A proposta do nosso estudo foi comparar o número de células apresentadoras de antígenos (CAAs) presentes em biópsias de gengivite (G) e de hiperplasia gengival induzida por ciclosporina (HGIC). Vinte e oito biópsias de pacientes com G e 14 biópsias de HGIC foram analisadas no epitélio de revestimento bucal (ERB), epitélio sulcular (ES) e no tecido conjuntivo (TC). O número de macrófagos (CD68+), de células de Langerhans (CD1a+) e de células dendríticas intersticiais (CDIs) (FXIIIA+) foi investigado por técnica imunoistoquímica. Células CD1a+/mm2 foram significantemente aumentadas na G quando comparada com HGIC, no TC, no ES e no ERB (p<0,05). Em contrapartida, o número de células CD68+ no TC e no ERB, e o número de células FXIIIA+/mm2 no TC foram aumentadas no grupo de HGIC (p<0,05). Ciclosporina A está relacionada com a diminuição de células de Langerhans. Podemos sugerir que este fato aumenta as infecções oportunistas, conseqüentemente, um maior número de macrófagos é necessário para combater os microorganismos. / The aim of this study was to compare the number of antigen-presenting cells (APCs) observed in biopsies of gingivitis (G), and in cyclosporine-induced gingival overgrowth (CIGO). Twenty eight biopsies from patients with G, and 14 with CIGO were analyzed in oral epithelium (OE), sulcular/junctional epithelium (SJE), and connective tissue (CT). The number of macrophages (CD68+), Langerhans’cells (CD1a+), and interstitial dendritic cells (FXIIIA+) was investigated by immunohistochemistry. CD1a+ cells/mm2 were significantly increased in G when compared with CIGO, in CT, in SJE, and in OE (p<0.05). In contrast, the number of CD68+ in CT, and in OE, and FXIIIA+ cells/mm2 in CT were increased in CIGO group (p<0.05). Cyclosporine is related with the diminution of Langerhans’ cells. We can suggest that this fact increase opportunistic infections, consequently, a greater number of macrophages is necessary in order to combat the microorganisms.

A proposta do nosso estudo foi comparar o número de células apresentadoras de antígenos (CAAs) presentes em biópsias de gengivite (G) e de hiperplasia gengival induzida por ciclosporina (HGIC). Vinte e oito biópsias de pacientes com G e 14 biópsias de HGIC foram analisadas no epitélio de revestimento bucal (ERB), epitélio sulcular (ES) e no tecido conjuntivo (TC). O número de macrófagos (CD68+), de células de Langerhans (CD1a+) e de células dendríticas intersticiais (CDIs) (FXIIIA+) foi investigado por técnica imunoistoquímica. Células CD1a+/mm2 foram significantemente aumentadas na G quando comparada com HGIC, no TC, no ES e no ERB (p<0,05). Em contrapartida, o número de células CD68+ no TC e no ERB, e o número de células FXIIIA+/mm2 no TC foram aumentadas no grupo de HGIC (p<0,05). Ciclosporina A está relacionada com a diminuição de células de Langerhans. Podemos sugerir que este fato aumenta as infecções oportunistas, conseqüentemente, um maior número de macrófagos é necessário para combater os microorganismos. / The aim of this study was to compare the number of antigen-presenting cells (APCs) observed in biopsies of gingivitis (G), and in cyclosporine-induced gingival overgrowth (CIGO). Twenty eight biopsies from patients with G, and 14 with CIGO were analyzed in oral epithelium (OE), sulcular/junctional epithelium (SJE), and connective tissue (CT). The number of macrophages (CD68+), Langerhans’cells (CD1a+), and interstitial dendritic cells (FXIIIA+) was investigated by immunohistochemistry. CD1a+ cells/mm2 were significantly increased in G when compared with CIGO, in CT, in SJE, and in OE (p<0.05). In contrast, the number of CD68+ in CT, and in OE, and FXIIIA+ cells/mm2 in CT were increased in CIGO group (p<0.05). Cyclosporine is related with the diminution of Langerhans’ cells. We can suggest that this fact increase opportunistic infections, consequently, a greater number of macrophages is necessary in order to combat the microorganisms.

