Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-05Bitstream added on 2014-06-13T19:33:18Z : No. of bitstreams: 1 meirelles_jad_me_jabo.pdf: 1044355 bytes, checksum: 0bc33764beb92268741c437b1c688dd8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os búfalos possuem importância econômica como animais de produção no cenário agropecuário brasileiro e mundial. O conhecimento de polimorfismos em marcadores microssatélites mapeados em búfalos é imprescindível para auxiliar em questões evolutivas da espécie, variabilidade genética intra e inter-populacional, além de serem potencialmente úteis para os programas de melhoramento animal. Foram utilizadas três raças comerciais bubalinas, Mediterrâneo, Jafarabadi e Murrah de rebanhos brasileiros para análise de polimorfismos visando avaliar a diversidade genética existente dentro e entre as raças. Foram analisados 30 animais de cada raça pela amplificação do DNA genômico extraído do bulbo de pelos utilizando quatro locos microssatélites localizados em um cromossomo de interesse econômico. Os produtos de PCR foram separados por eletroforese vertical em gel de poliacrilamida desnaturante. O loco IDVGA-53 não obteve sucesso na amplificação e foi descartado das análises de polimorfismo. Os locos MB099 e BL41 foram monomórficos. Os parâmetros de diversidade foram gerados para o loco CSSM054, o único polimórfico, com média de 3,33 alelos por loco. A heterozigosidade observada com média de 0,503 foi maior que a esperada, indicando excesso de heterozigotos. As raças Mediterrâneo e Jafarabadi apresentaram desvio de equilíbrio de Hardy-Weinberg. O parâmetro Theta indicou evidências de que as três raças diferem entre si, e quando analisadas duas a duas foi possível verificar alta estruturação populacional entre elas. A maior distância genética foi verificada entre as raças Mediterrâneo e Murrah. O conteúdo de informação polimórfica revelou que o loco CSSM054 foi altamente informativo para a raça Mediterrâneo, portanto, considerando todos os resultados, essa raça apresentou maior variabilidade genética / The buffalo water are economically important livestock in Brazilian global and agricultural scenario. The knowledge of polymorphisms in microsatellites markers mapped in buffaloes is essential to assist in evolutionary studies of species, genetic variability within and between populations, as well as being potentially useful for animal breeding programs. Three commercial breeds of buffalos (Mediterranean, Jaffarabadi and Murrah) of Brazilian herds were used for polymorphisms analysis to evaluate the genetic diversity within and among them. In each breed 30 animals were analysed by amplification of genomic DND extracted from the hair bulbs using four microsatellite loci located on a chromosome of economic interest. PCR products were separated by vertical electrophoresis in denaturing polyacrylamide gel. The IDVGA-53 locus was not successful in amplifying and was discarded from the analysis of polymorphism. The loci MB099 and CSSM054 were monomorphic. The parameters of diversity were generated for the locus CSSM054, the only polymorphic, with an average of 3.33 alleles per locus. With a mean value of 0.503, the observed heterozygosity was higher than the expected, indicating excess of heterozygotes. Mediterranean and Jaffarabadi breeds had deviation of Hardy-Weinberg equilibrium. The parameter Theta indicated evidence that the three breeds differ and when they were analyzed in pairs, it was observed high population differentiation among them. The largest genetic distance was found between the Mediterranean and Murrah breeds. The polymorphic information content revealed that the locus CSSM054 was highly informative to the Mediterranean breed, therefore considering all the results that race had a high genetic variability

Orientador: Germano Francisco Biondi / Resumo: O presente trabalho visou avaliar a qualidade microbiológica de queijos mussarela elaborados a partir de leite de búfala, adquiridos do comércio varejista, assim como, verificar a sua autenticidade, averiguando a possível presença de leite de vaca no produto. As análises microbiológicas compreenderam em contagem de coliformes totais e E. coli, contagem de Staphylococcus coagulase-positiva e pesquisa de Salmonella spp.; enquanto que, para a determinação da pureza das mussarelas, a técnica utilizada foi a eletroforese em gel de poliacrilamida. Com base nos resultados obtidos na avaliação microbiológica, pode-se afirmar que 98% das amostras estão dentro dos padrões microbiológicos legais vigentes, embora algumas delas tenham apresentado valores para coliformes totais entre 103-106 UFC/g, indicando provavelmente condições inadequadas de higiene durante a fabricação dos queijos. Entretanto, 2% das amostras encontram-se em desacordo com a legislação, uma vez que apresentaram populações de coliformes fecais