O objetivo deste trabalho foi quantificar os parâmetros produtivos em sistemas intensificados de bovinos de corte com irrigação. A intensificação é uma necessidade na pecuária de corte, especialmente devido ao aumento do custo de oportunidade da terra. Na região de Uruguaiana, Sul do Brasil, existe amplas potencialidades para a irrigação, pois dispõem de grande quantidade de corpos de água naturais ou construídos, no entanto, poucas informações científicas estão disponíveis sobre o tema. Para isto, de outubro de 2010 a setembro de 2011, avaliou-se três sistemas de produção de bovinos de corte em terminação (S1, S2 e S3) com base na irrigação de pastagens de espécies de clima temperado com rota metabólica C3. Foi quantificado o crescimento do pasto (CP; kgMS/ha/dia), acúmulo de forragem (AF; kgMS/ha), carga animal (CA; kgPV/ha/ano), desempenho (GMD; kg/cab/dia) e produção animal por área (PTa; kgPV/ha/ano). O sistema S3 apresentou maior CP (44,7 kg) do que S1(32,2 kg) e S2 (26,9 kg), sendo que em todos os sistemas o menor CP foi observado na estação de inverno. O AF foi 10.874, 8.905 e 15.658 kg, para S1, S2 e S3, respectivamente. No verão e primavera foram determinados maiores AF em todos os sistemas. No entanto, no S2 teve maior CA (1.007 kg) e GMD (0,830 kg/d) do que nos outros dois sistemas (S1=494; 0,780; S3= 820; 0,740, respectivamente). Na primavera a CA e GMD foram superiores às outras estações do ano. Os maiores valores para CA e GMD do S2 determinaram PTa superior (772 Kg PV) a S1 (369 kg PV) e S3 (519 kg PV). A estacionalidade da produção forrageira diminuiu com o uso da irrigação e contribuiu para a produção animal mais estável no ano. Os valores encontrados para os parâmetros avaliados neste trabalho demonstram o potencial para a intensificação da produção de bovinos de corte pela irrigação de pastagens temperadas. Contudo, foram identificadas oportunidades de melhorias no uso dos recursos e na gestão dos processos nos três sistemas avaliados. / The productive parameters of the three production pasture system irrigated based (S1, S2 and S3) in the finishing beef cattle were evaluated at South Brazil. The experimental period was from October, 2010 until September, 2011. The pasture growth (PG; KgDM/ha/d), forage accumulate (FA; KgDM/ha), stocking rate (SR; kgLW/ha/y), animal performance (ADG; kg/an/d) and animal production total (APt; kgLW/ha/y) were determined. The S3 showed higher PG (44.7kg) than the S1 (32.2kg) and S2 (26.9kg) systems. In addition, the lowest PG was observed in the winter season by all systems. The FA was 10,874kg, 8,905kg and 15,658 kg, to S1, S2 e S3, respectively. In the spring and summer seasons were showed more FA than the other two systems. However, in the S2 were observed higher PG (1,007 kg) and ADG (0.830 kg/d) than the first and second systems. The highest value to SR and ADG observed in the S2 result in the higher APt (772 kg LW) than the S1 (369 kg LW) and S3 (519 kg LW). The production forage seasonality decrease with the irrigation and resulted in the more stable animal production during the year. The productive parameters founded in this research showed the potential for intensification to the beef cattle system from the pasture by irrigation. However, there are the opportunities to improve the resource used and the management process in the systems evaluated.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-12-01T17:14:06Z No. of bitstreams: 1 2014_AryanaDiasdeAbreu.pdf: 3642603 bytes, checksum: a30042e06dc63d97939caacfa7bcefbd (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-12-02T12:16:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AryanaDiasdeAbreu.pdf: 3642603 bytes, checksum: a30042e06dc63d97939caacfa7bcefbd (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-02T12:16:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AryanaDiasdeAbreu.pdf: 3642603 bytes, checksum: a30042e06dc63d97939caacfa7bcefbd (MD5) / A superestimulação ovariana em bovinos é uma técnica caracterizada pelo aumento do número de folículos ovarianos que continuam o seu crescimento até à ovulação. Essa técnica consiste na administração de múltiplas injeções de hormônios gonadotrópico para manter o crescimento folicular, e com a finalidade de buscar novas formas de aplicações para diminuição do custo e do manejo dos animais o estudo in vitro apresenta-se como o passo inicial. A produção in vitro (PIV) de embriões bovinos compreende de três etapas, a maturação dos oócitos, a fecundação e o cultivo embrionário, sendo muito utilizada para fins econômicos e de pesquisa. O presente estudo visa ao desenvolvimento de micro e nanopartículas poliméricas para entrega sustentada, em sistemas de PIV, de hormônios adeno-hipofisários com o intuito de testar as suas atividades na expansão das células do cumulus. Após análise de produtos comerciais que oferecem atividade de FSH, por meio de espectrometria de massa MALDI TOF/TOF, a proteína precursora do hormônio adrenocorticotrópico (ACTH) foi identificada em algumas frações. Portanto, foi realizada sua síntese manualmente, pelo método da fase sólida, e purificação em sistema de cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (RP-HPLC) e, em uma etapa subsequente foi realizada uma avaliação do papel do ACTH não encapsulado na maturação in vitro de oócitos bovinos. Posteriormente, foram formuladas nanopartículas (NPs) de quitosana pelo método de geleificação iônica para encapsular o ACTH e hormônio folículo estimulante (FSH). As NPs apresentaram diâmetro hidrodinâmico médio de 85 nm (ACTH) e de 159 nm (FSH), potencial Zeta de 51,83±1,67 mV (ACTH) e 48,5±5,41 mV (FSH) onde se obteve eficiência de encapsulamento de 30% (ACTH) e 60% (FSH). A microscopia de forma atômica (MFA) possibilitou uma avaliação qualitativa no que diz respeito à morfologia das NPs, onde as contendo ACTH apresentaram formatos variados e pequenos aglomerados, enquanto que as contendo FSH, formato aproximadamente esférico sem aglomerados. As NPs contendo FSH apresentaram atividade semelhante ao hormônio livre mesmo com 40% a menos do ativo, enquanto as ACTH-NPs não foram ativas sobre a maturação in vitro de oócitos bovinos. No que se refere à fecundação, a taxa de clivagem e de produção de blastocistos foi satisfatória apenas com as FSH-NPs. Conclui-se que as NPs contendo FSH são efetivas no processo de PIV de embriões bovinos, provendo a expansão das células do cumulus e a produção de blastocistos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The ovarian superstimulation in bovine is a technique characterized by an increase in the number of ovarian follicles which continue their growth until ovulation. This technique consists of administering multiple injections of gonadotropin hormones to maintain follicular growth, and in order to pursue new forms of applications to decrease the cost and handling of animals the in vitro study is presented as an initial step. In vitro production (PIV) of bovine embryos comprises three steps, oocyte maturation, fertilization and embryo culture, commonly used for economic and research purposes. This study aims at the development polymeric micro-and nanoparticles for sustained delivery in vitro production systems, hormones of the pituitary in order to test their activities in the expansion of cumulus cells. After analyzing the commercial product Folltropin-V that provides FSH activity through of MALDI TOF/TOF mass spectrometry, the adrenocorticotropic hormone (ACTH) was identified in some fractions. Therefore, its synthesis was performed manually by the solid phase method and following purification by reverse-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC), and in a subsequent evaluation step it was investigated the role of ACTH unencapsulated on bovine oocytes maturation in vitro. Subsequently, chitosan NPs were formulated by the ionic gelation method in order to encapsulate both adrenocorticotropic hormone (ACTH) and follicle stimulating hormone (FSH). The NPs presented a mean hydrodynamic diameter of 85 nm (ACTH) and 159 nm (FSH), Zeta potential of 51,83±1,67 mV (ACTH) and 48,5±5,41 mV (FSH) in which was obtained encapsulation efficiency of 30% (ACTH) and 60% (FSH). The atomic form microscopy (AFM) allowed a qualitative assessment with regard to the morphology of NPs where the ACTH containing showed various shapes and small agglomerates, whereas FSH, shape approximately spherical without agglomerates. NPs containing FSH showed similar activity to that of the free hormone with 40% less active, whereas ACTH-NPs were not active on the in vitro maturation of bovine oocytes. With regard to fertilization, cleavage rate and blastocyst production were satisfactory only in the case of FSH-NPs. We conclude that NPs which contained FSH are effective in the PIV bovine embryos, providing the expansion of the cumulus cells and producing blastocysts.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-11-21T14:22:35Z No. of bitstreams: 1 2012_RosanaCamargoNishimura.pdf: 5708270 bytes, checksum: 77b7bbcafa5c6d350028f17c8eb48482 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-11-21T14:41:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_RosanaCamargoNishimura.pdf: 5708270 bytes, checksum: 77b7bbcafa5c6d350028f17c8eb48482 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-21T14:41:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_RosanaCamargoNishimura.pdf: 5708270 bytes, checksum: 77b7bbcafa5c6d350028f17c8eb48482 (MD5) / Embriões de mamíferos sofrem duas ondas de reprogramação, uma no zigoto, onde os genomas maternos e paternos são desmetilados e em seguida metilados de novo, e outra nas células germinativas primordiais. Acredita-se que a metilação de novo nas células germinativas masculinas esteja estabelecida ainda antes do nascimento, no entanto, como e quando esse processo ocorre em bovinos ainda não foi estabelecido. Sendo assim, este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de verificar se há reprogramação epigenética durante a espermatogênese através da avaliação do perfil de metilação da região do éxon 1 do gene XIST em diferentes células espermáticas. Foram utilizados espermatócitos, espermátides alongadas e espermatozóides da cabeça e cauda do epidídimo coletados de testículos obtidos em abatedouro. As células coletadas tiveram o seu DNA extraído e em seguida tratado com bissulfito de sódio. O DNA tratado foi amplificado através de PCR nested, e o produto amplificado foi inserido em um vetor e clonado em bactérias. O DNA plasmidial foi extraído e sequenciado. As sequências do experimento foram comparadas com a sequência do gene XIST depositada no GenBank, e aquelas que apresentaram taxa de conversão do bissulfito de sódio ≥95% e homologia ≥97% com a sequência do GenBank foram utilizadas. Para a comparação do nível de metilação entre os grupos foram utilizados os testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, com nível de significância de P<0,05. O grupo dos espermatócitos, espermátides alongadas, espermatozóides de cauda e cabeça de epidídimo apresentaram 15,70%±14,54, 1,96%±1,96, 74,09%±6,78 e 45,09%±20,19 de metilação, respectivamente, sendo que o grupo da cabeça de epidídimo apresentou-se mais metilado do que os grupos espermatócitos e espermátides alongadas (P<0,01). Quando foram formados e comparados dois grupos, um com espermatócitos e espermátides alongadas, e outro com espermatozoides de cabeça e cauda de epidídimo, a análise mostrou haver diferença entre eles (P<0,01) com relação a percentagem de metilação. Os resultados sugerem que a reprogramação epigenética em bovinos ainda está ocorrendo durante a formação do espermatozóide. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Mammalian embryos undergo two waves of genome reprogramming, the first in the zygote, when paternal and maternal genomes are demethylated and, just after, re-methylated, and the second in the primordial germ cells. It is believed that re-methylation is reestablished in male germ cells before birth, however, it is not clear when and how this process occurs in bovine. Thus, this work aimed to verify if there is epigenetic reprogramming during spermatogenesis through the evaluation of the methylation profile of XIST gene exon 1 in different spermatogenic cells. Spermatocytes, elongated spermatids and spermatozoa from epididymis head and tail were collected from bovine testes obtained from a slaughterhouse. The collected cells had their DNA extracted and treated with bisulfite. The treated DNA was amplified through nested PCR, and the product was inserted on a vector and cloned in bacteria. The plasmidial DNA was extracted and sequenced. The sequences of the experiment were compared with the sequence of gene XIST from the GenBank and those that presented bisulfite conversion rate of ≥95% and homology of ≥97% with the sequence from GenBank were utilized. To compare the methylation level between the groups Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests were used, with significance level of P<0.05. The spermatocytes, elongated spermatids and spermatozoa from epididymis head and tail groups presented 15.70%±14.54, 1.96%±1.96, 74.09%±6.78 and 45.09%±20.19 of methylation respectively. The epididymis head group was more methylated then spermatocytes and elongated spermatids groups (P<0.01). When arranged in two groups, one with spermatocytes and elongated spermatids, and another with epididymids spermatozoa, and compared, it was observed that the methylation level was different (P<0.01) between them. These results suggest that epigenetic reprogramming is still occurring during spermatozoa formation.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Ciências Animais, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-03-06T15:12:48Z No. of bitstreams: 1 2012_AndreaMariaLazzari.pdf: 1083089 bytes, checksum: 61cf2c4a8cdf6ae0f44b3024b371d1a5 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-03-08T10:47:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_AndreaMariaLazzari.pdf: 1083089 bytes, checksum: 61cf2c4a8cdf6ae0f44b3024b371d1a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-08T10:47:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_AndreaMariaLazzari.pdf: 1083089 bytes, checksum: 61cf2c4a8cdf6ae0f44b3024b371d1a5 (MD5) / Avaliações da imunidade inata, do quadro clínico, da composição e produção de leite foram realizadas em vacas e búfalas submetidas à infecção intramamária por Staphylococcus aureus (SBP 09/10). Foram utilizadas 20 fêmeas primíparas, com um a dois meses de lactação, sendo 12 da espécie bubalina (raça Murrah) e 08 da espécie bovina (Holandês x Zebu), ordenhadas uma vez ao dia e com bezerro ao pé. As fêmeas foram mantidas a pasto, com água ad libitum e suplementadas com sal mineral e concentrado comercial. Os animais estavam livres de alterações clínicas e infecções nas glândulas mamárias. O experimento foi realizado em duas etapas, pré (Dia 1 a D3) e pós-inoculação (D4 a D14 e 30º dia pós-inoculação). No D3 foi realizada a inoculação intramamária de aproximadamente 1,0 x 103 UFC de S. aureus na glândula anterior esquerda (AE) e de salina esterilizada 0,85% na glândula anterior