A forma indeterminada é a fase inicial da hanseníase, que se caracteriza histologicamente pelo infiltrado inflamatório leve, não granulomatoso, de linfócitos e histiócitos ao redor de vasos, anexos e nervos. No local de entrada do M. leprae, as células apresentadoras de antígeno do tipo células dendríticas são as primeiras a encontrar o bacilo. Este, no interior de células dendríticas, desencadeia a produção local de citocinas e quimiocinas, que resultam em proliferação de linfócitos T helper 1 ou T helper 2, assim definindo uma resposta imune celular ou humoral, respectivamente. As lesões tuberculoides mostram predominância das citocinas de padrão Th1 como IL-2, TNF-alfa, IFN-y, IL-12 e IL-18, enquanto que nas lesões virchowianas predominam citocinas de padrão Th2, como IL-4, IL-5, IL-10 e TGF-beta. Na pele, as principais células dendríticas são células dendríticas mieloides, células de Langerhans e alguns dendrócitos dérmicos. São identificadas respectivamente pela expressão imuno-histoquímica de S100, CD1a e Fator XIIIa. Células de Langerhans e dendrócitos dérmicos Fator XIIIa positivos estão aumentados em quantidade nas lesões tuberculoides quando comparadas com lesões virchowianas. Os objetivos do presente estudo foram: 1) caracterizar a inflamação \"in situ\" na hanseníase indeterminada através da quantificação das marcações imuno-histoquímicas de: CD57, CD4, CD8, CD1a, S100, FXIIIa, CD68, Foxp3, CD123, IL-1, IL-2r, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-18, IFN-, TNF-alfa, TGF-beta, iNOS, granzima B, receptor Toll-like 2/4, e antígeno BCG, 2) comparar o perfil fenotípico e citocínico das lesões na hanseníase indeterminada entre grupos de reação de Mitsuda positiva e negativa, a fim de investigar se existem padrões que possam prever para qual forma a doença evoluiria, e 3) revisar a histopatologia da forma indeterminada através da análise semiquantitativa das alterações vistas à coloração de hematoxilina/eosina. Foram selecionadas 15 lesões de pacientes com hanseníase indeterminada. Foram usados grupos controles de expressão de Fator XIIIa e CD1a em 10 casos de pele normal. A histopatologia mostrou discretas alterações epidérmicas, como alteração vacuolar e exocitose de linfócitos (33% dos casos cada), apoptose de queratinócitos (26%), atrofia e acantose (06% dos casos cada); infiltrado inflamatório linfomononuclear neural (100%), perivascular superficial (100%), perivascular profundo (93%), peri-écrino (40%) e peri-folículo pilossebáceo (20%), além de melanófagos em 93% dos casos. Esses achados mostraram que nem sempre todos os ambientes estão acometidos por inflamação na histopatologia. Em 66% dos pacientes foi encontrado antígeno bacilar (por Fite-Faraco ou técnica imuno-histoquímica anti-BCG), portanto a forma indeterminada não deve ser considerada sistematicamente como paucibacilar. Não houve diferença significativa de padrões de marcadores entre os grupos Mitsuda positivo e negativo. No microambiente inflamatório das lesões houve expressões significativas de TLR 2/4, Fator XIIIa, CD4, CD8, IL-2r, IL-4, IL-10, iNOS e TGF-beta. A expressão importante de IL-4, IL-10 e TGF- beta nas lesões de hanseníase indeterminada significaram tendência de resposta imune para o polo Th2, um ambiente de tolerância à permanência do bacilo. A baixa expressão de IFN-y colaborou para a inexpresiva resposta Th1. Não houve diferença significativa na expressão de CD1a entre as lesões e pele normal. Fator XIIIa foi expresso em mais que 50 células/mm2 em todos os casos, com quantidades significativamente maiores que outras células dendríticas nas lesões (S100, CD68, CD123) e que a pele normal. Estes achados demonstraram a importância dos dendrócitos dérmicos Fator XIIIa positivos na apresentação de antígeno na fase inicial da hanseníase / The indeterminate form is the initial stage of leprosy, which is characterized histologically by mild inflammatory infiltrate, non granulomatous, with lymphocytes and histiocytes around vessels, nerves and adnexals. When M. leprae enter the host, antigen-presenting cells of dendritic type are the first cells to find the bacillus. Once inside dendritic cells, the bacillus elicits local production of cytokines and chemokines, which result in proliferation of T lymphocytes helper 1 or T helper 2, thereby defining a cellular or humoral immune response, respectively. The tuberculoid lesions show predominance of Th1 cytokines such as IL-2, TNF-alfa, IFN-y, IL-12 and IL-18, whereas in the lepromatous lesions predominate cytokines of Th2 pattern such as IL-4, IL-5 IL-10 and TGF-beta. In the skin, main dendritic cells are myeloid dendritic cells, Langerhans cells, and some dermal dendrocytes. They are identified respectively by immunohistochemical expression of S100, CD1a and Factor XIIIa. Langerhans cells and dermal dendrocytes Factor XIIIa positive are increased in number in tuberculoid lesions compared with lepromatous lesions. The objectives of this study were: 1) to characterize \"in situ\" inflammation in indeterminate leprosy through the quantification of immunohistochemical markers: CD57, CD4, CD8, CD1a, S100, FXIIIa, CD68, Foxp3, CD123, IL-1, IL-2r, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-18, IFN-y, TNF-alfa, TGF-beta, iNOS, granzyme B, Toll-like receptor 2/4, and BCG antigen, 2) compare the phenotypic and cytokinic profile of indeterminate leprosy lesions between positive and negative Mitsuda reaction groups in order to investigate if there are patterns that can predict which way the disease may evolve, and 3 ) review the histopathology of the indetermate form by semi-quantitative analysis of changes seen in hematoxylin / eosin. Fifteen lesions of patients with indeterminate leprosy were selected. There was used control groups of Factor XIIIa and CD1a expression in 10 cases of normal skin. Histopathology showed discrete epidermal changes, such as vacuolar changes and lymphocyte exocytosis (in 33% of cases each), keratinocyte apoptosis (26%), atrophy and acanthosis (in 06% of cases each); neural lymphocytic inflammatory infiltrate (100%), superficial perivascular (100%), deep perivascular (93%), peri-eccrine (40%), peri-pilosebaceous follicle (20%), and melanophages in 93% of cases. These findings showed that not always all environments are affected by inflammation in histopathology. In 66% of patients it was found bacterial antigen (by Fite-Faraco or immunohistochemical technique anti-BCG), so the indeterminate form should not be systematically considered as paucibacillary. There was no significant difference in phenotypic and cytokinic patterns between the positive and negative Mitsuda groups. In the microenvironment of inflammatory lesions there was significant expression of TLR 2/4, Factor XIIIa, CD4, CD8, IL-2r, IL-4, IL-10, TGF-beta and iNOS. The important expression of IL-4, IL-10 and TGF-beta in indeterminate leprosy meant tendency to Th2 immune response pole, an environment of tolerance to permanence of bacillus. Low IFN-? expression contributed to the negligible Th1 response. There was no significant difference in the expression of CD1a between the lesions and normal skin. Factor XIIIa was expressed as greater than 50 cells / mm2 in all cases, with significantly larger quantities than other dendritic cells in lesions (S100, CD68, CD123) and than normal skin. These findings demonstrate the importance of Factor XIIIa positive dermal dendrocytes in antigen presentation at the initial stage of leprosy

A forma indeterminada é a fase inicial da hanseníase, que se caracteriza histologicamente pelo infiltrado inflamatório leve, não granulomatoso, de linfócitos e histiócitos ao redor de vasos, anexos e nervos. No local de entrada do M. leprae, as células apresentadoras de antígeno do tipo células dendríticas são as primeiras a encontrar o bacilo. Este, no interior de células dendríticas, desencadeia a produção local de citocinas e quimiocinas, que resultam em proliferação de linfócitos T helper 1 ou T helper 2, assim definindo uma resposta imune celular ou humoral, respectivamente. As lesões tuberculoides mostram predominância das citocinas de padrão Th1 como IL-2, TNF-alfa, IFN-y, IL-12 e IL-18, enquanto que nas lesões virchowianas predominam citocinas de padrão Th2, como IL-4, IL-5, IL-10 e TGF-beta. Na pele, as principais células dendríticas são células dendríticas mieloides, células de Langerhans e alguns dendrócitos dérmicos. São identificadas respectivamente pela expressão imuno-histoquímica de S100, CD1a e Fator XIIIa. Células de Langerhans e dendrócitos dérmicos Fator XIIIa positivos estão aumentados em quantidade nas lesões tuberculoides quando comparadas com lesões virchowianas. Os objetivos do presente estudo foram: 1) caracterizar a inflamação \"in situ\" na hanseníase indeterminada através da quantificação das marcações imuno-histoquímicas de: CD57, CD4, CD8, CD1a, S100, FXIIIa, CD68, Foxp3, CD123, IL-1, IL-2r, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-18, IFN-, TNF-alfa, TGF-beta, iNOS, granzima B, receptor Toll-like 2/4, e antígeno BCG, 2) comparar o perfil fenotípico e citocínico das lesões na hanseníase indeterminada entre grupos de reação de Mitsuda positiva e negativa, a fim de investigar se existem padrões que possam prever para qual forma a doença evoluiria, e 3) revisar a histopatologia da forma indeterminada através da análise semiquantitativa das alterações vistas à coloração de hematoxilina/eosina. Foram selecionadas 15 lesões de pacientes com hanseníase indeterminada. Foram usados grupos controles de expressão de Fator XIIIa e CD1a em 10 casos de pele normal. A histopatologia mostrou discretas alterações epidérmicas, como alteração vacuolar e exocitose de linfócitos (33% dos casos cada), apoptose de queratinócitos (26%), atrofia e acantose (06% dos casos cada); infiltrado inflamatório linfomononuclear neural (100%), perivascular superficial (100%), perivascular profundo (93%), peri-écrino (40%) e peri-folículo pilossebáceo (20%), além de melanófagos em 93% dos casos. Esses achados mostraram que nem sempre todos os ambientes estão acometidos por inflamação na histopatologia. Em 66% dos pacientes foi encontrado antígeno bacilar (por Fite-Faraco ou técnica imuno-histoquímica anti-BCG), portanto a forma indeterminada não deve ser considerada sistematicamente como paucibacilar. Não houve diferença significativa de padrões de marcadores entre os grupos Mitsuda positivo e negativo. No microambiente inflamatório das lesões houve expressões significativas de TLR 2/4, Fator XIIIa, CD4, CD8, IL-2r, IL-4, IL-10, iNOS e TGF-beta. A expressão importante de IL-4, IL-10 e TGF- beta nas lesões de hanseníase indeterminada significaram tendência de resposta imune para o polo Th2, um ambiente de tolerância à permanência do bacilo. A baixa expressão de IFN-y colaborou para a inexpresiva resposta Th1. Não houve diferença significativa na expressão de CD1a entre as lesões e pele normal. Fator XIIIa foi expresso em mais que 50 células/mm2 em todos os casos, com quantidades significativamente maiores que outras células dendríticas nas lesões (S100, CD68, CD123) e que a pele normal. Estes achados demonstraram a importância dos dendrócitos dérmicos Fator XIIIa positivos na apresentação de antígeno na fase inicial da hanseníase / The indeterminate form is the initial stage of leprosy, which is characterized histologically by mild inflammatory infiltrate, non granulomatous, with lymphocytes and histiocytes around vessels, nerves and adnexals. When M. leprae enter the host, antigen-presenting cells of dendritic type are the first cells to find the bacillus. Once inside dendritic cells, the bacillus elicits local production of cytokines and chemokines, which result in proliferation of T lymphocytes helper 1 or T helper 2, thereby defining a cellular or humoral immune response, respectively. The tuberculoid lesions show predominance of Th1 cytokines such as