acima do permitido, como resultado de uma alta contaminação por E. coli. Mediante a caracterização eletroforética, detectou-se a presença de leite de vaca em 22% das amostras, adicionado, provavelmente, de forma intencional. / Abstract: This study evaluated the microbiological of mozzarella cheese made from buffalo milk bought in retail outlets and validated their authenticity by checking the product for the possible presence of cow milk. Microbiological analysis included counts of E. coli, total coliform, positive coagulase Staphylococcus, and Salmonella spp. For the determination of mozzarella purity, we used polyacrylamide gel electrophoresis. Based on the results of the microbiological evaluation, we can state that 98% of samples are within the legal microbiological standards, although some have shown values of total coliforms between 103-106 UFC/g, which indicates poor conditions and hygiene during cheese manufacture. However 2% of samples showed fecal coliform populations outside the legal limits as a result of a high E. coli contamination. Electrophoresis detected cow milk in 22% of the samples which was probably added intentionally. / Mestre

Resumo: No presente trabalho, apresentamos o primeiro mapa RH do cromossomo 16 bubalino (BBU16), construído com a utilização do painel celular BBURH5000. Seqüências de primers para PCR de 30 genes derivados do cromossomo 15 bovino (BTA15) foram testados com DNA de búfalo para a construção do mapa RH BBU16. Dos marcadores testados, 11 geraram produtos de PCR específicos com o DNA de búfalo, mostrando-se adequados para o mapeamento utilizando o painel BBURH5000. A partir de análises estatísticas, 9 genes foram incluídos no primeiro mapa RH do cromossomo BBU16 contendo apenas um grupo de ligação. As freqüências de retenção (FR) dos marcadores variaram entre 16,6% (SDHD) e 32,2% (PORIMIN). Comparando-se o mapa RH obtido com a sequência do BTA15, pode-se verificar que não houve discrepâncias quanto a ordem dos 9 genes em ambas espécies, evidenciando a conservação da ordem linear desses marcadores nas mesmas / Abstract: This paper describes a radiation hybrid (RH) map of river buffalo (Bubalus bubalis) chromosome 16, generated from a previously described river buffalo whole genome RH panel (BBURH5000). PCR Primer sequences were selected for 30 cattle derived genes mapped on bovine chromosome 15. From the total number of selected markers, 11 generated specific PCR products with buffalo DNA and were suitable for mapping using the BBURH5000 panel. The statistical analysis included 9 genes on the BBU16 RH map, which were distributed in one linkage group. Retention frequencies (RF) ranged from 16,6% for SDHD and 32,2 % for PORIMIN. The marker order on the linkage group is entirely consistent with the current BTA15 sequence assembly (Btau_4.0), indicating a conservation in the order of the genes on both species / Orientador: Maria Elisabete Jorge Amaral / Coorientador: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Humberto Tonhati / Banca: Mary Massumi Itoyama / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-22Bitstream added on 2014-06-13T20:36:09Z : No. of bitstreams: 1 andrade_crm_me_botfmvz.pdf: 388106 bytes, checksum: cb1074c4214dd07772fd3697e51fc468 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O presente estudo teve como objetivo analisar os dados de desempenho ponderal e curva de crescimento do rebanho bubalino Murrah da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, da Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu, no período de 1998 a 2009. Os pesos dos animais foram corrigidos às diversas idades padrão e o modelo estatístico incluiu os efeitos de sexo (S), mês (M) e ano de nascimento (A), classe de idade da búfala ao parto (C) e as interações S x M, S x A, S x C e M x A. As médias ajustadas e respectivos erros-padrão estimados para as características estudadas foram: PN: 37,89 ± 9,61kg; P120: 100,17 ± 20,28kg; P240: 170,36 ± 33,30kg; P365: 233,27 ± 35,57kg; P550: 309,85 ± 37,14kg e; P730: 395,14 ± 30,17kg. Houve efeito de sexo (S) somente para PN e P365, sendo que os machos tenderam a nascer mais pesados que fêmeas. O mês de nascimento (M) exerceu efeito sobre o PN, P120 e P730, sendo que animais nascidos em maio foram os mais pesados ao nascer, enquanto os nascidos em janeiro e maio foram os mais pesados aos 120 e 730 dias, respectivamente. O ano de nascimento (A) exerceu efeito sobre o PN, P120, P240 e P730. A classe de idade da búfala (C) exerceu efeito sobre o peso ao nascer, sendo que búfalas da classe 1 (3 anos ou menos) tenderam a parir bezerros mais leves e búfalas da classe 6 (10,11 e 12 anos) pariram bezerros mais pesados, o que contribui para a utilização desta característica na seleção das futuras matrizes do rebanho, respectivamente. O modelo linear foi o que melhor se ajustou aos dados para as curvas de crescimento / This study aimed to analyze performance data and weight growth curve of Murrah buffalo herd of the Faculty of Veterinary Medicine, Universidade Estadual Paulista, Campus Botucatu, in the period 1998 to 2009. The weights of the animals were fixed for various ages and the standard statistical model included effects of sex (S), month (M) and year of birth (A), age class at calving buffalo (C) and the interactions S x M , S x, S x C x M and A. The adjusted means and their standard errors estimated for the characteristics studied were: NP: 37.89 ± 9.61 kg; P120, 100.17 ± 20.28 kg; P240, 170.36 ± 33.30 kg; P365, 233.27 ± 35.57 kg; P550, 309.85 ± 37.14 kg; and P730, 395.14 ± 30.17 kg. There was an effect of sex (S) only for BW and W365, and the males tended to be born heavier than females. The month of birth (M) exert effect on the PN, P120 and P730, and animals born in May were heavier at birth, while those born in January and May were heavier at 120 and 730 days, respectively. The year of birth (A) had an effect on the PN, P120, P240 and P730. The age class of buffalo (C) had an effect on birth weight, and buffaloes first class (three years or less) tended to give birth to lighter calves and buffaloes in Class 6 (10,11 and 12) gave birth to calves heavier, which contributes to the use of this feature in the selection of future headquarters of the herd, respectively. The linear model was the best fit to data for growth curves

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-08Bitstream added on 2014-06-13T20:36:10Z : No. of bitstreams: 1 francisco_cl_me_botfmvz.pdf: 298670 bytes, checksum: 07cf29969b291dc9657e6127f73f1e6f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Sabendo-se do grande potencial dos bubalinos como produtores de carne e da importância da análise das fibras musculares para a caracterização da qualidade da carne, objetivou-se neste estudo avaliar as isoformas da miosina de cadeia pesada (MyHC) e os tipos de fibras dos músculos Longissimus dorsi (LD) e Semitendinosus (ST) de 28 bubalinos Mediterrâneo não-castrados e a possível modulação de acordo com os diferentes pesos de abate (450, 480, 510 e 540 kg). Amostras dos músculos foram coletadas e submetidas às técnicas de eletroforese (SDS-PAGE), m-ATPase e NADH-TR. Foram analisadas a porcentagem relativa das isoformas de MyHC, assim como, frequência, área e diâmetro das fibras musculares. Constatou-se que bubalinos Mediterrâneo não possuem a isoforma MyHC IIb, apresentando somente três isoformas de MyHC (IIa, IIx/d e I), cujas porcentagens não variaram significativamente (P > 0,05) entre os pesos de abate. A presença de fibras musculares híbridas (IIA/X) nos músculos LD e ST permitiu a classificação dos tipos de fibras pela atividade contrátil, em fast e slow. Para ambos os músculos, a frequência foi maior para as fibras fast em todas as categorias avaliadas, porém houve diferença (P < 0,05) na frequência dos tipos de fibras dos músculos LD e ST de acordo com os pesos de abate. Os animais abatidos aos 540 kg obtiveram maiores valores para área e diâmetro das fibras, tanto para o LD quanto para o ST. O músculo ST apresentou maiores valores de área e diâmetro que o músculo LD para todos os pesos de abate avaliados, revelando o crescimento mais tardio. / Knowing of the great productive potential of the water buffalo as meat producer and of the importance of the research of muscle fiber types for the characterization of the meat quality, the aim of the study was to evaluate Myosin Heavy Chain Isoforms (MyHC) and the muscle fiber types of Longissimus dorsi (LD) and Semitendinosus (ST) muscles of 28 Mediterranean buffaloes not-castrated and its possible modulation according with the different slaughter weights (450, 480, 510 and 540 kg). Samples of the muscles were collected and submitted the electrophoresis (SDS-PAGE), m- ATPase and NADH-TR techniques. The relative percentage of isoforms MyHC were measured, as well as, frequency, area and diameter of muscle fiber types. The absence of MyHC IIb isoform in Mediterranean buffaloes was evidenced, which had only three MyHC isoforms (IIa, IIx/d and I), whose percentage had not varied significantly (P > 0.05) between the slaughter weights. The presence of hybrid fibers (IIA/X) in muscles LD and ST allowed to the classification of the fiber types for a contraction activity, in fast and slow. For both muscles, the frequency was higher for fiber fast in all the evaluated categories, however had differences (P < 0.05) in the frequency of muscle fiber types LD and ST in the slaughter weights evalueted. The animals of slaughter weight 540 kg showed higher values for area and diameter of the fibers, as much for the LD as well as the ST. Muscle ST presented greater values of area and diameter then muscle LD for all slaughtered weights evaluated, disclosing the more delayed growth.

