Thèse d'exercice : Médecine vétérinaire : Toulouse 3 : 2009. / Titre provenant de l'écran titre. Bibliogr. f. 75-78.

Th. doct.-ing.--Sci. et tech. en prod. animale--Toulouse--I.N.P., 1982. N°: 222.

En utilisant un modèle de phase folliculaire artificielle, la quantité minimale d’œstradiol (E) nécessaire pour induire le pic préovulatoire de LH et le comportement sexuel a été comparée chez des brebis de prolificité différentes : Ile de France (IF) vs Romanov (ROM). Un signal œstrogénique très faible induit le comportement sexuel chez la brebis ROM mais pas chez l’IF. L’induction du pic préovulatoire de LH nécessite des quantités d’E très supérieures chez la ROM par comparaison à l’IF. Le pic de LH apparaît plus tard chez la ROM. L’étude de la sensibilité hypophysaire et hypothalamique à l’E a montré que le moment du pic préovulatoire de LH est essentiellement contrôlé par l’hypothalamus. Chez la ROM, des doses modérées d’E stimulent une faible libération de GnRH dans le liquide céphalorachidien, sans qu’elle ne soit traduite au niveau hypophysaire par une augmentation de libération parallèle de LH. Ce peptide, participerait au contrôle du comportement sexuel induit par l’E. La grande différence de sensibilité à l’E entre les deux races semble être liée à un seuil de « lecture » différent du signal œstrogénique pour induire le pic de LH et le comportement sexuel. / Using an artificial follicular phase model, the minimum estradiol (E) requirement to induce the preovulatory LH surge and estrous behaviour, was compared between two breeds of ewes having either single (Ile de France= IF) or multiple (Romanov= ROM) ovulations. While a small E signal is sufficient to induce estrous behaviour, in ROM ewe, the same treatment has no effect on IF ewe. A much larger amount of E is required to induce the LH surge in the ROM compared to the IF. The onset of the LH surge occurred earlier in IF. Pituitary and hypothalamic sensitivity to E were studied in vivo and in vitro. The timing of the LH surge is essentially under the control of the hypothalamus. The latency to the onset of the LH surge is timed by a negative feedback effect of E at the hypothalamic level which is longer in ROM ewes. A moderate E signal stimulates a light GnRH secretion into the cerebrospinal fluid, which was not accompanied by a parallel pituitary LH discharge. GnRH appears involved in the control of estrous behaviour. The difference in sensitivity to E between IF and ROM ewes to induce LH surge and estrous behaviour is more than likely due to a different threshold in the lecture of the E signal.

Thèse d'exercice : Médecine vétérinaire : Toulouse 3 : 2008. / Titre provenant de l'écran titre. Bibliogr. f. 50-54.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine vétérinaire : Toulouse 3 : 2007. / Titre provenant de l'écran titre. Bibliogr. p. 130-137.

Thèse (M.Sc.)--Université Laval, 2008. / Bibliogr. Publié aussi en version électronique dans la Collection Mémoires et thèses électroniques.

