Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-05-19Bitstream added on 2014-06-13T20:26:09Z : No. of bitstreams: 1 ereno_rl_dr_botfmvz.pdf: 240214 bytes, checksum: e0013dd0770e04e468d38b245d2276d1 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Objetivou-se com o presente trabalho, avaliar a expressão das isoformas do LHR nas células da granulosa de novilhas da raça Nelore (Bos taurus indicus), antes, durante e após o desvio folicular. Para caracterizar o momento do desvio folicular (Experimento 1, primeira etapa), novilhas Nelore (n=20) foram submetidas ao seguinte protocolo de sincronização da ovulação: no D-10 receberam um dispositivo intravaginal liberador de progesterona (1,0 g, DIB®,), associado a aplicação de benzoato de estradiol (BE, 2,5 mg, Estrogin®, via IM). O dispositivo intravaginal foi removido no D-3 e os animais receberam uma aplicação de PGF2a (d-cloprostenol, 500 mg, Prolise®, IM). Vinte e quatro horas mais tarde administrou-se 1,0 mg de BE (via IM) e a partir deste momento, o crescimento do folículo dominante foi acompanhado através de exame ultrasonográfico (US, Aloka SSD 900; transdutor de 7,5 a 9,0 MHz, Japan), realizado a cada 12 horas até 144 horas após a ovulação. Na segunda etapa deste experimento avaliou-se a expressão das isoformas do LHR (M1, M2, M3 e M4) nas células da granulosa de folículos obtidos antes, durante e após o momento esperado para ocorrência do desvio folicular. As mesmas novilhas utilizadas anteriormente foram submetidas ao protocolo de sincronização da ovulação descrito acima e separadas em 3 grupos (segunda etapa): Grupo 2 (G2, 2 dias após a ovulação, n=7), Grupo 2,5 (G2,5, 2,5 dias após a ovulação, n=7) e Grupo 3 (G3, 3 dias após a ovulação, n =7). Os animais foram abatidos 2,0, 2,5 e 3 dias após a ovulação para remoção dos ovários e as células da granulosa, coletadas dos folículos ovarianos, foram separadas para a extração do RNA total com Trizol. A expressão gênica das isoformas de LHR foi mensurada por RT-PCR semi-quantitativo. No experimento 2, um outro lote de novilhas Nelore (n=21) foi submetidos aos procedimentos,... / The main objective of the present work was to evaluate the expression of LHR isoforms in granulosa cells from Nelore heifers, before, during and after follicule deviation. To characterize the time of follicle deviation (Experiment 1, phase 1), Nellore heifers (n=20) were submitted to the following synchronization protocol: at Day -10 (D -10) they received an intravaginal progesterone releasing device (1.0 g, DIB®) and estradiol benzoate (BE, 2.5 mg, Estrogin®, i.m.). Intravaginal device was removed on D -3 and animals received PGF2a (d-cloprostenol, 500 mg, Prolise®, i.m.). Twenty four hours afterwards 1.0 mg de BE (i.m.) was administered and follicular growth of the dominant follicle was registered by ultrasonography (US, Aloka SSD 900; 7.5 to 9.0 MHz probe) performed every 12 h until 144 h after ovulation. In the second phase of this experiment expression of isoforms of LH receptors (M1, M2, M3 and M4) from granullosa cells obtained from follicles before, during and after the expected time of follicle deviation, were evaluated. The same heifers used on phase 1 were submitted to the protocol described above to synchronize ovulation, and randomly allocated in three groups (phase 2): Group 2 (G2, 2 days after ovulation, i.e., before the expect time of deviation, n=7), Group 2.5 (G2.5, 2.5 days after ovulation, i.e., during deviation, n=7) and Group 3 (G3, 3 days after ovulation, i.e., after deviation). The animals were slaughtered 2.0, 2.5, and 3 days after ovulation to remove the ovaries, and granullosa cells from ovarian follicles were separated for total RNA extraction with Trizol. Gene expression of LHR isoforms were determined by RT-PCR. In experiment 2, another group of Nellore heifers (n=21) was exposed to the same procedures described in the second phase of experiment 1, to increase the number of samples from granullosa cells that expressed LHR isoforms. In experiment 1 (phase 1),...(Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-11-19Bitstream added on 2014-06-13T20:19:17Z : No. of bitstreams: 1 marquesfilho_wc_me_botfmvz_prot.pdf: 699571 bytes, checksum: bf2012f0581ebad10e83e33d446f0ed3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Com o objetivo de avaliar os efeitos da eletroejaculação (EEJ) sobre o estresse, 20 touros Nelore foram divididos em grupo Controle (n=10), deslocado semanalmente por nove semanas até o curral para avaliação em grupo dos indicadores comportamentais de bem-estar durante cinco minutos. Posteriormente, os animais foram contidos no tronco para avaliação dos indicadores fisiológicos de bem-estar (freqüências respiratória e cardíaca e temperatura retal) e colheita de sangue, permanecendo sob contenção por cinco minutos, seguidos de nova avaliação dos indicadores fisiológicos e colheita de sangue para mensuração do cortisol e da progesterona plasmáticos. Depois da contenção os animais foram liberados em outro curral para avaliação individual dos indicadores comportamentais por cinco minutos. O grupo Estresse (n=10) foi submetido aos mesmos procedimentos, exceto que foi submetido semanalmente a aplicação de estímulos elétricos transretais pela EEJ durante os cinco minutos em que os animais permaneceram contidos. O grupo Controle foi submetido à EEJ somente na nona semana do experimento. Durante a observação dos períodos pré e pós-contenção, os animais do grupo Estresse apresentaram maior freqüência de abaixamento de cabeça. Este grupo apresentou também maiores freqüências respiratória e cardíaca e maiores concentrações plasmáticas de cortisol e de progesterona na segunda avaliação do período de contenção. A estimulação elétrica transretal alterou os indicadores comportamentais dos períodos pós e de contenção. As freqüências respiratória e cardíaca e as concentrações plasmáticas de cortisol e de progesterona foram maiores na segunda avaliação do período de contenção no grupo Estresse, o que classifica a técnica da eletroejaculação como um agente desencadeador de estresse em touros Nelore (Bos taurus indicus). / The objective this work was to evaluate the stress effects to eletroejaculation (EEJ) in Nelore bulls. Twenty Nelore bulls were divided in two groups. The Control (n=10) was displaced weekly for nine weeks to a stable for evaluation behavior indicators for five minutes. The animals were restrained in a trunk for evaluation of physiological indicators (respiratory and heart rates, and rectal temperature) and blood sample collection for measurement of cortisol and progesterone plasmatic. After that they remained restrained for five minutes, followed by another evaluation of the physilogical variables. They were released in a stable for five minutes for individual evaluation of the behavior indicators. The Stress group (n=10) was submitted to the same protocol except that the animals were submitted to a five minute session of transrectal eletric stimulation by EEJ device while they remained restrained. The animals of the Control group were also submitted to EEJ the nineth week of the study. Both before and after of the restrain period the animals of the Stress group showed greater frequence of lower head than those from Control group. The animals of the Stress group also had higher respiratory and heart rates and cortisol and progesterone plasma concetrations in the second evaluation of the restrain period than those from the Cotrol group. Eletric stimulation modified the welfare behavior indicators both after and during the restrain period. The respiratory and heart rates and cortisol and progesterone plasmatic concentrations of the second evaluation of the restrain period were higher in the Stress group. In conclusion, EEJ for five minutes should be considered as a stress procedure in Nelore bulls (Bos taurus indicus).

Orientador: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Jackson Barros do Amaral / Banca: Stélio Pacca Loureiro Luna / Resumo: Com o objetivo de avaliar os efeitos da eletroejaculação (EEJ) sobre o estresse, 20 touros Nelore foram divididos em grupo Controle (n=10), deslocado semanalmente por nove semanas até o curral para avaliação em grupo dos indicadores comportamentais de bem-estar durante cinco minutos. Posteriormente, os animais foram contidos no tronco para avaliação dos indicadores fisiológicos de bem-estar (freqüências respiratória e cardíaca e temperatura retal) e colheita de sangue, permanecendo sob contenção por cinco minutos, seguidos de nova avaliação dos indicadores fisiológicos e colheita de sangue para mensuração do cortisol e da progesterona plasmáticos. Depois da contenção os animais foram liberados em outro curral para avaliação individual dos indicadores comportamentais por cinco minutos. O grupo Estresse (n=10) foi submetido aos mesmos procedimentos, exceto que foi submetido semanalmente a aplicação de estímulos elétricos transretais pela EEJ durante os cinco minutos em que os animais permaneceram contidos. O grupo Controle foi submetido à EEJ somente na nona semana do experimento. Durante a observação dos períodos pré e pós-contenção, os animais do grupo Estresse apresentaram maior freqüência de abaixamento de cabeça. Este grupo apresentou também maiores freqüências respiratória e cardíaca e maiores concentrações plasmáticas de cortisol e de progesterona na segunda avaliação do período de contenção. A estimulação elétrica transretal alterou os indicadores comportamentais dos períodos pós e de contenção. As freqüências respiratória e cardíaca e as concentrações plasmáticas de cortisol e de progesterona foram maiores na segunda avaliação do período de contenção no grupo Estresse, o que classifica a técnica da eletroejaculação como um agente desencadeador de estresse em touros Nelore (Bos taurus indicus). / Abstract: The objective this work was to evaluate the stress effects to eletroejaculation (EEJ) in Nelore bulls. Twenty Nelore bulls were divided in two groups. The Control (n=10) was displaced weekly for nine weeks to a stable for evaluation behavior indicators for five minutes. The animals were restrained in a trunk for evaluation of physiological indicators (respiratory and heart rates, and rectal temperature) and blood sample collection for measurement of cortisol and progesterone plasmatic. After that they remained restrained for five minutes, followed by another evaluation of the physilogical variables. They were released in a stable for five minutes for individual evaluation of the behavior indicators. The Stress group (n=10) was submitted to the same protocol except that the animals were submitted to a five minute session of transrectal eletric stimulation by EEJ device while they remained restrained. The animals of the Control group were also submitted to EEJ the nineth week of the study. Both before and after of the restrain period the animals of the Stress group showed greater frequence of lower head than those from Control group. The animals of the Stress group also had higher respiratory and heart rates and cortisol and progesterone plasma concetrations in the second evaluation of the restrain period than those from the Cotrol group. Eletric stimulation modified the welfare behavior indicators both after and during the restrain period. The respiratory and heart rates and cortisol and progesterone plasmatic concentrations of the second evaluation of the restrain period were higher in the Stress group. In conclusion, EEJ for five minutes should be considered as a stress procedure in Nelore bulls (Bos taurus indicus). / Mestre

Orientador: Ciro Moraes Barros / Banca: José Buratini Junior / Banca: Marcelo Fabio Nogueira / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Banca: José Roberto Sartori / Resumo: Objetivou-se com o presente trabalho, avaliar a expressão das isoformas do LHR nas células da granulosa de novilhas da raça Nelore (Bos taurus indicus), antes, durante e após o desvio folicular. Para caracterizar o momento do desvio folicular (Experimento 1, primeira etapa), novilhas Nelore (n=20) foram submetidas ao seguinte protocolo de sincronização da ovulação: no D-10 receberam um dispositivo intravaginal liberador de progesterona (1,0 g, DIB®,), associado a aplicação de benzoato de estradiol (BE, 2,5 mg, Estrogin®, via IM). O dispositivo intravaginal foi removido no D-3 e os animais receberam uma aplicação de PGF2a (d-cloprostenol, 500 mg, Prolise®, IM). Vinte e quatro horas mais tarde administrou-se 1,0 mg de BE (via IM) e a partir deste momento, o crescimento do folículo dominante foi acompanhado através de exame ultrasonográfico (US, Aloka SSD 900; transdutor de 7,5 a 9,0 MHz, Japan), realizado a cada 12 horas até 144 horas após a ovulação. Na segunda etapa deste experimento avaliou-se a expressão das isoformas do LHR (M1, M2, M3 e M4) nas células da granulosa de folículos obtidos antes, durante e após o momento esperado para ocorrência do desvio folicular. As mesmas novilhas utilizadas anteriormente foram submetidas ao protocolo de sincronização da ovulação descrito acima e separadas em 3 grupos (segunda etapa): Grupo 2 (G2, 2 dias após a ovulação, n=7), Grupo 2,5 (G2,5, 2,5 dias após a ovulação, n=7) e Grupo 3 (G3, 3 dias após a ovulação, n =7). Os animais foram abatidos 2,0, 2,5 e 3 dias após a ovulação para remoção dos ovários e as células da granulosa, coletadas dos folículos ovarianos, foram separadas para a extração do RNA total com Trizol. A expressão gênica das isoformas de LHR foi mensurada por RT-PCR semi-quantitativo. No experimento 2, um outro lote de novilhas Nelore (n=21) foi submetidos aos procedimentos,...