The aim is to determine the importance of photoperiod for oviposition of Peruphasma schultei. The theoretical part covers common description of the reproduction and embryonic development of phasmid. Included the climatic factors affecting physiological action and brief description of the biological clock of insects. Experimental individuals were are kept in three different photoperiods with constant temperature of 25 °C. Control and collection of eggs ran at intervals of two hours. It was shown the influence of photoperiod, time and their interaction on the number of eggs and imposed the difference in putting across time.

Os indivíduos diferem em suas preferências quanto ao horário para alocar períodos de sono e de atividade. Essas diferenças inter-individuais se devem, parcialmente, ao relógio biológico que controla funções relacionadas à expressão gênica, secreção hormonal, temperatura corporal, funções cognitivas e comportamentais como o ciclo sono-vigília. O presente estudo cronobiológico teve como objetivo principal avaliar em uma amostra populacional de estudantes universitários da região sul do Brasil, a distribuição dos cronotipos e estudar a relação entre cronotipo e as seguintes variáveis: ponto médio de sono nos dias livres e nos dias de atividade (estudo), bem como avaliar a consistência interna, confiabilidade e concordância entre o Munich Chronotype Questionnaire (MCTQ) e o Questionário de Cronotipo de Horne e Östberg (HO) para identificar cronotipos. Com a análise discriminante dos parâmetros de sono para o cronotipo vespertino destaca-se a importância de se obter preditores mais fáceis para a tipologia vespertina visto que essa característica tem sido associada a alguns riscos de transtornos comportamentais e mentais. Duzentos e quarenta e quatro estudantes universitários (59.0% mulheres), com idade de 17-35 anos, foram analisados através de um estudo transvesal. O Munich ChronoType Questionnaire (MCTQ) foi usado para avaliar os parâmetros de sono nos dias livres e de trabalho (estudo) e o Morningness/Eveningness Questionnaire (MEQ) para avaliar os cronotipos. Os dados foram analisados através da curva ROC (Receiver Operating Characteristic curve) e de uma análise discriminante. As variáveis que apresentaram os mais altos coeficientes discriminantes foram: o ponto médio de sono nos dias livres (0.89) e o início do sono nos dias livres (0.86). Testando os valores de diagnóstico da fase do ponto médio de sono para identificar o tipo vespertino observou-se que a área sob a curva ROC foi de 76%. Este estudo mostrou uma boa sensibilidade e especificidade para identificar o cronotipo vespertino com esses parâmetros de sono. Conclui-se, portanto, que estes parâmetros sejam úteis para identificar o cronotipo vespertino podendo ser usados para propósitos de pesquisa e na prática clínica. / Individuals differ in their preferences to allocate the time periods of sleep and activity. These inter-individual differences are due partly to the biological clock that controls functions related to gene expression, hormone secretion, body temperature, cognitive and behavioral functions such as sleep-wake cycle. This chronobiological study aimed to evaluate a sample of university students in southern Brazil, the distribution of chronotypes and to study the relationship between chronotype and the following variables: mid- sleep on free days and days of activity (study), and to assess the internal consistency, reliability and agreement between the Munich Chronotype Questionnaire (MCTQ) and the Morningness/Eveningness Questionnaire (MEQ) of Horne and Östberg (HO) to identify chronotypes. By discriminant analysis of sleep parameters for the evening chronotype highlights the importance of obtaining easier predictors to the evening typology since such characteristic has been associated with some risks of mental and behavioral disorders.Two hundred and forty four undergraduate students (59.0% women), 17- 35 years old, were assessed in a cross-sectional study. The Munich ChronoType Questionnaire (MCTQ) was used to evaluate sleep parameters on free days and work days and the Morningness/Eveningness Questionnaire (MEQ) to assess chronotypes. The data were analyzed by the Receiver Operating Characteristic (ROC) curve and a discriminant analysis. The variables that presented the highest discriminant coefficients were mid-sleep on free days (0.89) and sleep onset on free days (0.86). Testing the diagnostic values of mid-sleep phase to identify eveningtype it was observed that the area under the ROC curve was 76%. This study showed a good sensitivity and specificity to identify the evening chronotype with these sleep parameters. We conclude that these parameters are useful to identify evening typology and can be used both to research purposes and clinical practice.

