or biomolecules, we investigated the immunological response aspects of susceptible and resistant mice using irradiated parasites. Low radiation doses preserved the reproductive and invasive capacities of the parasite. Both susceptible and resistant animals, after immunization with irradiated parasites produced specific antibodies. After a challenge, the animals presented low parasitaemia, excepting those immunized with the antigen irradiated with higher doses. Using low radiation doses, we were able to selectively isolate trypomastigotes, leading to an improvement in the quality of the immune response, as previously reported when performing complement system assays. These data highlight the importance of selecting trypomastigote forms for immunization against T. cruz; and point towards ionizing radiation as an alternative to achieve this selection, since when this procedure is performed using complement, the subsequent steps are impaired by the difficulties to remove this component from the system.

Neste estudo, foi determinado o dano celular em linfócitos periféricos após exposição ao 153Sm-EDTMP (Samário-153 etilenodiaminotetrametilenofosfonato) por meio da técnica de análise de micronúcleos e coloração diferencial. O 153Sm-EDTMP é um radiofármaco utilizado para alívio da dor em pacientes com metástase óssea. A análise da freqüência de micronúcleos em amostras sangüíneas de pacientes obtidas uma hora após a administração endovenosa do radiofármaco (41 MBq/kg) mostrou que não houve diferença estatística em relação aos valores basais em células binucleadas. Porém, a análise da distribuição do dano em células mononucleadas mostrou que os pacientes sem tratamento radioterápico prévio apresentaram um aumento significativo na freqüência de células com um micronúcleo e aqueles com tratamento radioterápico prévio, nas células com dois ou mais micronúcleos. Os experimentos in vitro realizados com exposição de sangue total a três concentrações radioativas de 153Sm-EDTMP (0,370; 0,555 e 1,110 MBq/mL) por uma hora mostraram um aumento na freqüência de micronúcleos e de células necróticas e apoptóticas com o aumento da dose de radiação. Foram construídas curvas dose-resposta para os indivíduos sadios e para os pacientes com metástases óssea sem prévio tratamento radioterápico. A comparação das curvas mostrou que os pacientes apresentaram uma radiossensibilidade mais alta que os indivíduos sadios tanto quanto a porcentagem de células com micronúcleos como de células mortas (necróticas e apoptóticas). / In this study the cellular damage in peripheral lymphocytes after exposure to 153Sm-EDTMP (Samarium-153 ethylenediaminetetrametylenephosphonate) was determined using the technique of micronuclei analysis and differential coloration. 153Sm- EDTMP is a radiopharmaceutical used for pain relief in patients with bone metastases. The analysis of the frequency of micronuclei in patient blood samples obtained one hour after endovenous administration of radiopharmaceutical (41 MBq/kg) showed no statistical difference in relation to basal values in binucleated cells. However the analysis of damage distribution in mononucleated cells, showed that the patients without previous radiotherapic treatment presented a significant increase in the frequency of cells with one micronucleus and in those who had taken previous radiotherapic treatment, in cells with two or more micronuclei. The in vitro experiments conducted with the exposition of total blood to three radiation concentrations of 153Sm-EDTMP (0.370, 0.555 and 1.110 MBq/mL) during one hour showed an increase in the frequency of micronuclei and necrotic and apoptotic cells with increasing radiation dose. Dose-response curves for healthy donors and patients with bone metastasis without previous radiotherapic treatment were constructed. The comparison of the curves showed that patients presented higher radiosensitivity, either micronuclei or dead cell (necrotic or apoptotic) percentages, than healthy donors.

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