Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-12-19T14:57:57Z No. of bitstreams: 1 Maria Camila de Barros Silva Leite.pdf: 1678658 bytes, checksum: 85d69f0445fbb49333bcab450c6eab50 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-19T14:57:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Camila de Barros Silva Leite.pdf: 1678658 bytes, checksum: 85d69f0445fbb49333bcab450c6eab50 (MD5) Previous issue date: 2012-10-26 / Brazil is the largest sugarcane producer in the world, with the Pernambuco State presenting a production of nearly 18.4 million tons. However, productivity growth and expansion of this culture has been hampered due to salinity in some soils, especially when subjected to dispose of vinasse, a byproduct of ethanol production. Excess salts cause toxic effects and a lower capacity for water absorption by plants. Like plants, the symbiotic bacteria present variation in salinity tolerance and could be affected in their characteristics of plant growth promotion. This situation can be corrected with the use of bacterial isolates tolerant to salinity. Thus, the objective of this study was to isolate and identify bacterial isolates sugarcane, and salt-tolerant plant growth promoters, which may contribute to the better development of this species, both already producing regions, as in regions of Pernambuco that have saline soils, and until then, there are cultivated with sugarcane. Therefore, root endophytic and rhizosphere were isolated in culture medium supplemented with 0 and 5% NaCl, plant sugarcane, collected in different soils, two under vinasse use and another without vinasse use. After isolation, were evaluated population density and characteristics of plant growth promotion, the tests consisted in checking the potential for biological nitrogen fixation (BNF), production of indole acetic acid (IAA), inorganic phosphate solubilization and production quorum sensing molecule. Furthermore, the diversity cultivable was assessed by means of restriction analysis of amplified ribosomal DNA (ARDRA) with two restriction enzymes. And uncultivable diversity was analyzed using the total DNA of rhizosphere soil and plant tissue (root) using the technique of DGGE of nifH. After the selection of bacterial isolates promoters plant growth, salinity tolerance tests were also performed. As a result, it was possible to isolate 102 bacterial isolates from rhizosphere and endophytic root, sugarcane, with various morphologies. Regarding population density, it was observed that there was no statistical difference between treatments. As for the potential for nitrogen fixation, production of IAA, phosphate solubilization and production of quorum sensing molecule, 72.5; 100; 75.5 and 49% of the isolates were positive, respectively. Both in the ARDRA technique as in DGGE of nifH, the dendrogram showed high genetic variability among isolates and among samples of plant tissue and rhizosphere, respectively. Moreover, it was observed that the salinity directly affects both bacterial growth, as characteristics of plant growth promotion. Therefore, this study contributed to the study of bacteria system/plant/soil, particularly regarding halotolerant bacteria associated with plant sugarcane, selecting isolates that may contribute to the better development of this important crop in different regions Pernambuco State. / O Brasil é o maior produtor de cana-de-açúcar do mundo, com o Estado de Pernambuco apresentando uma produção de quase 18,4 milhões de toneladas. Porém, o aumento da produtividade e da expansão desta cultura vem sendo dificultado devido à salinidade em alguns solos, especialmente quando submetidos ao descarte de vinhaça, subproduto da produção de álcool. O excesso de sais provoca efeitos tóxicos e uma menor capacidade de absorção de água pelas plantas. Assim como as plantas, as bactérias simbióticas apresentam variação na tolerância à salinidade, podendo ser afetadas nas suas características de promoção de crescimento vegetal. Esta situação pode ser corrigida com a utilização de isolados bacterianos tolerantes à salinidade. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi isolar e identificar isolados bacterianos de cana-de-açúcar, tolerantes à salinidade e promotores de crescimento vegetal, que possam contribuir para o melhor desenvolvimento desta espécie, tanto em regiões já produtoras, como em regiões do Estado de Pernambuco que possuem solos salinos e que, até então, não são cultivados com a cana-de-açúcar. Para tanto, bactérias endofíticas de raiz e rizosfera foram isoladas, em meio de cultura acrescido de 0 e 5% de NaCl, de plantas de cana-de-açúcar, coletadas em diferentes solos, dois sob uso de vinhaça e outro não. Após o isolamento, foram avaliadas a densidade populacional e características de promoção de crescimento vegetal, os testes realizados constituíram em verificar o potencial para a fixação biológica de nitrogênio (FBN), produção de ácido indol acético (AIA), solubilização de fosfato inorgânico e produção da molécula quorum sensing. Além disso, a diversidade cultivável foi avaliada pela técnica da Análise da Restrição do DNA Ribossomal Amplificado (ARDRA), com duas enzimas de restrição. E a diversidade não cultivável foi analisada utilizando o DNA total do solo rizosférico e do tecido vegetal (raiz) através da técnica do DGGE do gene NifH. Após a seleção de isolados bacterianos promotores de crescimento vegetal, testes de tolerância à salinidade também foram realizados. Como resultado, foi possível isolar 102 isolados bacterianos de rizosfera e endofíticos de raiz, de cana-de-açúcar, com morfologias diversas. Com relação à densidade populacional, foi observado que não houve diferença estatística entre os tratamentos. Quanto ao potencial para fixação de nitrogênio, produção de AIA, solubilização de fosfato e produção da molécula quorum sensing, 72,5; 100; 75,5 e 49% dos isolados foram positivos, respectivamente. Tanto na técnica da ARDRA como no DGGE do gene nifH, o dendrograma indicou alta variabilidade genética entre os isolados e entre as amostras de rizosfera e tecido vegetal, respectivamente. Além disso, foi possível observar que a salinidade afeta diretamente tanto o crescimento bacteriano, como características de promoção de crescimento vegetal. Portanto, o presente trabalho contribuiu para o estudo do sistema bactéria/planta/solo, em particular quanto às bactérias halotolerantes associadas a plantas de cana-de-açúcar, selecionando isolados que possam vir a contribuir para o melhor desenvolvimento desta importante cultura em diferentes regiões do Estado de Pernambuco.