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The main objective of the present work was to evaluate the expression of LHR isoforms in granulosa cells from Nelore heifers, before, during and after follicule deviation. To characterize the time of follicle deviation (Experiment 1, phase 1), Nellore heifers (n=20) were submitted to the following synchronization protocol: at Day -10 (D -10) they received an intravaginal progesterone releasing device (1.0 g, DIB®) and estradiol benzoate (BE, 2.5 mg, Estrogin®, i.m.). Intravaginal device was removed on D -3 and animals received PGF2a (d-cloprostenol, 500 mg, Prolise®, i.m.). Twenty four hours afterwards 1.0 mg de BE (i.m.) was administered and follicular growth of the dominant follicle was registered by ultrasonography (US, Aloka SSD 900; 7.5 to 9.0 MHz probe) performed every 12 h until 144 h after ovulation. In the second phase of this experiment expression of isoforms of LH receptors (M1, M2, M3 and M4) from granullosa cells obtained from follicles before, during and after the expected time of follicle deviation, were evaluated. The same heifers used on phase 1 were submitted to the protocol described above to synchronize ovulation, and randomly allocated in three groups (phase 2): Group 2 (G2, 2 days after ovulation, i.e., before the expect time of deviation, n=7), Group 2.5 (G2.5, 2.5 days after ovulation, i.e., during deviation, n=7) and Group 3 (G3, 3 days after ovulation, i.e., after deviation). The animals were slaughtered 2.0, 2.5, and 3 days after ovulation to remove the ovaries, and granullosa cells from ovarian follicles were separated for total RNA extraction with Trizol. Gene expression of LHR isoforms were determined by RT-PCR. In experiment 2, another group of Nellore heifers (n=21) was exposed to the same procedures described in the second phase of experiment 1, to increase the number of samples from granullosa cells that expressed LHR isoforms. In experiment 1 (phase 1),...(Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-20Bitstream added on 2014-06-13T19:38:28Z : No. of bitstreams: 1 guardieiro_mm_me_botfmvz.pdf: 504146 bytes, checksum: 07979740dad67abc78d3a31a2e3dde43 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente trabalho foi avaliar a resposta superovulatória, a produção embrionária e a resistência à criopreservação através de congelação ou vitrificação de embriões de novilhas Nelore suplementadas com gordura protegida ruminal (Megalac-E®). Foram utilizadas 40 novilhas da raça Nelore mantidas a pasto, divididas em dois grupos experimentais de acordo com o tipo de suplementação fornecido (G = concentrado com gordura protegida ruminal e C = suplementação controle, sem adição de gordura). Os suplementos foram formulados para serem isoenergéticos e isoprotéicos. O delineamento foi do tipo cross-over com 67 (primeira repetição) e 70 d (segunda repetição) de duração. Após 50 d de suplementação dietética, foi realizada a sincronização da emergência da onda para iniciar o protocolo de superovulação. Os embriões colhidos foram congelados ou vitrificados e avaliação de desenvolvimento embrionário in vitro foi realizada posteriormente. Não houve diferença (P > 0,10) entre os Grupos G e C em relação à resposta superestimulatória, ao número total de estruturas, embriões congeláveis, degenerados e ovócitos não fecundados colhidos. Apesar do grupo C ter mostrado maior reposta superovulatória que o G (15,7 ± 1,2 vs 18,0 ± 1,3 CL; P = 0,06), os embriões do Grupo C apresentaram maior taxa de eclosão, independentemente do método de criopreservação, às 48 h (33,1 ± 4,0%; n = 148 vs 17,3 ± 3,3%; n = 137; P = 0,009) e às 72 h (44,3 ± 4,2%; n = 148 vs 30,9 ± 4,0%; n = 137; P = 0,04) de cultivo do que os do grupo G. Além disso, os embriões vitrificados e congelados apresentaram taxas similares de eclosão (P > 0,10). Nas condições do presente estudo, o suplemento composto com gordura protegida não afetou a resposta superestimulatória e a produção de embriões, e os embriões do Grupo Controle foram mais tolerantes à criopreservação. / The aim of the current study was to evaluate the superovulatory response and embryo production, as well as embryo resistance to cryopreservation through freezing or vitrification of embryos from Nellore heifers supplemented with rumen-protected fat, Megalac-E®. Forty heifers kept in pasture were randomly divided into two experimental groups according to supplement source (G = supplement with rumen-protected fat and C = Control, without fat supplementation). The supplements were formulated to be isocaloric and isoproteic. Each female underwent both treatments in a cross-over design with approximately 67 d (first replicate) and 70 d (second replicate). After 50 d of feeding, the emergence of the wave was synchronized with the aid of hormones to iniciate the superovulation protocol. The embryos recovered were frozen or vitrified and subsequently in vitro embryo development evaluation was accomplished. There was no difference between G and C groups (P > 0.10) regarding superstimulatory response, number of total embryos/ova, viable embryos, degenerate embryos, or unfertilized oocytes recovered. However, group C had a greater superovulatory response than G (15.7 ± 1.2 vs 18.0 ± 1.3 CL; P = 0.06). Group C embryos presented greater hatching rate, independently of the cryopreservation method, at 48 h (33.1 ± 4.0%; n = 148 vs 17.3 ± 3.3%; n = 137; P = 0.009) and at 72 h (44.3 ± 4.2%; n = 148 vs 30.9 ± 4.0%; n = 137; P = 0.04) of in vitro culture. Moreover, vitrified and frozen embryos had similar hatching rate (P > 0.10). Under the conditions of the present study, supplementation with protected fat did not affect superstimulatory response, quantity or quality of embryos. However embryos from the Control group were more tolerant to cryopreservation.