Submitted by Aelson Maciera (aelsoncm@terra.com.br) on 2017-05-11T17:29:15Z No. of bitstreams: 1 TeseTAN.pdf: 1864712 bytes, checksum: 75782f61cc6526aa709949101798707e (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-05-18T20:22:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseTAN.pdf: 1864712 bytes, checksum: 75782f61cc6526aa709949101798707e (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-05-18T20:22:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseTAN.pdf: 1864712 bytes, checksum: 75782f61cc6526aa709949101798707e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-22T20:17:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseTAN.pdf: 1864712 bytes, checksum: 75782f61cc6526aa709949101798707e (MD5) Previous issue date: 2016-06-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Bovine babesiosis and anaplasmosis are distinct diseases, which constitute the syndrome called tick fever, characterized by infection of red blood cells. Its distribution in herds causes the reduction in productivity and high economic losses to livestock worldwide. Anaplasma marginale, Babesia bovis, and Babesia bigemina are the predominant species in Brazil. Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the biological vector of babesiosis and anaplasmosis may be transmitted by ticks, hematophagous flies, and fomites. It is known that the water buffalo can become infected with Babesia and Anaplasma, but little is known the extent of the infection and how it affects the health of these animals. Thus, the present study aimed to determine the frequency and the level of infection by B. bovis, B. bigemina and A. marginale in 108 water buffalo (50 calves and 58 adult females), naturally infested with the tick R. (B). microplus raised in farms located in areas of endemic stability in São Paulo state. From each animal, a blood sample from the jugular vein was taken for DNA extraction and packed cell volume (PCV) determination. Samples from auricular vessels were taken for blood smears. The body temperature was measured with a mercury thermometer column. Electrochemical impedance spectroscopy technique was used to differentiate the serum of uninfected animals from the serum of animals infected with B. bovis. To this end, antigens derived from culture were immobilized on gold electrodes (150 nm thick) to give a biosensor device using the compound [Fe (CN) 6] 3- / 4-proof redox. The peripheral blood smears were stained with May-Grunwald-Giemsa for research of hemoparasites by optical microscopy. DNA extractions were performed using the Easy DNA TM Kit (Invitrogen). DNA amplification protocols were tested with primers specific to B. bigemina, B. bovis, and A. marginale using nested PCR (nPCR) and quantitative real-time PCR (qPCR). qPCR was used to estimate the number of copies of the gene cytochrome b (mt-cytB) of both babesias and Anaplasma msp 1b gene in all samples. Merozoites of B. bigemina were seen in blood smears of three calves from the Alambari herd (all less than 0.1 of parasitemia). Molecular techniques, nPCR, and qPCR, were more sensitive in the detection of parasites that direct examination of the blood smears and the frequencies of infection were 20:37% and 100% for B. bovis and 59.26% and 100% to B. bigemina, respectively. CN of the mt-cytB gene of B. bovis and B. bigemina showed significant effects (p <0.05) of herd age, species, and their interaction. The CN values were higher (p≤0.05) for B. bovis (2.81 ± 0:07) when compared to B. bigemina (2.61 ± 12:07) and A. marginale (0:57 ± 0:07). These data suggest a high frequency of infection by B. bovis and B. bigemina in the population of water buffalo studied. Preliminary testing of diagnosing infection with B. bovis device showed changes in the impedance in the system used and clearly demonstrated that the biosensor can detect infected animals, which can be exploited for rapid detection of B. bovis infections and also extended for the test to other parasites. / A babesiose e anaplasmose bovina são enfermidades distintas, que constituem o complexo chamado de Tristeza Parasitária Bovina (TPB), caracterizada por infecção das células vermelhas do sangue. Sua distribuição nos rebanhos ocasiona redução na produtividade e grandes perdas econômicas para a pecuária mundial. Anaplasma marginale, Babesia bovis e Babesia bigemina são as espécies prevalentes no Brasil. O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é o vetor biológico das babesioses, e a anaplasmose, além do carrapato pode ser transmitida por moscas hematófogas ou fômites. Sabe-se que, os búfalos podem se infectar com os agentes da TPB, porém pouco é conhecido a extensão dessa infecção e como ela afeta a saúde desses animais. Assim o presente estudo teve o objetivo de determinar a frequência e o nível de infecção por B. bovis, B. bigemina e A. marginale em 108 búfalos d’água (50 bezerros e 58 fêmeas adultas), naturalmente infestados com o carrapato R. (B). microplus, oriundos de fazendas localizadas em áreas endêmicas para as babesioses no estado de São Paulo. Foram colhidas amostras de sangue dos capilares auriculares para confeccção de esfregaços em lâminas de vidro e sangue da veia caudal para extração de DNA e determinação do volume globular (VG) pela técnica do microhematócrito. A técnica de espectroscopia de impedância eletroquímica foi realizada com o soro dos bovinos, com o objetivo de diferenciar animais saudáveis dos animais infectados com B. bovis. Para tanto, antígenos provenientes de cultura foram imobilizados em eletrodos de ouro (150 nm de espessura) dando origem a um dispositivo biossensor utilizando o composto [Fe (CN)6]3-/4-como prova redox. Os esfregaços de sangue periférico foram corados com May Grunwald-Giemsa para a pesquisa dos hemoparasitas por meio de microscopia óptica. As extrações de DNA foram feitas usando o Easy-DNATM Kit (Invitrogen). Foram testados protocolos de amplificação do DNA com primers específicos para B. bigemina, B. bovis e A. marginale por meio de Nested PCR (nPCR) e PCR em tempo real quantitativo (qPCR), usado para estimar o número de cópias (NC) do gene do citocromo b (mt-cytB) de ambas as babesias e do gene de superfície 1b (msp1b) de Anaplasma em todas as amostras. Foram visualizados merozoítas de B. bigemina nos esfregaços sanguíneos de três bezerros do rebanho de Alambari (todos com menos de 0,1 de parasitemia). As técnicas moleculares, nPCR e qPCR foram mais sensíveis para a detecção dos parasitas que o exame direto das lâminas, sendo que as frequências de infecção foram de 20.37% e 100% para B. bovis e 59.26% e 100% para B. bigemina, respectivamente. O NC do gene do mt-cytB de B. bovis e B. bigemina mostrou efeitos significativos (p<0.05) para rebanho-idade, espécies e sua interação. Os valores de NC foram superiores (p≤0.05) para B. bovis (2.81 ± 0.07) quando comparado a B. bigemina (2.61 ± 0.07) e A. marginale (0.57 ± 0.07). Estes dados sugerem uma elevada frequência de infecção por B. bovis e B. bigemina na população de búfalos estudada. Os testes preliminares do dispositivo de diagnóstico da infecção por B. bovis mostraram alterações na impedância do sistema usado e evidenciaram claramente que o biossensor é capaz de diferencia/detectar os animais infectados, podendo ser explorado para a detecção rápida da B. bovis e estendido também para a detecção de outros parasitas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-05Bitstream added on 2014-06-13T18:39:01Z : No. of bitstreams: 1 zorzetto_mf_me_botfmvz.pdf: 1249993 bytes, checksum: b41bc94bf30e1281fc157ffc76b1e023 (MD5) / Os programas que visam aumentar a incorporação de biotecnologias reprodutivas a fim de se obter um incremento genético dos rebanhos bubalinos, visando aumentar a produtividade dos mesmos. No entanto, a melhoria do sistema produtivo e reprodutivo será possível mediante a utilização de tecnologias que viabilizem o melhor aproveitamento dos animais, como a congelação de sêmen. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a qualidade das amostras seminais de búfalos diluídas em três meios diferentes: Botu-bov® (BB), água de coco em pó (ACP-111) e Tris-gema antes e após a criopreservação utilizando o mesmo protocolo. No presente estudo foram utilizados 4 touros bubalinos para colheitas seminais utilizando vagina artificial, os ejaculados foram diluídos com BB, Tris-gema e ACP-111. O sêmen fresco foi analisado quanto ao seu volume, aspecto, cor, concentração (câmara de Neubauer), morfologia realizada por microscopia de interferência diferencial (DIC), cinética pelo sistema CASA e pela microscopia de epifluorescência. Na pós-congelação as amostras foram avaliadas pelo CASA, citometria de fluxo (membrana plasmática, acrossoma, lesões semelhantes à capacitação e fragmentação do DNA) e pela microscopia de epifluorescência. Os diluentes BB e Tris-gema apresentaram melhores resultados para congelação do sêmen de búfalos, em relação ao meio ACP-111 (BB 58,59%; Tris-gema 52,64% e ACP-111 36,94% para MT). Porém o diluente BB demonstrou superioridade em relação à motilidade progressiva espermática (MP para BB, Tris-gema e ACP-111, 47,56%; 40,39% e 29,59% respectivamente), menor porcentagem de índice de fragmentação de DNA (0,85%) e de espermatozoides lesados (24,97%). Assim sendo, mediante o protocolo do presente estudo deduz-se que o BB apresenta superioridade na congelação de sêmen de búfalos, sendo este a melhor opção de diluente para essa biotecnologia / These programs aim to increase the incorporation of reproductive biotechnologies in order to obtain a genetic increment of buffalo herds to increase their productivity. However, improving the productive and reproductive system will be possible through the use of technologies that enable the best use of animals, such as semen freezing. Therefore, this study aimed to evaluate the quality of semen samples of buffalo diluted in three different extenders: Botu-bov ® (BB), powdered coconut water (ACP-111) and Tris-yolk before and after cryopreservation using the same protocol. In the present study was used four buffalo bulls for seminal collection using artificial vagina. The ejaculates were diluted with BB, Tris-yolk and ACP-111. The fresh semen was analyzed for volume, appearance, color, concentration (Neubauer chamber), morphology performed by differential interference microscopy (DIC), the kinetic by CASA system and membrane integrity by epifluorescence microscopy. In the post-freeze moment the samples were evaluated by CASA, flow cytometry (plasma membrane, acrosome, lesions similar to capacitation and DNA fragmentation) and by epifluorescence microscopy. The extenders BB and Tris-yolk showed superior results for semen freezing of buffalo in relation to the ACP-111 (BB 58,59%; Tris-yolk 52,64% e ACP-111 36,94% for MT). However the diluent BB demonstrated superiority for progressive sperm motility (MP for BB, Tris-yolk and ACP-111, 47,56%; 40,39% e 29,59% respectiblely), lower percentage of DNA fragmentation (0,85%) and lower percentage of damaged sperm (24,97%). Thus, through the protocol of this study it shows that the BB has superiority in semen freezing of buffalo, appearing to be the best option of extender for this biotechnology

Orientadora: Maria Angélica Miglino / Banca: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Tatiana Carlesso dos Santos / Banca: Isaura Maria Mesquita Prado / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Resumo: Este estudo utilizou 15 fêmeas bufalinas, provenientes de abatedouros frigoríficos dos estados do Maranhão, São Paulo e Paraná para estudo morfológico, macroscópico, microscópico e morfométrico das papilas mamárias. O material para estudo macroscópico foi pesado, medido e fotografado, e os resultados do peso papilar foram de: cranial direita (PCD) 20, 95g; caudal direita (PCaD) 21,49g; cranial esquerda (PCE) 23,52g e para caudal esquerda (PCaE) 21,35g. Os valores médios para comprimento do ducto papilar, número de pregas e comprimento da cisterna papilar foram de: 0,67cm; 5,5 e 2,17cm para PCD; 0,62cm; 6,0 e 2,26cm para PCaD; 0,71cm; 6,0 e 2,26cm para PCE e 0,74cm; 5,7 e 2,57cm para PCaE, respectivamente. A análise de correlação de Pearson indicou não existir relação entre o peso corpóreo e o peso glandular. Fragmentos das regiões proximal, média e distal foram colhidos e fixados em solução aquosa de formol 10%, cortados com 10, 20 e 40mm e corados em Azan, Picrocírus F3BA e Weigert-Van Gieson, para a análise mesoscópica. Cortes com 5mm corados em HE, tricrômico de Masson foram utilizados para a análise histológica e morfométrica. A estrutura histológica da papila mamária em búfalas mostrou-se similar aquela dos bovinos, a camada muscular é formada por fibras em duas disposições, a interna circular e a externa longitudinal, e com epitélio cúbico biestratificado em quase toda a sua extensão. Na porção média da papila a camada mais desenvolvida é a muscular com 22,90mm de espessura, a qual possui grande quantidade de tecido conjuntivo denso (7,10 mm). / Abstract: Fifteen Murrah female buffaloes, proceeding from abattoirs of Maranhão, São Paulo and Paraná states, were used in this study and submitted for morphologic, macroscopic, microscopic and morphometric analysis of the mammary papilla. The material for macroscopic study was weighed, measured and photographed, the results for papillary weight had been: cranial right (PCD) 20.95g; caudal right (PCaD) 21.49g; left cranial (PCE) 23.52g and for left caudal (PCaE) 21.35g. The average values for the papillary duct length, number of folds and length of the papillary cistern had been respectively for PCD: 0.67cm, 5.5, 2.17cm; PCaD: 0.62cm, 6.0, 2.26cm; PCE: 0.71cm, 6.0, 2.26cm and PcaE: 0.74cm, 5.7, 2.57cm. The analysis of de Pearson correlation coefficient test between corporeal weight and the glandular weight indicated not relation existence. Proximal, meddle and distal tissue samples had been collected and fixed in 10% formol watery solution and cut with 10-20-40mm and stained in Azan, Picrosirus F3BA and Weigert-Van Gieson, for the mesoscopic analysis. Cuts of 5mm and had stained in HE and Masson's trichrome were submitted to the morphologic and morphometric analysis. Buffalo's' mammary papilla structure revealed to be similar to the described for bovines, the muscular layer was composed by two bundles of smooth muscle fibers, the external circular layer and the longitudinal external one. The mucosa was bi-stratified cuboidal ephitelia in almost all its extension. The papilla meddle portion muscular layer was 22.90mm of thickness which contained large amount of connective tissue (7.10mm). / Doutor

Resumo: Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) e Escherichia coli shigatoxigênica (STEC) estão implicadas em causar sérias doenças no homem. Devido o crescimento da produção de búfalos leiteiros e a pequena quantidade de estudos sobre a prevalência de STEC e EPEC em bubalinos esse trabalho foi proposto. Os objetivos foram: determinar a prevalência de STEC e EPEC de amostras de origem bubalina através da pesquisa dos genes stx1, stx2, eae, iha, efa1, toxB, lpfAO157/OI-141, lpfAO157/OI-154, lpfAO113, saa, ehxA e bfp; caracterização bioquímica e sorogrupagem dos isolados e o perfil de resistência das estirpes de STEC e EPEC isoladas frente a diferentes drogas antimicrobianas. Foram isoladas 33 estirpes de E. coli, das quais 21 (63,6%) STEC e 12 (36,4%) EPEC, que apresentaram 23 perfis genéticos diferentes. Todos os isolados apresentaram mais de um gene de virulência. De todos os genes estudados apenas o bfp não foi encontrado nas amostras analisadas. As estirpes isoladas apresentaram sensibilidade a maioria dos antimicrobianos testados. O sorogrupo mais freqüente foi o O26, seguido do O157. As estirpes estudadas apresentaram genes de virulência que estão relacionados à graves doenças no homem. Pelos resultados pode-se dizer que búfalos são importantes reservatórios de STEC e EPEC e a presença desses isolados com determinados perfis genéticos devem ser melhor estudados / Abstract: Escherichia coli (EPEC) and Shiga toxin Escherichia coli (STEC) are implicated in causing serious disease in humans. Due to the increased production of buffalo milk and small amount of studies on the prevalence of STEC and EPEC in buffalo this work was proposed. The objectives were to determine the prevalence of STEC and EPEC isolates from buffalo by investigating the genes stx1, stx2, eae, iha, efa1, toxB, lpfAO157/OI-141, lpfAO157/OI-154, lpfAO113, saa, ehxA and bfp; sorogrupagem and biochemical characterization of isolates and resistance profile of strains of EPEC and STEC isolates to different antimicrobial drugs. We isolated 33 strains of E. coli, of which 21 (63.6%) STEC and 12 (36.4%) EPEC, showed that 23 different genetic profiles. All isolates had more than one virulence gene. All of the genes studied only the bfp was not found in the samples. The strains isolated were sensitive to most antimicrobials tested. The serogroup O26 was the most common, followed by O157. The strains were virulence genes that are related to severe disease in humans. From the results we can say that buffaloes are major reservoirs of STEC and EPEC and the presence of strains with certain genetic profiles should be better studied / Orientador: Fernando Antônio de Ávila / Coorientador: Everlon Cid Rigobelo / Banca: José Moacir Marin / Banca: Antonio José Piantino Ferreira / Mestre

Orientador: Eunice Oba / Coorientador: Ian Martin / Banca: Luciana da Silva Leal / Banca: Frederico Ozanan Papa / Resumo: Os programas que visam aumentar a incorporação de biotecnologias reprodutivas a fim de se obter um incremento genético dos rebanhos bubalinos, visando aumentar a produtividade dos mesmos. No entanto, a melhoria do sistema produtivo e reprodutivo será possível mediante a utilização de tecnologias que viabilizem o melhor aproveitamento dos animais, como a congelação de sêmen. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a qualidade das amostras seminais de búfalos diluídas em três meios diferentes: Botu-bov® (BB), água de coco em pó (ACP-111) e Tris-gema antes e após a criopreservação utilizando o mesmo protocolo. No presente estudo foram utilizados 4 touros bubalinos para colheitas seminais utilizando vagina artificial, os ejaculados foram diluídos com BB, Tris-gema e ACP-111. O sêmen fresco foi analisado quanto ao seu volume, aspecto, cor, concentração (câmara de Neubauer), morfologia realizada por microscopia de interferência diferencial (DIC), cinética pelo sistema CASA e pela microscopia de epifluorescência. Na pós-congelação as amostras foram avaliadas pelo CASA, citometria de fluxo (membrana plasmática, acrossoma, lesões semelhantes à capacitação e fragmentação do DNA) e pela microscopia de epifluorescência. Os diluentes BB e Tris-gema apresentaram melhores resultados para congelação do sêmen de búfalos, em relação ao meio ACP-111 (BB 58,59%; Tris-gema 52,64% e ACP-111 36,94% para MT). Porém o diluente BB demonstrou superioridade em relação à motilidade progressiva espermática (MP para BB, Tris-gema e ACP-111, 47,56%; 40,39% e 29,59% respectivamente), menor porcentagem de índice de fragmentação de DNA (0,85%) e de espermatozoides lesados (24,97%). Assim sendo, mediante o protocolo do presente estudo deduz-se que o BB apresenta superioridade na congelação de sêmen de búfalos, sendo este a melhor opção de diluente para essa biotecnologia / Abstract: These programs aim to increase the incorporation of reproductive biotechnologies in order to obtain a genetic increment of buffalo herds to increase their productivity. However, improving the productive and reproductive system will be possible through the use of technologies that enable the best use of animals, such as semen freezing. Therefore, this study aimed to evaluate the quality of semen samples of buffalo diluted in three different extenders: Botu-bov ® (BB), powdered coconut water (ACP-111) and Tris-yolk before and after cryopreservation using the same protocol. In the present study was used four buffalo bulls for seminal collection using artificial vagina. The ejaculates were diluted with BB, Tris-yolk and ACP-111. The fresh semen was analyzed for volume, appearance, color, concentration (Neubauer chamber), morphology performed by differential interference microscopy (DIC), the kinetic by CASA system and membrane integrity by epifluorescence microscopy. In the post-freeze moment the samples were evaluated by CASA, flow cytometry (plasma membrane, acrosome, lesions similar to capacitation and DNA fragmentation) and by epifluorescence microscopy. The extenders BB and Tris-yolk showed superior results for semen freezing of buffalo in relation to the ACP-111 (BB 58,59%; Tris-yolk 52,64% e ACP-111 36,94% for MT). However the diluent BB demonstrated superiority for progressive sperm motility (MP for BB, Tris-yolk and ACP-111, 47,56%; 40,39% e 29,59% respectiblely), lower percentage of DNA fragmentation (0,85%) and lower percentage of damaged sperm (24,97%). Thus, through the protocol of this study it shows that the BB has superiority in semen freezing of buffalo, appearing to be the best option of extender for this biotechnology / Mestre