Submitted by Inácio de Oliveira Lima Neto (inacio.neto@inpa.gov.br) on 2018-10-01T14:07:13Z No. of bitstreams: 2 renah_boanerges_de_queiroz_pimentel.pdf: 1110021 bytes, checksum: 18ab42aaa4784a2ac1dedc634e0ceb00 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-01T14:07:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 renah_boanerges_de_queiroz_pimentel.pdf: 1110021 bytes, checksum: 18ab42aaa4784a2ac1dedc634e0ceb00 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-01-30 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / sem abstract / agentes antifúngicos, caracterizando e identificando quimicamente seus diferentes compostos e, contribuindo para identificar potenciais moléculas relacionadas à defesa das plantas. Os óleos Nesta pesquisa foi investigada a possibilidade de utilizar óleos essenciais como possíveis essenciais de extratos foliares (galhos e folhas) de Aniba rosaeodora provenientes de plantios localizados em Manaus e Maués, e óleos essenciais de Aniba canelilla de um plantio de Manaus e Aniba Parviflora de um plantio localizado em Santarém no Pará, foram avaliados contra fungos fitopatogênicos de importância agrícola. O óleo essencial A. rosaeodora obtido a partir da hidrodestilação foi analisado por GC-MS e dezesseis constituintes foram identificados representando 98% do total do óleo essencial, dos quais o linalol foi o mais representativo, compondo até 80% do óleo essencial. O óleo de folhas e galhos (20,0 mg.mL-1) apresentaram significativa atividade antifúngica contra os fungos fitopatogênicos Colletotrichum gloeosporoides, apresentando halos de inibição medindo entre 14,3 e 16,5 mm e CIM/CMF de 1,2 mg.mL-1; Colletotrichum sp., com halos de 12,1 a 14,3 mm e CIM/CMF de 2,5 mg.mL-1; e Colletotrichum guaranicola, com halos de 19,8 a 22,2 mm e CIM/CMF de 0,6 mg.mL-1. Os óleos essenciais de A. canellila e A. parviflora também foi avaliada contra fungos fitopatogênicos de importância agrícola. O óleo essencial obtido a partir da hidrodestilação foi analisado por GC-MS e sessenta e quatro constituintes dos óleos essenciais foram identificados, dos quais o linalol foi o mais representativo compondo até 40% do óleo essencial de A. parviflora, e o 1-nitro-2-feniletano da A. canellila compondo até 90% do óleo essencial. O óleo de folhas e galhos A. parviflora (20,0mg.mL-1) apresentaram atividade antifúngica contra os fungos fitopatogênicos Colletotrichum gloeosporoides apresentando halos de inibição medindo entre 14,9 e 13,2 mm e CIM/CMF de 2,5 mg.mL-1; Colletotrichum sp., com halos de 10,0 e 10,2 mm e CIM/CMF de 5,0 mg.mL-1; e Colletotrichum guaranicola, com halos de 9,5 a 9,1 mm e CIM/CMF de 1,2 mg.mL-1. Aniba canellila foi bem mais ativo contra os fungos apresentando halos de 14,7 e 14,6mm e CIM/CMF 0,6 mg.mL-1 contra fungo C. gloeosporoides, 11,5 e 11,7mm e CIM/CMF de 0,6 mg.mL-1 contra o Colletotrichum sp., 12,0 e 12,1mm e CIM/CMF 0,15mg.mL-1 C.guaranicola. O linalol também apresentou atividade contra todos os cinco fungos. Diante dos resultados obtidos, fica provado que a utilização dos óleos essenciais das folhas e galhos dessas espécies podem eventualmente substituir o óleo extraído da madeira e a bioprospecção de metabólitos secundários de Lauráceas se mostraram ativos contra fungos e o seu uso possibilitará o desenvolvimento de fungicidas menos agressivos.

Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-04-04T13:16:42Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Final - LUISA CARVALHO ANDRADE.pdf: 1905703 bytes, checksum: d26c7953ce5663f0aca0a866c5701328 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-07-06T12:52:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Final - LUISA CARVALHO ANDRADE.pdf: 1905703 bytes, checksum: d26c7953ce5663f0aca0a866c5701328 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T12:52:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Final - LUISA CARVALHO ANDRADE.pdf: 1905703 bytes, checksum: d26c7953ce5663f0aca0a866c5701328 (MD5) / FAPESB / A Baía de Todos os Santos (BTS), segunda maior baía do Brasil, abriga grande diversidade de ambiente, flora e fauna, porém pouco se sabe sobre sua diversidade microbiológica e seu potencial de bioprospecção. Este trabalho teve por objetivo a busca de novas substâncias antimicrobianas, capazes de inibir o crescimento de bactérias patogênicashumanas e de animais marinhos, isolados do solo de cinco praias da BTS. No total foram isoladas 107 bactérias das quais dez apresentaram produção de substâncias antimicrobianas. Após o sequenciamento verificou-se que dos dez isolados, somente oito foram de fato identificadas molecularmente, sendo sete destes membros da família Bacillaceae, grupo ao qual pertencem diversas produtoras de substâncias antimicrobianas. Entre os isolado que apresentaram produção de substâncias inibidoras do crescimento constatou-se que os isolados 21, 50 e 54 tinham maior poder de inibição. O extrato destes três isolados foi confeccionado através da acidificação do sobrenadante livre de células, isolado após o período de incubação. Os extratos do isolado 21 e do isolado 50 foram capazes de inibir a bactéria Klebsiella rizophyla, e o extrato 21 conseguiu ainda inibir a Vibrio vulnificus. Após verificação molecular através de primers específicos de sete substâncias antimicrobianas produzidas por Bacillus, constatou-se que os isolados 21 e 50 são produtores da substância ericina. / The All Saints´s Bay (BTS), the second largest bay in Brazil, where can be founded great diversity of flora and fauna including diversity of landscapes, but unknown about their microbial diversity and potential to bioprospecting. This study aimed to search for new antimicrobial substances that can be able to inhibit the growth of human pathogenic bacterias and marine animals, isolated from sediment from five BTS beaches. Was isolated a total of 107 bacterias where 10 showed antimicrobial substances production. After 16S sequencing, was found that from the ten isolates, only eight were identified by amplification PCR and seuqencing, seven members of the Bacillaceae family, where antimicrobial substances belonging this group are known. It was found that the isolates numbers 21, 50 and 54 had a greater power of inhibition. The extract of these three strains was made by acidification of the cell-free supernatant, isolated after the incubation period. The extracts of the isolate 21 and 50 were able to inhibit the bacteria Kocuria rhizophyla , and the same extract could also inhibit Vibrio vulnificus. In advance, was realized a molecular bioprospecting using specific molecular primers from conserved regions belongs to seven antimicrobial substances produced by Bacillus. It was found that the isolates 21 and 50 are Erycina producing.

O Origannum vulgare L. (orégano) é uma erva com potencial terapêutico, havendo, entre seus extratos, maior atividade detectada no óleo essencial (OEO). Dentre os constituintes estudados neste extrato estão monoterpenos responsáveis por atividades farmacológicas, incluindo ação antibiótica sobre diversos organismos, entre os quais, Aspergillus spp, os mais importantes fungos em medicina veterinária. A aspergilose é a micose de maior morbimortalidade em aves, e a principal doença respiratória nesses animais. A espécie mais envolvida em casos clínicos é o A. fumigatus, devido principalmente à sua ampla capacidade de disseminação ambiental, ao reduzido tamanho de seus propágulos e à produção de metabólitos secundários. O tratamento da micose é considerado pouco eficiente, devido, entre outros fatores, ao número limitado de antifúngicos, à alta toxicidade destes fármacos, e à resistência por parte do Aspergillus spp. Em vista desta realidade o presente estudo objetivou avaliar o potencial terapêutico do OEO no tratamento e prevenção da aspergilose crônica experimental por A. fumigatus em frangos (Gallus gallus). Para tanto realizou-se, primeiramente testes de sensibilidade in vitro de Aspergillus spp. frente ao OEO; de toxicidade do óleo e desenvolvimento experimental de aspergilose em frangos. Os testes de sensibilidade in vitro foram ensaiados com A. fumigatus, A. flavus e A. niger, iniciando com OEO na concentração 900mg/mL (6%) passando por dez diluições seriadas com base log2. Foram realizados testes de toxicidade aguda sistêmica (24h de exposição) e toxicidade subcrônica sistêmica (30 dias de exposição) com OEO nas concentrações 225mg/mL (1,5%), 450mg/mL (3,0%) e 675mg/mL (4,5%). A infecção experimental foi realizada em três etapas, utilizando para tanto diferentes concentrações, volumes e números de inoculações. E tanto para tratamento quanto para profilaxia da aspergilose utilizou-se grupo tratado com OEO (O), com o antifúngico padrão itraconazol (I), com ambos os produtos associados (I+O), e grupo sem tratamento (C). A partir da análise química do óleo foram observados 15 diferentes compostos ativos, sendo 4-terpineol (18.4%), hidrato de sabinene (15,6%) e timol (13,6%), os componentes majoritários. No teste de sensibilidade in vitro o óleo essencial apresentou tanto atividade fungicida quanto fungistática frente a Aspergillus spp., com CIM variando entre 28,125mg/mL (0,1875%) e 450mg/mL (3,0%) e CFM entre 112,5mg/mL (0,75%) e 450mg/mL (3,0%). E CIM 50 de 112,5 mg/mL (0,75%) e CIM 90 de 450mg/mL (3,0%). Observouse que em todas as concentrações testadas, o óleo essencial de O. vulgare não causou nenhuma alteração clínica nem anatomopatológica. Para reproduzir aspergilose experimental crônica A. fumigatus em frangos de 15 dias definiu-se que deve-se utilizar concentração de 12x108 UFC/mL em três inoculações seriadas, com intervalos de 24h. O primeiro dia de infecção foi considerado o dia três. Na avaliação do uso d OEO para tratamento e profilaxia da aspergilose, I+O apresentou melhores resultados, com menos sinais clínicos, anatomopatológicos, microscópicos e menor contagem de Unidades Formadoras de Colônia/g/órgão. I e O apresentaram resultados, de forma geral, inferiores à I+O, porém superiores à C, não sendo possível avaliar qual grupo obteve maior eficácia no tratamento e/ou profilaxia da micose. / Origannum vulgare L. (oregano) is a herb with therapeutic properties. In its extract, higher activity is detected on the essential oil (OEO). Among the extract components are monoterpenes with pharmacological properties, e.g. antibiotic action over several microorganisms, including Aspergillus spp., which are fungi of great importance in veterinary medicine. Avian aspergillosis is a mycosis causing the highest morbidmorbidity in captive birds. It is also the main respiratory disease observed on this group. A. fumigatus is the pathogen more commonly detected in clinical cases, mainly due to its high capacity of being environmentally disseminated and producing secondary metabolites, as well as due to its reduced propagule size. The mycosis treatment is inefficient mainly due to the limited availability of antifungal compounds, the high toxicity found on these compounds and the resistance of Aspergillus species. Thus, the aim of this work was to evaluate the therapeutic potential of OEO in both the treatment and prevention of experimental chronic aspergillosis, caused by A. fumigatus in poultry (Gallus gallus). Initial experiments were carried out to test the in vitro OEO-sensitivity of Aspergillus spp., oil toxicity, and the experimental progression of disease in poultry. In vitro sensitivity testes were carried out with A. fumigatus, A. flavus and A. niger, starting with a concentration of 900mg/mL (6%) OEO, going through ten serial dilutions (log2 scale). Systemic acute toxicity (24h of exposure) and systemic subchronic toxicity (30h of exposure) tests were carried out, with OEO concentrations of 225mg/mL (1.5%), 450mg/mL (3.0%) and 675mg/mL (4.5%). The experimental infection was accomplished in three stages, with diverse inoculation concentrations, volumes and frequencies being tested. Both in aspergillosis treatment and prevention, groups tested were either treated with OEO (O), with the standard anti-fungal itraconazol (I), with both products combined (I+O), or with none of them (C). Fifteen different active compounds were observed in the chemical analysis of the oil, being 4- terpineol (18.4%), sabinene hydrate (15.6%) and thymol (13.6%) the major components found. At the in vitro sensitivity test, the essential oil displayed both fungicide and fungistatic effect towards Aspergillus spp., with MIC varying between 28.125mg/mL (0.1875%) and 450mg/mL (3%) and MFC varying between 112.5mg/mL (0.75%) and 450mg/mL (3%). In all concentrations tested, the essential oil from O. vulgare did not cause any clinical or anatomopathologic alteration. Experimental reproduction of chronic A. fumigatus aspergillosis in 15 day-old poultry was achieved by using an inoculum concentration of 12x108 Colonies Forming Units/mL (CFU) in three serial inoculations at 24h intervals, being day three considered the first day of infection. The use of OEO in aspergillosis treatment and prevention was best observed in I+O, resulting in less clinical, anatomopathologic and microscopic signs, as well as a smaller count of CFU/g/organ. Overall, I and O were less effective than I+O, but more effective than C. Nevertheless, it was not possible to evaluate which group increased the mycosis treatment and/or prevention efficacy.

Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-12-03T15:49:45Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_IsolamentoCaracterizaçãoBioquímica.pdf: 3845090 bytes, checksum: 8d4e4ecdfd9122058804589b297cc9c2 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T20:54:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_IsolamentoCaracterizaçãoBioquímica.pdf: 3845090 bytes, checksum: 8d4e4ecdfd9122058804589b297cc9c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-09T20:54:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_IsolamentoCaracterizaçãoBioquímica.pdf: 3845090 bytes, checksum: 8d4e4ecdfd9122058804589b297cc9c2 (MD5) Previous issue date: 2013 / Populações microbianas relacionam-se diretamente com diferentes nichos encontrados no ambiente. O solo é um importante ecossistema onde raízes de plantas e microrganismos contidos nele competem ou se associam pela aquisição de nutrientes. Baseado na relação de complementaridade entre microrganismos e planta, Langsdorffia hypogaea foi adotada como planta modelo, uma vez que se trata de uma espécie holoparasita pouco estudada e, por isso, caracteriza-se como um modelo potencial para a descoberta de novos microrganismos de interesse biológico e biotecnológico. O estudo teve como objetivo central bioprospectar a microbiota desse modelo e suas possíveis interações com sua planta hospedeira e rizosfera correspondente. Para isso, foram utilizadas inicialmente técnicas microbiológicas de cultivo e isolamento, seguidas de técnicas moleculares de identificação dos isolados. Também foram realizadas técnicas bioquímicas que permitiram verificar a capacidade destas 81 bactérias isoladas em produzir íon amônio, ácido cianídrico, ácidoindolacético, sideróforos e capacidade de fixação de nitrogênio e solubilização de fosfato. Testes para verificação do potencial de degradação de amido, pectina, proteínas e celulose também foram incorporadas nas análises. Com exceção da solubilização de fosfato e do potencial de degradação de proteínas e celulase, todos os outros parâmetros apresentaram resultados positivos para alguns dos isolados. Foram encontradas bactérias dos gêneros Bacillus, Enterobacter, Lysinibacillus, Paenibacillus, Serratia, Klebsiella, Ewingella, Citrobacter, Pseudomonas, Viridibacillus, da ordem Actinomycetale e da família Enterobacteriaceae, além de bactérias similares a depositadas no banco de dados como “não cultivadas” e uma bactéria que não apresentou similaridade com nenhuma já depositada no banco de dados (possivelmente nova). Tais resultados auxiliam no melhor entendimento da interação entre microrganismos e plantas, que poderiam justificar em parte a sobrevivência destas espécies em ambiente com diversas peculiaridades. Finalmente, por estas análises, possíveis bactérias classificadas como potenciais promotores de crescimento parecem ser fundamentais para a manutenção das espécies vegetais. Isto abre um leque de possibilidades de seus usos, em especial como fator substituinte de agroquímicos. ______________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Microbial populations are relate directly to different niches found in the environment. Soil is important ecosystems where plant roots and microorganisms contained therein or associate compete for the acquisition of nutrients. Based on the complementary relationship between microorganisms and plant, Landsdorffia hypogaea was adopted as a model plant, since it is a holoparasita specie little studied, and therefore characterized a potential model for the discovery of new biologically and biotechnology relevant microorganisms. The study aimed central bioprospect the microbiota of this model and its possible interactions with its host plant and corresponding rhizosphere. For this, microbiological techniques were used initially growing and isolation, followed by molecular techniques for the identification of isolates. Were also performed biochemical techniques that allow to verify the ability of these 81 isolates to produce ammonium ion, hydrocyanic acid, indole acetic acid, siderophores, and the ability to fix nitrogen and phosphate solubilization. Tests to verify the potential for degradation of starch, pectin, cellulose and proteins were also incorporated in the analyzes. With the exception of phosphate solubilization and degradation potential of cellulase and proteins, all other parameters showed positive results for some of the isolates. We have found bacteria of genus Bacillus, Enterobacter, Lysinibacillus, Paenibacillus, Serratia, Klebsiella, Ewingella, Citrobacter, Pseudomonas, Viridibacillus, the order Actinomycetale, the family Enterobacteriaceae, similar bacteria deposited in the database as "uncultivated"and bacteria which did not show any similarity with already deposited in database (possibly new). These results help to better understand the interaction between microorganisms and plants, which could partly explain the survival of these species in an environment with several peculiarities. Finally, for these analyzes, possible bacteria classified as potential growth promoters seem to be fundamental to the maintenance of plant species. This opens a range of possibilities for its uses, especially as substituent factor of agrochemicals.