Os indivíduos diferem em suas preferências quanto ao horário para alocar períodos de sono e de atividade. Essas diferenças inter-individuais se devem, parcialmente, ao relógio biológico que controla funções relacionadas à expressão gênica, secreção hormonal, temperatura corporal, funções cognitivas e comportamentais como o ciclo sono-vigília. O presente estudo cronobiológico teve como objetivo principal avaliar em uma amostra populacional de estudantes universitários da região sul do Brasil, a distribuição dos cronotipos e estudar a relação entre cronotipo e as seguintes variáveis: ponto médio de sono nos dias livres e nos dias de atividade (estudo), bem como avaliar a consistência interna, confiabilidade e concordância entre o Munich Chronotype Questionnaire (MCTQ) e o Questionário de Cronotipo de Horne e Östberg (HO) para identificar cronotipos. Com a análise discriminante dos parâmetros de sono para o cronotipo vespertino destaca-se a importância de se obter preditores mais fáceis para a tipologia vespertina visto que essa característica tem sido associada a alguns riscos de transtornos comportamentais e mentais. Duzentos e quarenta e quatro estudantes universitários (59.0% mulheres), com idade de 17-35 anos, foram analisados através de um estudo transvesal. O Munich ChronoType Questionnaire (MCTQ) foi usado para avaliar os parâmetros de sono nos dias livres e de trabalho (estudo) e o Morningness/Eveningness Questionnaire (MEQ) para avaliar os cronotipos. Os dados foram analisados através da curva ROC (Receiver Operating Characteristic curve) e de uma análise discriminante. As variáveis que apresentaram os mais altos coeficientes discriminantes foram: o ponto médio de sono nos dias livres (0.89) e o início do sono nos dias livres (0.86). Testando os valores de diagnóstico da fase do ponto médio de sono para identificar o tipo vespertino observou-se que a área sob a curva ROC foi de 76%. Este estudo mostrou uma boa sensibilidade e especificidade para identificar o cronotipo vespertino com esses parâmetros de sono. Conclui-se, portanto, que estes parâmetros sejam úteis para identificar o cronotipo vespertino podendo ser usados para propósitos de pesquisa e na prática clínica. / Individuals differ in their preferences to allocate the time periods of sleep and activity. These inter-individual differences are due partly to the biological clock that controls functions related to gene expression, hormone secretion, body temperature, cognitive and behavioral functions such as sleep-wake cycle. This chronobiological study aimed to evaluate a sample of university students in southern Brazil, the distribution of chronotypes and to study the relationship between chronotype and the following variables: mid- sleep on free days and days of activity (study), and to assess the internal consistency, reliability and agreement between the Munich Chronotype Questionnaire (MCTQ) and the Morningness/Eveningness Questionnaire (MEQ) of Horne and Östberg (HO) to identify chronotypes. By discriminant analysis of sleep parameters for the evening chronotype highlights the importance of obtaining easier predictors to the evening typology since such characteristic has been associated with some risks of mental and behavioral disorders.Two hundred and forty four undergraduate students (59.0% women), 17- 35 years old, were assessed in a cross-sectional study. The Munich ChronoType Questionnaire (MCTQ) was used to evaluate sleep parameters on free days and work days and the Morningness/Eveningness Questionnaire (MEQ) to assess chronotypes. The data were analyzed by the Receiver Operating Characteristic (ROC) curve and a discriminant analysis. The variables that presented the highest discriminant coefficients were mid-sleep on free days (0.89) and sleep onset on free days (0.86). Testing the diagnostic values of mid-sleep phase to identify eveningtype it was observed that the area under the ROC curve was 76%. This study showed a good sensitivity and specificity to identify the evening chronotype with these sleep parameters. We conclude that these parameters are useful to identify evening typology and can be used both to research purposes and clinical practice.

Os indivíduos diferem em suas preferências quanto ao horário para alocar períodos de sono e de atividade. Essas diferenças inter-individuais se devem, parcialmente, ao relógio biológico que controla funções relacionadas à expressão gênica, secreção hormonal, temperatura corporal, funções cognitivas e comportamentais como o ciclo sono-vigília. O presente estudo cronobiológico teve como objetivo principal avaliar em uma amostra populacional de estudantes universitários da região sul do Brasil, a distribuição dos cronotipos e estudar a relação entre cronotipo e as seguintes variáveis: ponto médio de sono nos dias livres e nos dias de atividade (estudo), bem como avaliar a consistência interna, confiabilidade e concordância entre o Munich Chronotype Questionnaire (MCTQ) e o Questionário de Cronotipo de Horne e Östberg (HO) para identificar cronotipos. Com a análise discriminante dos parâmetros de sono para o cronotipo vespertino destaca-se a importância de se obter preditores mais fáceis para a tipologia vespertina visto que essa característica tem sido associada a alguns riscos de transtornos comportamentais e mentais. Duzentos e quarenta e quatro estudantes universitários (59.0% mulheres), com idade de 17-35 anos, foram analisados através de um estudo transvesal. O Munich ChronoType Questionnaire (MCTQ) foi usado para avaliar os parâmetros de sono nos dias livres e de trabalho (estudo) e o Morningness/Eveningness Questionnaire (MEQ) para avaliar os cronotipos. Os dados foram analisados através da curva ROC (Receiver Operating Characteristic curve) e de uma análise discriminante. As variáveis que apresentaram os mais altos coeficientes discriminantes foram: o ponto médio de sono nos dias livres (0.89) e o início do sono nos dias livres (0.86). Testando os valores de diagnóstico da fase do ponto médio de sono para identificar o tipo vespertino observou-se que a área sob a curva ROC foi de 76%. Este estudo mostrou uma boa sensibilidade e especificidade para identificar o cronotipo vespertino com esses parâmetros de sono. Conclui-se, portanto, que estes parâmetros sejam úteis para identificar o cronotipo vespertino podendo ser usados para propósitos de pesquisa e na prática clínica. / Individuals differ in their preferences to allocate the time periods of sleep and activity. These inter-individual differences are due partly to the biological clock that controls functions related to gene expression, hormone secretion, body temperature, cognitive and behavioral functions such as sleep-wake cycle. This chronobiological study aimed to evaluate a sample of university students in southern Brazil, the distribution of chronotypes and to study the relationship between chronotype and the following variables: mid- sleep on free days and days of activity (study), and to assess the internal consistency, reliability and agreement between the Munich Chronotype Questionnaire (MCTQ) and the Morningness/Eveningness Questionnaire (MEQ) of Horne and Östberg (HO) to identify chronotypes. By discriminant analysis of sleep parameters for the evening chronotype highlights the importance of obtaining easier predictors to the evening typology since such characteristic has been associated with some risks of mental and behavioral disorders.Two hundred and forty four undergraduate students (59.0% women), 17- 35 years old, were assessed in a cross-sectional study. The Munich ChronoType Questionnaire (MCTQ) was used to evaluate sleep parameters on free days and work days and the Morningness/Eveningness Questionnaire (MEQ) to assess chronotypes. The data were analyzed by the Receiver Operating Characteristic (ROC) curve and a discriminant analysis. The variables that presented the highest discriminant coefficients were mid-sleep on free days (0.89) and sleep onset on free days (0.86). Testing the diagnostic values of mid-sleep phase to identify eveningtype it was observed that the area under the ROC curve was 76%. This study showed a good sensitivity and specificity to identify the evening chronotype with these sleep parameters. We conclude that these parameters are useful to identify evening typology and can be used both to research purposes and clinical practice.

No ambiente marinho a maior fonte de nitrogênio encontra-se na forma de nitrato, que é reduzido para incorporação à biomoléculas como aminoácidos e bases nitrogenadas. A enzima nitrato redutase (NR), responsável pela conversão de nitrato a nitrito, é a primeira enzima a participar do processo de assimilação de nitrogênio. Gracilaria tenuistipitata é uma macroalga marinha de grande importância econômica explorada comercialmente para a produção de ágar, um ficocolóide de ampla aplicação industrial e biotecnológica. Esta alga tem seu crescimento limitado principalmente pela assimilação de nitrogênio do meio. Em trabalhos anteriores envolvendo a NR de G. tenuistipitata, foram demonstradas as oscilações diárias de sua atividade e expressão protéica. Esses ritmos permaneceram mesmo em situações de luz constante, sendo assim regulados endogenamente pelo relógio biológico. Neste trabalho procuramos seqüênciar o gene de NR nesta alga e responder se a regulação de NR também ocorria na transcrição, estudando o ritmo diário dos níveis de expressão do RNA