Aux Antilles Françaises, les animaux d’élevage sont susceptibles d’être exposés à la chlordécone (CLD), Polluant Organique Persistant (POP) présent dans leur environnement. Afin de sécuriser les Denrées Alimentaires d’Origine Animale (DAOA) destinées à la consommation humaine, nos travaux ont porté sur l’étude du devenir de la CLD chez la brebis. Les objectifs de ces travaux étaient de comprendre comment s’effectue l’élimination de la molécule depuis l’organisme animal c’est-à-dire de déterminer par quelle(s) voie(s), sous quelle(s) forme (s), en combien de temps, en quelle quantité et par quels mécanismes s’élimine la CLD. Pour cette étude, deux volets ont été considérés : un volet analytique et un volet toxicocinétique. En effet, les méthodes de dosage connues des métabolites de la CLD ne permettaient pas d’obtenir la sensibilité et la fiabilité attendues pour nos travaux. Ainsi, un développement analytique de méthodes de dosage de la CLD et de ses métabolites dans les matrices d’intérêt a été mené. Ces travaux analytiques se sont appuyés sur une méthodologie d’extraction de type Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe (QuEChERS), une analyse par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/MS) et l’utilisation d’étalons internes isotopiques. Ce développement permet de disposer de méthodes de dosage sensibles, rapides et fiables de la CLD et de ses métabolites dans différentes matrices animales. A l’issue de l’étape de développement analytique, les méthodes dans le foie, les fèces et les urines ont été validées à l’aide de profils d’exactitude établis selon la norme V03-110 et le guide SANTE de référence pour les pesticides. Pour exemple, dans la matrice foie, des limites de quantification de 1,36 µg kg-1 PF et de 2,50 µg kg-1 PF respectivement de chlordécone et de chlordécol (métabolite de la CLD) ont été retrouvées. Le deuxième volet de cette thèse s’est appuyé sur deux protocoles toxicocinétiques réalisés chez la brebis. A l’aide de ces expérimentations, il a été possible de combler une partie des lacunes sur la toxicocinétique de la CLD chez la brebis. Nos travaux ont démontré que la CLD est partiellement métabolisée en chlordécol (CLDOH) par la chlordécone réductase dans le foie des brebis. Par la suite, la CLD et le CLDOH peuvent être métabolisés à l’aide d’UDP-glucuronosyl-transferases et de sulfo-transferases en métabolites conjugués de la CLD et du CLDOH (CLD-C et CLDOH-C). Le CLDOH est un métabolite intermédiaire qui n’est quasiment jamais quantifié dans l’organisme animal hormis dans le tissu gras. L’élimination de la CLD se fait majoritairement via les fèces : 1/3 de la molécule parent CLD est éliminé sous forme de CLD et 1/6 est éliminé sous forme de CLDOH. La voie urinaire est une voie mineure d’élimination de la CLD. A l’aide de ces travaux, un modèle compartimental a été proposé. Sur la base de ce modèle, des travaux de modélisation seront possibles et permettront la proposition et la mise en place de stratégies de décontamination des ovins aux Antilles Françaises / In the French West Indies (FWI), farming animals can be exposed to CLD, a persistent organic pollutant (POP) bound to soil in contaminated areas. In order to produce safe animal products, this thesis was focused on the CLD’s fate in ewes. The aims were to determine by which way(s), in which form(s), in how much time, in which quantities and by which mechanisms, CLD would be eliminated from the animal body. In this thesis, two complementary approaches were followed. First it was necessary to improve the analytical methods especially for the metabolites in order to obtain more sensitive and reliable methods than the actual ones. In the analytical approach, methods for CLD and its metabolites were developed in various animal matrices suitable for the toxicokinetic studies. The extraction method was based on the Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe (QuEChERS) methodology and the analysis was performed with a liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Isotopic Standards were also used. Thanks to this work, sensitive, quick and reliable methods were obtained in animal matrices. The set-up methods in liver, feces and urine were validated with accuracy profiles according to the French Standard NF V03-110 and European Union guidelines. Limits of quantifications of 1.36 μg kg−1 and 2.50 μg kg−1 of fresh liver were respectively found for chlordecone and chlordecol (the CLD’s metabolite). Secondly, and thanks to the analytical development, in vivo toxicokinetic studies were performed to determine the fate of CLD in ewes. The second approach of this thesis was based on two toxicokinetic protocols realized in ewes. The results revealed that CLD is partially metabolized in chlordecol (CLDOH) by the chlordecone reductase in ewe’s liver. Then, CLD and CLDOH can be conjugated by UDP-glucuronosyl-transferases and sulfo-transferases in conjugated metabolites (CLD-C and CLDOH-C). It appeared that CLDOH is only an intermediate metabolite which is almost never quantified in the organism except in fat tissue. The major route of CLD elimination is in feces: 1/3 of the molecule is eliminated in its CLD’s form and 1/6 in its CLDOH’s form. The urinary way of CLD elimination is minor. Based on the obtained results, a compartmental model was proposed. It will allow to propose and to establish ovine decontamination strategies in the FWI

La culture de cortex ovarien se pose comme une alternative à l'autogreffe après autoconservation ovarienne. Pour améliorer la survie folliculaire après congélation, nous avons évalué chez la brebis l'influence de l'épaisseur de cortex ; 0,5 vs 1mm, du support de culture et du cryoprotecteur DMSO 2M vs PROH 1,5M+sucrose 0,3M. L'épaisseur de tissu de 1mm sur filtre millicell avec le protocole de congélation DMSO 2M a montré les meilleurs résultats avec 39% de survie folliculaire au 4e jour de culture. Sur tissu frais de brebis et humain, nous avons exploré un éventuel déficit d'expression en culture de Gdf9, de Bmp15 et de leur récepteurs qui expliquerait le blocage de croissance folliculaire in vitro. Dans les deux modèles la présence des ARNm et des protéines de Gdf9 et Bmp15 est maintenue et l'expression protéique de leurs récepteurs BmprIA, BmprIB, BmprII est conservée. Ce travail montre que la survie en culture après cryoconservation peut être optimisée, la cause du blocage de croissance reste à définir

L’objectif de cette thèse était d’identifier une mutation nommée FecLL affectant le nombre d’ovulations et la prolificité des brebis de race Lacaune et d’en analyser les conséquences physiologiques. En associant des approches de génétique et de biologie fonctionnelle à haut débit telles que le séquençage Roche 454 et la spectrométrie de masse, j’ai mis en évidence que la mutation FecLL est un haplotype de 2 SNPs présents dans des régions non-codantes d’un locus de 194,6kb porté par le chromosome 11 ovin. Cette mutation induit la surexpression ovarienne et l’activité du gène B4GALNT2 (beta-1,4-N-acetyl-galactosaminyl transferase 2) codant une enzyme de glycosylation capable de transférer un sucre N-acétyl-galactosamine sur des glycoprotéines cibles, dont l’inhibine A, une hormone importante pour la fonction ovarienne. Les conséquences de cette glycosylation atypique sont une altération de la production d’inhibine A chez les brebis Lacaune mutées, proposée comme mécanisme initiateur de leur hyper-prolificité. / The aim of this thesis was to identify a mutation called FecLL affecting ovulation rate and prolificacy of Lacaune sheep and to study its physiological consequences. By combining genetics and functional highthroughput biology approaches such as Roche 454 sequencing and mass spectrometry, I evidenced the FecLL mutation as a 2 SNP haplotype present in non-coding regions of a 194.6 kb locus on ovine chromosome 11. This mutation induces ectopic overexpression and ovarian activity of the B4GALNT2 (beta-1,4-N-acetylgalactosaminyl transferase 2) gene encoding a glycosylation enzyme capable of transferring a N-acetylgalactosamine sugar on target glycoproteins. Among those targets, I highlighted inhibin A, an important hormone in ovarian function. The consequences of this atypical glycosylation lead to impaired production of inhibin A in Lacaune mutated sheep proposed as an initiator mechanism of their hyper- prolificacy.

Malgré les progrès réalisés en procréation médicalement assistée, les patientes ayant une infertilité utérine (IU) ne peuvent à ce jour mener une grossesse, contrairement aux patientes présentant une infertilité d’origine ovarienne ou tubaire. La transplantation utérine (TU) pourrait être une alternative à l’adoption et à la gestation pour autrui (GPA). Objectifs : Réalisation d’études expérimentales, translationnelles et cliniques.Méthodologie : Au cours de cette thèse, des travaux expérimentaux chez la brebis ont compris l’évaluation de l’IRM pelvienne, la réalisation d’allo-transplantation utérine, l’étude d’un modèle d’immunosuppression et l’évaluation originale de la tolérance à l’ischémie froide de l’utérus utilisant la membrane chorio-allantoïdienne d’embryon de poulet (CAM). Les études translationnelles et cliniques ont compris l’évaluation du prélèvement utérin (PU) au sein d’un prélèvement multi-organe (PMO) avec analyse de la tolérance à l’ischémie froide de l’utérus humain, l’évaluation de l’expression HLA par immunohistochimie du tissu utérin et l’évaluation de l’intérêt vis-à-vis de la TU.Résultats : L’IRM semble être l’examen de choix pour l’évaluation du greffon utérin. L’allo-transplantation utérine chez la brebis est complexe notamment en raison de la difficulté d’obtenir une immunosuppression optimale. L’administration de ciclosporine à travers une gastrostomie optimise l’exposition au traitement mais n’est pas envisageable à moyen terme. La greffe de tissu utérin sur CAM a révélé la capacité de l’endomètre à proliférer après 24 heures d’ischémie froide suggérant une tolérance à l’ischémie supérieure à celle du myomètre. La réalisation d’un PU au sein d’un PMO semble reproductible. L’exposition des tissus utérins à 24 heures d’ischémie froide n’a pas révélé de modifications histologiques majeures ni de majoration du signal apoptotique par TUNEL ou Caspase 3 clivée. L’expression forte HLA I et II par l’endomètre suggère l’utilisation, en cas de TU, d’un protocole d’immunosuppression optimal et d’un appariement HLA. Enfin, la population de patientes ayant une IU, peu connue jusque-là, est majoritairement représentée par les femmes atteintes du syndrome MRKH. L’intérêt pour la TU semble réel, l’adoption voire la GPA ne semblant satisfaire ces patientes. Perspectives: Nous prévoyons d’évaluer la TU à partir de donneuses en état de mort encéphalique dans le cadre d’un PHRC national. Par ailleurs, nous continuons un entrainement chirurgical chez l’animal avec l’étude de la tolérance à l’ischémie reperfusion de l’utérus de brebis selon une période courte ou prolongée d’ischémie froide. / In case of uterine infertility, uterus transplantation could be an alternative to adoption or surrogacy. We performed different experimental, translationnal and clinical studies in the field of uterus transplantation. We assessed surgery of uterus retrieval, resistance of the uterus to cold ischemia, the HLA expression from the uterus and the demand from patients with uterine infertility for uterus transplantation.