O Origannum vulgare L. (orégano) é uma erva com potencial terapêutico, havendo, entre seus extratos, maior atividade detectada no óleo essencial (OEO). Dentre os constituintes estudados neste extrato estão monoterpenos responsáveis por atividades farmacológicas, incluindo ação antibiótica sobre diversos organismos, entre os quais, Aspergillus spp, os mais importantes fungos em medicina veterinária. A aspergilose é a micose de maior morbimortalidade em aves, e a principal doença respiratória nesses animais. A espécie mais envolvida em casos clínicos é o A. fumigatus, devido principalmente à sua ampla capacidade de disseminação ambiental, ao reduzido tamanho de seus propágulos e à produção de metabólitos secundários. O tratamento da micose é considerado pouco eficiente, devido, entre outros fatores, ao número limitado de antifúngicos, à alta toxicidade destes fármacos, e à resistência por parte do Aspergillus spp. Em vista desta realidade o presente estudo objetivou avaliar o potencial terapêutico do OEO no tratamento e prevenção da aspergilose crônica experimental por A. fumigatus em frangos (Gallus gallus). Para tanto realizou-se, primeiramente testes de sensibilidade in vitro de Aspergillus spp. frente ao OEO; de toxicidade do óleo e desenvolvimento experimental de aspergilose em frangos. Os testes de sensibilidade in vitro foram ensaiados com A. fumigatus, A. flavus e A. niger, iniciando com OEO na concentração 900mg/mL (6%) passando por dez diluições seriadas com base log2. Foram realizados testes de toxicidade aguda sistêmica (24h de exposição) e toxicidade subcrônica sistêmica (30 dias de exposição) com OEO nas concentrações 225mg/mL (1,5%), 450mg/mL (3,0%) e 675mg/mL (4,5%). A infecção experimental foi realizada em três etapas, utilizando para tanto diferentes concentrações, volumes e números de inoculações. E tanto para tratamento quanto para profilaxia da aspergilose utilizou-se grupo tratado com OEO (O), com o antifúngico padrão itraconazol (I), com ambos os produtos associados (I+O), e grupo sem tratamento (C). A partir da análise química do óleo foram observados 15 diferentes compostos ativos, sendo 4-terpineol (18.4%), hidrato de sabinene (15,6%) e timol (13,6%), os componentes majoritários. No teste de sensibilidade in vitro o óleo essencial apresentou tanto atividade fungicida quanto fungistática frente a Aspergillus spp., com CIM variando entre 28,125mg/mL (0,1875%) e 450mg/mL (3,0%) e CFM entre 112,5mg/mL (0,75%) e 450mg/mL (3,0%). E CIM 50 de 112,5 mg/mL (0,75%) e CIM 90 de 450mg/mL (3,0%). Observouse que em todas as concentrações testadas, o óleo essencial de O. vulgare não causou nenhuma alteração clínica nem anatomopatológica. Para reproduzir aspergilose experimental crônica A. fumigatus em frangos de 15 dias definiu-se que deve-se utilizar concentração de 12x108 UFC/mL em três inoculações seriadas, com intervalos de 24h. O primeiro dia de infecção foi considerado o dia três. Na avaliação do uso d OEO para tratamento e profilaxia da aspergilose, I+O apresentou melhores resultados, com menos sinais clínicos, anatomopatológicos, microscópicos e menor contagem de Unidades Formadoras de Colônia/g/órgão. I e O apresentaram resultados, de forma geral, inferiores à I+O, porém superiores à C, não sendo possível avaliar qual grupo obteve maior eficácia no tratamento e/ou profilaxia da micose. / Origannum vulgare L. (oregano) is a herb with therapeutic properties. In its extract, higher activity is detected on the essential oil (OEO). Among the extract components are monoterpenes with pharmacological properties, e.g. antibiotic action over several microorganisms, including Aspergillus spp., which are fungi of great importance in veterinary medicine. Avian aspergillosis is a mycosis causing the highest morbidmorbidity in captive birds. It is also the main respiratory disease observed on this group. A. fumigatus is the pathogen more commonly detected in clinical cases, mainly due to its high capacity of being environmentally disseminated and producing secondary metabolites, as well as due to its reduced propagule size. The mycosis treatment is inefficient mainly due to the limited availability of antifungal compounds, the high toxicity found on these compounds and the resistance of Aspergillus species. Thus, the aim of this work was to evaluate the therapeutic potential of OEO in both the treatment and prevention of experimental chronic aspergillosis, caused by A. fumigatus in poultry (Gallus gallus). Initial experiments were carried out to test the in vitro OEO-sensitivity of Aspergillus spp., oil toxicity, and the experimental progression of disease in poultry. In vitro sensitivity testes were carried out with A. fumigatus, A. flavus and A. niger, starting with a concentration of 900mg/mL (6%) OEO, going through ten serial dilutions (log2 scale). Systemic acute toxicity (24h of exposure) and systemic subchronic toxicity (30h of exposure) tests were carried out, with OEO concentrations of 225mg/mL (1.5%), 450mg/mL (3.0%) and 675mg/mL (4.5%). The experimental infection was accomplished in three stages, with diverse inoculation concentrations, volumes and frequencies being tested. Both in aspergillosis treatment and prevention, groups tested were either treated with OEO (O), with the standard anti-fungal itraconazol (I), with both products combined (I+O), or with none of them (C). Fifteen different active compounds were observed in the chemical analysis of the oil, being 4- terpineol (18.4%), sabinene hydrate (15.6%) and thymol (13.6%) the major components found. At the in vitro sensitivity test, the essential oil displayed both fungicide and fungistatic effect towards Aspergillus spp., with MIC varying between 28.125mg/mL (0.1875%) and 450mg/mL (3%) and MFC varying between 112.5mg/mL (0.75%) and 450mg/mL (3%). In all concentrations tested, the essential oil from O. vulgare did not cause any clinical or anatomopathologic alteration. Experimental reproduction of chronic A. fumigatus aspergillosis in 15 day-old poultry was achieved by using an inoculum concentration of 12x108 Colonies Forming Units/mL (CFU) in three serial inoculations at 24h intervals, being day three considered the first day of infection. The use of OEO in aspergillosis treatment and prevention was best observed in I+O, resulting in less clinical, anatomopathologic and microscopic signs, as well as a smaller count of CFU/g/organ. Overall, I and O were less effective than I+O, but more effective than C. Nevertheless, it was not possible to evaluate which group increased the mycosis treatment and/or prevention efficacy.

Manguezais são ecossistemas costeiros que ocorrem na transição entre os ambientes terrestres e marinhos, ao longo das regiões tropicais e subtropicais, sofrendo influência direta do regime das marés. A comunidade microbiana diversificada é fundamental para a ocorrência da ciclagem de nutrientes e, portanto, manutenção da biodiversidade faunística e florística nestes ambientes. As actinobactérias correspondem um grupo heterogêneo de bactérias filamentosas, que naturalmente habitam o solo, adaptam-se às diversas condições do ambiente, produzem antibióticos e são capazes de colonizar a rizosfera e tecidos internos das plantas. Neste trabalho foi possível observar a diversidade de actinobactérias rizosféricas isoladas nos manguezais de Cananéia e Bertioga SP; avaliar a produção de metabólitos secundários antifúngicos desses microrganismos; analisar o perfil químico dos extratos orgânicos das actinobactérias por espectrômetro de massas, seguidos de avaliação dos constituintes químicos desses extratos por cromatografia em camada delgada e coluna preparativa para separação dos mesmos, onde após os bioensaios com as frações ativas, foi determinado a concentração inibitória mínima dessas frações. / Mangroves are coastal ecosystems which occur in the areas of transition between marine and terrestrial environments throughout the tropical and subtropical regions, suffering direct tide influence. The diverse microbial communities are important to the nutrient cycling occurrence and consequently to the maintenance of these environments fauna and flora biodiversity. The Actinobacteria are a heterogeneous group of filamentous bacteria that naturally inhabit the soil. They can easily adapt to different environmental conditions, producing antibiotics and colonizing the rhizosphere and plants internal tissues. This study aims were: to allow the assessment of the diversity of the diversity of rhizosphere Actinobacteria isolated from mangroves located in Cananeia and Bertioga, cities under the jurisdiction of Sao Paulo State; to evaluate the production of antifungal secondary metabolites of these microorganisms; to analyze the chemical profile of organic extracts of Actionobacteria by mass spectrometry, followed by the evaluation of the chemical components of theses extracts through thin-layer chromatography and preparative column for their separation. After this process minimum inhibitory concentration of the active fractions of the bioassays were determined.

O Origannum vulgare L. (orégano) é uma erva com potencial terapêutico, havendo, entre seus extratos, maior atividade detectada no óleo essencial (OEO). Dentre os constituintes estudados neste extrato estão monoterpenos responsáveis por atividades farmacológicas, incluindo ação antibiótica sobre diversos organismos, entre os quais, Aspergillus spp, os mais importantes fungos em medicina veterinária. A aspergilose é a micose de maior morbimortalidade em aves, e a principal doença respiratória nesses animais. A espécie mais envolvida em casos clínicos é o A. fumigatus, devido principalmente à sua ampla capacidade de disseminação ambiental, ao reduzido tamanho de seus propágulos e à produção de metabólitos secundários. O tratamento da micose é considerado pouco eficiente, devido, entre outros fatores, ao número limitado de antifúngicos, à alta toxicidade destes fármacos, e à resistência por parte do Aspergillus spp. Em vista desta realidade o presente estudo objetivou avaliar o potencial terapêutico do OEO no tratamento e prevenção da aspergilose crônica experimental por A. fumigatus em frangos (Gallus gallus). Para tanto realizou-se, primeiramente testes de sensibilidade in vitro de Aspergillus spp. frente ao OEO; de toxicidade do óleo e desenvolvimento experimental de aspergilose em frangos. Os testes de sensibilidade in vitro foram ensaiados com A. fumigatus, A. flavus e A. niger, iniciando com OEO na concentração 900mg/mL (6%) passando por dez diluições seriadas com base log2. Foram realizados testes de toxicidade aguda sistêmica (24h de exposição) e toxicidade subcrônica sistêmica (30 dias de exposição) com OEO nas concentrações 225mg/mL (1,5%), 450mg/mL (3,0%) e 675mg/mL (4,5%). A infecção experimental foi realizada em três etapas, utilizando para tanto diferentes concentrações, volumes e números de inoculações. E tanto para tratamento quanto para profilaxia da aspergilose utilizou-se grupo tratado com OEO (O), com o antifúngico padrão itraconazol (I), com ambos os produtos associados (I+O), e grupo sem tratamento (C). A partir