IL-2, TNF-alfa, IFN-y, IL-12 and IL-18, whereas in the lepromatous lesions predominate cytokines of Th2 pattern such as IL-4, IL-5 IL-10 and TGF-beta. In the skin, main dendritic cells are myeloid dendritic cells, Langerhans cells, and some dermal dendrocytes. They are identified respectively by immunohistochemical expression of S100, CD1a and Factor XIIIa. Langerhans cells and dermal dendrocytes Factor XIIIa positive are increased in number in tuberculoid lesions compared with lepromatous lesions. The objectives of this study were: 1) to characterize \"in situ\" inflammation in indeterminate leprosy through the quantification of immunohistochemical markers: CD57, CD4, CD8, CD1a, S100, FXIIIa, CD68, Foxp3, CD123, IL-1, IL-2r, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-18, IFN-y, TNF-alfa, TGF-beta, iNOS, granzyme B, Toll-like receptor 2/4, and BCG antigen, 2) compare the phenotypic and cytokinic profile of indeterminate leprosy lesions between positive and negative Mitsuda reaction groups in order to investigate if there are patterns that can predict which way the disease may evolve, and 3 ) review the histopathology of the indetermate form by semi-quantitative analysis of changes seen in hematoxylin / eosin. Fifteen lesions of patients with indeterminate leprosy were selected. There was used control groups of Factor XIIIa and CD1a expression in 10 cases of normal skin. Histopathology showed discrete epidermal changes, such as vacuolar changes and lymphocyte exocytosis (in 33% of cases each), keratinocyte apoptosis (26%), atrophy and acanthosis (in 06% of cases each); neural lymphocytic inflammatory infiltrate (100%), superficial perivascular (100%), deep perivascular (93%), peri-eccrine (40%), peri-pilosebaceous follicle (20%), and melanophages in 93% of cases. These findings showed that not always all environments are affected by inflammation in histopathology. In 66% of patients it was found bacterial antigen (by Fite-Faraco or immunohistochemical technique anti-BCG), so the indeterminate form should not be systematically considered as paucibacillary. There was no significant difference in phenotypic and cytokinic patterns between the positive and negative Mitsuda groups. In the microenvironment of inflammatory lesions there was significant expression of TLR 2/4, Factor XIIIa, CD4, CD8, IL-2r, IL-4, IL-10, TGF-beta and iNOS. The important expression of IL-4, IL-10 and TGF-beta in indeterminate leprosy meant tendency to Th2 immune response pole, an environment of tolerance to permanence of bacillus. Low IFN-? expression contributed to the negligible Th1 response. There was no significant difference in the expression of CD1a between the lesions and normal skin. Factor XIIIa was expressed as greater than 50 cells / mm2 in all cases, with significantly larger quantities than other dendritic cells in lesions (S100, CD68, CD123) and than normal skin. These findings demonstrate the importance of Factor XIIIa positive dermal dendrocytes in antigen presentation at the initial stage of leprosy

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-25 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Dentre os efeitos moduladores da Propionibacterium acnes (P. acnes), um de grande importância, verificado em nosso laboratório em um modelo murino de hipersensibilidade imediata à ovoalbumina (OVA), é a sua capacidade de direcionar a resposta imune para Th1 ou Th2, dependendo do esquema de tratamento dos animais. Efeito semelhante foi induzido pelo polissacarídeo solúvel extraído da bactéria (PS), porém, como apenas a sua capacidade de modular a resposta Th1 havia sido verificada, nós nos propusemos a investigar, no presente estudo, se o PS poderia também potencializar a resposta Th2. De fato, verificamos que o polissacarídeo solúvel extraído da P. acnes foi capaz de potencializar a reação de hipersensibilidade imediata na pata de camundongos, como demonstrado pelo aumento do número de eosinófilos no infiltrado inflamatório, predominância do número de esplenócitos produtores de IL-4 e aumento da produção de IgG1 anti-OVA, concomitantemente à diminuição de IgG2a, compatível com padrão Th2 de resposta. Além disso, nós também avaliamos se os efeitos de potencialização ou supressão da hipersensibilidade imediata induzidos pela P. acnes ou seu polissacarídeo estariam relacionados com diferenças no número e grau de ativação de células apresentadoras de antígenos (APCs) e linfócitos B1. Observamos que o aumento da quantidade de APCs esplênicas positivas para moléculas co-estimuladoras, TLR4 e IL-4 em animais tratados com P. acnes ou PS e a maior expressão de CD80 por linfócitos B1c peritoneais estava relacionada com exacerbação da resposta Th2. Por outro lado, o aumento do número de linfócitos B2 esplênicos TLR2+, bem como maior expressão de TLR9 intracelular por células dendríticas, e também menor número de células B1a peritoneais positivas para TLR2 e TLR9 intracelular em camundongos tratados com P. acnes ou PS, estava relacionado com supressão da reação. Quanto à síntese de citocinas, verificou-se um aumento menos pronunciado do número de APCs IL-4+ e também maior quantidade de células produtoras de IL-12 nos grupos em que a reação foi suprimida, em relação aos submetidos ao protocolo de exacerbação. In vitro, o estímulo concomitante de P. acnes e OVA em co-culturas de células dendríticas e linfócitos T aumentou a liberação de IL-5 e IL-17, em relação às culturas estimuladas apenas com OVA, e o estímulo concomitante de PS e OVA aumentou a síntese de IL-17. Já o estímulo com P. acnes ou PS, seguido do estímulo com OVA no dia seguinte, induziu uma diminuição da liberação de IL-5 e IL-17, em comparação com as culturas estimuladas apenas com OVA, sugerindo que a P. acnes e o polissacarídeo atuam diretamente sobre células apresentadoras de antígenos. / Among Propionibacterium acnes (P. acnes) immunomodulatory effects, one of great importance, verified in our laboratory in a murine model of type I hypersensitivity to ovalbumin (OVA), is its capacity to direct the immune response to Th1 or Th2, depending on the animals treatment. Similar effect was induced by the soluble polysaccharide extracted from the bacteria (PS), however, since only its capacity to modulate the Th1 response has been verified, we decided to investigate, in the present study, if PS could also potentiate the Th2 response. In fact, this compound was able to potentiate or suppress the immediate hypersensitivity reaction in mice, depending on the protocol used. Besides, we investigated, in this work, whether the number of spleen cells and peritoneal B1 lymphocytes would be different between the treatment protocols, being related to potentiation or suppression of the OVA response, and also if the activation status of antigen presenting cells (APCs) and B1 lymphocytes could interfere on reaction modulation. We verified that the higher numbers of APCs expressing co-stimulatory molecules and the higher expression levels of these molecules on cell surface are probably related to potentiation of the Th2 response to OVA induced by P. acnes or PS. The higher CD80 expression by peritoneal B1c lymphocytes is also possibly involved with OVA response exacerbation in these animals. Besides, there seems to be a correlation between higher number of APCs expressing TLR4 and exacerbation of the immediate hypersensitivity reaction in P. acnes- or PS-treated mice. Differences on TLRs expression by spleen and peritoneal B1 lymphocytes can also be related to the type I hypersensitivity modulation. Analysis of cytokines synthesis by spleen APCs confirmed the Th2 potentiation or suppression in this model. Finally, in vitro experiments using co-cultures of dendritic cells and T lymphocytes indicated that P. acnes and PS seem to perform their effects of Th2 response potentiation or suppression by direct action on antigen presenting cells. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações