Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-08-12T16:15:37Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Joanemile Pacheco de Figueiredo.pdf: 786075 bytes, checksum: e932bb435d8f92e49c6cdcf62892ceac (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2016-08-23T15:31:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Joanemile Pacheco de Figueiredo.pdf: 786075 bytes, checksum: e932bb435d8f92e49c6cdcf62892ceac (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-23T15:31:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Joanemile Pacheco de Figueiredo.pdf: 786075 bytes, checksum: e932bb435d8f92e49c6cdcf62892ceac (MD5) / CAPES; CNPq; FAPESB; National Institute of Health; / A prevalência de infecção por helmintos é negativamente associada à prevalência de alergia, e alguns trabalhos têm demonstrado uma inversa associação entre infecções por helmintos e gravidade de asma. Neste trabalho, foi avaliada a resposta imune específica para alérgeno 1 de Dermatophagoides pteronyssinus (Der p 1) em asmáticos infectados com helmintos de uma área endêmica no município do Conde-Bahia (Grupo 1), comparando-se com a resposta em asmáticos não infectados de uma área não endêmica, Salvador-Bahia (Grupo 2). Os indivíduos foram selecionados utilizando-se questionário ISAAC modificado e exames parasitológicos de fezes por meio da técnica de Kato-Katz. Foram realizados testes cutâneos de leitura imediata com aeroalérgenos, dosagem de IgE específica para Der p 1, coleta de amostras de poeira domiciliar para estudo da fauna acarina, além da avaliação da resposta imunológica pela produção de citocinas por células mononucleares do sangue periférico estimuladas, in vitro, com Der p 1. A dosagem de citocinas no sobrenadante das culturas foi realizada pelo método de ELISA, a expressão de IL-4 pela técnica de RT-PCR e a fonte produtora de IL-10 foi avaliada utilizando-se citometria de fluxo. Foi observada menor positividade aos testes cutâneos de leitura imediata com aeroalérgenos nos asmáticos infectados por helmintos, incluindo S. mansoni (grupo 1), quando comparados com asmáticos não infectados. Embora a positividade aos testes cutâneos tenha sido baixa no grupo de asmáticos infectados, em 40,6% dos indivíduos foi observada IgE específica para o Der p 1 acima de 0,70 KU/L (classe II). Com relação à produção de citocinas, observou-se que células de asmáticos infectados pelo S. mansoni produziram baixos níveis de IL-5 em culturas estimuladas com Der p 1, quando comparados à produção desta citocina por células de indivíduos não infectados (p<0,0001). Da mesma forma, a razão da densitometria de IL-4/HPRT no grupo de infectados foi mais baixa do que no grupo de não infectados (p<0,05). Em contraste, os níveis de IL-10 foram altos em cultura de células de asmáticos infectados por S. mansoni e baixos ou indetectáveis no grupo controle (p=0,0018). Observou-se uma associação positiva entre carga parasitária de S. mansoni e níveis de IL-10 em culturas estimuladas com Der p 1 (= 0,3212, p=0,012). A adição de IL-10 recombinante humana (rhIL-10) às culturas de asmáticos não infectados resultou em diminuição na produção de IL-5 (p<0,05). Os indivíduos do grupo 1 foram tratados com anti-helmínticos e houve redução da produção de IL-10 específica para Der p 1 (p<0,05), associada à piora dos sintomas de asma após o tratamento. Por fim, os dados mostraram que, em asmáticos infectados com S. mansoni, a IL-10 foi produzida principalmente por células T CD8+ e monócitos e, no grupo de não infectados, esta citocina foi produzida basicamente por monócitos. Este estudo sugere que a IL-10 é uma citocina supressora da resposta imune inflamatória do tipo Th2 em asmáticos infectados por helmintos, incluindo S. mansoni e que as células T CD8+ constituem uma importante fonte produtora desta citocina nos indivíduos infectados.

Objetivo: O objetivo deste estudo foi analisar a relação e a predominância dos padrões de resposta imune Th1 e Th2 em pacientes com endometriose. Pacientes e Métodos: Entre Fevereiro de 2004 e Abril de 2005 foram avaliadas 98 pacientes divididas em dois grupos de acordo com a presença (Grupo A) ou ausência de endometriose (Grupo B), confirmada histologicamente. Foram coletados sangue periférico e fluido peritoneal de todas as pacientes para a dosagem de interleucinas (IL) 2, 4 e 10, fator de necrose tumoral-alfa (TNF-alfa) e interferon-gama (IFN-gama) por citometria de fluxo. Além da presença da endometriose, foram analisadas a fase do ciclo menstrual, o quadro clinico, o estadiamento, o local de acometimento e a classificação histológica da moléstia. Resultados: Observou-se elevação estatisticamente significante nas concentrações de IFN-gama (mediana de 1,5pg/ml no Grupo A e de 0,4pg/ml no Grupo B, p=0,03) e de IL-10 (mediana de 38,6pg/ml no Grupo A e de 15,7pg/ml no Grupo B, p=0,03) do fluido peritoneal das pacientes com endometriose em relação àquelas sem a doença. As pacientes com endometriose apresentaram alteração estatisticamente significativa na relação das concentrações de IL-4/IFN-gama (p<0,001), IL-4/IL-2 (p=0,006), IL-10/IFN-gama (p < 0,001) e IL-10/IL-2 (p<0,001) do fluido peritoneal, com concentrações mais elevadas da IL-4 e da IL-10, o que reflete o predomínio da resposta Th2 sobre a Th1. Conclusão: Os resultados obtidos permitem concluir que, neste estudo, observou-se elevação de citocinas relativas à resposta imune Th2, denotando haver um predomínio deste padrão de resposta em pacientes com endometriose. / Objective: The objective of this study was to analyze the relation and the predominance of the immune response patterns Th1 and Th2 in patients with endometriosis. Patients and Methods: Between February 2004 and April 2005, 98 patients were evaluated and divided into two groups, according to the presence (Group A) or absence of endometriosis (Group B), confirmed by histology. Peripheral blood and peritoneal fluid were collected from all patients to obtain the concentrations of interleukines (IL) 2, 4 and 10, tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and interferon-gamma (IFN-gamma) using flow cytometry. Besides the presence of endometriosis, we analyzed phase of menstrual cycle, clinical complaints, classification, site and histological differentiation of the disease. Results: We observed higher concentrations of IFN-gamma (median of 1.5pg/ml in Group A and 0.4pg/ml in Group B, p = 0.03) and IL-10 (median of 38.6pg/ml in Group A and 15.7pg/ml in Group B, p = 0.03) in peritoneal fluid of patients with endometriosis in relation to those without the disease. Patients with endometriosis presented a significant alteration in IL-4/IFN-gamma (p < 0.001), IL-4/IL-2 (p = 0.006), IL-10/IFN-gamma (p < 0.001) and IL-10/IL-2 (p<0.001) ratio concentrations of peritoneal fluid, with IL-4 and IL-10 predominance, reflecting a Th2 response predominance over the Th1. Conclusion: The results allow concluding that, in this study, it was observed a cytokine elevation related to Th2 immune response, indicating a predominance of this pattern of response in patients with endometriosis.

Objetivo: O objetivo deste estudo foi analisar a relação e a predominância dos padrões de resposta imune Th1 e Th2 em pacientes com endometriose. Pacientes e Métodos: Entre Fevereiro de 2004 e Abril de 2005 foram avaliadas 98 pacientes divididas em dois grupos de acordo com a presença (Grupo A) ou ausência de endometriose (Grupo B), confirmada histologicamente. Foram coletados sangue periférico e fluido peritoneal de todas as pacientes para a dosagem de interleucinas (IL) 2, 4 e 10, fator de necrose tumoral-alfa (TNF-alfa) e interferon-gama (IFN-gama) por citometria de fluxo. Além da presença da endometriose, foram analisadas a fase do ciclo menstrual, o quadro clinico, o estadiamento, o local de acometimento e a classificação histológica da moléstia. Resultados: Observou-se elevação estatisticamente significante nas concentrações de IFN-gama (mediana de 1,5pg/ml no Grupo A e de 0,4pg/ml no Grupo B, p=0,03) e de IL-10 (mediana de 38,6pg/ml no Grupo A e de 15,7pg/ml no Grupo B, p=0,03) do fluido peritoneal das pacientes com endometriose em relação àquelas sem a doença. As pacientes com endometriose apresentaram alteração estatisticamente significativa na relação das concentrações de IL-4/IFN-gama (p<0,001), IL-4/IL-2 (p=0,006), IL-10/IFN-gama (p < 0,001) e IL-10/IL-2 (p<0,001) do fluido peritoneal, com concentrações mais elevadas da IL-4 e da IL-10, o que reflete o predomínio da resposta Th2 sobre a Th1. Conclusão: Os resultados obtidos permitem concluir que, neste estudo, observou-se elevação de citocinas relativas à resposta imune Th2, denotando haver um predomínio deste padrão de resposta em pacientes com endometriose. / Objective: The objective of this study was to analyze the relation and the predominance of the immune response patterns Th1 and Th2 in patients with endometriosis. Patients and Methods: Between February 2004 and April 2005, 98 patients were evaluated and divided into two groups, according to the presence (Group A) or absence of endometriosis (Group B), confirmed by histology. Peripheral blood and peritoneal fluid were collected from all patients to obtain the concentrations of interleukines (IL) 2, 4 and 10, tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and interferon-gamma (IFN-gamma) using flow cytometry. Besides the presence of endometriosis, we analyzed phase of menstrual cycle, clinical complaints, classification, site and histological differentiation of the disease. Results: We observed higher concentrations of IFN-gamma (median of 1.5pg/ml in Group A and 0.4pg/ml in Group B, p = 0.03) and IL-10 (median of 38.6pg/ml in Group A and 15.7pg/ml in Group B, p = 0.03) in peritoneal fluid of patients with endometriosis in relation to those without the disease. Patients with endometriosis presented a significant alteration in IL-4/IFN-gamma (p < 0.001), IL-4/IL-2 (p = 0.006), IL-10/IFN-gamma (p < 0.001) and IL-10/IL-2 (p<0.001) ratio concentrations of peritoneal fluid, with IL-4 and IL-10 predominance, reflecting a Th2 response predominance over the Th1. Conclusion: The results allow concluding that, in this study, it was observed a cytokine elevation related to Th2 immune response, indicating a predominance of this pattern of response in patients with endometriosis.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A estomatite aftosa recorrente (EAR) e uma doenca inflamatoria cronica que se caracteriza por surtos de lesoes ulcerativas na mucosa oral. Ha evidencias que na EAR a polarizacao da resposta imune para o tipo Th1 tem papel importante na etiopatogenia da doenca e que, a utilizacao de simbioticos poderia estimular maior atividade dos linfocitos T reguladores, influenciando favoravelmente a evolucao da EAR. Objetivos: Avaliar a evolucao clinica dos portadores de estomatite aftosa recorrente frente ao uso do simbiotico Lactofos®/Simbioflora®, analisando a sintomatologia, a frequencia das crises, numero, duracao e tamanho das lesoes. Comparar o perfil imunologico dos pacientes portadores de estomatite aftosa recorrente, por meio dos niveis de citocinas com os controles e entre si, antes e apos o tratamento. Metodo: Realizamos ensaio clinico duplo cego randomizado placebo controlado, com 3 grupos. Um grupo controle composto por 30 individuos saudaveis e 2 grupos com EAR (grupo Lactofos® com 22 pacientes, grupo placebo com 23 pacientes). Os dois grupos foram instruidos a tomar 2 saches ao dia durante 120 dias. Foram realizadas coletas de sangue em 3 momentos, no momento inicial (pre-tratamento, T0), 120 dias apos o inicio do tratamento (final do tratamento T4) e 2 meses apos a interrupcao do medicamento (T6). Foram feitas analises das citocinas no soro, em sobrenadante de cultura estimulada por fitohemaglutinina (PHA) e nao estimulada de celulas mononucleares de sangue periferico(PBMC) utilizando o kit Kit MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel, HCYTOMAG-60K (Millipore u Missouri, EUA). Na analise estatistica foram utilizados testes ANOVA, Mann-Whitney e t-student. Resultados: Pacientes que fizeram uso de Lactofos®/Simbioflora® apresentaram melhora na variavel clinica DOR quando comparados ao grupo placebo (p=0,027), nao havendo diferenca para as outras variaveis clinicas avaliadas. Os efeitos colaterais observados foram semelhantes nos dois grupos, mas a flatulencia (p=0,003) e o intestino solto (p=0,04) foram significantes para os pacientes em uso de Lactofos®/Simbioflora®. Constatamos diferenca significante nas citocinas IFN-&#947;, IL-4 e IL-6 no soro dos PBMCs dos pacientes ao comparar o grupo controle e o grupo EAR. Em relacao ao tratamento ao longo do tempo pudemos observar que o IFN-&#947; (p=0,023), IL-4(p=0,045), IL-10 (p=0,000) e Il-12p70 (p=0,027) apresentaram diferenca significante entre os tratamentos e ou entre os momentos (T0, T4 e T6). Conclusao: O simbiotico Lactofos®/Simbioflora® foi eficiente na melhora de uma unica variavel clinica, a DOR quando comparado com o placebo. Os pacientes portadores de estomatite aftosa recorrente apresentam perfil misto de resposta imune Th1/Th2 quando comparados com o grupo controle no momento inicial do estudo. O simbiotico Lactofos®/Simbioflora® induz resposta Th1 por meio de aumento de IL-12 e IFN-&#947;, e resposta Th2 devido ao aumento de IL-4 e IL-10 / Recurrent aphthous stomatitis (RAS) is a chronic inflammatory disease characterized by relapses of ulcerative lesions in the oral mucosa. There is evidence that the RAS polarization of the immune response towards a Th1 response plays an important role in the pathogenesis of the disease and the use of symbiotic could stimulate greater activity of regulatory T lymphocytes, favorably influencing the evolution of the RAS. Objectives: To evaluate the clinical outcome of patients with recurrent aphthous stomatitis towards the use of symbiotic Lactofos ® / Simbioflora ®, analyzing symptoms, frequency, number, duration and size of the lesions. Compare the immunological profile of patients with recurrent aphthous stomatitis, through cytokine levels with the controls and with each other before and after treatment.Method: We conducted double blind randomized clinical trial placebo controlled study with 3 arms. A control group of 30 healthy individuals and two arms with RAS(Lactofos®/Simbioflora® group with 22 patients, 23 patients in the placebo group). Both groups were instructed to take 2 sachets daily for 120 days. Blood samples were collected in 3 times at baseline (pre-treatment T0), and 120 days after beginning the treatment (end of treatment T4) and 2 months after discontinuation of the drug (T6). Analyzes were conducted on serum cytokines in the culture supernatants stimulated by phytohemagglutinin (PHA) stimulated and not peripheral blood mononuclear cells (PBMC) using the kit MILLIPLEX MAP Human Cytokine / Chemokine Magnetic Bead Panel HCYTOMAG-60K (Millipore - Missouri, USA). Statistical analysis used ANOVA, Mann-Whitney and t-student tests. Results: Patients who used Lactofos® /Simbioflora® showed improvement in symptoms compared to placebo (p = 0.027), with no statistical difference for the other clinical variables assessed. The side effects observed were similar in both groups, but the flatulence (p= 0.003) and diarrhrea (p = 0.04) were significant for patients using Lactofos ®. We found significant differences in cytokine IFN - γ, IL - 4 and IL - 6 in serum of PBMCs of patients when compared the control group and RAS group. Regarding treatment over time we observed that IFN - γ (p = 0.023), IL - 4 (p = 0.045), IL - 10 (p = 0.000) and IL - 12p70 (p = 0.027) showed significant difference or between treatments and between times (T0, T4 and T6). Conclusion: The symbiotic Lactofos® /Simbioflora® was effective in improving one clinical variable, pain compared to placebo. Patients with recurrent aphthous stomatitis have mixed profile of Th1/Th2 immune response when compared with the control group at baseline. The symbiotic Lactofos® /Simbioflora® induces Th1 response by increasing IL - 12 and IFN - γ and the Th2 response due to increased IL - 4 and IL - 10 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A forma indeterminada é a fase inicial da hanseníase, que se caracteriza histologicamente pelo infiltrado inflamatório leve, não granulomatoso, de linfócitos e histiócitos ao redor de vasos, anexos e nervos. No local de entrada do M. leprae, as células apresentadoras de antígeno do tipo células dendríticas são as primeiras a encontrar o bacilo. Este, no interior de células dendríticas, desencadeia a produção local de citocinas e quimiocinas, que resultam em proliferação de linfócitos T helper 1 ou T helper 2, assim definindo uma resposta imune celular ou humoral, respectivamente. As lesões tuberculoides mostram predominância das citocinas de padrão Th1 como IL-2, TNF-alfa, IFN-y, IL-12 e IL-18, enquanto que nas lesões virchowianas predominam citocinas de padrão Th2, como IL-4, IL-5, IL-10 e TGF-beta. Na pele, as principais células dendríticas são células dendríticas mieloides, células de Langerhans e alguns dendrócitos dérmicos. São identificadas respectivamente pela expressão imuno-histoquímica de S100, CD1a e Fator XIIIa. Células de Langerhans e dendrócitos dérmicos Fator XIIIa positivos estão aumentados em quantidade nas lesões tuberculoides quando comparadas com lesões virchowianas. Os objetivos do presente estudo foram: 1) caracterizar a inflamação \"in situ\" na hanseníase indeterminada através da quantificação das marcações imuno-histoquímicas de: CD57, CD4, CD8, CD1a, S100, FXIIIa, CD68, Foxp3, CD123, IL-1, IL-2r, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-18, IFN-, TNF-alfa, TGF-beta, iNOS, granzima B, receptor Toll-like 2/4, e antígeno BCG, 2) comparar o perfil fenotípico e citocínico das lesões na hanseníase indeterminada entre grupos de reação de Mitsuda positiva e negativa, a fim de investigar se existem padrões que possam prever para qual forma a doença evoluiria, e 3) revisar a histopatologia da forma indeterminada através da análise semiquantitativa das alterações vistas à coloração de hematoxilina/eosina. Foram selecionadas 15 lesões de pacientes com hanseníase indeterminada. Foram usados grupos controles de expressão de Fator XIIIa e CD1a em 10 casos de pele normal. A histopatologia mostrou discretas alterações epidérmicas, como alteração vacuolar e exocitose de linfócitos (33% dos casos cada), apoptose de queratinócitos (26%), atrofia e acantose (06% dos casos cada); infiltrado inflamatório linfomononuclear neural (100%), perivascular superficial (100%), perivascular profundo (93%), peri-écrino (40%) e peri-folículo pilossebáceo (20%), além de melanófagos em 93% dos casos. Esses achados mostraram que nem sempre todos os ambientes estão acometidos por inflamação na histopatologia. Em 66% dos pacientes foi encontrado antígeno bacilar (por Fite-Faraco ou técnica imuno-histoquímica anti-BCG), portanto a forma indeterminada não deve ser considerada sistematicamente como paucibacilar. Não houve diferença significativa de padrões de marcadores entre os grupos Mitsuda positivo e negativo. No microambiente inflamatório das lesões houve expressões significativas de TLR 2/4, Fator XIIIa, CD4, CD8, IL-2r, IL-4, IL-10, iNOS e TGF-beta. A expressão importante de IL-4, IL-10 e TGF- beta nas lesões de hanseníase indeterminada significaram tendência de resposta imune para o polo Th2, um ambiente de tolerância à permanência do bacilo. A baixa expressão de IFN-y colaborou para a inexpresiva resposta Th1. Não houve diferença significativa na expressão de CD1a entre as lesões e pele normal. Fator XIIIa foi expresso em mais que 50 células/mm2 em todos os casos, com quantidades significativamente maiores que outras células dendríticas nas lesões (S100, CD68, CD123) e que a pele normal. Estes achados demonstraram a importância dos dendrócitos dérmicos Fator XIIIa positivos na apresentação de antígeno na fase inicial da hanseníase / The indeterminate form is the initial stage of leprosy, which is characterized histologically by mild inflammatory infiltrate, non granulomatous, with lymphocytes and histiocytes around vessels, nerves and adnexals. When M. leprae enter the host, antigen-presenting cells of dendritic type are the first cells to find the bacillus. Once inside dendritic cells, the bacillus elicits local production of cytokines and chemokines, which result in proliferation of T lymphocytes helper 1 or T helper 2, thereby defining a cellular or humoral immune response, respectively. The tuberculoid lesions show predominance of Th1 cytokines such as IL-2, TNF-alfa, IFN-y, IL-12 and IL-18, whereas in the lepromatous lesions predominate cytokines of Th2 pattern such as IL-4, IL-5 IL-10 and TGF-beta. In the skin, main dendritic cells are myeloid dendritic cells, Langerhans cells, and some dermal dendrocytes. They are identified respectively by immunohistochemical expression of S100, CD1a and Factor XIIIa. Langerhans cells and dermal dendrocytes Factor XIIIa positive are increased in number in tuberculoid lesions compared with lepromatous lesions. The objectives of this study were: 1) to characterize \"in situ\" inflammation in indeterminate leprosy through the quantification of immunohistochemical markers: CD57, CD4, CD8, CD1a, S100, FXIIIa, CD68, Foxp3, CD123, IL-1, IL-2r, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-18, IFN-y, TNF-alfa, TGF-beta, iNOS, granzyme B, Toll-like receptor 2/4, and BCG antigen, 2) compare the phenotypic and cytokinic profile of indeterminate leprosy lesions between positive and negative Mitsuda reaction groups in order to investigate if there are patterns that can predict which way the disease may evolve, and 3 ) review the histopathology of the indetermate form by semi-quantitative analysis of changes seen in hematoxylin / eosin. Fifteen lesions of patients with indeterminate leprosy were selected. There was used control groups of Factor XIIIa and CD1a expression in 10 cases of normal skin. Histopathology showed discrete epidermal changes, such as vacuolar changes and lymphocyte exocytosis (in 33% of cases each), keratinocyte apoptosis (26%), atrophy and acanthosis (in 06% of cases each); neural lymphocytic inflammatory infiltrate (100%), superficial perivascular (100%), deep perivascular (93%), peri-eccrine (40%), peri-pilosebaceous follicle (20%), and melanophages in 93% of cases. These findings showed that not always all environments are affected by inflammation in histopathology. In 66% of patients it was found bacterial antigen (by Fite-Faraco or immunohistochemical technique anti-BCG), so the indeterminate form should not be systematically considered as paucibacillary. There was no significant difference in phenotypic and cytokinic patterns between the positive and negative Mitsuda groups. In the microenvironment of inflammatory lesions there was significant expression of TLR 2/4, Factor XIIIa, CD4, CD8, IL-2r, IL-4, IL-10, TGF-beta and iNOS. The important expression of IL-4, IL-10 and TGF-beta in indeterminate leprosy meant tendency to Th2 immune response pole, an environment of tolerance to permanence of bacillus. Low IFN-? expression contributed to the negligible Th1 response. There was no significant difference in the expression of CD1a between the lesions and normal skin. Factor XIIIa was expressed as greater than 50 cells / mm2 in all cases, with significantly larger quantities than other dendritic cells in lesions (S100, CD68, CD123) and than normal skin. These findings demonstrate the importance of Factor XIIIa positive dermal dendrocytes in antigen presentation at the initial stage of leprosy

Avaliou-se a capacidade dos cimentos endodônticos: Sealapex®, Activ-GP® e AH-Plus® de alterarem o perfil das citocinas nas respostas Th1, Th2 e Th17, após a implantação destes em subcutâneo de camundongos. A quantificação das citocinas IL-2, IL-6, TNF-&alpha;, IFN-&gamma;, IL-4, IL-10 e IL-17 foi realizada in vivo, no tecido reacional circundante aos implantes, os quais foram confeccionados a partir de sondas nasogástricas estéreis e apirogênicas de cloreto de polivinila preenchidas com os cimentos, tendo um grupo controle com sondas vazias. Utilizou-se camundongos isogênicos da linhagem C57BL/6 machos de 6/8 semanas de vida sendo que cada um recebeu 2 implantes na região dorsal (lado direito e esquerdo). Após os períodos experimentais de 7, 21 e 63 dias, com os camundongos anestesiados, os implantes foram removidos juntamente com o tecido circundante, e os animais sacrificados em seguida por deslocamento cervical. As amostras de cada grupo foram divididas sendo: duas, contendo implante/tecido, processadas histotecnicamente e as demais com apenas tecido (sem implante) foram homogeneizadas e centrifugadas com solução formada por tampão RIPA e inibidor de protease. O sobrenadante, fruto deste processo, foi coletado e a dosagem das citocinas realizada através do kit CBA mouse-Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit (BD Cytometric Bead Array, San Jose, CA, USA) em análise por citometria de fluxo. Os parâmetros avaliados foram a concentração da citocina em função do cimento testado em cada período experimental. Submeteu-se os resultados à análise estatística por meio do teste t com a correção de Welch\'s. Para todos os testes o nível de significância foi de 5%. Com relação à IL-2 houve diferenças estatísticas significantes entre os grupos Activ-GP® e AH-Plus® (p=0,0391). No período de 21 dias foram detectadas diferenças entre o grupo controle e AH-Plus® (p=0,0402) e entre o grupo Sealapex® e AH-Plus® (p=0,0244). O AH-Plus® induziou um maior aumento na IL-6, aos 7 dias em relação ao Activ-GP® (p=0,0286) e aos 21 dias entre o grupo controle (p=0.0402) e Activ-GP® (p=0.0244). Os níveis de TNF-&alpha; foram estatisticamente superiores após 7 dias quando comparou-se o grupo AH-Plus® com os demais. Observou-se que no grupo controle aos 7 e 21 dias ocorreram diferenças estatísticas em relação ao Sealapex® e AH-Plus® respectivamente quando avaliadas as concentrações de IFN-&gamma;. Houve também diferenças estatísticas entre o grupo controle e Sealapex® (p=0,0158) no período de 7 dias para a citocina IL-4. Os valores de IL-10 foram estatisticamente superiores para o grupo controle em relação ao Activ-GP® no período de 21 dias (p=0,0471). Com relação a IL-17 no período de 21 dias, observou-se os maiores valores para o grupo controle, seguido pelo Sealapex®, Activ-GP® e AH-Plus®. Foram detectadas diferenças entre os grupos controle e AH-Plus® (p=0,0121), controle e Activ-GP® (p=0,0262) e entre Sealapex® e Activ GP® (p=0,0314). Baseado nesses resultados podê-se concluir que: os cimentos endodônticos são capazes de modular as respostas Th1, Th2 e Th17 através da inibição ou estimulação da liberação das citocinas testadas. O cimento AH-Plus® promoveu as maiores diferenças no perfil de resposta Th1. / It was evaluated the capacity of the following endodontic sealers: Sealapex, Activ-GP and AH-Plus to modify the cytokine profile in Th1, Th2 and Th17 responses, after their implantation in the subcutaneous tissue of mice. Quantification of IL-2, IL-6, TNF-&alpha;, IFN-&gamma;, IL-4, IL-10 and IL-17 was performed in vivo, in the reactional tissue surrounding the implants, which were made from sterile nasogastric probes and apyrogenic of polyvinyl chloride filled with sealer, and a control group of empty probes. It was used isogenic mice of C57BL/6 lineage, 6/8 weeks old males, each of which received two implants in the dorsal region (left and right). After the experimental time of 7, 21 and 63 days, the mice were anesthetized and the implants were removed along with the surrounding tissue, the animals were then sacrificed by cervical dislocation. Samples from each group were divided as follows: two containing implant / tissue processed histologically and with only the remaining tissue (without implant) were mixed and centrifuged with a solution formed by RIPA buffer and protease inhibitors. The supernatant result of this process was collected and cytokine dosage accomplished by mouse-Th1/Th2/Th17 Cytokine CBA Kit Kit (BD cytometric Bead Array, San Jose, CA, USA) for flow cytometry analysis. The evaluated parameters were the cytokine concentration in function of sealer tested in each trial. The results were submitted to statistical analysis using the t test with Welch\'s correction. For all tests the significance level was 5%. With respect to IL-2 there were significant statistical differences between groups-Activ GP and AH-Plus (p=0.0391). In the period of 21 days differences were found between the control group and AH-Plus (p=0.0402) and between the group Sealapex and AH-Plus (p=0.0244). The AH-Plus induced a greater increase in IL-6, at 7 days compared to Activ-GP (p=0.0286) and at 21 days between the control group (p=0.0402) and Activ-GP (p=0.0244). The levels of TNF-&alpha; were significantly higher after 7 days when the AH-Plus group was compared with others. It was observed that in the control group at 7 and 21 days there were statistical differences in relation to Sealapex and AH-Plus respectively when evaluated concentrations of IFN-&gamma;. There were also significant differences between the control group and Sealapex (p=0.0158) within 7 days for the cytokine IL-4. The amounts of IL-10 were statistically higher in the control group compared to the Activ GP in a period of 21 days (p=0.0471). With respect to IL-17 in a period of 21 days, it was observed the highest values for the control group, followed by Sealapex, Activ-GP and AH-Plus. Differences were found between the control groups and AH-Plus (p=0.0121), control and Activ-GP (p=0.0262) and between Sealapex and Activ-GP (p=0.0314). Based on the presented results theendodontic sealers are able to promote changes in the response cytokine profile Th1, Th2 and Th17; Sealer AH-Plus produced the greatest changes, in the Th1 response profile.

Avaliou-se a capacidade dos cimentos endodônticos: Sealapex®, Activ-GP® e AH-Plus® de alterarem o perfil das citocinas nas respostas Th1, Th2 e Th17, após a implantação destes em subcutâneo de camundongos. A quantificação das citocinas IL-2, IL-6, TNF-&alpha;, IFN-&gamma;, IL-4, IL-10 e IL-17 foi realizada in vivo, no tecido reacional circundante aos implantes, os quais foram confeccionados a partir de sondas nasogástricas estéreis e apirogênicas de cloreto de polivinila preenchidas com os cimentos, tendo um grupo controle com sondas vazias. Utilizou-se camundongos isogênicos da linhagem C57BL/6 machos de 6/8 semanas de vida sendo que cada um recebeu 2 implantes na região dorsal (lado direito e esquerdo). Após os períodos experimentais de 7, 21 e 63 dias, com os camundongos anestesiados, os implantes foram removidos juntamente com o tecido circundante, e os animais sacrificados em seguida por deslocamento cervical. As amostras de cada grupo foram divididas sendo: duas, contendo implante/tecido, processadas histotecnicamente e as demais com apenas tecido (sem implante) foram homogeneizadas e centrifugadas com solução formada por tampão RIPA e inibidor de protease. O sobrenadante, fruto deste processo, foi coletado e a dosagem das citocinas realizada através do kit CBA mouse-Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit (BD Cytometric Bead Array, San Jose, CA, USA) em análise por citometria de fluxo. Os parâmetros avaliados foram a concentração da citocina em função do cimento testado em cada período experimental. Submeteu-se os resultados à análise estatística por meio do teste t com a correção de Welch\'s. Para todos os testes o nível de significância foi de 5%. Com relação à IL-2 houve diferenças estatísticas significantes entre os grupos Activ-GP® e AH-Plus® (p=0,0391). No período de 21 dias foram detectadas diferenças entre o grupo controle e AH-Plus® (p=0,0402) e entre o grupo Sealapex® e AH-Plus® (p=0,0244). O AH-Plus® induziou um maior aumento na IL-6, aos 7 dias em relação ao Activ-GP® (p=0,0286) e aos 21 dias entre o grupo controle (p=0.0402) e Activ-GP® (p=0.0244). Os níveis de TNF-&alpha; foram estatisticamente superiores após 7 dias quando comparou-se o grupo AH-Plus® com os demais. Observou-se que no grupo controle aos 7 e 21 dias ocorreram diferenças estatísticas em relação ao Sealapex® e AH-Plus® respectivamente quando avaliadas as concentrações de IFN-&gamma;. Houve também diferenças estatísticas entre o grupo controle e Sealapex® (p=0,0158) no período de 7 dias para a citocina IL-4. Os valores de IL-10 foram estatisticamente superiores para o grupo controle em relação ao Activ-GP® no período de 21 dias (p=0,0471). Com relação a IL-17 no período de 21 dias, observou-se os maiores valores para o grupo controle, seguido pelo Sealapex®, Activ-GP® e AH-Plus®. Foram detectadas diferenças entre os grupos controle e AH-Plus® (p=0,0121), controle e Activ-GP® (p=0,0262) e entre Sealapex® e Activ GP® (p=0,0314). Baseado nesses resultados podê-se concluir que: os cimentos endodônticos são capazes de modular as respostas Th1, Th2 e Th17 através da inibição ou estimulação da liberação das citocinas testadas. O cimento AH-Plus® promoveu as maiores diferenças no perfil de resposta Th1. / It was evaluated the capacity of the following endodontic sealers: Sealapex, Activ-GP and AH-Plus to modify the cytokine profile in Th1, Th2 and Th17 responses, after their implantation in the subcutaneous tissue of mice. Quantification of IL-2, IL-6, TNF-&alpha;, IFN-&gamma;, IL-4, IL-10 and IL-17 was performed in vivo, in the reactional tissue surrounding the implants, which were made from sterile nasogastric probes and apyrogenic of polyvinyl chloride filled with sealer, and a control group of empty probes. It was used isogenic mice of C57BL/6 lineage, 6/8 weeks old males, each of which received two implants in the dorsal region (left and right). After the experimental time of 7, 21 and 63 days, the mice were anesthetized and the implants were removed along with the surrounding tissue, the animals were then sacrificed by cervical dislocation. Samples from each group were divided as follows: two containing implant / tissue processed histologically and with only the remaining tissue (without implant) were mixed and centrifuged with a solution formed by RIPA buffer and protease inhibitors. The supernatant result of this process was collected and cytokine dosage accomplished by mouse-Th1/Th2/Th17 Cytokine CBA Kit Kit (BD cytometric Bead Array, San Jose, CA, USA) for flow cytometry analysis. The evaluated parameters were the cytokine concentration in function of sealer tested in each trial. The results were submitted to statistical analysis using the t test with Welch\'s correction. For all tests the significance level was 5%. With respect to IL-2 there were significant statistical differences between groups-Activ GP and AH-Plus (p=0.0391). In the period of 21 days differences were found between the control group and AH-Plus (p=0.0402) and between the group Sealapex and AH-Plus (p=0.0244). The AH-Plus induced a greater increase in IL-6, at 7 days compared to Activ-GP (p=0.0286) and at 21 days between the control group (p=0.0402) and Activ-GP (p=0.0244). The levels of TNF-&alpha; were significantly higher after 7 days when the AH-Plus group was compared with others. It was observed that in the control group at 7 and 21 days there were statistical differences in relation to Sealapex and AH-Plus respectively when evaluated concentrations of IFN-&gamma;. There were also significant differences between the control group and Sealapex (p=0.0158) within 7 days for the cytokine IL-4. The amounts of IL-10 were statistically higher in the control group compared to the Activ GP in a period of 21 days (p=0.0471). With respect to IL-17 in a period of 21 days, it was observed the highest values for the control group, followed by Sealapex, Activ-GP and AH-Plus. Differences were found between the control groups and AH-Plus (p=0.0121), control and Activ-GP (p=0.0262) and between Sealapex and Activ-GP (p=0.0314). Based on the presented results theendodontic sealers are able to promote changes in the response cytokine profile Th1, Th2 and Th17; Sealer AH-Plus produced the greatest changes, in the Th1 response profile.

A forma indeterminada é a fase inicial da hanseníase, que se caracteriza histologicamente pelo infiltrado inflamatório leve, não granulomatoso, de linfócitos e histiócitos ao redor de vasos, anexos e nervos. No local de entrada do M. leprae, as células apresentadoras de antígeno do tipo células dendríticas são as primeiras a encontrar o bacilo. Este, no interior de células dendríticas, desencadeia a produção local de citocinas e quimiocinas, que resultam em proliferação de linfócitos T helper 1 ou T helper 2, assim definindo uma resposta imune celular ou humoral, respectivamente. As lesões tuberculoides mostram predominância das citocinas de padrão Th1 como IL-2, TNF-alfa, IFN-y, IL-12 e IL-18, enquanto que nas lesões virchowianas predominam citocinas de padrão Th2, como IL-4, IL-5, IL-10 e TGF-beta. Na pele, as principais células dendríticas são células dendríticas mieloides, células de Langerhans e alguns dendrócitos dérmicos. São identificadas respectivamente pela expressão imuno-histoquímica de S100, CD1a e Fator XIIIa. Células de Langerhans e dendrócitos dérmicos Fator XIIIa positivos estão aumentados em quantidade nas lesões tuberculoides quando comparadas com lesões virchowianas. Os objetivos do presente estudo foram: 1) caracterizar a inflamação \"in situ\" na hanseníase indeterminada através da quantificação das marcações imuno-histoquímicas de: CD57, CD4, CD8, CD1a, S100, FXIIIa, CD68, Foxp3, CD123, IL-1, IL-2r, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-18, IFN-, TNF-alfa, TGF-beta, iNOS, granzima B, receptor Toll-like 2/4, e antígeno BCG, 2) comparar o perfil fenotípico e citocínico das lesões na hanseníase indeterminada entre grupos de reação de Mitsuda positiva e negativa, a fim de investigar se existem padrões que possam prever para qual forma a doença evoluiria, e 3) revisar a histopatologia da forma indeterminada através da análise semiquantitativa das alterações vistas à coloração de hematoxilina/eosina. Foram selecionadas 15 lesões de pacientes com hanseníase indeterminada. Foram usados grupos controles de expressão de Fator XIIIa e CD1a em 10 casos de pele normal. A histopatologia mostrou discretas alterações epidérmicas, como alteração vacuolar e exocitose de linfócitos (33% dos casos cada), apoptose de queratinócitos (26%), atrofia e acantose (06% dos casos cada); infiltrado inflamatório linfomononuclear neural (100%), perivascular superficial (100%), perivascular profundo (93%), peri-écrino (40%) e peri-folículo pilossebáceo (20%), além de melanófagos em 93% dos casos. Esses achados mostraram que nem sempre todos os ambientes estão acometidos por inflamação na histopatologia. Em 66% dos pacientes foi encontrado antígeno bacilar (por Fite-Faraco ou técnica imuno-histoquímica anti-BCG), portanto a forma indeterminada não deve ser considerada sistematicamente como paucibacilar. Não houve diferença significativa de padrões de marcadores entre os grupos Mitsuda positivo e negativo. No microambiente inflamatório das lesões houve expressões significativas de TLR 2/4, Fator XIIIa, CD4, CD8, IL-2r, IL-4, IL-10, iNOS e TGF-beta. A expressão importante de IL-4, IL-10 e TGF- beta nas lesões de hanseníase indeterminada significaram tendência de resposta imune para o polo Th2, um ambiente de tolerância à permanência do bacilo. A baixa expressão de IFN-y colaborou para a inexpresiva resposta Th1. Não houve diferença significativa na expressão de CD1a entre as lesões e pele normal. Fator XIIIa foi expresso em mais que 50 células/mm2 em todos os casos, com quantidades significativamente maiores que outras células dendríticas nas lesões (S100, CD68, CD123) e que a pele normal. Estes achados demonstraram a importância dos dendrócitos dérmicos Fator XIIIa positivos na apresentação de antígeno na fase inicial da hanseníase / The indeterminate form is the initial stage of leprosy, which is characterized histologically by mild inflammatory infiltrate, non granulomatous, with lymphocytes and histiocytes around vessels, nerves and adnexals. When M. leprae enter the host, antigen-presenting cells of dendritic type are the first cells to find the bacillus. Once inside dendritic cells, the bacillus elicits local production of cytokines and chemokines, which result in proliferation of T lymphocytes helper 1 or T helper 2, thereby defining a cellular or humoral immune response, respectively. The tuberculoid lesions show predominance of Th1 cytokines such as IL-2, TNF-alfa, IFN-y, IL-12 and IL-18, whereas in the lepromatous lesions predominate cytokines of Th2 pattern such as IL-4, IL-5 IL-10 and TGF-beta. In the skin, main dendritic cells are myeloid dendritic cells, Langerhans cells, and some dermal dendrocytes. They are identified respectively by immunohistochemical expression of S100, CD1a and Factor XIIIa. Langerhans cells and dermal dendrocytes Factor XIIIa positive are increased in number in tuberculoid lesions compared with lepromatous lesions. The objectives of this study were: 1) to characterize \"in situ\" inflammation in indeterminate leprosy through the quantification of immunohistochemical markers: CD57, CD4, CD8, CD1a, S100, FXIIIa, CD68, Foxp3, CD123, IL-1, IL-2r, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-18, IFN-y, TNF-alfa, TGF-beta, iNOS, granzyme B, Toll-like receptor 2/4, and BCG antigen, 2) compare the phenotypic and cytokinic profile of indeterminate leprosy lesions between positive and negative Mitsuda reaction groups in order to investigate if there are patterns that can predict which way the disease may evolve, and 3 ) review the histopathology of the indetermate form by semi-quantitative analysis of changes seen in hematoxylin / eosin. Fifteen lesions of patients with indeterminate leprosy were selected. There was used control groups of Factor XIIIa and CD1a expression in 10 cases of normal skin. Histopathology showed discrete epidermal changes, such as vacuolar changes and lymphocyte exocytosis (in 33% of cases each), keratinocyte apoptosis (26%), atrophy and acanthosis (in 06% of cases each); neural lymphocytic inflammatory infiltrate (100%), superficial perivascular (100%), deep perivascular (93%), peri-eccrine (40%), peri-pilosebaceous follicle (20%), and melanophages in 93% of cases. These findings showed that not always all environments are affected by inflammation in histopathology. In 66% of patients it was found bacterial antigen (by Fite-Faraco or immunohistochemical technique anti-BCG), so the indeterminate form should not be systematically considered as paucibacillary. There was no significant difference in phenotypic and cytokinic patterns between the positive and negative Mitsuda groups. In the microenvironment of inflammatory lesions there was significant expression of TLR 2/4, Factor XIIIa, CD4, CD8, IL-2r, IL-4, IL-10, TGF-beta and iNOS. The important expression of IL-4, IL-10 and TGF-beta in indeterminate leprosy meant tendency to Th2 immune response pole, an environment of tolerance to permanence of bacillus. Low IFN-? expression contributed to the negligible Th1 response. There was no significant difference in the expression of CD1a between the lesions and normal skin. Factor XIIIa was expressed as greater than 50 cells / mm2 in all cases, with significantly larger quantities than other dendritic cells in lesions (S100, CD68, CD123) and than normal skin. These findings demonstrate the importance of Factor XIIIa positive dermal dendrocytes in antigen presentation at the initial stage of leprosy