mensageiro. Na biblioteca de cDNA de G. tenuistipitata identificamos e seqüenciamos os clones de NR por primer walking. Utilizando os mesmos primers desenhados, seqüenciamos também o gene da NR, que não apresenta introns. Esta é a primeira descrição na literatura de uma NR sem introns e também do gene NR de algas vermelhas. Observamos a oscilação diária da expressão do RNA mensageiro de NR. Esses dados nos permitem concluir que a regulação de NR em G. tenuistipitata também ocorre durante a expressão deste gene. Em condições normais de claro-escuro há uma expressão basal de NR que pode ser atribuída a existência de dois genes de NR, um constitutivo e outro regulado; ou ainda a um único gene que tem sua expressão basal induzida. / In the marine environment, the major source of nitrogen is nitrate, which must be reduced before incorporation into organic compounds, such as amino acids and nitrogen bases (purines and pyrimidines). The first enzyme that participates in the nitrogen assimilation process is nitrate reductase (NR), which is responsible for the conversion of nitrate to nitrite. Gracilaria tenuistipitata is a marine macroalga with a great economic importance, harvested for the production of agar, which has many uses in products from industry and biotechnology. Nitrogen is the limiting macronutrient of this alga\'s growth. The previous biochemical characterization for NR in this alga demonstrated a dial oscillation of activity and protein expression. These rhythms have been conserved in the situation of continuous light being regulated by the biological clock. For a better understanding of the regulation of NR, we sequenced the NR gene and studied the genetic regulation of NR mRNA expression. In a cDNA library of G. tenuistipitata, we identified and sequenced the NR clones, using the primer walking methodology. Using the same primers we also sequenced the gene that did not show introns. This is the first description in the literature of a NR gene for red algae and also of intron absence in NR genes. A rhythm for NR mRNA expression was observed in a period of 24h. In conclusion NR expression is also regulated at the transcription level. There is a basal expression of the NR gene that could be related to two hypotheses: two NR genes, one constitutive and another regulated, or only one NR gene, which is continuously translated having, however, its expression regulated and enhanced.

Submitted by Cristiane Chim (cristiane.chim@ucpel.edu.br) on 2018-08-08T12:13:43Z No. of bitstreams: 1 Louise Halla Reydams.pdf: 1479930 bytes, checksum: dbeb9959b561b6b01f81682d8d0dd3b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-08T12:13:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Louise Halla Reydams.pdf: 1479930 bytes, checksum: dbeb9959b561b6b01f81682d8d0dd3b9 (MD5) Previous issue date: 2018-04-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES# / #2075167498588264571# / #600 / Substance use disorder is related to numerous mental and physical health problems, associated with several functional impairments that affect several aspects of the life of the individual with the disorder. The objective of this study was to evaluate the relationship between psychoactive substances and biological rhythm in a community sample of young people. It is a cross-sectional population-based study with adults aged 24 to 30 years living in the urban area of the city of Pelotas, RS. The sample selection was performed by multi-stage conglomerates. Socio-demographic data were collected from the sample and substance abuse or dependence was assessed through the Alcohol, Smoking and Substance Involvement Screening Test (ASSIST), as well as the biological rhythm was evaluated through the Biological Rhythm Interview of Assessment Neuropsychiatry (BRIAN). A total of 1241 subjects were evaluated. The prevalence of substance use disorders in the sample was as follows: alcohol 14.1% (n=175), tobacco 30.8% (n=382), cannabis 10.5% (n=130), cocaine/crack 8.4% (n=104) and other psychoactive substance use disorder 9.2% (n=114). In the model of linear regression adjustment, alcohol use disorder was able to predict change in sleep/social pattern (p<0.001), activity (p=0.024), eating pattern (p=0.049) and overall rhythm (p<0.001). Other psychoactive substance use disorder was also predictive of changes in the sleep/social pattern (p <0.001), activity (p<0.001), eating pattern (p<0.001) and overall rhythm (p<0.001). Our findings suggest that individuals with alcohol and other psychoactive use disorders presented greater changes in sleep/social patterns, activity and food patterns, as well as greater disruptions in maintaining the overall biological rhythm. / O transtorno por uso de substâncias está relacionado a inúmeros problemas de saúde mental e física, associado a diversos prejuízos funcionais que afetam diversos aspectos da vida do indivíduo portador do transtorno. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre substâncias psicoativas e ritmo biológico em uma amostra comunitária de jovens. Trata-se de um estudo transversal de base populacional com adultos de 24 a 30 anos de idade residentes da zona urbana da cidade de Pelotas-RS. A seleção amostral foi realizada por conglomerados com múltiplos estágios. Foram coletados dados sócio-demográfico da amostra e o abuso ou dependência de substâncias foi avaliado através do Alcohol, Smoking and Substance Involvement Screening Test (ASSIST), bem como o ritmo biológico foi avaliado através da Biological Rhythm Interview of Assessment Neuropsychiatry (BRIAN). Foram avaliados 1241 sujeitos. As prevalências de transtornos por uso de substâncias na amostra foram as seguintes: álcool 14,1% (n=175), tabaco 30,8% (n=382), cannabis 10,5% (n=130), cocaína/crack 8,4% (n=104) e uso de outra substância psicoativas 9,2% (n=114). No modelo de ajuste por Regressão Linear, transtorno por uso de álcool foi capaz de predizer mudança no padrão de sono/social (p<0,001), atividade (p=0,024), alimentação (p=0,049) e ritmo global (p<0,001). Além disso, o transtorno por uso de outras substâncias psicoativas também foi capaz de predizer mudanças no padrão de sono/social (p<0,001), atividade (p<0,001), alimentação (p<0,001) e ritmo global (p<0,001). Nossos sugerem que os indivíduos com transtorno por uso de álcool e outras substâncias psicoativas apresentaram maiores alterações no padrão de sono/social, na atividade e no padrão alimentar, bem como, apresentaram maiores disrupturas na manutenção do ritmo biológico global.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A hiperatividade locomotora e as alterações nos ritmos circadianos têm sido descritas em roedores e humanos expostos ao etanol durante o desenvolvimento. Considerando que a atividade locomotora em camundongos é conhecida por variar ao longo das fases do ciclo claro escuro, é possível que o fenótipo hiperativo resultante da exposição precoce ao etanol também varie em função da hora do dia. Além disso, é possível que a hiperatividade apresentada pelos indivíduos expostos ao etanol durante o desenvolvimento esteja associada com distúrbios no sistema de controle do ritmo circadiano. Neste estudo, avaliamos estas duas possibilidades realizando uma análise circadiana da atividade locomotora e da expressão dos genes de relógio de camundongos adolescentes expostos ao etanol durante o período de surto de crescimento cerebral. Para tanto, camundongos suíços criados e mantidos em um ciclo claro/escuro de 12h (luzes acesas às 2:00h, apagadas as 14:00h) foram injetados com etanol (5g/kg ip, grupo ETOH) ou um volume equivalente de solução salina (grupo SAL) em dias alternados do segundo ao oitavo dias pós-natais. No 30 dia pós-natal, os animais foram testados em campo aberto por 15 minutos em diferentes momentos do ciclo claro/escuro: durante a fase clara entre 6:00 e 7:30h e entre12:00 e 13:30h; durante a fase escura entre 18:00 e 19:30h e entre 0:00 e 01:30h. Durante a fase escura os testes foram realizados sob iluminação com luz vermelha. Após os testes comportamentais, alguns animais foram randomicamente selecionados para as análises de imunofluorescência da expressão dos genes PER 1, 2 e 3 no núcleo supraquiasmático. Ao longo dos seis primeiros minutos, a atividade locomotora dos animais testados durante o período claro não mudou significativamente ou apresentou um leve aumento e a dos animais testados no período escuro apresentou uma marcante redução. Além disso, o grupo de animais testados entre 00:00 e 1:30h apresentou a maior atividade locomotora e o grupo dos animais testados entre 12:00 e 13:30h apresentou a menor atividade locomotora. De modo importante, a exposição neonatal ao etanol promoveu hiperatividade locomotora apenas no grupo de animais testados entre 00:00 e 1:30h. Em relação aos genes de controle do ritmo circadiano, a exposição precoce ao etanol afetou apenas a expressão do gene Per1 que foi menor entre 18:00 e 19:30h. O fato de que a expressão dos genes de controle do ritmo circadiano foi alterada no meio da fase escura e que a hiperatividade locomotora foi observada apenas no final da fase escura é compatível com a hipótese de que a hiperatividade induzida pelo etanol pode estar associada com as perturbações de controle do ritmo circadiano. / Locomotor hyperactivity and alterations of circadian rhythmicity have been described both in rodents and in humans exposed to ethanol during development. Considering that spontaneous locomotor activity in mice is known to vary as a function of the time of the day, it is conceivable that the expression of the locomotor hyperactivity phenotype resulting from developmental ethanol exposure also varies throughout the day. In addition, it is possible that the hyperactivity presented by individuals early exposed to ethanol is associated with a dysfunction in the control system of the circadian rhythm. In this study, we tested these two possibilities by performing a circadian analysis of the locomotor activity and the expression of clock genes in adolescent mice exposed to ethanol during the brain growth spurt period. Subjects were Swiss mice that were bred and maintained in our laboratory on a 12:12h light/dark cycle (lights on: 2:00, lights off: 14:00). From postnatal day 2 (PN2) to PN8, litters either received ethanol (5 l/g i.p., 25% in saline solution) or an equivalent volume of saline solution every other day. At PN30, locomotor activity was automatically assessed for 15 min in the open field test. During the light period, the animals were tested between 6:00 and 7:30 h or between 12:00 and 13:30 h whereas during the dark period the tests were performed between 18:00 and 19:30 h or between 0:00 and 1:30 h. During the dark period, the tests were conducted under red dim light illumination. After the behavioral tests, a sample of animals was randomly selected for the analysis by immunofluorescence of the expression of genes PER 1, 2 and 3 in the suprachiasmatic nucleus. Throughout the first 6 min, the locomotor activity of animals tested during the light period did not change or only increased slightly, while animals tested during the dark period presented a marked reduction. Furthermore, animals tested between 00:00 and 1:30 h presented the highest activity while animals tested between 12:00 and 13:30 h presented the lowest locomotor activity. Importantly, neonatal exposure to ethanol caused locomotor activity only in those animals tested between 00:00 and 1:30 h. As for the the clock genes, neonatal exposure to ethanol only affected the PER 1 expression, which was lowest between 18:00 and 19:30. Our data is in line with the idea that locomotor activity varies as a function of the time of the day. The fact that the expression of a clock gene was altered in then middle of the dark cycle and that locomotor hyperactivity was observed only at the end of this period is compatible with the hypothesis that the hyperactivity observed as result of ethanol exposure is associated with alterations in the control of the circadian rhythm.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A hiperatividade locomotora e as alterações nos ritmos circadianos têm sido descritas em roedores e humanos expostos ao etanol durante o desenvolvimento. Considerando que a atividade locomotora em camundongos é conhecida por variar ao longo das fases do ciclo claro escuro, é possível que o fenótipo hiperativo resultante da exposição precoce ao etanol também varie em função da hora do dia. Além disso, é possível que a hiperatividade apresentada pelos indivíduos expostos ao etanol durante o desenvolvimento esteja associada com distúrbios no sistema de controle do ritmo circadiano. Neste estudo, avaliamos estas duas possibilidades realizando uma análise circadiana da atividade locomotora e da expressão dos genes de relógio de camundongos adolescentes expostos ao etanol durante o período de surto de crescimento cerebral. Para tanto, camundongos suíços criados e mantidos em um ciclo claro/escuro de 12h (luzes acesas às 2:00h, apagadas as 14:00h) foram injetados com etanol (5g/kg ip, grupo ETOH) ou um volume equivalente de solução salina (grupo SAL) em dias alternados do segundo ao oitavo dias pós-natais. No 30 dia pós-natal, os animais foram testados em campo aberto por 15 minutos em diferentes momentos do ciclo claro/escuro: durante a fase clara entre 6:00 e 7:30h e entre12:00 e 13:30h; durante a fase escura entre 18:00 e 19:30h e entre 0:00 e 01:30h. Durante a fase escura os testes foram realizados sob iluminação com luz vermelha. Após os testes comportamentais, alguns animais foram randomicamente selecionados para as análises de imunofluorescência da expressão dos genes PER 1, 2 e 3 no núcleo supraquiasmático. Ao longo dos seis primeiros minutos, a atividade locomotora dos animais testados durante o período claro não mudou significativamente ou apresentou um leve aumento e a dos animais testados no período escuro apresentou uma marcante redução. Além disso, o grupo de animais testados entre 00:00 e 1:30h apresentou a maior atividade locomotora e o grupo dos animais testados entre 12:00 e 13:30h apresentou a menor atividade locomotora. De modo importante, a exposição neonatal ao etanol promoveu hiperatividade locomotora apenas no grupo de animais testados entre 00:00 e 1:30h. Em relação aos genes de controle do ritmo circadiano, a exposição precoce ao etanol afetou apenas a expressão do gene Per1 que foi menor entre 18:00 e 19:30h. O fato de que a expressão dos genes de controle do ritmo circadiano foi alterada no meio da fase escura e que a hiperatividade locomotora foi observada apenas no final da fase escura é compatível com a hipótese de que a hiperatividade induzida pelo etanol pode estar associada com as perturbações de controle do ritmo circadiano. / Locomotor hyperactivity and alterations of circadian rhythmicity have been described both in rodents and in humans exposed to ethanol during development. Considering that spontaneous locomotor activity in mice is known to vary as a function of the time of the day, it is conceivable that the expression of the locomotor hyperactivity phenotype resulting from developmental ethanol exposure also varies throughout the day. In addition, it is possible that the hyperactivity presented by individuals early exposed to ethanol is associated with a dysfunction in the control system of the circadian rhythm. In this study, we tested these two possibilities by performing a circadian analysis of the locomotor activity and the expression of clock genes in adolescent mice exposed to ethanol during the brain growth spurt period. Subjects were Swiss mice that were bred and maintained in our laboratory on a 12:12h light/dark cycle (lights on: 2:00, lights off: 14:00). From postnatal day 2 (PN2) to PN8, litters either received ethanol (5 l/g i.p., 25% in saline solution) or an equivalent volume of saline solution every other day. At PN30, locomotor activity was automatically assessed for 15 min in the open field test. During the light period, the animals were tested between 6:00 and 7:30 h or between 12:00 and 13:30 h whereas during the dark period the tests were performed between 18:00 and 19:30 h or between 0:00 and 1:30 h. During the dark period, the tests were conducted under red dim light illumination. After the behavioral tests, a sample of animals was randomly selected for the analysis by immunofluorescence of the expression of genes PER 1, 2 and 3 in the suprachiasmatic nucleus. Throughout the first 6 min, the locomotor activity of animals tested during the light period did not change or only increased slightly, while animals tested during the dark period presented a marked reduction. Furthermore, animals tested between 00:00 and 1:30 h presented the highest activity while animals tested between 12:00 and 13:30 h presented the lowest locomotor activity. Importantly, neonatal exposure to ethanol caused locomotor activity only in those animals tested between 00:00 and 1:30 h. As for the the clock genes, neonatal exposure to ethanol only affected the PER 1 expression, which was lowest between 18:00 and 19:30. Our data is in line with the idea that locomotor activity varies as a function of the time of the day. The fact that the expression of a clock gene was altered in then middle of the dark cycle and that locomotor hyperactivity was observed only at the end of this period is compatible with the hypothesis that the hyperactivity observed as result of ethanol exposure is associated with alterations in the control of the circadian rhythm.

No ambiente marinho a maior fonte de nitrogênio encontra-se na forma de nitrato, que é reduzido para incorporação à biomoléculas como aminoácidos e bases nitrogenadas. A enzima nitrato redutase (NR), responsável pela conversão de nitrato a nitrito, é a primeira enzima a participar do processo de assimilação de nitrogênio. Gracilaria tenuistipitata é uma macroalga marinha de grande importância econômica explorada comercialmente para a produção de ágar, um ficocolóide de ampla aplicação industrial e biotecnológica. Esta alga tem seu crescimento limitado principalmente pela assimilação de nitrogênio do meio. Em trabalhos anteriores envolvendo a NR de G. tenuistipitata, foram demonstradas as oscilações diárias de sua atividade e expressão protéica. Esses ritmos permaneceram mesmo em situações de luz constante, sendo assim regulados endogenamente pelo relógio biológico. Neste trabalho procuramos seqüênciar o gene de NR nesta alga e responder se a regulação de NR também ocorria na transcrição, estudando o ritmo diário dos níveis de expressão do RNA mensageiro. Na biblioteca de cDNA de G. tenuistipitata identificamos e seqüenciamos os clones de NR por primer walking. Utilizando os mesmos primers desenhados, seqüenciamos também o gene da NR, que não apresenta introns. Esta é a primeira descrição na literatura de uma NR sem introns e também do gene NR de algas vermelhas. Observamos a oscilação diária da expressão do RNA mensageiro de NR. Esses dados nos permitem concluir que a regulação de NR em G. tenuistipitata também ocorre durante a expressão deste gene. Em condições normais de claro-escuro há uma expressão basal de NR que pode ser atribuída a existência de dois genes de NR, um constitutivo e outro regulado; ou ainda a um único gene que tem sua expressão basal induzida. / In the marine environment, the major source of nitrogen is nitrate, which must be reduced before incorporation into organic compounds, such as amino acids and nitrogen bases (purines and pyrimidines). The first enzyme that participates in the nitrogen assimilation process is nitrate reductase (NR), which is responsible for the conversion of nitrate to nitrite. Gracilaria tenuistipitata is a marine macroalga with a great economic importance, harvested for the production of agar, which has many uses in products from industry and biotechnology. Nitrogen is the limiting macronutrient of this alga\'s growth. The previous biochemical characterization for NR in this alga demonstrated a dial oscillation of activity and protein expression. These rhythms have been conserved in the situation of continuous light being regulated by the biological clock. For a better understanding of the regulation of NR, we sequenced the NR gene and studied the genetic regulation of NR mRNA expression. In a cDNA library of G. tenuistipitata, we identified and sequenced the NR clones, using the primer walking methodology. Using the same primers we also sequenced the gene that did not show introns. This is the first description in the literature of a NR gene for red algae and also of intron absence in NR genes. A rhythm for NR mRNA expression was observed in a period of 24h. In conclusion NR expression is also regulated at the transcription level. There is a basal expression of the NR gene that could be related to two hypotheses: two NR genes, one constitutive and another regulated, or only one NR gene, which is continuously translated having, however, its expression regulated and enhanced.

Les rythmes biologiques constituent une propriété fondamentale de la vie, permettant aux organismes d’appréhender leur environnement et d’en anticiper les changements. Ces rythmes possèdent une double origine : une horloge moléculaire génère ces rythmes, qui sont ensuite synchronisés par des facteurs environnementaux. Si les organismes terrestres sont essentiellement soumis au rythme d’alternance jour/nuit, les espèces marines côtières et estuariennes occupent un biotope plus changeant encore : ils sont en effet également confrontés au rythme des marées. Pourtant, leurs rythmes biologiques sont à ce jour encore mal connus et les mécanismes moléculaires de(s) (l’) horloge(s) sous-jacente(s) ne sont pas caractérisés. Parallèlement, les efflorescences d’algues toxiques, en constante augmentation depuis 1970, constituent un problème écologique majeur, tant local qu’international. Les objectifs du présent travail consistaient à caractériser les rythmes de référence de l’huître Crassostrea gigas et d’en déterminer l’origine (moléculaire, zeitgebers). Il s’agissait ensuite d’étudier les perturbations potentielles de ces rythmes par l’algue toxique Alexandrium minutum, qui produit des toxines paralytiques et est régulièrement présente dans de nombreuses mers du globe. Les travaux réalisés ont permis de mettre en évidence l’existence d’un rythme d’activité valvaire circadien, faible et dual, et n’a pas permis de supporter l’hypothèse de l’existence d’une horloge circatidale. Nous avons formulé l’hypothèse que, chez C. gigas, le rythme tidal est soit d’origine exogène, soit produit par l’horloge circadienne synchronisée par les marées. Les analyses moléculaires réalisées sur le gène circadien cryptochrome dans le muscle adducteur - effecteur du mouvement des valves - ont montré que ce gène oscille à une fréquence tidale dans le muscle strié, favorisant notre seconde hypothèse. Par ailleurs, au-delà des gènes de l’horloge, l’algue A. minutum réprime l’expression de gènes impliqués dans différentes voies métaboliques importantes : la lutte contre le stress oxydant (cat, gpx), la respiration mitochondriale (cox1), l’immunité (ilk), la détoxification (mdr). Finalement nos analyses ont permis de mettre en évidence un impact génotoxique d’A. minutum chez C. gigas. / Biological rhythms constitute a fundamental property of life, allowing organisms to anticipate and adapt to their changing environment. These rhythms present a double origin: they are generated by a molecular clock and synchronized by environmental cues. Whereas terrestrial organisms are mainly subjected to day/night alternation, coastal and estuarine marine species inhabit an even more cycling biotope. They are indeed also submitted to tides. Nevertheless, biological rhythms in marine species are still unrecognized and molecular mechanisms of the underlying oscillator(s) are to date not determined. At the same time, toxic algae blooms are increasing since the 1970s and represent a major ecological concern, both at local and international levels. An objective of the present work was the characterization of biological rhythms in the oyster Crassotrea gigas and of their origin (molecular mechanism, zeitgebers). Furthermore, the work was designed to study the potential disruption of these rhythms by the toxic algal of worldwide distribution Alexandrium minutum, which produces paralytic toxins. The present results show the existence of a weak and dual circadian rhythm of valve activity in the oyster, and do not provide evidence for the existence of any circatidal clock. We suggested that, in the oyster C. gigas, the tidal rhythm could either be generated exogenously or endogenously by the tidally-synchronized circadian clock. Molecular analyses performed on the circadian gene cryptochrome in the adductor muscle of oyster, the effector of valve movements, revealed that Cgcry oscillates at tidal frequency in the striated muscle. This result supports our second hypothesis. Furthermore, A. minutum represses the expression of genes involved in key metabolic pathways: struggle against oxidative stress (cat, gpx), mitochondrial respiration (cox1), immunity (ilk), detoxification (mdr). Moreover, A. minutum impacts C. gigas at DNA level, being thus genotoxic.