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-13Bitstream added on 2014-06-13T19:38:30Z : No. of bitstreams: 1 bastos_mr_me_botfmvz.pdf: 790909 bytes, checksum: 06b5f7cf1b70d4316f61ff63d1907d62 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se avaliar o efeito da condição corporal e/ou da alta ingestão de matéria seca (AIMS) na produção in vivo de embriões de fêmeas bovinas superovuladas. Em um primeiro experimento, 14 vacas Simental x Nelore não-lactantes com elevado escore de condição corporal (ECC) foram divididas em grupos de Manutenção=M ou alta ingestão de matéria seca=AIMS. As vacas do grupo AIMS receberam dieta com 180% da manutenção, entre 7 dias antes do início da superovulação (SOV) e o final das aplicações de FSH. O grupo M recebeu dieta de manutenção. O número de folículos recrutados e ovulados não diferiu entre os grupos (P>0,10). Entretanto, os números de estruturas totais e embriões viáveis colhidos foram maiores no grupo M (P<0,05). Em um segundo experimento avaliou-se a influência do ECC associado ou não da AIMS na produção embrionária em 36 novilhas Nelore. AIMS ocorreu por 14 dias antes do início da SOV. Após colheita, os embriões viáveis foram congelados para posterior cultivo até eclosão. Não houve diferença entre os grupos na população folicular ao início da SOV, na resposta superestimulatória ou superovulatória, nem no número ou qualidade dos embriões colhidos. As novilhas com <ECC apresentaram maiores concentrações séricas de IGF-I, entretanto as com >ECC tiveram insulina mais alta. Os embriões dos animais com >ECC apresentaram diâmetro, taxas de eclosão e expressão relativa de mRNA do gene BAX superiores após cultivo do que os coletados no grupo com <ECC. Os resultados conflitantes entre os experimentos e com dados da literatura sugerem haver diferentes respostas à alimentação dependendo da raça ou estado nutricional na produção embrionária. / The aim of this study was to investigate the effect of body condition and/or high dry matter intake (flushing) on in vivo embryo production in superovulated female cattle. A first experiment used 14 non-lactating Nelore x Simmental cows with a high body condition score (BCS) divided into Maintenance=M or Flushing=F groups. Seven days prior to onset of superovulation (SOV) until the last day of treatment with FSH, group F cows were fed a diet to achieve 180% of maintenance. Group M cows were fed a maintenance diet. The number of recruited or ovulated follicles did not differ between groups (P>0.10). However, the total number of embryos/ova and the number of viable embryos recovered were greater in the M group (P<0.05). A second study investigated whether differences in BCS, associated or not with nutritional flushing, influence the embryo production in 36 Nelore heifers. Nutritional flushing was conducted during 14 days prior to the onset of SOV. After recovery, viable embryos were frozen to be subsequently cultured until hatching. There was no difference among groups for follicle population at onset of SOV, superstimulatory or superovulatory responses, nor number or quality of recovered embryos. Heifers with <BCS had grater blood concentrations of IGF-I, whereas heifers with >BCS had grater insulin. Embryos collected from >BCS heifers had greater diameter, hatching rates and relative expression of the BAX gene mRNA than the ones recovered from <BCS heifers. The conflicting results between the experiments and also in relation to data from the literature suggest that there are different responses to diets depending on animal breed or nutritional status on embryo production.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-27Bitstream added on 2014-06-13T20:19:19Z : No. of bitstreams: 1 moya_cf_dr_botfmvz.pdf: 348880 bytes, checksum: dfb1789c8b1c607bbc3d25ebe0e02063 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Tendo em vista, a incidência de problemas fetais observados no momento do parto de animais produzidos in vitro (PIV) e a escassez de literatura nesta área, o presente estudo teve por objetivo determinar os níveis de fator de necrose tumoral-alfa (TNF-), interferon-gama (IFN-), interleucina-6 (IL-6) e IL-8 no fluido amniótico de bezerros oriundos de PIV comparando com aqueles obtidos pela transferência de embrião convencional e inseminação artificial no momento do parto, na tentativa de auxiliar na resolução de problemas ainda pouco conhecidos que são observados a campo durante emprego comercial da PIV. Foram utilizados sessenta animais divididos em grupo 01: vinte vacas gestando bezerros da raça Nelore PO de inovulações de embriões oriundos de doadoras superovuladas pelo método convencional (TE); grupo 02: vinte vacas gestando bezerros Nelore PO de inovulações de embriões oriundos de PIV; grupo 03: vinte vacas Nelore PO gestando bezerros oriundos de inseminação artificial (IA) - controle. Todos os partos dos animais do experimento foram observados. Durante a fase de expulsão e após a ruptura do alantocórion, foi realizada a punção do âmnion para a colheita de 15mL de líquido amniótico utilizando-se agulhas e seringas descartáveis compatíveis. O material foi depositado em tubo plástico e congelado em freezer para posterior análise laboratorial. O acompanhamento do padrão de desenvolvimento dos bezerros no periparto foi realizado. Após a descongelação das amostras foi realizado ensaio imunoenzimático (ELISA) para a dosagem de TNF-, com emprego do Kit comercial: ESS0011 - Bovine TNF Alpha, para IFN- foi Kit comercial: ESS0026 - Bovine IFN-, para IL-6 foi Kit comercial: ESS0029 - Bovine IL-6 da Pierce Biotechnology e para IL-8 Kit... / In view, the incidence of fetal problems seen at the time of birth of animals in vitro production and the be short of the literature in this area, this study aimed to determine the levels of tumor necrosis factor (TNF-), interferon-gamma (IFN-), interleukin-6 (IL-6) and IL-8 in amniotic fluid of calves from in vitro production (IVP) compared with those obtained by conventional embryo transfer and artificial insemination at the delivery, in an attempt to assist in solving problems that are still little known observed in simulations and the experimental field of commercial employment during IVP. Sixty animals used were divided into groups: 1 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves of embryos transfer conventional method (ET); 2 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves obtained by in vitro production after follicular aspiration; 3 - Twenty pregnant Nelore cows bearing calves obtained by artificial insemination (AI). All births of the animals of the experiment were observed. During the expulsion phase the amnion was punctured and 15mL of fluid were collected using a needle and syringes compatible. The material was deposited on plastic tube and frozen in freezer for later analysis. Monitoring the pattern of development of the calves in peripartum was performed. The cytokines levels were measured by immunoenzymatic assay (ELISA). The commercial kit used was: ESS0011 - Bovine TNF Alpha, ESS0026 - Bovine IFN- gamma, ESS0029 - Bovine IL-6 Pierce Biotechnology and comercial Kit: D8000C - Human IL-8 of the R & D Systems. The protocol was performed according to the manufacturer´s recommendations. The densities were evaluated in automatic optical reader ELISA. The well plates were read at 450nm. The Kruskal-Wallis Test was used for statistical analysis... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Roberto Sartori Filho / Banca: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar a resposta superovulatória, a produção embrionária e a resistência à criopreservação através de congelação ou vitrificação de embriões de novilhas Nelore suplementadas com gordura protegida ruminal (Megalac-E®). Foram utilizadas 40 novilhas da raça Nelore mantidas a pasto, divididas em dois grupos experimentais de acordo com o tipo de suplementação fornecido (G = concentrado com gordura protegida ruminal e C = suplementação controle, sem adição de gordura). Os suplementos foram formulados para serem isoenergéticos e isoprotéicos. O delineamento foi do tipo cross-over com 67 (primeira repetição) e 70 d (segunda repetição) de duração. Após 50 d de suplementação dietética, foi realizada a sincronização da emergência da onda para iniciar o protocolo de superovulação. Os embriões colhidos foram congelados ou vitrificados e avaliação de desenvolvimento embrionário in vitro foi realizada posteriormente. Não houve diferença (P > 0,10) entre os Grupos G e C em relação à resposta superestimulatória, ao número total de estruturas, embriões congeláveis, degenerados e ovócitos não fecundados colhidos. Apesar do grupo C ter mostrado maior reposta superovulatória que o G (15,7 ± 1,2 vs 18,0 ± 1,3 CL; P = 0,06), os embriões do Grupo C apresentaram maior taxa de eclosão, independentemente do método de criopreservação, às 48 h (33,1 ± 4,0%; n = 148 vs 17,3 ± 3,3%; n = 137; P = 0,009) e às 72 h (44,3 ± 4,2%; n = 148 vs 30,9 ± 4,0%; n = 137; P = 0,04) de cultivo do que os do grupo G. Além disso, os embriões vitrificados e congelados apresentaram taxas similares de eclosão (P > 0,10). Nas condições do presente estudo, o suplemento composto com gordura protegida não afetou a resposta superestimulatória e a produção de embriões, e os embriões do Grupo Controle foram mais tolerantes à criopreservação. / Abstract: The aim of the current study was to evaluate the superovulatory response and embryo production, as well as embryo resistance to cryopreservation through freezing or vitrification of embryos from Nellore heifers supplemented with rumen-protected fat, Megalac-E®. Forty heifers kept in pasture were randomly divided into two experimental groups according to supplement source (G = supplement with rumen-protected fat and C = Control, without fat supplementation). The supplements were formulated to be isocaloric and isoproteic. Each female underwent both treatments in a cross-over design with approximately 67 d (first replicate) and 70 d (second replicate). After 50 d of feeding, the emergence of the wave was synchronized with the aid of hormones to iniciate the superovulation protocol. The embryos recovered were frozen or vitrified and subsequently in vitro embryo development evaluation was accomplished. There was no difference between G and C groups (P > 0.10) regarding superstimulatory response, number of total embryos/ova, viable embryos, degenerate embryos, or unfertilized oocytes recovered. However, group C had a greater superovulatory response than G (15.7 ± 1.2 vs 18.0 ± 1.3 CL; P = 0.06). Group C embryos presented greater hatching rate, independently of the cryopreservation method, at 48 h (33.1 ± 4.0%; n = 148 vs 17.3 ± 3.3%; n = 137; P = 0.009) and at 72 h (44.3 ± 4.2%; n = 148 vs 30.9 ± 4.0%; n = 137; P = 0.04) of in vitro culture. Moreover, vitrified and frozen embryos had similar hatching rate (P > 0.10). Under the conditions of the present study, supplementation with protected fat did not affect superstimulatory response, quantity or quality of embryos. However embryos from the Control group were more tolerant to cryopreservation. / Mestre

Orientador: Nereu Carlos Prestes / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Márcia Guimarães da Silva / Banca: Daniel Bartole de Sousa / Resumo: Tendo em vista, a incidência de problemas fetais observados no momento do parto de animais produzidos in vitro (PIV) e a escassez de literatura nesta área, o presente estudo teve por objetivo determinar os níveis de fator de necrose tumoral-alfa (TNF-), interferon-gama (IFN-), interleucina-6 (IL-6) e IL-8 no fluido amniótico de bezerros oriundos de PIV comparando com aqueles obtidos pela transferência de embrião convencional e inseminação artificial no momento do parto, na tentativa de auxiliar na resolução de problemas ainda pouco conhecidos que são observados a campo durante emprego comercial da PIV. Foram utilizados sessenta animais divididos em grupo 01: vinte vacas gestando bezerros da raça Nelore PO de inovulações de embriões oriundos de doadoras superovuladas pelo método convencional (TE); grupo 02: vinte vacas gestando bezerros Nelore PO de inovulações de embriões oriundos de PIV; grupo 03: vinte vacas Nelore PO gestando bezerros oriundos de inseminação artificial (IA) - controle. Todos os partos dos animais do experimento foram observados. Durante a fase de expulsão e após a ruptura do alantocórion, foi realizada a punção do âmnion para a colheita de 15mL de líquido amniótico utilizando-se agulhas e seringas descartáveis compatíveis. O material foi depositado em tubo plástico e congelado em freezer para posterior análise laboratorial. O acompanhamento do padrão de desenvolvimento dos bezerros no periparto foi realizado. Após a descongelação das amostras foi realizado ensaio imunoenzimático (ELISA) para a dosagem de TNF-, com emprego do Kit comercial: ESS0011 - Bovine TNF Alpha, para IFN- foi Kit comercial: ESS0026 - Bovine IFN-, para IL-6 foi Kit comercial: ESS0029 - Bovine IL-6 da Pierce Biotechnology e para IL-8 Kit... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In view, the incidence of fetal problems seen at the time of birth of animals in vitro production and the be short of the literature in this area, this study aimed to determine the levels of tumor necrosis factor (TNF-), interferon-gamma (IFN-), interleukin-6 (IL-6) and IL-8 in amniotic fluid of calves from in vitro production (IVP) compared with those obtained by conventional embryo transfer and artificial insemination at the delivery, in an attempt to assist in solving problems that are still little known observed in simulations and the experimental field of commercial employment during IVP. Sixty animals used were divided into groups: 1 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves of embryos transfer conventional method (ET); 2 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves obtained by in vitro production after follicular aspiration; 3 - Twenty pregnant Nelore cows bearing calves obtained by artificial insemination (AI). All births of the animals of the experiment were observed. During the expulsion phase the amnion was punctured and 15mL of fluid were collected using a needle and syringes compatible. The material was deposited on plastic tube and frozen in freezer for later analysis. Monitoring the pattern of development of the calves in peripartum was performed. The cytokines levels were measured by immunoenzymatic assay (ELISA). The commercial kit used was: ESS0011 - Bovine TNF Alpha, ESS0026 - Bovine IFN- gamma, ESS0029 - Bovine IL-6 Pierce Biotechnology and comercial Kit: D8000C - Human IL-8 of the R & D Systems. The protocol was performed according to the manufacturer's recommendations. The densities were evaluated in automatic optical reader ELISA. The well plates were read at 450nm. The Kruskal-Wallis Test was used for statistical analysis... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Roberto Sartori Filho / Banca: José Buratini Júnior / Banca: Pietro Sampaio Baruselli / Resumo: Objetivou-se avaliar o efeito da condição corporal e/ou da alta ingestão de matéria seca (AIMS) na produção in vivo de embriões de fêmeas bovinas superovuladas. Em um primeiro experimento, 14 vacas Simental x Nelore não-lactantes com elevado escore de condição corporal (ECC) foram divididas em grupos de Manutenção=M ou alta ingestão de matéria seca=AIMS. As vacas do grupo AIMS receberam dieta com 180% da manutenção, entre 7 dias antes do início da superovulação (SOV) e o final das aplicações de FSH. O grupo M recebeu dieta de manutenção. O número de folículos recrutados e ovulados não diferiu entre os grupos (P>0,10). Entretanto, os números de estruturas totais e embriões viáveis colhidos foram maiores no grupo M (P<0,05). Em um segundo experimento avaliou-se a influência do ECC associado ou não da AIMS na produção embrionária em 36 novilhas Nelore. AIMS ocorreu por 14 dias antes do início da SOV. Após colheita, os embriões viáveis foram congelados para posterior cultivo até eclosão. Não houve diferença entre os grupos na população folicular ao início da SOV, na resposta superestimulatória ou superovulatória, nem no número ou qualidade dos embriões colhidos. As novilhas com <ECC apresentaram maiores concentrações séricas de IGF-I, entretanto as com >ECC tiveram insulina mais alta. Os embriões dos animais com >ECC apresentaram diâmetro, taxas de eclosão e expressão relativa de mRNA do gene BAX superiores após cultivo do que os coletados no grupo com <ECC. Os resultados conflitantes entre os experimentos e com dados da literatura sugerem haver diferentes respostas à alimentação dependendo da raça ou estado nutricional na produção embrionária. / Abstract: The aim of this study was to investigate the effect of body condition and/or high dry matter intake (flushing) on in vivo embryo production in superovulated female cattle. A first experiment used 14 non-lactating Nelore x Simmental cows with a high body condition score (BCS) divided into Maintenance=M or Flushing=F groups. Seven days prior to onset of superovulation (SOV) until the last day of treatment with FSH, group F cows were fed a diet to achieve 180% of maintenance. Group M cows were fed a maintenance diet. The number of recruited or ovulated follicles did not differ between groups (P>0.10). However, the total number of embryos/ova and the number of viable embryos recovered were greater in the M group (P<0.05). A second study investigated whether differences in BCS, associated or not with nutritional flushing, influence the embryo production in 36 Nelore heifers. Nutritional flushing was conducted during 14 days prior to the onset of SOV. After recovery, viable embryos were frozen to be subsequently cultured until hatching. There was no difference among groups for follicle population at onset of SOV, superstimulatory or superovulatory responses, nor number or quality of recovered embryos. Heifers with <BCS had grater blood concentrations of IGF-I, whereas heifers with >BCS had grater insulin. Embryos collected from >BCS heifers had greater diameter, hatching rates and relative expression of the BAX gene mRNA than the ones recovered from <BCS heifers. The conflicting results between the experiments and also in relation to data from the literature suggest that there are different responses to diets depending on animal breed or nutritional status on embryo production. / Mestre