Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-12T12:19:42Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Maurília Palmeira da Costa.pdf: 2216280 bytes, checksum: 2501263b51874e991dcc009a65829d64 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T12:19:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Maurília Palmeira da Costa.pdf: 2216280 bytes, checksum: 2501263b51874e991dcc009a65829d64 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / FACEPE / No presente trabalho foi desenvolvido um sistema de detecção eletroquímica, baseado num biossensor impedimétrico para detecção do Mycobacterium tuberculosis (MTB). Na superfície do eletrodo de ouro foram testadas dois tipos de sonda de tuberculose (TB), inicialmente foi imobilizado na superfície do eletrodo a poli (alilamina)-(PAH) com a nanopartícula magnética (NpsFe3O4) e o primer de tuberculose(TB) para montagem da sonda de TB. Na montagem da segunda sonda foi utilizado o ácido mercaptobenzóico (AMB) com a nanopartícula magnética (NpsFe3O4) modificada com o aminopropiltrimetoxisilano (ATPES) e o primer de TB modificado com o glutaraldeído (Glut). O objetivo da utilização dessas modificações foi no intuito de avaliar qual das plataformas montadas apresenta uma melhor sensibilidade para a detecção do genoma do MTB. A interação das sondas-genoma foi realizada utilizando o par redox [Fe (CN)6]4-/[Fe(CN)6]3- . A montagem da sonda foi realizada com deposição de PAH no eletrodo por 20 minutos em seguida a NpsFe3O4 também por 20 minutos e posteriormente o primer de TB por 30 minutos. Para o segundo modelo o AMB foi depositado na superfície do eletrodo por 2 minutos em seguida a NpsFe3O4 modificada com ATPES por 4 minutos e por fim o Glut-primer de TB por 30 minutos. Nesta plataforma foram avaliadas as variações das concentrações do primer de TB que foram de (6, 12, 20, 30 e 40ng) além da variação do tempo que foi de (1, 5, 10, 20 e 30 minutos), como também a avaliação do controle negativo que utilizou o genoma do Schistossoma mansoni. Cada sensor foi avaliado pelas técnicas de voltametria cíclica (VC), espectroscopia de impedância eletroquímica (EIE) para avaliação do comportamento eletroquímico dos sensores,como também pela microscopia de força atômica (AFM) que foi utilizada para o sensor contendo o AMB. O sensor em presença da PAH apresentou uma baixa sensibilidade tanto em VC como EIE. O biossensor com o AMB apresentou uma melhor sensibilidade como também frente ao MTB e ao controle negativo. Este sensor apresentou uma diferença de potencial notável além de uma maior transferência de carga elétrica do sistema para montagem da sonda de TB além de um sinal distinto frente ao controle negativo. As plataformas em presença de (PAH e AMB) avaliadas a que apresentou uma melhor resposta com excelente sensibilidade foi em presença do AMB. Esta pode ser empregada para identificação do genoma do MTB.