direita (AD). Nos dois períodos foram coletadas as seguintes amostras e realizados os seguintes exames e avaliações: coleta de leite para cultura; testes de caneca telada e California Mastitis Test (CMT); ordenha das glândulas inoculadas e não inoculadas para pesagem do leite, verificação da contagem de células somáticas (CCS) e avaliação da composição (lactose, proteínas totais, gordura, extrato seco total – EST e extrato seco desengordurado – ESD); coleta de leite para mensuração da citocina interleucina-1beta (IL-1β); avaliação da resposta sistêmica à inflamação através da aferição da temperatura retal, verificação do apetite e alteração na produção de leite e avaliação da resposta localizada à inflamação, através da aparência/consistência da glândula, CCS e características da secreção láctea. O processo inflamatório foi induzido na glândula AE de todos os animais. Foi observada migração mais rápida de células de defesa para a glândula mamária das búfalas e contagem máxima de células somáticas (CS) semelhante (p>0,05) entre as duas espécies, porém em momentos distintos. Ao final do experimento, o leite da ordenha completa das búfalas apresentava níveis fisiológicos de CS, diferente do leite da ordenha completa das vacas. Foi detectada alteração (p<0,05) nos teores de lactose e ESD, que apresentaram correlação negativa (p<0,05) com a CCS. Todos os animais desenvolveram mastite clínica superaguda. A bactéria foi recuperada de todas as glândulas inoculadas com o patógeno, sem diferença significativa no percentual de isolamento e no Log10 de UFC/mL de leite bovino e bubalino até o 11º dia pós-inoculação (D14). Diferença (p<0,001) foi verificada no 30º dia pós-inoculação, com recuperação da bactéria em 50% das vacas e 8,3% das búfalas. Reação ao CMT foi observada nas 24h pós-inoculação, de forma mais intensa nas búfalas, com 75% e 37,5% das reações positivas com intensidade 3+, respectivamente, em búfalas e vacas (p<0,05). Onze dias pós-inoculação, 100% das vacas e 50% das búfalas encontravam-se reagentes a esse teste. A CCS avaliada por método eletrônico e o CMT apresentaram resultados semelhantes, sendo que as búfalas reagiram mais intensamente que as vacas logo após a inoculação e apresentaram diminuição evidente da contagem ao final do experimento. As contagens eletrônicas de CS e o CMT revelaram correlação com a cultura bacteriana (p<0,001). Algumas alterações visuais no leite e na aparência/consistência da glândula foram verificadas nas primeiras 24h. Estes dois parâmetros foram mais intensos e persistentes nas vacas, que adicionalmente apresentaram lesão ulcerativa na glândula desafiada (25%). Diminuição de produção e alteração no apetite foram evidenciados já nas primeiras 24h pós-inoculação. Houve uma redução média de produção de leite de 37,33% nas búfalas e 47,17% nas vacas. Ao final do experimento observou-se um número maior de vacas (62,5% contra 25% das búfalas) com queda superior a 61% da produção inicial de leite (p<0,05). A elevação da temperatura retal foi verificada nas duas espécies, sendo que 100% das vacas e 91,6% das búfalas alcançaram temperaturas superiores à 39,6ºC. Os parâmetros da resposta local à inflamação e da resposta sistêmica à inflamação, utilizados para avaliar a severidade da mastite foram classificados em escores. A média dos escores foi mais elevada na espécie bovina (p<0,05). Ao longo do período de observação, verificou-se uma capacidade superior das búfalas em alcançar o status sanitário adequado, chegando, ao final do experimento, com os parâmetros avaliados mais próximos dos fisiológicos. A inoculação intramamária de S. aureus provocou elevação nas concentrações de IL-1β nas espécies bovina e bubalina. A evolução da concentração da citocina foi diferente para as duas espécies (p<0,05). As búfalas apresentaram uma elevação mais rápida e as vacas alcançaram uma concentração 1,57 vezes maior. O pico da concentração nas búfalas, ocorreu nas primeira 48h, com 0,413 ng de IL-1β por mililitro de leite. As vacas apresentaram um aumento menos expressivo nas 24h pós-inoculação e alcançaram a concentração máxima nas 72h pós-inoculação (1,061 ng/mL). Na espécie bovina houve correlação (p<0,05) entre a concentração da IL-1β no leite, CCS, resposta localizada à inflamação e temperatura retal. As espécies bovina e bubalina alcançaram contagens máximas semelhantes (p>0,05) de CS/mL de leite, porém com concentrações médias diferentes (p<0,05) de IL-1β/mL de leite, 1,061 ng/mL e 0,120 ng/mL, respectivamente. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Evaluations of innate immunity, clinical picture, milk composition and production were peformed in cows and buffaloes submitted to intramammary infection by Staphylococcus aureus (SBP 09/10). It was used 20 primiparous females between one to two months of lactation, being 12 bubalines (Murrah breed) and 08 bovines (Holstein x Zebu), milked once a day and with calf at foot. The females were kept on pasture with ad libitum water and supplemented with mineral salt and commercial concentrate. The animals were free of clinical alterations and infections in the mammary glands. The experiment was conducted in two stages, pre (Day 1 to D3) and post inoculation (D4 to D14 and day 30 post inoculation). On D3 it was carried out the intramammary inoculation of approximately 1,0 x 10³ UFC of S. aureus into the left anterior gland (AE) and sterile 0.85% saline solution into the right anterior gland (AD). In both periods the following samples were collected and the following tests and evaluations were performed: milk collection for culture; strip cup tests and California Mastitis Test (CMT); milking of the inoculated and non-inoculated glands for milk weighing, verification of somatic cell count (CCS) and composition assessment (lactose, total proteins, fat, total solids - EST and nonfat solids - ESD); milk collection to measure interleukin-1beta cytokine (IL-1β); evaluation of systemic response to inflammation by measurement of rectal temperature, verification of appetite and alteration in milk production, and assessment of localized response to inflammation by the gland appearance/consistency, CCS and features of the milk secretion. Inflammatory process was induced in AE gland of all animals. It was observed a faster migration of immune cells into the mammary gland of buffaloes and similar (p>0.05) maximum somatic cell count (CS) between the two species, but at different times. At the end of the experiment, buffalo complete milking showed physiological levels of CS, different from cow complete milking. Alteration was observed (p<0.05) in levels of lactose and ESD, which were negatively correlated (p<0.05) to CCS. All animals developed hyperacute clinical mastitis. The bacteria was recovered from all the glands inoculated with the pathogen, with no significant difference in the isolation percentage and UFC/mL Log10 of bovine and bubaline milk until day 11 post inoculation (D14). Difference (p<0.001) was observed at day 30 post inoculation, with recovery of the bacteria in 50% of cows and 8.3% of buffaloes. The CMT reaction was observed in 24h post inoculation more intensely in buffaloes with 75% and 37.5% of positive reactions with 3+ intensity, respectively, in buffaloes and cows (p<0.05). Eleven days post inoculation 100% of cows and 50% of buffaloes were reagents to this test. The CCS by electronic method presented a similar result to that detected by CMT, with buffaloes reacting more intensely post inoculation and evident decreased counting at the end of the experiment. The CCS by electronic method and CMT revealed correlation with the bacterial culture (p<0.001). Some visual alterations in milk and in appearance/consistency of the gland were observed in the first 24h. These two parameters were more intense and persistent in cows, which additionally showed ulcerative lesions in the challenged gland (25%). Decreased production and appetite alterations were seen just within the first 24h post inoculation. There was a milk production average reduction of 37.33% in buffaloes and 47.17% in cows. At the end of the experiment there was a greater number of cows (62.5% versus 25% of buffaloes) with a drop superior to 61% of the initial milk production (p<0.05). The increase in rectal temperature was observed in both species, with 100% of cows and 91.6% of buffaloes reaching temperatures higher than 39.6°C. The parameters of local response to inflammation and systemic response to inflammation, used to evaluate the severity of mastitis were classified by scores. The mean score was higher in the bovine species (p<0.05). Throughout the observation period, there was a higher capacity of buffaloes in reaching the appropriate sanitary status, getting parameters closer to physiological ones at the end of the experiment. The intramammary S. aureus inoculation caused an increase in IL-1β concentrations of bovines and bubalines. The evolution of the cytokine concentration was different between the two species (p<0.05). Buffaloes showed a faster rise and cows reached an 1.57 fold higher concentration. The buffaloes concentration peak occurred in 48h with 0.413 ng of IL-1β per milliliter of milk. The cows showed a less expressive increase in 24h post inoculation and reached a maximum concentration in 72h post inoculation (1.061 ng/mL). In bovine there was correlation (p<0.05) among the milk IL-1β concentration, CCS, localized response to inflammation and rectal temperature. The bovine and bubaline species reached similar maximum countings (p>0.05) of milk CS/mL, but with different mean concentrations (p<0.05) of milk IL-1β/mL, 1.061 ng/mL and 0.120 ng/mL, respectively.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2010-02-27T05:31:25Z No. of bitstreams: 1 2008_LigianeOliveiraLeme.pdf: 795458 bytes, checksum: 6d819ed699aa24cf2af955c31166f54b (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-03-01T23:43:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_LigianeOliveiraLeme.pdf: 795458 bytes, checksum: 6d819ed699aa24cf2af955c31166f54b (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-01T23:43:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_LigianeOliveiraLeme.pdf: 795458 bytes, checksum: 6d819ed699aa24cf2af955c31166f54b (MD5) Previous issue date: 2008-08-18 / O sucesso da PIV está relacionado ao conhecimento das necessidades dos gametas e embriões em diferentes fases do desenvolvimento. É conhecido que embriões PIV são diferentes dos embriões in vivo em vários aspectos. As diferenças entre os dois modelos têm sido pesquisadas na tentativa de tornar os meios artificiais o mais próximo possível ao ambiente natural do embrião. Para tanto, a viabilidade desses embriões (in vivo ou in vitro, oriundos de distintos sistemas de produção) pode ser mensurada por ferramentas diversas, tais como a criotolerância, a análise do metabolismo, os níveis e a expressão de genes. A suplementação protéica dos meios de cultivo tem sido amplamente discutida, na busca pela utilização de meios definidos, onde há o conhecimento da sua composição, possibilitando a eliminação ou acréscimo de produtos benéficos ao embrião, sem que ocorra influência de fatores inerentes desconhecidos do meio – características normalmente atribuídas aos componentes séricos, os quais são mais comumente utilizados, em especial o Soro Fetal Bovino (SFB) e a Albumina Sérica Bovina (BSA). Neste estudo, os efeitos do SFB e da BSA-faf durante a PIV de embriões bovinos, foram investigados quanto à quantidade na produção de blastocistos e em termos de qualidade, quando submetidos à vitrificação e análise de expressão gênica. Foram maturados, fecundados e cultivados in vitro 2.171 ovócitos, oriundos de abatedouro. Em cada réplica, os CCOs foram distribuídos em três tratamentos (T1: suplementação com SFB; T2: suplementação com BSA; T3: suplementação inicial com BSA e final com SFB.). Quanto à taxa de clivagem (D2), não houve diferença entre os tratamentos; porém quanto às taxas de blastocisto, T1 foi superior aos T2 e T3 nos dias 6,5 a 8,5 de avaliação (P<0.001). Os embriões de todos os tratamentos que alcançaram estágio de BL e/ou BX (total de 507 embriões) nos dias 6,5 e 7,5 foram separados e, 50% deles, vitrificados pelo método da OPS, descongelados, retornando então ao CIV, e observados às 24, 48 e 72 horas pós-vitrificação; os outros 50% dos embriões permaneceram como grupo controle. Para esta análise, foram consideradas re-expansão e eclosão das estruturas analisadas como parâmetro de avaliação, mediante os fatores tratamento (T1 vs. T2 e T3), grupo (C vs. V), estágio embrionário (BL vs. BX) e tempo (D6,5 vs. D7,5). Em suma, os resultados para o teste de criotolerância foram: T1=T2>T3; C>V; BX>BL; D6,5>D7,5. Quatro pools com 9 blastocistos eclodidos do grupo controle em D8,5, de cada tratamento, foram formados para avaliação da expressão dos genes MnSOD, Bax, BCL-2, HSP-70, CIRP-b, ACAT-2 e ATP8A1. Para normalização dos dados, foram utilizados os genes constitutivos Actina e GAPDH. A expressão da maioria dos genes não foi significativamente diferente entre T1 e T2, exceto para o ACAT-2 – o qual se diferenciou devido à composição protéica do meio. A menor expressão significativa no T3, pode indicar uma condição sub-ótima deste meio à PIV de embriões. A suplementação com SFB produziu mais embriões e com qualidade semelhante a aqueles produzidos em suplementação de BSA-faf. É possível, portanto, concluir que os componentes séricos presentes no soro não afetaram os parâmetros analisados neste estudo. Possíveis efeitos no desenvolvimento embrionário avançado e fetal, bem como a variação entre as partidas de soro, devem ser analisados em outros experimentos. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The embryo IVP success is related to the knowledge of main requirements from gametes and embryos in different stages of development. It is well known that IVP embryos are quite different of those counterparts in vivo in many aspects. Dissimilarity between both has been studied in tempting to turn artificially mediums mostly similar to embryo natural environment. For that, viability of these embryos (in vivo or in vitro, from diverses systems of production) may be measured by a variety of tools, such as cryotolerance, metabolism analysis, genes levels and expression. Protein medium supplementation in cultive has been largely discussed as well, aiming the substitution for defined components, where there is comprehension of its composition, eliminating or adding benefic products to the embryo in this way, without existing unknown factors in it – characteristics usually attributed to serum components, whose most used are Bovine Calf Serum (FCS) and Bovine Serum Albumin (BSA). In this study, the effects of FCS being substituted total or partially by BSA-faf during bovine embryos IVP, were investigated to quantity (blastocysts rate) and quality, when submitted to vitrification and gene expression analysis. Two thousand one hundred seventy one (2.171) oocytes obtained from abattoir ovary were matured, fertilized and cultured in vitro. In each replicate, CCOs were distributed in three treatments: (T1: supplementation with FCS on IVM and IVC; T2: supplementation with BSA on IVM and IVC; T3: supplementation with BSA on IVM and at the beginning of IVC and FCS, at the end of IVC). For cleavage rates (D2), there were no difference among treatments; therefore for blastocysts rates, T1 was superior to T2 and T3 on days 6.5 to 8.5 of development evaluation (P<0.001). Embryos from all treatments which have reached BL and/or BX stage (507 embryos, in total) were separated and, 50% of them, vitrified by OPS method, post-thawed, returning then to IVC, and observed at 24, 48 and 72 hours post-vitrification; other 50% remaining embryos were preserved as control group. For these analysis, were considered structures re-expansion and hatching rates as a parameter to evaluate factors as treatment (T1 vs. T2 and T3), groups (C vs. V), embryo development stage (BL vs. BX) and time (D6.5 vs. D7.5). At a glance, results for cryotolerance test related to these parameters were: T1=T2>T3; C>V; BX>BL; D6.5>D7.5. Four pools with 9 hatched blastocysts from Control group on D8.5, from each treatment, were formed to evaluate the expression of genes MnSOD, Bax, BCL-2, HSP-70, CIRP-b, ACAT-2 and ATP8A1. To standardize data, the constitutive genes, Actina and GAPDH, were taken. The majority genes expressions were not significantly different between T1 and T2, except for ACAT-2 – who might be due to the medium protein source composition. The smaller and significant expression on T3, should indicate a suboptimal condition of this medium to embryo IVP. The supplementation with FCS produced more embryos with similar quality to those originated from BSA-faf supplementation. It is possible therefore, to conclude that serum components do not affected the parameters analyzed here, in this working environment. Possible effects in late embryo and fetal development, as well as variation among serum batches, should be verified in other experiments.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-22T18:17:53Z No. of bitstreams: 1 2009_EsterSiqueiraCaixeta.pdf: 758651 bytes, checksum: 45bc51487131a4d93e30e7209f9c9405 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-05-11T01:39:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EsterSiqueiraCaixeta.pdf: 758651 bytes, checksum: 45bc51487131a4d93e30e7209f9c9405 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-11T01:39:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EsterSiqueiraCaixeta.pdf: 758651 bytes, checksum: 45bc51487131a4d93e30e7209f9c9405 (MD5) Previous issue date: 2009-01 / O sucesso das várias técnicas de reprodução assistida depende da competência do ovócito. Entretanto, os fatores envolvidos na sua aquisição e as características moleculares de um ovócito competente não são completamente conhecidos. Com o objetivo de avaliar genes relacionados com a competência do ovócito foi quantificado o nível de transcritos de genes candidatos em ovócitos (H1Foo, H2A, H3A, GHR, GDF9, BMP15, OOSP1) e nas células do cumulus (FSHR, EGFR, GHR, PTX3, IGF-II) com diferentes níveis de competência. Folículos ovarianos foram dissecados e distribuídos de acordo com seu diâmetro em quatro grupos: (1) 1,0 a 3,0 mm; (2) 3,1 a 6,0 mm; (3) 6,1 a 8,0 mm; (4) ≥ 8,1 mm. Os complexos cumulus-ovócitos (COCs) foram liberados, classificados morfologicamente, maturados, fecundados e cultivados in vitro, ou desnudados para a mensuração do diâmetro do ovócito. Os ovócitos em estágio de vesícula germinativa desnudados e suas células do cumulus correspondentes foram utilizados para análise de expressão gênica por RT-qPCR. A taxa de blastocistos foi maior nos ovócitos recuperados de folículos >6 mm, que nos outros dois grupos, confirmando que o tamanho folicular é um bom modelo para o estudo da competência. Nos ovócitos, somente os transcritos da H2A aumentaram gradualmente de acordo com o tamanho do folículo, sendo maior (P<0,05) nos ovócitos originados de folículos ≥8,1 mm do que naqueles menores que 6,0 mm. Dos cinco genes avaliados nas células do cumulus, três (FSHR, EGFR, GHR) mostraram diferença no nível de RNAm, aumentando deacordo com o tamanho folicular. Com base nos resultados, foi confirmada a implicação crítica da H2A no desenvolvimento da competência. Além disso, foram identificados genes importantes nas células do cumulus, os quais estão associados com a competência do ovócito e podem refletir a sua qualidade. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The success of the various assisted reproductive techniques depends on oocyte competence. However, the factors involved on its acquisition and the molecular attributes of competent oocyte are generally unknown. In an attempt to assess genes related with oocyte competence we quantify transcripts for candidate genes in oocytes (H1Foo, H2A, H3A, GHR, GDF9, BMP15, OOSP1) and cumulus cells (FSHR, EGFR, GHR, PTX3, IGF-II) of different levels of competence. Follicles were dissected and distributed according to their diameter into 4 groups: (1) 1.0 to 3.0 mm; (2) 3.1 to 6.0 mm; (3) 6.1 to 8.0 mm; (4) ≥ 8.1 mm. The COCs were released, morphologically classified, matured, fertilized and cultured in vitro or denuded for diameter measurements. The denuded germinal vesicle oocytes and their correspondent cumulus cells were used for gene expression analysis by RT-qPCR. Blastocyst rate was higher for the oocytes recovered from follicles >6 mm than the other two groups, confirming that follicles size is a good model to study competence. In the oocyte, only H2A transcript increased gradually according to follicle size, being greater (P<0.05) in oocyte originated from follicles ≥8.1 mm than those lower than 6.0 mm. Of the 5 genes evaluated in the cumulus cells, 3 (FSHR, EGFR and GHR) showed differences in mRNA level, increasing according to follicular size. In conclusion, we confirmed the critical implication of H2A on developmental competence, and identify important genes in cumulus cells which are associated with oocyte competence and can reflect its quality.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-05-27T20:39:23Z No. of bitstreams: 1 LILIAN AZEVEDO FIGUEIREDO.pdf: 510722 bytes, checksum: 7d19a1025be105a28bb3694687343801 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2010-05-31T17:39:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LILIAN AZEVEDO FIGUEIREDO.pdf: 510722 bytes, checksum: 7d19a1025be105a28bb3694687343801 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-31T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LILIAN AZEVEDO FIGUEIREDO.pdf: 510722 bytes, checksum: 7d19a1025be105a28bb3694687343801 (MD5) Previous issue date: 2009 / Os herpesvírus bovinos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5) são vírus de DNA de fita dupla, com envelope glicoprotéico, que pertencem à subfamília Alphaherpesvirinae, gênero Varicellovirus. A principal propriedade biológica dessa subfamília é a capacidade de estabelecer latência após a infecção aguda, quando não é possível sua detecção, exceto quando são utilizadas técnicas moleculares de hibridização in situ e a reação em cadeia pela polimerase (PCR). O BoHV-1 é principalmente atribuído a problemas respiratórios e reprodutivo e raramente à encefalite, como o BoHV-5. Dificuldades de isolamento do BoHV-5 têm sido descritas, o que torna a PCR um importante meio de diagnóstico. O objetivo deste trabalho foi avaliar a importância da técnica da PCR para a detecção do BoHV-5 e do BoHV-1 em SNC de bovinos com encefalite por BoHV-5, com outras encefalopatias e normais. Foram utilizadas amostras de SNC de bovinos atendidos nos Hospitais Veterinários da Universidade de Brasília (HV-UnB) e da Universidade Estadual de Londrina (HV-UEL), além de amostras de matadouros. Nenhuma amostra apresentou resultado positivo para o BoHV-1. Das amostras positivas para o BoHV-5, foram 21 das 68 (30,88%) provenientes do HV-UnB, 2 das 30 (7%) provenientes do matadouro e 2 de 17 (11,76%) provenientes do HVUEL. Dos 21 animais positivos do HV-UnB 3 casos foram de amostras de animais sem diagnóstico conclusivo, 7 casos de animais com diagnóstico confirmado de raiva, 7 casos com encefalite por BoHV-5, 1 caso de animal com polioencefalomalácia, 1 caso de animal com botulismo, 1 caso de animal com encefalite bacteriana e 1 caso de animal com carbúnculo sintomático. Das amostras positivas provenientes do HV-UEL todas eram de animais com diagnóstico de encefalite por BoHV-5 e do matadouro eram de animais sadios. A PCR para detecção do genoma do BoHV-5 em bovinos com encefalopatia não deve ser utilizada isoladamente no diagnóstico, e sim associada aos sinais clínicos, histopatologia, isolamento e imunoistoquímica. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bovine herpesvirus 1 and 5 are enveloped double-stranded DNA viruses belonging to the Herpesviridae family, subfamily Alphaherpesvirinae, genus Varicellovirus. This family major property is to establish a lifelong latent infection after acute infection, when it is not possible to detect the virus, except when molecular techniques as situ hybridization and polymerase chain reaction are used. BoHV-1 is primarily associated with respiratory and reproductive disease in cattle, while BoHV-5 is commonly associated to encephalitis. Difficulties in isolation of BoHV-5 have been described, which makes PCR an important tool of diagnosis. The aim of this study was to evaluate the applicability of PCR assay for the detection of BoHV-1 and BoHV-5 in CNS of bovines with meningoencephalitis, other encephalitis and healthy animals. For the present study, brain fragments samples of bovines were obtained from necropsy routine at Veterinary Hospital of University of Brasília (Hv-UnB) and State University of Londrina (HV-UEL), besides slaughterhouse samples. All CNS fragments were negative for BoHV-1. In 21 of 68 (30,88%) samples from Hv-UnB, 2 of 30 (7%) samples from slaughterhouse and 2 of 17 (11,76%) samples from HV-UEL the results were positive for BoHV-5. Among the 21 positive animals from HV-UnB, 3 where from samples of non-conclusive diagnosis cases, 7 from confirmed rabies diagnosis, 7 from animals with BoHV-5 encephalitis, 1 case of polioencephalomalacia, 1 animal with botulism, 1 with bacterial encephalitis and 1 animal with carbunculus. All positive samples from HV-UEL were from animals with BoHV-5 encephalitis diagnosis and from the slaughterhouse all animals were healthy. The PCR detection of BoHV-5 genome in bovines with encephalopathies must not be used alone as diagnosis but associated with clinical signs, histopathological findings, isolation and immunohistochemistry.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2006. / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2010-10-19T22:24:40Z No. of bitstreams: 1 2006-Georgia Assis Corrêa.pdf: 547203 bytes, checksum: 9313c80c72e30acdf66d51b83b4d9867 (MD5) / Rejected by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br), reason: Falta abstract. Está na p. xv on 2010-10-19T22:45:49Z (GMT) / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2010-11-04T09:39:31Z No. of bitstreams: 1 2006-Georgia Assis Corrêa.pdf: 547203 bytes, checksum: 9313c80c72e30acdf66d51b83b4d9867 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-11-05T21:52:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006-Georgia Assis Corrêa.pdf: 547203 bytes, checksum: 9313c80c72e30acdf66d51b83b4d9867 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-11-05T21:52:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Georgia Assis Corrêa.pdf: 547203 bytes, checksum: 9313c80c72e30acdf66d51b83b4d9867 (MD5) / Apesar dos avanços obtidos nos últimos anos nas técnicas de maturação, fecundação e cultivo in vitro de embriões bovinos, a qualidade dos embriões produzidos in vitro ainda é inferior a dos in vivo. O ambiente de cultivo após a fecundação é considerado responsável pela qualidade dos embriões. Dentre os fatores que podem influenciar o ambiente de cultivo, o estresse oxidativo causado pela alta tensão de O2 tem recebido especial atenção. Atualmente, a maioria dos sistemas de cultivo utilizada para a PIV usa o meio SOFaaci com atmosfera de 5% de O2. Portanto, o presente estudo teve por objetivo comparar a produção de embriões em sistema de cultivo com alta e baixa tensão de O2. Um total de 1118 ovócitos obtidos de ovários de abatedouro foram maturados e fecundados in vitro. Dezoito horas após a inseminação (pi) os zigotos foram separados em 2 grupos. No primeiro grupo (T1) os zigotos foram lavados e transferidos para o meio de cultivo SOFaaci e cultivados por 7 dias em atmosfera de 5% CO2 em ar, à 39°C. No outro grupo (T2), os zigotos foram desnudados por pipetagens sucessivas, e transferidos para o meio SOFaaci, onde foram cultivados em atmosfera de 5% CO2 e 5% de O2, a 39°C. As taxas de clivagem foram avaliadas 48 horas pi e as de blastocisto em D6 e D7 pi. De ambos os grupos, um total de 94 embriões no estágio de blastocisto expandido em D7 foram fixados e corados com aceto-orceína para contagem do número de células, e 7 "pools" com 15 embriões de cada tratamento, foram congelados para avaliação da expressão de genes relacionados ao estresse oxidativo, sendo superóxido dismutase (Mn-SOD), catalase e glutationa peroxidase (GPX4). Os dados relativos à taxa de clivagem e blastocisto foram analisados pelo teste do Chi-quadrado, os de número de células pela análise de variância e os relativos à expressão gênica, pelo teste t de Student ou teste de Mann-Whitney. A taxa de clivagem foi semelhante (P>0,05) para os grupos sendo 77,4% para o T1 e 79,9% para o T2. A taxa de blastocisto em D6 foi maior (P<0,05) no grupo cultivado em baixa tensão de O2 (40,7%) do que no de alta tensão (33,8%). Entretanto, a taxa de blastocisto em D7 foi similar (P>0,05) para os dois grupos, sendo 44,7% e 47,1% para T1 e T2, respectivamente. O número total de células (T1= 175,6±54,1; T2= 160,6±41,8) dos embriões, não variou (P>0,05) entre os dois sistemas de cultivo. A quantidade relativa de transcritos para o gene Mn-SOD foi maior (P<0,05) na presença de alto O2, para a catalase e a GPX4 o nível de expressão foi semelhante nos dois sistemas de cultivo. Esses resultados sugerem que o cultivo de embriões bovinos em meio SOFaaci sob alta tensão de O2 na presença de células do cumulus não afeta a quantidade e qualidade dos embriões produzidos in vitro. É possível que as células do cumulus tenham um papel importante na retirada de substâncias indesejáveis minimizando o estresse oxidativo causado pela alta tensão de O2. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Although substantial progress has been made in the procedures for in vitro maturation, fertilization and culture of bovine oocytes, the percentage and quality of embryos produced in vitro are lower than those produced in vivo. The environment where embryos are cultured after fertilization is the main factor responsible for their quality. Among the factors that can influence the culture environment, oxidative stress caused by high O2 tension, has received special attention. Currently, the majority of the in vitro culture systems for embryo production (IVP) use SOFaaci medium under 5% of O2. Therefore, the present study had the objective to compare in vitro embryo production using high and low O2 during embryo culture. A total of 1118 oocytes obtained from abattoir ovaries were matured and fertilized in vitro. Twenty hours pos-insemination (hpi) the zygotes were divided into two groups. In the first group (T1) the zygotes were washed and transferred to SOFaaci medium and cultured for 7 days under 5% CO2 in air, at 39°C. In the second group (T2) the zygotes were denuded by successive pipetting and then, transferred to SOFaaci medium and cultured under 5% CO2 and 5% de O2 at 39°C. Cleavage rates were evaluated 48 hpi and the blastocyst rates at D6 and D7 pi. From both groups a total of 94 expanded blastocyst, from D7 of culture, were fixed and stained with acetoorcein to evaluate cell numbers. Seven pools of 15 embryos from each treatment were frozen for gene expression evaluation. The abundance of transcripts for genes related to oxidative stress, superoxide dismutase (Mn-SOD), catalase and gluthatione peroxidase (GPX) were determined using a semi-quantitative PCR. Data for cleavage and blastocyst rates were analyzed by Chi-square test and those for embryo cell number by analysis of variance. Data from gene expression were analyzed by t test or Mann-Whitney test. Cleavage rate was similar (P>0.05) for both groups, being 77.4 % for T1 and 79.9% for T2. The blastocyst rate at D6 pi was higher (P<0.05) in the group cultured under low O2 tension (40.7%) than in the high O2 tension (33.8%). However, blastocyst rate at D7 was similar (P>0.05) for both groups, being 44.7% and 47.1% for T1 and T2, respectively. Embryos total cell numbers (T1=175.654.1; T2=160.641.8) did not differ between culture systems (P>0.05). The relative abundance of transcripts for Mn-SOD gene was higher (P<0.05) for embryos cultured in high O2 tension. The catalase and GPX expression level was similar for both systems. The results suggested that culture of bovine embryos in SOFaaci medium under high O2 tension, in the presence of cumulus cells, does not affect quantity and quality of IVP embryos. It is possible that the cumulus cells have an important role in the removal of detrimental substances, minimizing the oxidative stress caused by the high O2 concentration.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-02-24T20:21:38Z No. of bitstreams: 1 2010_TiagoOmarDiesel.pdf: 734259 bytes, checksum: 6e0b1eddf51b2a9c40945329b1aaffcb (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-03-21T14:01:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_TiagoOmarDiesel.pdf: 734259 bytes, checksum: 6e0b1eddf51b2a9c40945329b1aaffcb (MD5) / Made available in DSpace on 2011-03-21T14:01:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_TiagoOmarDiesel.pdf: 734259 bytes, checksum: 6e0b1eddf51b2a9c40945329b1aaffcb (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da estimulação ovariana na quantidade e qualidade de ovócitos obtidos por aspiração folicular transvaginal (OPU) em novilhas Nelore. Foram utilizadas 27 novilhas cíclicas da raça Nelore, sendo que todos os animais passaram pelos três tratamentos em delineamento “cross-over”. Os animais foram sincronizados e no D6 após a manifestação do cio foi realizada a ablação dos folículos ≥ 5mm de diâmetro, com colocação de implante intravaginal de progesterona e aplicação de prostaglandina F2α,. Nos animais do grupo controle (Tc) a OPU foi realizada no D12 após estro; no grupo SOV-LH (T1) no D8 após estro teve início a administração de FSH (162 UI-PLUSET ®) em 6 doses decrescentes de 12 em 12 horas, e a OPU foi realizada 36 horas após a última aplicação de FSH, sendo que 6 horas antes da OPU os animais receberam uma aplicação de 25mg de LH; no grupo SOV (T2) os animais receberam o mesmo tratamento do T1, porém sem aplicação de LH. No momento da OPU os folículos foram contados, classificados pelo tamanho em > 6 mm e < 6 mm e aspirados separadamente de acordo com o tamanho. Os CCOs recuperados foram classificados de acordo com a qualidade morfológica (1-4) e os de qualidade grau 1,2,3 foram utilizados para a PIV. Um total de 833 ovócitos foram maturados e fecundados in vitro, sendo que a taxa de clivagem foi avaliada no D2 (48h após a inseminação) a taxa de blastocisto avaliada nos dias 6,7,8 e a taxa de eclosão no dia 8. Para detectar a existência de efeito do tamanho dos folículos (>6 mm e <6 mm) e tratamentos hormonais (Tc, T1, T2), bem como suas interações sob a taxa de ovócitos recuperados e produção de embriões foi utilizado o modelo linear generalizado misto (MLGM). Para o número de folículos aspirados, ajustou-se um modelo linear generalizado misto família quase Poisson, com função de ligação log, para analisar a taxa de eclosão foi utilizado o modelo linear generalizado família binomial. Os resultados indicaram que o tratamento T2 (8,5 ± 5,5) apresentou número médio de ovócitos recuperados maior (P<0,05) do que o T1 (7,2 ± 4,3) e o Tc (6,7 ± 4,3). Quando as médias foram avaliadas por tamanho de folículo, foi observado número médio de ovócitos recuperados a por sessão maior (P<0,05) nos folículos <6 mm (9,3 ± 5,4) em comparação aos >6 mm (5,7 ± 3,2). O número de folículos <6 mm foi maior (P<0,05) no Tc (34,8 ± 16,3) em relação ao T1(8,5 ± 8,6) e T2 (10,1 ± 7,6), e estes foram semelhantes (P>0,05). Já para folículos >6mm um maior número foi observado no T1(23,5 ± 11,5) e T2 (19,1 ± 6,8) em comparação ao Tc (1,8 ± 1,4) (P<0,05). A produção de ovócitos de qualidade I, II e III de folículos < 6mm, foi maior no Tc em comparação aos tratamentos T1 e T2 (P<0,05). Para folículos < 6mm o T2 produziu mais ovócitos de qualidade I em média, 2,62 vezes maior (P<0,05) em relação ao T1. O contrário ocorreu na produção de ovócitos de qualidade I, II e III de folículos >6mm onde T1 e T2 foram semelhantes, porem produziram mais ovócitos que Tc (P<0,05). Os resultados mostraram que a taxa de blastocisto não diferiu entre os tratamentos (P>0,05) quando apenas os folículos menores do que 6 foram avaliados, sendo 31,2±12,2%, 31,0±16,9% e 24,3±14,1% para Tc, T1 e T2, respectivamente. Entretanto, quando o tamanho do folículo >6mm foi considerado, um aumento (P<0,05) na taxa de blastocistos foi observada nos tratamentos T1 (47,8±21,2%) e T2 (39,1±19,8%) em relação ao Tc (22,2±44,1%). O efeito do tratamento hormonal na produção embrionária também foi detectado quando a análise global foi realizada independente do tamanho do folículo, sendo a taxa de blastocisto maior (P<0,05) no T1 (39,4±20,5%) e T2 (31,7±18,4%) em relação ao Tc (26,7±31,7%). A taxa de eclosão foi semelhante entre todos os tratamentos considerando ou não o tamanho folicular (P>0,05). A superestimulação ovariana, com ou sem aplicação de LH, aumentou a produção de embriões in vitro em novilhas Nelore. Portanto a aplicação de FSH na onda sincronizada para aspiração folicular pode ser uma alternativa viável para a produção comercial de embriões in vitro. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study was to evaluate the effect of ovarian stimulation in quantity and quality of oocytes obtained by ovum pick up (OPU) in Nellore heifers. Twenty seven Nellore cyclical heifers were used in a cross-over experimental design, where all the animals passed by each of the three treatments. All animals were sincronized and on D6 after estrus detection the ablation of follicles ≥ 5 mm in diameter was performed and the animals received an intravaginal implant of progesterone and an application of prostaglandin F2α. In the animals of the control group (Tc) the OPU was performed on D12 after estrus; in the group SOV-LH (T1) on D8 after estrus, it has started the administration of FSH (162 UI-PLUSET ®) in 6 decreasing doses of 12 to 12 hours, the OPU was performed 36 hours after the last application of FSH and, 6 hours before OPU the animals received one application of 25 mg of LH; in the group SOV (T2) the animals received the same treatment as T1, but without the application of LH. At the time of OPU follicles were counted and classified by the size in > 6 mm and <6 mm, and then were aspirated separately. The recovered COCs were classified according to morphological quality (I-IV) to quality in grade I, II, III and were used for IVP. A total of 833 oocytes were matured in vitro, cleavage rate was evaluated on D2 [48 h post insemination (pi)] and blastocyst rate on day 6, 7 and 8 pi, being the hatching rate evaluated on D8 pi. To detect effect of the follicles size (> 6 mm and <6 mm) and hormonal treatments (Tc, T1, T2) and their interactions in the rate of retrieved oocytes and embryo production the generalized linear mixed model (MLGM) with normal distribution and log link function was used. For the number of aspirated follicles, a generalized linear mixed model almost Poisson family was adjusted with log link function. To analyze the hatching a generalized linear model binomial family was used. The results indicated that in T2 treatment (8.5 ± 5.5) a higher number of oocyte was recoverd (P<0.05) than in T1 (7.2 ± 4.3) and Tc (6.7 ± 4.3). When the means were evaluated by follicles size, it was observed a higher number of oocytes per session (P<0.05) in follicles <6 mm (9.3 ± 5.4) compared to >6 mm (5.7 ± 3.2). The number of follicles <6 mm was higher (P <0.05) in Tc (34.8 ± 16.3) compared to T1 (8.5 ± 8.6) and T2 (10.1 ± 7.6), which were similar between them (P>0.05). For follicles > 6 mm a larger number was observed in T1 (23.5 ± 11.5) and T2 (19.1 ± 6.8) compared to Tc (1.8 ± 1.4) (P<0.05). On follicles <6 mm, higher number of oocytes grade I, II and III were recovered in Tc compared to treatments T1 and T2 (P<0.05). For follicles <6 mm the T2 produced more oocytes quality I, being 2.62 times higher (P<0.05) than T1. In contrast, for follicles > 6 mm number of oocytes grade I, II and III was similar between T1 and T2, but it was lower in Tc (P<0.05). The results showed that the blastocyst production did not differ between treatments (P>0.05) when only the follicles smaller than 6 mm were considered, being 31.2 ± 12.2%, 31.0 ± 16.9% and 24.3 ± 14.1% for Tc, T1 and T3, respectively. However, when only follicle > 6 mm were considered, an increase (P<0.05) in blastocyst rate was observed in T1 treatments (47.8 ± 21.2%) and in T2 (39.1 ± 19.8%) compared to Tc (22.2 ± 44.1%). The effect of hormonal treatment on blastocyst production was also detected when a global analysis was conducted independent of follicle size, being the blastocyst rate higher (P<0.05) in T1 (39.4 ± 20.5%) and T2 (31.7 ± 18.4 %) than in Tc (26.7 ± 31.7%). The hatched rate was similar among all treatments considering or not the follicular size (P>0.05), in the general analysis the hatched rate was similar for Tc (39.0±12.2%), T1 (38.7±25.3%) and T2 (35.524.1%). The ovarian stimulation, with or without application of LH, increased the in vitro production of embryos in Nellore heifers. Therefore the application of FSH in the synchronized wave for follicular aspiration may be a viable alternative to the commercial production of embryos in vitro.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-graduação em Agronegócios, 2011. / Submitted by Max Lee da Silva (bruce1415@hotmail.com) on 2011-06-28T12:53:20Z No. of bitstreams: 1 2011_DiogoLeitãoMiranda.pdf: 750042 bytes, checksum: e73945d698596508c21ea065d46b03ab (MD5) / Approved for entry into archive by Guilherme Lourenço Machado(gui.admin@gmail.com) on 2011-06-29T16:12:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_DiogoLeitãoMiranda.pdf: 750042 bytes, checksum: e73945d698596508c21ea065d46b03ab (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-29T16:12:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_DiogoLeitãoMiranda.pdf: 750042 bytes, checksum: e73945d698596508c21ea065d46b03ab (MD5) / O atual cenário de competição no setor agropecuário cria uma série de oportunidades potenciais que só podem ser exploradas por produtores preparados. Além disso, o mercado consumidor começa a fazer mais exigências quanto ao produto final. A questão do bem-estar animal entra em pauta quando mercados importantes, como a União Européia, começam a se preocupar com este fator, exigindo do seu fornecedor que incorpore a garantia de bem-estar animal na sua produção. Assim, o objetivo deste trabalho foi fazer um levantamento da produção de carne bovina nacional, analisando a percepção dos especialistas na área sobre os aspectos do bem-estar animal que podem ser adotados na cadeia produtiva da carne bovina e que conferem impactos tanto na eficiência produtiva dos agentes e na melhoria da qualidade da carne oferecida ao mercado consumidor como nas relações comerciais. O método utilizado para alcançar este objetivo foi o Método Delphi, através de entrevistas dirigidas a especialistas, formulando análises quantitativas e feedbacks para chegar a um consenso, podendo montar um quadro do cenário e formular projeções futuras. A situação da produção pecuária de corte no Brasil varia muito, tanto pelo grande extensão territorial como as diferenças culturais, assim tem-se no país desde produtores que já se preocupam uma produção voltada para o bem-estar animal e, ao mesmo tempo, produtores e frigoríficos que não atendem a requisitos primários de boas práticas e higiene. Mas pelas características da produção pecuária de corte que domina no Brasil, criação extensiva, acredita-se ser possível desenvolver uma produção com maior bem-estar animal criando um mercado diferenciado conseguindo um produto de qualidade e maiores retornos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The current environment of competition in the agricultural sector creates a series of potential opportunities that can only be exploited by prepared producers. Furthermore, the consumer market begins to make more demands on the final product. The issue of animal welfare comes under discussion when important markets like the European Union, are beginning to de be concerned about this factor, requiring from the suppliers to incorporate the care of animal welfare in their production. The objective of this study is to make a diagnosis of national beef production, examining aspects of animal welfare that can be adopted in the production chain of beef and gives impacts both in the efficiency productive agents and in the improving of the quality of meat offered to the consumer market, as well in the trade relations. The method used to achieve this goal was the Delphi method, interviewing a sample of the experts, making quantitative analysis and feedback to reach a consensus, and can assemble a picture of the scenario and make future projections. The situation of beef cattle production in Brazil varies greatly both by the wide expanse of land as cultural differences, so has the country since producers that are already concerned about a production for animal welfare, and at the same time, producers and slaughterhouses that do not meet the primary requirements of good practice and hygiene. But by the features of beef cattle production dominating in Brazil, extensive farming, is believed to be possible to develop a production with higher animal welfare by creating a differentiated market getting a quality product and higher returns.