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Aplicação de tecnicas de engenharia no estudo de celulas cardiacas isoladas : medição de [Ca27] e limiar de estimulação

Gomes, Paulo Alberto Paes 22 December 1997 (has links)
Orientador: Jose Wilson Magalhães Bassani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia Eletrica e de Computação / Made available in DSpace on 2018-07-23T05:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gomes_PauloAlbertoPaes_D.pdf: 8372969 bytes, checksum: 3b3ed01cb6c16c960f7392127e548f17 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Vários eventos fisiológicos importantes são governados por variações na concentração intracelular de cálcio, ['CA POT. 2+¿]i. Na célula cardíaca, variações na ['CA POT. 2+¿]i são responsáveis pelo disparo e controle da força e curso temporal da contração. Neste trabalho estudamos a teoria que fundamenta o uso do Método da Razão, na quantificação de ['CA POT. 2+¿], a partir da medição de fluorescência emitida por indicadores como indo-1 e fura-2. Um sistema de microscopia de fluorescência completo, para ser utilizado com o indo-1, foi projetado e construído. O sistema foi utilizado no estudo dos transientes de cálcio em miócitos cardíacos isolados de ratos durante o desenvolvimento pós-natal (idades: 3 - 6; 13 - 16; 28 - 35 e 180 dias). Apesar dos parâmetros de calibração não se manterem constantes nos diversos grupos, as características dos transientes não mostraram diferenças estatisticamente significativas (['CA POT. 2+¿] diastólico 180nM; ['CA POT. 2+¿] pico 1¿mu¿M e fwhm 0.35ms). Estudando o limiar de estimulação elétrica pudemos comprovar experimentalmente que ele diminui com o desenvolvimento do animal, devido à modificação da geometria das células, como previsto pela teoria / Abstract: Important physiological events are governed by changes in intracellular 'CA POT. 2+¿ concentration (['CA POT. 2+¿]i). In cardiac cells, ['CA POT. 2+¿]I changes are resposible for triggering and controlling the strength and timecourse of contractions. In this work, we studied the fundamental theory for the ratio method, a method to quantitate ['CA POT. 2+¿] from the ratio of fluorescence emitted by a ratiometric 'CA POT. 2+¿ indicator, such as indo-1 and fura-2. Additionally, a complete microscopic system for measuring indo-1 fluorescence was designed and constructed. This system was applied for measuring 'CA POT. 2+¿ transients in cardiac myocytes isolated from rats during post-natal development (ages: 3-6; 13- 16; 28-35 and 180 days). Although the calibration parameters were not the same for all ages, diastolic and peak ['CA POT. 2+¿]i and duration of the 'CA POT. 2+¿ transients were not significantly different ( 180 nM , 1¿mu¿M and 0.35 s, respectively). To explain the field stimulation process of the cells at different ages we developed a simple model based on the eletromagnetic theory. Measured threshold for field eletrical stimulation was age-dependent and was found to be related to the cell geometry, as predicted by the model / Doutorado / Automação / Doutor em Engenharia Elétrica
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Confiabilidade dos testes de infiltração apical com azul de metileno, rodamina B e sistema de transporte de fluído em obturações de canais após o uso de curativo de hidróxido de cálcio

Christian Giampietro Brandão 01 April 2005 (has links)
Objetivou-se avaliar se o curativo de hidróxido de cálcio realmente apresenta influência no selamento de obturações de canais, realizadas com cimento de óxido de zinco e eugenol, utilizando-se o transporte de fluídos e a infiltração de corantes com azul de metileno e rodamina B. Foram utilizadas 70 raízes que tiveram seus canais obturados pela técnica da condensação lateral com cimento de óxido de zinco e eugenol, após o uso ou não do curativo de hidróxido de cálcio. A infiltração marginal apical foi avaliada utilizando-se, primeiramente, o sistema de transporte de fluído e, posteriormente, os mesmos espécimes foram imersos em corante, sendo uma metade em Rodamina B a 0,2% e a outra em azul de metileno a 0,5%. Os resultados obtidos mostraram que tanto com o sistema de transporte de fluído, como com a utilização da Rodamina B, o curativo de hidróxido de cálcio não teve qualquer influência no selamento apical das obturações. Todavia, os resultados foram significantes quando da marcação pelo azul de metileno, demonstrando haver interferência desse curativo, a qual tem sido relatada como que física e que, provavelmente, melhoraria a capacidade de selamento das obturações. A observação desse resultado isoladamente poderia levar a supor da possibilidade dessa ocorrência. Contudo, considerando-se que apenas os resultados utilizando o azul de metileno mostraram diferença estatisticamente significante entre os grupos com e sem uso de curativo, o mais sensato é concluir que o hidróxido de cálcio, muito provavelmente, tenha apresentado interação química com o azul de metileno, o que deve ter promovido sua descoloração (pela ação da alcalinidade do hidróxido de cálcio) e resultando, portanto, em dados não confiáveis. / Filling of the root canal system is the end of a sequence of cleaning, shaping and removing bacteria from root canals, and should seal them as more hermetic as possible. Many filling techniques and materials are continuously being developed, trying to reach a perfect seal of the root canal system. The necessity of testing such techniques and material produces a lot of papers analyzing biological and physical properties of root canal fillings. Apical sealing is the more tested physical property, although there is not standardization for it that could provide unquestionable results. Seventy roots canals were filled by the lateral condensation technique with zinc-oxide eugenol sealer, after the use or not of a intracanal medicament of calcium hydroxide paste. Apical marginal leakage was assessed firstly by a fluid transport system and, then, the roots were divided in two groups, being immersed in Rhodamine B or methylene blue dye solutions. Either the fluid transport system results as the Rhodamine B ones, showed no statistically influence of calcium hydroxide use in the sealing capacity of the root fillings. However, when methylene blue was used as tracer, the results were significant, indicating a direct influence of this root canal dressing in the quality of apical sealing of the fillings. This fact is usually explained as a physical action of calcium hydroxide, what should improve the apical sealing. If this finding would be analyzed solely, we could suppose and believe in it but, considering that only methylene blue test showed this statistically significant finding between dressing and no dressing groups, it\'s reasonable to conclude that a chemical interaction between calcium hydroxide and methylene blue should happen, making this tracer uncolored (through alkalinity action), giving us no trustable results at all.
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Níveis de Cálcio e de Boro na solução nutritiva para os cultivares de girassol IAC-Uruguai e Rumbossol-91 / not available

Marcela Trecenti Capoani 29 March 2001 (has links)
O girassol é uma das espécies mais sensíveis à deficiência de boro, e por essa razão, vem sendo utilizada em experimentos como planta teste para esse micronutriente. O objetivo do experimento foi estudar a interação entre doses de cálcio (Ca) e de boro (B), fornecidas via solução nutritiva e, avaliar a influência das doses desses nutrientes na produção do material seco e na compartimentalização do cálcio e do boro na parte aérea das plantas. O experimento foi realizado em casa-de-vegetação utilizando-se os cultivares IAC-Uruguai e Rumbossol-91. Foram aplicados 12 tratamentos com duas doses de B (0,1 e 0,5 mg L-1) e seis de Ca (0, 50, 100, 200, 250 e 300 mg L-1). Foram cultivadas duas plantas por vaso, com capacidade para 3,6 litros, contendo sílica como substrato. O delineamento experimental foi blocos completos ao acaso em esquema fatorial 2x6 com quatro repetições. Aos 55 dias, avaliou-se a altura, diâmetro do caule, massa do material seco e os teores dos nutrientes no material seco nas seguintes partes das plantas: a) folhas do terço superior, b) folhas inferiores, c) terço superior do caule e d) caule inferior. A manifestação de sintomas visuais de deficiência de boro foi mais intensa no cultivar IAC-Uruguai, no tratamento com 0,1 mg L-1 de B. Os resultados permitiram concluir que houve interação significativa entre as doses de cálcio e boro na produção do material seco e no acúmulo desses nutrientes nas partes das plantas. As folhas acumularam maiores quantidades de cálcio e boro do que os caules. Maiores produções de material seco foram verificadas nos tratamentos com 0,5 mg L-1 de B. O acúmulo de boro nas plantas foi influenciado pelas doses de cálcio fornecidas / not available
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Estudo de vidros cálcio boroaluminato dopados com Eu2O3 / Study of boroaluminate calcium glasses doped with Eu2O3

MELO, Glauco Hebert Almeida de 03 June 2015 (has links)
Submitted by Maria Aparecida (cidazen@gmail.com) on 2017-05-25T12:57:10Z No. of bitstreams: 1 Glauco herbert.pdf: 2350916 bytes, checksum: 4bca93071e5f53c3cb946ca7f27ab0e6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-25T12:57:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Glauco herbert.pdf: 2350916 bytes, checksum: 4bca93071e5f53c3cb946ca7f27ab0e6 (MD5) Previous issue date: 2015-06-03 / CAPES, FAPEMA,CNPQ e FINEP / Calcium Boroaluminate (CaBAl) glass is an important family of optical materials, which has been studied due to the good combination of chemical, thermal, mechanical, optical and spectroscopic properties. In this work Eu2O3 doped CaBAl glasses were prepared and thermal, structural, optical and spectroscopic properties were discussed in terms of rare earth content. Results of density, glass transition temperature, crystallization temperature, specific heat, refractive index, optical absorption coefficient, luminescence and lifetime measures were analyzed. Molar volume, thermal conductivity, electronic polarizability, ion concentration per cubic centimeter and interionic distance were calculated. X-ray diffraction, Raman and FT-IR were also carried out to obtain structural information of these glasses. The results show that europium doping, when replacing CaO, induced changes in various properties of the glass studied. The X-ray data showed the amorphous nature of all samples. Raman and FT-IR data confirmed the structural change, which showed that Eu2O3 addition cause the simultaneous increase in the bands corresponding to the presence of structural units of the type BO3, BO4 and non-bridging oxygens (NBO). The thermal and structural results shows that the incorporation of Eu2O3 lead to an increase in density, glass transition temperature, decrease in crystallization onset temperature and a consequent reduction in the thermal stability of the glass. The glass doping didn’t affect significantly the specific heat and the thermal conductivity, within the errors. The results of refractive index show an increase with Eu2O3 content. The absorption spectrum of glass matrix shows that it is transparent from 370nm to 2400nm. The absorption coefficient at 394nm showed a linear increase with the Eu2O3 concentration. The luminescence results indicate two emission bands centered at 614nm and 700nm. The emission intensity for these peaks increase with dopant concentration and no luminescence quenching was observed for the studied compositions. The emission lifetime results at 614nm shows a exponential decrease with doping concentration due to, probably, ion-ion interaction . The data analysis shows that the europium acts as network modifier. The results show that glasses studied in this work have a good combination of properties, making these glasses, potential candidate for use in photonic devices. / O vidro Cálcio Boroaluminato (CaBAl) faz parte de uma importante família de materiais ópticos que apresenta boas propriedades químicas, térmicas, mecânicas, ópticas e espectroscópicas. Neste trabalho foram realizados estudos em vidros CaBAl, dopados com óxido de európio. Foram caracterizadas propriedades térmicas, estruturais, ópticas e espectroscópicas em função da concentração de európio. Analisou-se resultados de medidas de densidade, temperaturas de transição vítrea, início de cristalização, calor específico, índice de refração, coeficiente de absorção óptica, luminescência e tempo de vida. Também calculou-se volume molar, condutividade térmica, polarizabilidade eletrônica, concentração de íons por centímetro cúbico e distancia interiônica. Foram realizados ainda estudos de difração de Raios-X, espalhamento Raman e FT-IR para obter informações estruturais destes vidros. Os resultados mostram que a incorporação do dopante na base promoveu mudanças em diversas propriedades do vidro estudado. Os dados de Raios-X comprovaram a característica amorfa das amostras. Os dados de Raman e FT-IR confirmam a modificação estrutural e mostraram que, com o aumento na concentração de dopante, há um aumento simultâneo nas bandas correspondentes à presença de unidades estruturais do tipo BO3, BO4 e oxigênios não ligados (NBO). O estudo dos resultados térmicos e estruturais mostrou que incorporação de Eu2O3 provocou um aumento na densidade, aumento na temperatura de transição vítrea, redução na temperatura de início de cristalização e consequente redução na estabilidade térmica do vidro. O calor específico do material não apresentou diferenças significativas para as amostras dopadas com até 10% em peso, dentro da margem de erro experimental. A inclusão de dopante também foi responsável por um aumento linear no índice de refração das amostras. Os dados de absorção mostram que a base apresenta uma boa janela de transparência, que vai de aproximadamente 370nm até 2400nm. As amostras dopadas apresentaram bandas de absorção no UV características do Eu2O3 e o coeficiente de absorção, em 394nm, apresentou um aumento praticamente linear com a concentração de Eu2O3. As medidas de luminescência indicam duas bandas de emissão, centradas em 614nm e 700nm. Os picos de emissão aumentam com a concentração de dopante, indicando ausência de quenching na luminescência para as composições estudadas. As medidas do tempo de vida foram realizadas para a emissão em 614nm e apresentam uma redução exponencial com a concentração de dopante, devido provavelmente a interações íon-íon. A análise dos dados mostra que, como visto em outros trabalhos, o európio atua também como modificador de rede. Os resultados mostram que os vidros estudados neste trabalho apresentam uma boa combinação de propriedades, o que faz destes vidros potenciais candidatos para uso em dispositivos fotônicos.
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Fibronection and osteonectin adsorption onto hydroxyapatite nanostructures and ts influence on osteoblast adhesion

Ribeiro, Nilza Maria Lopes January 2009 (has links)
Tese de mestrado. Engenharia Biomédica. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto, Instituto Nacional de Engenharia Biomédica. Universidade do Porto. 2009
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Development, characterisation and application of calcium phosphates nanocrystals aggregates in a collagen matrix to be used as biomaterial in bone regeneration

Mateus, Alis Yovana Pataquiva January 2010 (has links)
Tese de doutoramento. Engenharia Biomédica. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2010
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Estudo e caracterização do reforço proporcionado pelo carbonato de cálcio tratado com agente de acoplamento visando substituição parcial do negro de carbono em compósitos de borracha natural /

Maria, Vitor Peixoto Klienchen de. January 2019 (has links)
Orientador: Renivaldo José dos Santos / Banca: Flavio Camargo Cabrera / Banca: John Fredy Franco Baquero / Resumo: O uso de materiais alternativos para inovação tecnológica, em específico para compósitos de borracha natural, são cada vez mais explorados; materiais reforçantes conhecidos como "cargas", comumente utilizados na indústria de borracha, são objetos de pesquisa para que sejam substituídos parcialmente por cargas alternativas ou residuais; sabe-se que o negro de carbono (NC) é estabelecido no mercado como uma das melhores cargas reforçantes. A presente dissertação de mestrado buscou uma forma alternativa para substituição do NC (tipo N-762) pelo carbonato de cálcio ultrafino (CC) comercial tratado com 2% de Chartwell C-515-71HR (agente de acoplamento) fornecido pela Aodran Ltda. Ainda, foram feitos estudos da reticulação dos compósitos produzidos, caracterização e comparação das propriedades dos compósitos vulcanizados. Os compósitos foram desenvolvidos com 50 phr de carga (CC/NC), variando a proporção de NC e CC. As propriedades mecânicas, térmicas e morfológicas foram analisadas por meio das seguintes técnicas: reometria, análises térmicas (DSC, TG, DMA), espectroscopia por infravermelho FT-IR, microscopia eletrônica de varredura (MEV), ensaios mecânicos (tensão x deformação, resistência à abrasão, dureza) e densidade de ligações cruzadas. Os resultados de tração na ruptura revelaram uma substituição de até 30 phr de NC em que o compósito CC30/NC20 (17,56 MPa) superou os valores de CC0/NC50 (16,83 MPa) além do aumento de 48% em relação a elongação na ruptura. As analises térmic... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The use of alternative materials for technological innovation, specifically for natural rubber composites, are increasingly explored; reinforcing materials known as "fillers", commonly used in rubber industry, are the subject of research to be partially replaced by alternative or residual fillers; it is known that carbon black (CB) is established on the market as one of the best reinforcing fillers. The present master's dissertation sought an alternative form of substitution of the NC (type N-762) by the commercial ultra-fine calcium carbonate (CC) treated with 2% of Chartwell C-515-71HR (coupling agent) supplied by Aodran Ltda. Also, the crosslinking of the composites produced, characterization and comparison of the properties of the vulcanized composites were made. The composites were developed with 50 phr of load (CC/CB), varying the ratio of CB and CC. The mechanical, thermal and morphological properties were analyzed using the following techniques: rheometry, thermal analysis (DSC, TG, DMA), FT-IR infrared spectroscopy, scanning electron microscopy (SEM), mechanical (stress x strain, abrasion and hardness) and crosslink density. The results of tensile at break revealed a substitution of up to 30 phr of CB in which the composite CC30/CB20 (17,56 MPa) exceeded the values of CC0/CB50 (16,83 MPa) in addition to the increase in 48% over elongation at break. Thermal analyzes revealed satisfactory thermal stability of the material. The results showed in general that the new mat... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Avaliação da resposta tecidual e da capacidade de mineralização dos cimentos Biodentine e MTA Branco /

Valentim, Diego. January 2017 (has links)
Orientador: Eloi Dezan Junior / Banca: Marco Antonio Hungaro Duarte / Banca: Luciano Tavares Ângelo Cintra / Banca: Rogério de Castilho Jacinto / Banca: Rodrigo Ricci Vivan / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar resposta tecidual e a capacidade de mineralização dos materiais endodônticos, Biodentine®, MTA Branco Angelus®, quando comparados com hidróxido de cálcio. Quarenta e oito ratos Wistar foram utilizados; 24 para análise subcutânea e 24 foram submetidos à pulpotomia. Após 7, 15, 30 e 60 dias (subcutâneo) os animais foram eutanasiados e foi realizado o processamento histológico e imunoistoquímico (Fibronectina e Tenascina). Após 7 e 15 dias (pulpotomia) as peças foram submetidas a processamento histológico e imunoistoquímico (Fibronectina e Tenascina) para avaliação da formação da ponte de tecido duro e resposta tecidual da polpa. Os dados tanto do subcutâneo quanto das pulpotomias foram submetidos ao teste de Kruskal Wallis e Dunn (p<0,05 A análise estatística mostrou que no subcutâneo aos 15 dias o Biodentine® gerou menor resposta inflamatória que o Ionômero de vidro e o Ca(OH)2 (p<0,05) enquanto o MTA não apresentou diferença estatística. Na polpa aos 7 dias o MTA e o Hidróxido de cálcio tiveram maior continuidade da ponte de tecido duro que o Ionômero de vidro (p<0,05) e o Biodentine apresentou melhores aspectos morfológicos que o Ionômero de vidro (p<0,05). Aos 15 dias o MTA e o Biodentine apresentaram ponte de tecido duro completa (p<0,05). Para a imunomarcação não houve diferença estatística no subcutâneo, para a pulpotomia o Biodentine obteve maior imunomarcação que o Ionômero de vidro tanto para Fibronectina quanto para Tenascina. O Bi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the study was to evaluate the tissue response and the mineralization capacity of the endodontic materials, Biodentine®, White MTA Angelus®, when compared with calcium hydroxide. Forty-eight Wistar rats were used; 24 for subcutaneous analysis and 24 underwent pulpotomy. After 7, 15, 30 and 60 days (subcutaneous) the animals were euthanized and histological and immunohistochemical processing were performed (Fibronectin and Tenascin). After 7 and 15 days (pulpotomy) the pieces were submitted to histological and immunohistochemical processing (Fibronectin and Tenascin) to evaluate the formation of the hard tissue bridge and tissue response of the pulp. Data from both subcutaneous and pulpotomy were submitted to the Kruskal Wallis and Dunn test (p<0.05). Statistical analysis showed that in the subcutaneous tissue at 15 days Biodentine® generated a lower inflammatory response than the glass ionomer and Ca(OH)2 (p<0,05),while the MTA presented no statistical difference (p>0,05). In the pulp at 7 days, the MTA and the calcium hydroxide had a higher continuity of the hard tissue bridge than the glass ionomer (p<0,05) and Biodentine presented better morphological features than the glass ionomer (p<0,05). At 15 days the MTA and Biodentine showed a complete hard tissue bridge (p<0,05); For immunostaining, there was no statistical difference in the subcutaneous tissue; for pulpotomy, Biodentine obtained higher immunostaining than the glass ionomer for both Fibronectin and Tena... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Doses de Ca e K na produção de pimentão fertirrigado em ambiente protegido /

Sousa, Renan Lima de, 1991. January 2017 (has links)
Orientador: Roberto Lyra Villas Bôas / Banca: Poliana Rocha D' Almeida Mota Suares / Banca: Caroline de Moura D Andréa Mateus / Resumo: Com o objetivo de avaliar o desenvolvimento e produção do cultivar 'Gaston' submetido a doses de cálcio e potássio, utilizando extratores de solução do solo, instalou-se a presente pesquisa em vasos na estufa agrícola do Departamento de Solos e Recursos Ambientais da Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" - Campus de Botucatu. Com delineamento em blocos casualizados e quatro repetições, foi conduzido um experimento testando quatro doses de Ca (98 kg.ha-1, 196 kg ha-1, 294 kg ha-1 e 392,0 kg ha-1) e outro experimento com 4 doses de K2O (363 kg ha-1, 726 kg ha-1, 1088 kg ha-1 e 1451 kg ha-1) aplicados via fertirrigação por gotejamento. Foram avaliados: a extração semanal da solução do solo, altura da planta, concentração de nutrientes (folha, fruto e solo) e produção. Os extratores permitiram monitoramento eficiente e houve diferença significativa entre os tratamentos. O aumento da concentração de sais na solução do solo reduziu a altura das plantas, número de frutos e a produção. As doses, além da calagem, que proporcionaram maior produção de frutos foram: 98 kg ha-1 de Ca com 46,5 t ha-1 e 363 kg ha-1 de K2O com 39,2 t ha-1. / Abstract: With the objective of evaluating the development and production of 'Gaston' cultivar submitted to calcium and potassium doses, use soil solution extractors, the present research in pots in the greenhouse of the Department of Soils and Environmental Resources of the State University Paulista "Júlio de Mesquita Filho" - Campus of Botucatu. A randomized complete block design with four replications was carried out by testing four Ca doses (98 kg ha-1, 196 kg ha-1, 294 kg ha-1 and 392.0 kg ha-1 ) and another experiment with 4 doses of K2O (363 kg ha-1, 726 kg ha-1, 1088 kg ha-1 and 1451 kg ha-1 ) applied via drip fertigation. Was evaluated: a weekly extraction of soil solution, plant height, nutrient concentration (leaf, fruit and soil) and production. The extractors allowed efficient monitoring and great difference between the treatments. Increasing the concentration of salts in the soil solution reduced plant height, number of fruits and yield. The doses, besides liming, that provide higher fruit yield: 98 kg ha- 1 of Ca with 46.5 t ha-1 and 363 kg ha-1 of K2O with 39.2 t ha-1 ... / Mestre
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Adipócitos humanos cultivados e mobilização de cálcio induzida pela angiotensina II e insulina / Human adipocytes cultured and calcium mobilization induce by angiotensin II and insulin

Gaiba, Silvana [UNIFESP] January 2005 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-06T23:07:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Introdução: O tecido adiposo armazena energia e secreta várias moléculas endócrino/parácrina como a angiotensina II (AII) e expressa receptores como de insulina e de AII (AT1 e AT2). Esses hormônios estão envolvidos em várias patologias tais como a obesidade, hipertensão, diabetes e aterosclerose. Objetivos: Caracterização morfológica da cultura primária de adipócitos humanos e da resposta ao estímulo dos hormônios AII e insulina. Métodos: Para caracterização morfológica fez-se a coloração com Oil red O, gotículas de lipídios, MitoTracker red, mitocôndrias e ERTracker, retículo endoplasmático. Determinaram-se também as fases do ciclo celular, tamanho e complexidade das populações das células cultivadas e dispersas através da citometria de fluxo. O cultivo das células foi realizado de acordo com Hauner et al. (1989). Para as medidas do Ca2+ intracelular foi utilizada a análise por microscopia de fluorescência de alta resolução. As células adiposas foram caracterizadas por imunocitoquímica utilizando-se anticorpos para insulina, AT1 da AII, receptor de insulina e lectina conjugados com um marcador fluorescente. Resultados: Por microscopia confocal verificou-se a presença de várias gotículas lipídicas, citoesqueleto, mitocôndrias, retículo endoplasmático e membrana celular preservados, e próprios dos pré adipócitos, Os pré-adipócitos apresentaram receptores e grânulos de insulina e o receptor AT1. Também se verificou por citometria de fluxo a amostra de células rescém-dispersas que pôde ser classificada como pré- adipócito. A avaliação temporal dos níveis de Ca2+ nas células de pré-adipócitos humanos estimuladas com a AII e insulina induzem respostas transientes no caso da AII o aumento imediato das [Ca2+]i seguido da diminuição desta resposta e no caso da insulina apresentou oscilações nas [Ca2+]i na presença deste agonista. Conclusões: Determinou-se a caracterização morfológica da cultura primária de adipócitos humanos como pré-adipócitos por:apresentarem morfologia semelhante a fibroblastos e inúmeras gotículas de lipídios; evidenciado a presença dos receptores de angiotensina II (AT1) e insulina (RI) por imunofluorescência. As células presentes na amostra do tecido adiposo apresentaram tamanho e complexidade de pré-adipócitos; Nos pré-adipócitos humanos cultivados verificou-se o aumento dos níveis intracelulares de Ca2+ que foi transiente para o estímulo com angiotensina II e oscilatório para a insulina. / Introduction: The adipose tissue stores energy and secretes several endocrine/paracrine molecules as the angiotensin II (AII) and expresses receptors as of insulin and of AII (AT1 and AT2). These hormones are involved in several pathologies such as the obesity, hypertension, diabetes and atherosclerosis. Objectives: Morphologic characterization of the primary culture of human adipocytes and of the answer to the incentive of the AII hormones and insulin. Methods: For morphologic characterization the coloration with Oil red O, lipids droplets, MitoTracker red, mitochondrias and ERTracker, endoplasmic reticulum was made. It also determined the phases of the cellular cycle, size and the populations complexity of the cultivated cells and disperse through the flow cytometry. The cells cultivation was accomplished in agreement with Hauner et al. (1989). For the Ca2+ intracellular measures the analysis by fluorescence microscope of high resolution was used. The adipose cells were characterized by immunocytochemistry using antibodies for insulin, AT1 of AII, insulin receptor and lectina conjugated with a fluorescent marker. Results: For confocal microscope was verified the presence of several lipidics droplets, cytoskeleton, mitochondrias, endoplasmic reticulum and cellular membrane preserved, characteristic on preadipocytes. The preadipocytes presented receptors and insulin granules and AT1 receptor It was also verified by flow cytometry the sample of newly-dispersed cells that could be classified as preadipocyte. The temporary evaluation of the Ca2+ levels in the human adipocytes cells which were stimulated with AII and insulin showed that AII induced transient answers, by the immediate increase of the [Ca2+]i followed by the decrease of this response. The insulin presented oscillations in the [Ca2+]i during the presence of this agonist. Conclusions: For confocal microscopy was determined the morphologic characterization of the primary culture of human adipocytes as preadipocytes and evidenced the presence of the receivers of angiotensina II (AT1) and insulin (RI) for imunofluorescência. The present cells in the sample of the fatty fabric presented size and preadipocytes complexity; In the cultivated human preadipocytes the increase of the levels intracelulares of Ca2+ was verified that was transient for the incentive with angiotensina II and oscillatory for the insulin. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

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