A obesidade tem aumentado dramaticamente nos últimos anos, tornando-se o maior fator de risco para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, vários tipos de câncer, e também do Diabetes mellitus tipo 2 (DM 2). A associação da obesidade com o desenvolvimento do DM 2 pode ser explicada, em parte, pela secreção alterada pelo tecido adiposo de adipocinas, como a adiponectina, um hormônio com propriedades antiinflamatórias e de sensibilização à insulina. O excesso do tecido adiposo regula negativamente a secreção de adiponectina, o que ocorre de 10 a 20 anos antes da hiperglicemia crônica, fazendo com que este hormônio seja um bom indicador para o diagnóstico preditivo de DM 2. A concentração de adiponectina em plasma é usualmente aferida por ELISA, método não amplamente utilizado devido ao seu alto preço, necessidade de pessoal qualificado e material e, dessa maneira, ainda praticamente inacessível à grande parcela da população. Sendo assim, o desenvolvimento de novas metodologias e de ferramentas de diagnóstico confiáveis e de baixo custo (que possam ser implementados pelo Sistema Único de Saúde SUS) é imprescindível. Aqui, desenvolvemos um biossensor simples e de baixo custo para detecção de adiponectina baseado na espectroscopia de impedância eletroquímica (EIS) ou voltametría cíclica (CV) usando plataformas nanoestruturadas contendo receptores transmembrana de adiponectina (AdipoR1 e AdipoR2) ou anticorpos anti-AdipoQ imobilizados em eletrodos de ouro. Os melhores resultados foram obtidos através do uso dos receptores AdipoR1/R2 em conjunto com CV. Neste caso, os biossensores foram capazes de detectar concentrações de adiponectina tão baixas quanto 7 nmol L-1 com uma faixa linear entre 0,01 a 0,75 mol L-1 de adiponectina, R²=0,992. O dispositivo apresentou ótima seletividade, estabilidade e reprodutibilidade (ca. 1,7% para n=3). Além disso, em amostras de plasma humano, o biossensor obteve resultados muito próximos aos obtidos pelo método pardão ELISA, com desvio de 14%. Esperamos que este estudo propicie maior acessibilidade ao diagnóstico preditivo do DM 2 através de dispositivos mais baratos, rápidos e portáteis e que um maior número indivíduos possam ser alertados e orientados, evitando o desenvolvimento posterior da doença. / Obesity has increased dramatically in the last few years, becoming the biggest risk factor for development of cardiovascular diseases, several types of cancer and also the type 2 diabetes mellitus (DM 2). The association between obesity and DM 2 can be partially explained by the altered secretion of adiponectin hormone by the adipose tissue, which presents anti-inflammatory and insulin sensitizing properties. The excess of adipose tissue regulates negatively adiponectin secretion, which occurs 10 to 20 years before chronic hyperglycemia, making this hormone a great biomarker for predictive DM 2 diagnosis. Adiponectin plasma concentration is usually measured by ELISA, a method not widely used due to its high cost, personal and material demand, being, therefore, not accessible to part of the population. Therefore, the development of new diagnostic methodologies and tools trustable and low-cost (that can be implemented by Sistema Único de Saúde SUS) is crucial. Here we developed a simple and low-cost biosensor for adiponectin detection based on electrochemical impedance spectroscopy (EIS) or cyclic voltammetry (CV) using nanostructured platforms containing adiponectin transmembrane receptors (AdipoR1 and AdipoR2) or anti-AdipoQ antibodies immobilized on gold electrodes. The best results were achieved using AdipoR1/R2 receptors among with CV. In this case, biosensors were able to detect adiponectin at concentrations down to 7 nmol L-1 in a linear detection range from 0.01 to 0.75 mol L-1 of adiponectin, R²=0.992. The device displayed great selectivity, stability and reproducibility (ca. 1.7% for n=3). For human plasma samples, analyses using the biosensor and the ELISA technique presented similar results, with deviations of 14%. Therefore, we expect that this study leads to a greater accessibility to predictive DM 2 diagnoses through cheaper, faster and portable devices, so that a higher number of patients may be alerted and oriented, avoiding further disease development.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:38:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Michella Bezerra Lima.pdf: 2830330 bytes, checksum: fabc8826135a63e76710a30d853375fa (MD5) Previous issue date: 2008-08-21 / The development of analytical and low cost methods for fast safe diagnosis and control of illnesses in humans has been one of researchers great interests in the last two decades. This attention is also due to simplicity of use and the great sensitivity in the results. Biosensors based on the surface plasmon resonance (SPR) technique combines the inherent specificity of the recognition elements with high sensitivity of physical transducers, enabling selective and sensitive detection of the analytes of interest without labeling and preliminary purification steps. We proposed the development of a biosensor with immobilized monoclonal antibodies on gold surface, for specific recognition of TNF-α using SPR technique. Design. Anti-TNF-α antibody was covalently immobilized on a gold substrate by silane coupling chemistry. After this, TNF-α antigens aliquots were added on the biosensor surface and the signal was measured during three minutes for TNF-α mass quantification recognized by immobilized antibodies. Results.This biosensor presented 24.0 pg.mm-2 (198,3  28,4) of antibodies immobilized on gold surface. TNF-α human was determined from successive injections, with a linear range from 4.3 up to 34.7 pg/mm-2 (R=0.98, SD=2.18, p<0.0001). Conclusion. We performed a preliminary biosensor to quantify TNF-α for planning of diseases treatment, such as auto immune and periodontal diseases, in which TNF-α inhibitor therapy is usually applied. In this cases, it would be necessary the quantification of this cytokine for therapeutic dose adjustment, improving treatment effectiveness and costs reduction. In the next step we intend to optimize the biosensors conditions preparation as well as to test it in human body fluids samples / Os imunossensores, ou biossensores de imunoafinidade são sistemas que exploram a seletividade e especificidade das interações antígeno-anticorpo, para detecção do analito alvo. O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um imunossensor, em que anticorpos monoclonais (anti-TNF-α humano) foram imobilizados em superfícies modificadas de ouro, para reconhecimento específico do Fator de Necrose Tumoral Alfa humano (TNF-α). Para a imobilização dessas imunoglobulinas foi necessária a formação de uma monocamada auto-organizada (SAM) sobre a superfície do sensor, composta por 3-aminopropiltrietóxisilano (APTS), sendo testadas quatro concentrações diferentes (1%, 2,5%, 5% e 10%), em dois tipos de solventes, água deionizada e tolueno, para comparação de metodologias para obtenção de melhores respostas. Os métodos de caracterização adotados foram a espectroscopia de Ressonância de Plásmon de Superfície (SPR), para análise da imobilização de anticorpos, na superfície modificada do sensor e a resposta dos sistemas desenvolvidos para detecção do TNF-α; e, Microscopia de Força Atômica (AFM), para verificação topográfica da SAM da superfície sensora. Os resultados mostraram que as melhores condições de desenvolvimento do biossensor desenvolvido neste trabalho ocorreram com a utilização de APTS 2,5% em tolueno, bloqueado com BSA 1%. O biossensor apresentou 24 pg.mm-2 (198,3  28,4 mgrau) de TNF-α humano imobilizados na superfície de ouro, e após injeções sucessivas de 25 pg.mL-1 de antígeno (n=8), em triplicata experimental, obtivemos uma região linear de resposta de 4,3 a 34.7 pg.mm-2 (R=0.98, SD=2.18, p<0.0001). Em análise topográfica das superfícies sensoras, realizada por AFM, foi observado que as amostras preparadas em tolueno, com melhores respostas de reconhecimento do antígeno, apresentaram menor uniformidade na sua estrutura, em razão da maior rugosidade detectada. Foi desenvolvido um imunossensor experimental, que servirá como modelo para o desenvolvimento de biossensor para aplicação clínica futura para quantificação de TNF- humano em fluidos corporais de pacientes portadores de doenças inflamatórias

Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-19T12:17:51Z No. of bitstreams: 2 neuma_merces_pereira.pdf: 2174500 bytes, checksum: 06da7ad03c07dd80832205dfc4d3dd20 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-19T12:18:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 neuma_merces_pereira.pdf: 2174500 bytes, checksum: 06da7ad03c07dd80832205dfc4d3dd20 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-19T12:18:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 neuma_merces_pereira.pdf: 2174500 bytes, checksum: 06da7ad03c07dd80832205dfc4d3dd20 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-19T12:19:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 neuma_merces_pereira.pdf: 2174500 bytes, checksum: 06da7ad03c07dd80832205dfc4d3dd20 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-19T12:19:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 neuma_merces_pereira.pdf: 2174500 bytes, checksum: 06da7ad03c07dd80832205dfc4d3dd20 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2013 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (Capes) / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / Neste trabalho,foi desenvolvido umbiossensor amperom?trico altamente sens?vel baseado na inibi??o da acetilcolinesterase (AChE).O m?todobaseia-se num eletrodo de pasta de nanotubos modificado com aftalocianina tetrassulfonada decobaltoe o l?quido i?nico tetrafluoroborato de 1-metil-3-octilimidaz?lio.Imagensde Microscopia Eletr?nica de Varredurae Espectroscopia de Infravermelho por Transformada de Fourierforam utilizadas para caracterizaros materiais.O processo de oxida??o datiocolinafoi investigadopor voltametria c?clica(CV) ecronoamperometria. A enzimaAChfoi imobilizadana superf?cie doeletrodo do comp?sitopor liga??o cruzadacomglutaralde?do equitosana.A a??osin?rgica do biossensorNTCPM/CoTSPc/AchEmostrou excelenteatividade eletrocatal?ticacombaixopotencial aplicadopara a detec??o detiocolina. Par?metrosque afetama resposta dobiossensor, como quantidadede enzima, tempo de incuba??o, pHe a concentra??oda solu??o tamp?oforam otimizadosutilizandocloreto deacetiltiocolina(ATCl) como substrato. Os resultadosmostraram que ofenitrotion, diclorvos e malationpodem levar aoprocesso de inibi??orevers?velda enzima.Estebiossensorapresentou um baixo limite dedetec??o, boa reprodutibilidade, elevada estabilidade sendo usadopara determinarpesticidas emamostras de ?gua. Rela??es linearesforam encontradasparafenitrotion(1,0-1000,0 pmolL-1), diclorvos(2,0-8.000,0 pmolL-1)emalation(16,0-5000,0 pmolL-1).O biossensor foi aplicado com sucesso em amostras de ?gua de rio e os resultados mostraram que o mesmo n?o sofre interfer?ncia da matriz biol?gica. Estudos de adi??o e recupera??o dos analitos foram realizados para avaliar a exatid?o do m?todo obtendo-se uma porcentagem de recupera??o entre 99,12% e 103,05% para o fenitrotion, 94,12% e 102,17% para o diclorvos e 100,03% e 100,96% para o malation. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2013. / ABSTRACT In this work, a highly sensitive acetylcholinesterase (AChE) inhibition-based amperometric biosensor has been developed. The method is based on a cobalt phthalocyanine tetrasulfonate and 1-methyl-3-octylimidazolium tetrafluoroborate ionic liquidmodified nanotubes paste electrode. Images Scanning Electron Microscopy and Spectroscopy Fourier Transform Infrared were used to characterize the materials. The thiocholine oxidation process was investigated by cyclic voltammetry (CV) and chronoamperometry. The AChE enzyme was immobilized on the composite electrode surface by cross-linking with glutaraldehyde and chitosan. The synergistic action of NTCPM/CoTSPc/AChE showed excellent electrocatalytic activity with low applied potential for the detection of thiocholine. Parameters affecting the biosensor response such as enzyme loading, incubation time, pH and concentration of the buffer solution were optimized utilizing acetylthiocholine chloride (ATChCl) as substrate. The results showed that the fenitrothion, dichlorvos and malathion can lead to a reversible inhibition process of the enzyme. This biosensor showed low detection limit, good reproducibility, high stability and was used to determine pesticides in water samples. Linear relationships were found for fenitrothion (1.0-1000.0 pmol L-1), dichlorvos (2.0-8000.0 pmol L-1) and malathion (16.0-5000.0 pmol L-1. The biosensor has been successfully applied for river water samples and the results showed that there is no interference from the biological matrix. Recovery studies were performed to evaluate the accuracy of the method yielding a percentage of recovery between 99.12% and 103.05% for fenitrothion, 94.12% and 102.17% for dichlorvos and 100 03% and 100.96% for malathion.

A obesidade tem aumentado dramaticamente nos últimos anos, tornando-se o maior fator de risco para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, vários tipos de câncer, e também do Diabetes mellitus tipo 2 (DM 2). A associação da obesidade com o desenvolvimento do DM 2 pode ser explicada, em parte, pela secreção alterada pelo tecido adiposo de adipocinas, como a adiponectina, um hormônio com propriedades antiinflamatórias e de sensibilização à insulina. O excesso do tecido adiposo regula negativamente a secreção de adiponectina, o que ocorre de 10 a 20 anos antes da hiperglicemia crônica, fazendo com que este hormônio seja um bom indicador para o diagnóstico preditivo de DM 2. A concentração de adiponectina em plasma é usualmente aferida por ELISA, método não amplamente utilizado devido ao seu alto preço, necessidade de pessoal qualificado e material e, dessa maneira, ainda praticamente inacessível à grande parcela da população. Sendo assim, o desenvolvimento de novas metodologias e de ferramentas de diagnóstico confiáveis e de baixo custo (que possam ser implementados pelo Sistema Único de Saúde SUS) é imprescindível. Aqui, desenvolvemos um biossensor simples e de baixo custo para detecção de adiponectina baseado na espectroscopia de impedância eletroquímica (EIS) ou voltametría cíclica (CV) usando plataformas nanoestruturadas contendo receptores transmembrana de adiponectina (AdipoR1 e AdipoR2) ou anticorpos anti-AdipoQ imobilizados em eletrodos de ouro. Os melhores resultados foram obtidos através do uso dos receptores AdipoR1/R2 em conjunto com CV. Neste caso, os biossensores foram capazes de detectar concentrações de adiponectina tão baixas quanto 7 nmol L-1 com uma faixa linear entre 0,01 a 0,75 mol L-1 de adiponectina, R²=0,992. O dispositivo apresentou ótima seletividade, estabilidade e reprodutibilidade (ca. 1,7% para n=3). Além disso, em amostras de plasma humano, o biossensor obteve resultados muito próximos aos obtidos pelo método pardão ELISA, com desvio de 14%. Esperamos que este estudo propicie maior acessibilidade ao diagnóstico preditivo do DM 2 através de dispositivos mais baratos, rápidos e portáteis e que um maior número indivíduos possam ser alertados e orientados, evitando o desenvolvimento posterior da doença. / Obesity has increased dramatically in the last few years, becoming the biggest risk factor for development of cardiovascular diseases, several types of cancer and also the type 2 diabetes mellitus (DM 2). The association between obesity and DM 2 can be partially explained by the altered secretion of adiponectin hormone by the adipose tissue, which presents anti-inflammatory and insulin sensitizing properties. The excess of adipose tissue regulates negatively adiponectin secretion, which occurs 10 to 20 years before chronic hyperglycemia, making this hormone a great biomarker for predictive DM 2 diagnosis. Adiponectin plasma concentration is usually measured by ELISA, a method not widely used due to its high cost, personal and material demand, being, therefore, not accessible to part of the population. Therefore, the development of new diagnostic methodologies and tools trustable and low-cost (that can be implemented by Sistema Único de Saúde SUS) is crucial. Here we developed a simple and low-cost biosensor for adiponectin detection based on electrochemical impedance spectroscopy (EIS) or cyclic voltammetry (CV) using nanostructured platforms containing adiponectin transmembrane receptors (AdipoR1 and AdipoR2) or anti-AdipoQ antibodies immobilized on gold electrodes. The best results were achieved using AdipoR1/R2 receptors among with CV. In this case, biosensors were able to detect adiponectin at concentrations down to 7 nmol L-1 in a linear detection range from 0.01 to 0.75 mol L-1 of adiponectin, R²=0.992. The device displayed great selectivity, stability and reproducibility (ca. 1.7% for n=3). For human plasma samples, analyses using the biosensor and the ELISA technique presented similar results, with deviations of 14%. Therefore, we expect that this study leads to a greater accessibility to predictive DM 2 diagnoses through cheaper, faster and portable devices, so that a higher number of patients may be alerted and oriented, avoiding further disease development.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T12:39:53Z No. of bitstreams: 2 TESE Paula Virgínia Souza.pdf: 3356842 bytes, checksum: 612ad016f5345373502688d9e4421a85 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T12:39:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Paula Virgínia Souza.pdf: 3356842 bytes, checksum: 612ad016f5345373502688d9e4421a85 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / CAPES; CNPq; FACEPE / Os métodos de diagnósticos clínicos convencionais, para detecção de infecções virais, geralmente demandam tempo, alto custo, reagentes e equipamentos laboratoriais. Os biossensores voltamétricos são excelentes alternativas de detecção viral, pois apresentam grande praticidade, rapidez, portabilidade, baixo custo e alta sensibilidade. Eletrodos quimicamente modificados (EQM) por polímeros condutores (poliacetileno, polianilina, polipirrol e politiofeno), são bastante sensíveis, com grande potencial de aplicação, constituindo excelentes alternativas para melhorar o desempenho de um sensor. Tais polímeros são constituídos por ligações duplas conjugadas que são responsáveis pelo aumento de condutividade. O objetivo deste estudo foi o desenvolver métodos diagnósticos label-free para detecção dos vírus papilomavírus bovino (BPV) e dengue (DENV), fabricados em eletrodos quimicamente modificados por Polianilina (PANI) e polipirrol (PPy) respectivamente. Foi utilizado como método para detecção viral de BPV um sistema genossensor elaborado a partir de eletrodos baseados em membranas de alumina anódica (AAO), polimerizadas quimicamente por Polianilina. Sondas de oligonucleotídeos de alta seletividade, alinhadas por bioinformática, foram imobilizadas no suporte proposto e, em seguida, a hibridização dos ácidos nucléicos complementares e amostras biológicas (positivas) foram avaliadas. A caracterização do perfil eletroquímico foi realizada e o sinal de oxidação da guanina verificado por voltametria de pulso diferencial (VPD) e as superfícies das membranas (AAO) foram analisadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV). O sistema exibiu uma resposta rápida, sensível e seletiva com detecção limite de 51 nM. Outro sistema para detecção da proteína NS1 do DENV (imunossensor), foi desenvolvido em eletrodos de carbono impresso, eletropolimerizados por polipirrol/polipirrol-2-ácido carboxílico (PPy-PPa) e nanobastões de ouro (AuNR). Análises do bioconjugado foram realizadas por espectroscopia UV-Vis, microscopia eletrônica de transmissão (MET) e a caracterização eletroquímica por voltametria cíclica (VC). Os resultados demonstraram uma detecção limite de 0.0079 μgml−1. Os dois sistemas de detecção desenvolvidos demonstraram grande potencial eletroquímico no diagnóstico de infecções virais.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-03-29T17:35:36Z No. of bitstreams: 5 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-29T17:35:36Z (GMT). No. of bitstreams: 5 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Monografia wendell.pdf: 1808073 bytes, checksum: e9d8afb74ac6d7bcafeb0dda6ba6bba8 (MD5) Previous issue date: 2015-04-23 / CAPES / A frequência de infecções hospitalares por fungos patogênicos tem aumentado substancialmente nas últimas décadas, acarretando altos níveis de mortalidade que atingem até 60% dos óbitos, frequentes em pacientes graves internados em Unidades de Terapia Intensiva. Testes específicos para diagnóstico de septicemia por Candida albicans possuem altos custos e necessitam um longo tempo para a obtenção de resultados. Diante desse quadro e considerando a necessidade da constante busca por alternativas no diagnóstico de septicemias por Candida albicans, nesse trabalho foi desenvolvido e avaliado uma nova plataforma de sensoriamento para um imunossensor óptico, baseado em Ressonância Localizada de Plasmon. Ressonância de Plasmon corresponde a oscilação coletiva dos elétrons de condução em resposta à excitação óptica promovida pela aplicação de um campo eletromagnético externo. A plataforma de sensoriamento corresponde a uma lâmina de vidro com nanopartículas de prata aderidas em sua superfície e funcionalizadas com anticorpos monoclonais anti-candida da classe das imunoglobulinas IgG. As nanopartículas utilizadas foram avaliadas por microscopia eletrônica de transmissão e espectroscopia de absorção, indicando a presença de nanoestruturas com diâmetro médio de 15 nm. Moléculas de cisteamina foram utilizadas como ligantes no processo de funcionalização de anticorpos e glicina foi explorada como bloqueadores dos sítios não funcionalizados da plataforma. Os experimentos com diferentes concentrações de anticorpos foram realizados em quadruplicadas. Foi observado que quando adicionada cisteamina, glicina e anticorpos o pico de ressonância de Plasmon do sistema sofre um deslocamento para a região vermelha do espectro. Verificou-se deslocamentos do pico de Plasmon de até 30 nm. Na avaliação da plataforma como sensor de antígeno de Candida albicans, a detecção de diferentes concentrações de antígeno foi demonstrada. Plataformas de sensoriamento foram imersas em solução de PBS contendo antígenos nas alíquotas de 50 ng/mL, 100 ng/mL, 200 ng/mL e 300 ng/mL, por um período de 1 hora, seguido de lavagem com água MiliQ. Os resultados mostram a capacidade do sistema em identificar alíquotas maiores que 50 ng/mL de antígeno de Candida albicans, indicando a possibilidade do uso da plataforma desenvolvida como imunossensor para Candida. / The frequency of hospital infections by pathogenic fungi has increased substantially in recent decades, leading to high levels of mortality reaching up to 60% of deaths, common in critically ill patients in intensive care units. Specific tests for the diagnosis of sepsis due to Candida albicans have high cost and require a long time to obtain results. Given this situation and considering the need for constant search for alternatives in the diagnosis of septicemia by Candida albicans, this work was developed and evaluated a new sensing platform for an optical immunosensor based on Resonance Localized Plasmon. Plasmon resonance corresponds to collective oscillation of conduction electrons in response to optical excitation promoted by the application of an external electromagnetic field. The sensing platform corresponds to a glass slide with nanoparticles of silver adhered on its surface and functionalized with monoclonal anti-candida antibodies of the IgG class of immunoglobulins. The nanoparticles used were evaluated by transmission electron microscopy and absorption spectroscopy, indicating the presence of nanostructures with an average diameter of 15 nm. Cysteamine molecules were used as ligands in the antibodies functionalization process and glycine as blockers of non-functionalized sites of the platform. Experiments with different concentrations of antibodies were performed in quadruplicate. It was observed that when added cysteine, glycine peak and antibodies specific Plasmon resonance is shifted to the red region of the spectrum. Peak shifts were found to Plasmon up to 54 nm. In the evaluation of the platform as a Candida albicans antigens sensor different antigen concentrations was demonstrated. The sensing platforms were immersed in PBS solution containing dilutions of antigens in 50 ng/mL, 100 ng/mL, 200 ng/mL to 300 ng/mL for a period of 1 hour, followed by washing with MilliQ water. The results show the system ability to identify higher dilutions than 50 ng/mL of Candida albicans antigen, indicating the possibility of the use of the platform as developed immunosensor for Candida.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1527_1.pdf: 1835283 bytes, checksum: 1f1ad67f95038279850ea3b3eec8c441 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O câncer cervical tem sido uma patologia grave no Brasil e no mundo com cerca de 18.680 mulheres infectadas anualmente. O Papilomavírus Humano (HPV) tem sido biologicamente associado ao desenvolvimento de lesões cervicais, devido a sua capacidade de infectar células epiteliais, e progressão ao câncer do colo de útero. O diagnóstico tardio pode inviabilizar o tratamento e levar a óbito muitas mulheres. Este diagnóstico poderia ser antecipado pelo uso de biossensores de DNA, que são dispositivos analíticos que resultam da integração entre uma sonda seqüência específica e um sinal transdutor. Entre outras técnicas eletroquímicas, os biossensores amperométricos têm sido descritos como atrativos devido à sua simplicidade, baixos custos de instrumentação, possibilidade de realização em tempo real e geralmente alta sensibilidade. Neste trabalho, foi desenvolvido um genossensor para detecção de seqüências do vírus HPV usando azul de metileno (AM) como mediador químico. Os sinais biológicos captados foram transduzidos por Voltametria de Pulso Diferencial (VPD). Os eletrodos de trabalho e referência foram produzidos através de técnica de impressão sob uma superfície de polivinil álcool. Os mesmos foram constituídos de carbono e Ag\AgCl, respectivamente. O eletrodo de trabalho foi modificado com quitosana para a imobilização de pequenas seqüências de DNA para hibridização com uma seqüência alvo. A seqüência alvo usada para hibridização foi o gene E6 do HPV18, uma cadeia extensa com 500 pares de bases disponíveis para anelamento com seqüências de 20 bases. Análises de bioinformática foram realizados para verificar possíveis regiões de anelamento destas seqüências curtas ao genoma viral. Os resultados demonstraram um aumento no sinal do AM quando a hibridização ocorreu, evidenciado pelo aumento dos picos de corrente de VPD analisados graficamente. As diferenças entre os sinais emitidos a partir de um eletrodo contendo reações de hibridização e outro isento das mesmas, foi usada para detectar seqüências de DNA viral obtidas de amostras clínicas. Os resultados indicaram ser o método passível de aplicações em diagnósticos clínicos, e a técnica de impressão, um instrumento viável para a construção dos biossensores de DNA utilizando o azul de metileno como indicador de sinais de hibridização

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1504_1.pdf: 791063 bytes, checksum: 4a11c48c67eb0f30d0a7814f389f14a4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A necessidade de métodos mais versáteis para a mensuração e monitoramento dos níveis séricos de lipídios tem estimulado a produção de uma grande variedade de novos métodos analíticos. O presente trabalho mostra o desenvolvimento de um biossensor monoenzimático para detecção de triglicerídeos empregando a tecnologia de Screenprinting através da qual, foram impressos os eletrodos de referência (Ag/AgCl) e o de trabalho contendo uma mistura de carbono e quitosana. A lipase foi imobilizada por adsorção no eletrodo de trabalho. A lipase solúvel, usando pNPM, apresentou pH ótimo de 8 e temperatura ótima de 32,5°C, mantendo cerca de 78,5% da atividade máxima a 25°C (temperatura operacional do biossensor). O Km e Vmáx para a lipase solúvel em relação ao pNPM foram de 0,95 mM e 25,51 U/mg proteína, respectivamente. No biossensor desenvolvido com apenas lipase imobilizada, usando trioleína como substrato, foram de 0,148 mM e 262,21 &#956;A/s e 0,304 mM e 85,07 &#956;A/s para a lipase solúvel e TIP sem enzima. Os resultados mostraram linearidade nas respostas de correntes para trioleína (0,25mM 2mM), atestando a viabilidade do biossensor desenvolvido, utilizando unicamente a lipase imobilizada na superfície do eletrodo de trabalho, podendo ser empregado eficientemente para a detecção de triglicerídeos

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2841_1.pdf: 1812233 bytes, checksum: 78abbf363fbd42ac838d1798c601100f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Entre outras técnicas, os métodos eletroquímicos têm emergido como sendo atrativos devido à sua simplicidade, baixo custo, possibilidade de medição em tempo real e, geralmente, apresentarem alta sensibilidade. Neste estudo, foi desenvolvido um protótipo de um biossensor amperométrico de glicose, parcialmente baseado na tecnologia de impressão jato de tinta (Inkjet). Dois eletrodos foram confecionados pelo método screenprinting em uma fita de PVA (Polivinil Álcool). Em um deles, uma solução de glicose oxidase foi depositada por impresora a jato de tinta, modificada para os experimentos. O eletrodo de referência foi constituído de Ag /AgCl. Antes do processo de impressão, foi realizada uma verificação dos sitema impressor por Microscopia Eletrônica de Varredura, para avaliação dos poros de impressão. A Voltametria cíclica apresentou resposta linear entre concentração de glicose e os picos de corrente anódica em um mesmo intervalo de potencial, indicando a viabilidade do método. Neste trabalho também foi desenvolvido um genosensor para a detecção de sequências específicas de DNA transduzidas por Voltametria de Pulso Diferencial. Os eletrodos foram feitos pela imobilização de sequências de DNA em um eletrodo de ITO (Indium Tin Oxide) modificado com NaOH e APTES. Os resultados demonstraram um aumento do valor de corrente anódica (0,73 &#956;A) quando a sequência de DNA estava presente no eletrodo, diferindo da corrente encontrada nos eletrodos sem a sequência imobilizada. Os resultados também mostraram que após a hibridização do DNA imobilizado com uma sequência complementar de uma região específica do vírus BPV contendo 27 bases, a corrente anódica diminuiu, indicando que o processo de hibridização ocorreu na superfície do eletrodo. A seqüência utilizada para a hibridização foi uma região específica do vírus BPV, contendo 27 bases. Os achados indicam que o eletrodo de ITO poderia ser um instrumento viável e de fácil manipulação para construção de biossensores de DNA