da análise química do óleo foram observados 15 diferentes compostos ativos, sendo 4-terpineol (18.4%), hidrato de sabinene (15,6%) e timol (13,6%), os componentes majoritários. No teste de sensibilidade in vitro o óleo essencial apresentou tanto atividade fungicida quanto fungistática frente a Aspergillus spp., com CIM variando entre 28,125mg/mL (0,1875%) e 450mg/mL (3,0%) e CFM entre 112,5mg/mL (0,75%) e 450mg/mL (3,0%). E CIM 50 de 112,5 mg/mL (0,75%) e CIM 90 de 450mg/mL (3,0%). Observouse que em todas as concentrações testadas, o óleo essencial de O. vulgare não causou nenhuma alteração clínica nem anatomopatológica. Para reproduzir aspergilose experimental crônica A. fumigatus em frangos de 15 dias definiu-se que deve-se utilizar concentração de 12x108 UFC/mL em três inoculações seriadas, com intervalos de 24h. O primeiro dia de infecção foi considerado o dia três. Na avaliação do uso d OEO para tratamento e profilaxia da aspergilose, I+O apresentou melhores resultados, com menos sinais clínicos, anatomopatológicos, microscópicos e menor contagem de Unidades Formadoras de Colônia/g/órgão. I e O apresentaram resultados, de forma geral, inferiores à I+O, porém superiores à C, não sendo possível avaliar qual grupo obteve maior eficácia no tratamento e/ou profilaxia da micose. / Origannum vulgare L. (oregano) is a herb with therapeutic properties. In its extract, higher activity is detected on the essential oil (OEO). Among the extract components are monoterpenes with pharmacological properties, e.g. antibiotic action over several microorganisms, including Aspergillus spp., which are fungi of great importance in veterinary medicine. Avian aspergillosis is a mycosis causing the highest morbidmorbidity in captive birds. It is also the main respiratory disease observed on this group. A. fumigatus is the pathogen more commonly detected in clinical cases, mainly due to its high capacity of being environmentally disseminated and producing secondary metabolites, as well as due to its reduced propagule size. The mycosis treatment is inefficient mainly due to the limited availability of antifungal compounds, the high toxicity found on these compounds and the resistance of Aspergillus species. Thus, the aim of this work was to evaluate the therapeutic potential of OEO in both the treatment and prevention of experimental chronic aspergillosis, caused by A. fumigatus in poultry (Gallus gallus). Initial experiments were carried out to test the in vitro OEO-sensitivity of Aspergillus spp., oil toxicity, and the experimental progression of disease in poultry. In vitro sensitivity testes were carried out with A. fumigatus, A. flavus and A. niger, starting with a concentration of 900mg/mL (6%) OEO, going through ten serial dilutions (log2 scale). Systemic acute toxicity (24h of exposure) and systemic subchronic toxicity (30h of exposure) tests were carried out, with OEO concentrations of 225mg/mL (1.5%), 450mg/mL (3.0%) and 675mg/mL (4.5%). The experimental infection was accomplished in three stages, with diverse inoculation concentrations, volumes and frequencies being tested. Both in aspergillosis treatment and prevention, groups tested were either treated with OEO (O), with the standard anti-fungal itraconazol (I), with both products combined (I+O), or with none of them (C). Fifteen different active compounds were observed in the chemical analysis of the oil, being 4- terpineol (18.4%), sabinene hydrate (15.6%) and thymol (13.6%) the major components found. At the in vitro sensitivity test, the essential oil displayed both fungicide and fungistatic effect towards Aspergillus spp., with MIC varying between 28.125mg/mL (0.1875%) and 450mg/mL (3%) and MFC varying between 112.5mg/mL (0.75%) and 450mg/mL (3%). In all concentrations tested, the essential oil from O. vulgare did not cause any clinical or anatomopathologic alteration. Experimental reproduction of chronic A. fumigatus aspergillosis in 15 day-old poultry was achieved by using an inoculum concentration of 12x108 Colonies Forming Units/mL (CFU) in three serial inoculations at 24h intervals, being day three considered the first day of infection. The use of OEO in aspergillosis treatment and prevention was best observed in I+O, resulting in less clinical, anatomopathologic and microscopic signs, as well as a smaller count of CFU/g/organ. Overall, I and O were less effective than I+O, but more effective than C. Nevertheless, it was not possible to evaluate which group increased the mycosis treatment and/or prevention efficacy.

Orientador: Gabriela Alves Macedo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-24T18:55:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ohara_Andre_M.pdf: 6935792 bytes, checksum: 553cf8492d7af096c35b5c595ec6e3a1 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A bioprospecção de micro-organismos representa um grande potencial tecnológico para produção de biocompostos de interesse comercial. Dentre estes compostos estão as enzimas lipolíticas, como as lipases (triacilglicerol acil-hidrolases EC 3.1.1.3) que apresentam um enorme potencial para aplicações biotecnológicas. Outro tipo de biocomposto de relevante interesse comercial são as vitaminas do complexo B, as quais possuem função essencial na atividade de enzimas que regulam reações do metabolismo. Desta forma, o objetivo desse trabalho foi isolar e selecionar linhagens de leveduras do solo de diferentes biomas do Estado de São Paulo com potencial para produção de lipase e de vitaminas do complexo B (biotina e riboflavina). Para tanto, foram isoladas 132 leveduras de amostras de solos provenientes da Mata Atlântica e da região de transição (Mata Atlântica e Cerrado). Essas linhagens foram depositadas na coleção de micro-organismos do laboratório de Bioquímica de Alimentos da FEA-UNICAMP, que já contava com 300 leveduras provenientes da região de Cerrado. As 432 linhagens presentes na coleção foram então avaliadas quanto ao potencial para a produção de lipase extracelular através de seleção em meio sólido diferencial e cultivo em meio líquido, sendo a atividade de lipase determinada no sobrenadante por titulometria de neutralização. O potencial para a produção de biotina e riboflavina extracelular foi avaliada por meio de seleção em meio de cultivo líquido, sendo as concentrações das vitaminas determinadas no sobrenadante por espectrofotometria e fluorimetria. Desta forma 33 leveduras apresentaram potencial para produção de lipase alcançando valores de atividade enzimática que variaram de 6,51 U/mL a 21,44 U/mL. Em relação à produção das vitaminas do complexo B, 38 linhagens apresentaram concentrações de biotina no sobrenadante do cultivo que variaram de 0,28 µg/mL a 18,61 µg/mL e 64 linhagens apresentaram concentrações de riboflavina que variaram de 0,03 µg/mL a 0,77 µg/mL. A linhagem RP.C153 apresentou potencial para produção de lipase e riboflavina, enquanto a linhagem RP.J1308 para produção de lipase e biotina. A linhagem RP.C153 foi classificada como Pichia caribbica e a linhagem RP.J1308 como Candida oleophila / Abstract: The bioprospection of microorganisms represents a great technological potential for the production of biocompounds of commercial interest. Among these compounds are the lipolytic enzymes, such as lipases (triacilglicerol acilhidrolases EC 3.1.1.3) which have currently a huge potential for biotechnological applications. B vitamins are another type of biocompound with relevant commercial interest, which have essential role in the activity of enzymes that regulate metabolic reactions in living organisms. Therefore, the aim of this work was to isolate and select strains of yeasts from the soil of different biomes present in the State of São Paulo for the biotechnological production of lipase and B vitamins (biotin and riboflavin). Thus, 132 yeasts were isolated from soil samples of the Atlantic Forest (Ilha Bela - SP) and the transition region between the Atlantic Forest and Savanna (Campinas - SP). These strains were deposited in the collection of microorganisms of the Food Biochemistry Laboratory FEA - UNICAMP, which already had 300 yeasts from the Savanna region (Ribeirão Preto - SP). Therefore 432 strains present in the collection were then evaluated for their potential to produce extracellular lipase by selection on solid selective differential and liquid medium culture, and the enzyme activity in the supernatant was determined by neutralization titration. The potential production of extracellular biotin and riboflavin was assessed by selection in medium liquid culture, and the concentrations of those vitamins were measured in the supernatant by spectrophotometry and fluorimetry. Therefore 33 yeasts demonstrated potential for the production of lipase, reaching values of enzymatic activity ranging from 6.51 U/mL to 21.44 U/mL. In relation to the production of B vitamins, 38 strains presented concentrations of biotin in the supernatant culture ranging from 0.28 µg/mL to 18.61 µg/mL and 64 strains demonstrated concentrations of riboflavin ranging from 0.03 µg/mL to 0.77 µg/mL. The strain RP.C153 presented potential for production of lipase and riboflavin, while strain RP.J1308 for production of lipase and biotin. The RP.C153 strain was classified as Pichia caribbica and RP.J1308 strain as Candida oleophila / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Gabriela Alves Macedo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-26T09:06:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbosa_PauladePaulaMenezes_M.pdf: 2172137 bytes, checksum: 707d48554bb74b873d31d80aa96163e6 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Compostos bioativos são moléculas orgânicas derivadas de vegetais, animais ou micro-organismos que estão relacionados à alguma atividade biológica. Os micro-organismos do solo representam uma importante fonte de compostos biologicamente ativos. O ponto crítico na descoberta de novas moléculas bioativas desta fonte é o isolamento de grupos de micro-organismos pouco explorados e conhecidos que são ao mesmo tempo bons produtores de metabólitos secundários. Os fungos filamentosos são conhecidos como produtores de uma grande variedade de metabólitos secundários. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi isolar e selecionar linhagens de fungos filamentosos silvestres, de duas regiões do Estado de São Paulo (Biomas de Mata Atlântica e Cerrado), com vistas para produção de compostos antimicrobianos ativos contra os micro-organismos alvo escolhidos nesta pesquisa: Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Escherichia coli, Salmonella choleraesuis e Candida albicans. Estes micro-organismos causam grandes problemas na área de alimentos e saúde. A partir das amostras de solo coletadas na região de Mata Atlântica (Ilhabela) e na região de transição dos biomas Mata Atlântica e Cerrado (Barão Geraldo, Campinas), 118 culturas de fungos filamentosos foram isoladas. Dentre elas 22 apresentaram elevado potencial antimicrobiano contra pelo menos um dos micro-organismos alvo e foram estudadas quanto ao seu efeito antimicrobiano. Ao final, foram obtidas culturas de fungos filamentosos com elevado potencial para produção de metabólitos com atividade antimicrobiana, os quais poderão ser identificados e explorados futuramente / Abstract: Bioactive compounds are organic molecules from vegetables, animals or microorganisms that are related to some biological activity. Soil microorganisms represent an important source of biologically active compounds. The isolation of unexplored and unknown microorganisms that are both good producers of secondary metabolites, provides the potential for novel bioactive molecules. Filamentous fungi are known as good producers of a great variety of secondary metabolites. Therefore, this work goal was to isolate and select wild filamentous fungi strains of two regions of São Paulo State (Biomes of Cerrado and Atlantic Forest), capable to produce antimicrobial compounds against the microorganisms: Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Escherichia coli, Salmonella choleraesuis and Candida albicans. These microorganisms cause important problems in food and health areas. 118 filamentous fungi strains were isolated from soil samples collected at Atlantic Forest region (Ilhabela) and transition region between Atlantic Forest and Cerrado biomes (Barão Geraldo, Campinas). Among them, 22 strains showed high antimicrobial activity against at least one of the pathogenic microorganisms target and their antimicrobial effect were studied. In conclusion, potentially filamentous fungi strains producers of antimicrobial activity metabolites were obtained, which can be identified and future explored / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos