Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-11-03Bitstream added on 2014-06-13T20:14:35Z : No. of bitstreams: 1 polachini_gm_me_sjrp.pdf: 1649993 bytes, checksum: 7bfc3ef81e6bc4cacef121f7c1fc4715 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço é um tumor agressivo e está relacionado com a exposição ao tabaco e ao álcool. A recorrência elevada, a variação na agressividade e as taxas baixas de sobrevivência dessa doença requerem nossos esforços para compreender a sua patogênese e para desenvolver melhores estratégias terapêuticas. No presente estudo, foi investigado se a análise proteômica pode identificar diferenças na expressão protéica entre carcinomas de cabeça e pescoço de diferentes graus de estadiamento. Para alcançar este objetivo, foram otimizados protocolos para extração de proteínas e a técnica de eletroforese bidimensional (2D) foi implantada no laboratório. Os padrões de perfil protéico obtidos foram analisados em oito amostras de carcinoma oral e duas de orofaringe (oito procedentes de tumores com metástases em linfonodos regionais e dois sem metástases) e em 17 amostras aparentemente normais de margens cirúrgicas. As variações qualitativas e quantitativas detectadas nos perfis protéicos de ambos os grupos foram consistentes e oito proteínas foram identificadas após análise por espectrometria de massa por dessorção/ionização a laser assistida por matriz (MALDI-TOF-TOF). Foram elas: albumina, alfa enolase, calgranulina B, galectina 7, mioglobina, miosina (cadeia leve 1), miosina (cadeia leve 2) e tropomiosina 2 (beta). Estas proteínas têm sido detectadas com expressão alterada por diferentes autores em carcinomas da cabeça e pescoço e também em outros tumores. Após validação, as proteínas identificadas podem revelar novos biomarcadores de prognóstico e alvos terapêuticos para tumores de cabeça e pescoço. / Head and neck squamous cell carcinoma is an aggressive cancer. It is closely related to the practice of tobacco smoking and alcohol abuse. The high recurrence, heterogeneous biological aggressiveness and low survival rates of this group of cancer require our efforts to understand the pathogenesis of the disease and to develop better therapeutic strategies. In the present study, we investigated whether proteome analysis can identify differences in protein expression between low and high stage head and neck carcinomas. To reach this aim we optimized protocols for protein extraction and established two-dimensional electrophoresis in the laboratory. Proteome profiling patterns were analyzed in eight oral and two oropharyngeal tumor samples (eight from carcinomas presenting lymph node metastasis and two from carcinomas with no regional metastasis) and in 17 apparently normal surgical margins. Qualitative and quantitative variations in both groups were consistent and eight proteins were identified by matrix assisted laser desorption/ionization - time of flight - time of flight (MALDI-TOFTOF) mass spectrometry. These proteins were: albumin, alpha enolase, calgranulin B, galectin 7, myoglobin, myosin (light chain 1), myosin (light chain 2) and tropomyosin beta chain. These proteins have shown to be with altered expression by different studies in head and neck cancers and also in other tumors. After validation, the proteins identified here could be novel biomarkers for prognosis and rational targets for head and neck tumors.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-28Bitstream added on 2014-06-13T20:57:18Z : No. of bitstreams: 1 salgado_bs_me_botfm.pdf: 482776 bytes, checksum: 23c491910cd4c7da0d422455a7e9b2df (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Transição epithelial-mesenquimal (EMT) é a conversão de células epiteliais polarizadas para células migratórias com fenótipo fibroblasto-símile. A EMT está envolvida na progressão e metástase em diversos cânceres nos seres humanos, porém permanece a ser mais bem explorada na literatura veterinária. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a imunoexpressão de proteínas relacionadas à EMT nos carcinomas mamários de cadelas (CMCs). Seis proteínas foram avaliadas por meio de imunoistoquímica em 94 amostras de CMCs. Tecidos mamários não neoplásicos de 17 cadelas e amostras de 9 tumores mamários benignos de cadelas foram avaliados de modo a determinar o perfil de imunoexpressão de Snai-1. Características anatomopatológicas foram comparadas com a imunoexpressão de proteínas relacionadas à EMT nos CMCs. A perda de proteínas epiteliais e/ou a aquisição de proteínas mesenquimais foi observada principalmente em neoplasias com evidência de invasão estromal; entretanto, somente foi observada significância estatística quando comparado S100A4 e invasão vascular. Snai-1 foi observado em células luminais de neoplasias simples malignas e em células mioepiteliais de tumores benignos ou malignos de caráter complexo, sendo também significativamente relacionado à baixa de expressão de Caderina-E. Conclui-se que a perda de proteínas epiteliais e/ou a aquisição de proteínas mesenquimais está associada com EMT e pode possuir importante papel na avaliação de CMCs. O padrão único de imunoexpressão de Snai-1 pode ajudar a distinção entre um adenoma e um carcinoma não metastático e aparenta estar relacionado à conversão de células mioepiteliais a um fenótipo mesenquimal completo. A perda de Caderina-E e citoqueratina e a mudança no padrão de imunoexpressão de Snai-1, Caderina-N, S100A4 e MMP-2 indica a ocorrência de EMT em carcinomas mamários de cadelas... / Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is defined as switching of polarized epithelial cells to a migratory fibroblastoid phenotype. EMT is known to be involved in the progression and metastasis of various cancers in humans, but this specific process is still little explored in the veterinary literature. The aim of this research was to evaluate the expression of EMT-related proteins in canine mammary carcinomas (CMCs). The expression of six EMT-related proteins in CMC of 94 female dogs was evaluated by immunohistochemistry. Additionally, mammary tissues from 17 female dogs with no history of mammary tumor development and from 9 bitches with benign tumors were evaluated in order to determine Snai-1 immunoexpression patterns. Anatomopathological characteristics were compared with the expression of EMTrelated proteins in CMCs. Loss of epithelial protein and/or acquisition of the expression of mesenchymal proteins were observed, particularly in tumors with evidence of stromal invasion; however, significance was only observed between the S100A4 and vascular invasion. Snai-1 was only expressed in luminal cells of histologically malignant tumors and in myoepithelial cells of benign and malignant complex tumors and was significantly related to E-cadherin loss. In conclusion, loss of epithelial proteins and/or the acquisition of mesenchymal proteins are associated with EMT and may have an important role in the evaluation of CMC patients. The unique immunoexpression pattern of Snai-1 could help to distinguish between an adenoma and a non-metastatic carcinoma and seems to be related to conversion of myoepithelial cells to a complete mesenchymal-like phenotype. Loss of E-cadherin and cytokeratin and change of immunoexpression pattern of Snai-1, N-cadherin, S100A4 and MMP-2 indicate the occurrence of EMT in canine mammary carcinomas and should result in an en bloc resection or a close follow-up.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:34:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:00:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:00:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:38:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:05:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06004.pdf: 4196576 bytes, checksum: 707f1ed9565795d26cc6aa938c5f4995 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:33:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:06:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:33:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:06:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Os carcinomas de cabeça e pescoço (CECPs) compreendem um grupo de tumores que atingem vários sítios do trato aerodigestivo superior, incluindo cavidade oral, orofaringe, hipofaringe e laringe. Esses carcinomas são clinicamente heterogeneous e resultam de modificações cumulativas em genes que regulam proliferação, migração celular e apoptose. São estimados aproximadamente 500.000 novos casos de CECP anualmente no mundo. No Brasil, cerca de 14.000 novos casos são esperados em 2010, somente para cavidade oral. As taxas de morbidade e mortalidade e as limitações das estratégias terapêuticas enfatizam a necessidade de um melhor entendimento dos padrões moleculares envolvidos na iniciação e na progressão desses tumores, e de abordagens preventivas e terapêuticas efetivas. Infelizmente, apesar da intensa pesquisa nessa área, poucos marcadores moleculares são conhecidos que exibam sensibilidade e especificidade para diagnóstico e prognóstico de CECP. Em um estudo prévio, nós avaliamos dados de três bibliotecas SAGE de carcinoma de laringe com a finalidade de identificar eventos associados ao desenvolvimento e à agressividade de CECP. Utilizando abordagens estatísticas e de Bioinformática, nós identificamos 60 genes com expressão elevada ou reduzida em tumores metastáticos versus não-metastáticos e em ambos os grupos versus tecidos normais. O objetivo do presente estudo foi avaliar a expressão de quatro genes desta lista, os das queratinas 6A (KRT6A) e 19 (KRT19), da mesotelina (MSLN) e da calicreína 8 (KLK8), em um conjunto de 63 carcinomas primários de cabeça e pescoço e suas margens cirúrgicas e em quarto linhagens celulares (Hep-2, FaDu, SCC9 e UM-SSC-38) por RT-PCR em tempo real. Como amostra de referência para as linhagens, foram utilizados queratinócitos orais humanos normais, cultivados sobre uma camada de sustentação de fibroblastos irradiados. Todos os genes exibiram níveis de transcritos reduzidos ou ausentes nas linhagens celulares, exceto MSLN, que mostrou um padrão irregular de expressão. Em tumores primários, os genes KRT19 e MSLN apresentaram expressão diminuída em laringe, o mesmo sendo observado para o gene KLK8 em tumores de língua metastático. Além disso, foi detectada expressão elevada de MSLN e KLK8 em tumores não metastáticos de soalho de boca e expressão reduzida de KRT19 em tumores de soalho de boca e língua metastáticos. Os resultados levantam questões sobre o papel desses genes em processos biológicos associados com a tumorigênese de cabeça e pescoço e sobre sua participação no fenótipo neoplásico. / Head and neck squamous cell carcinomas (HNSCCs) encompass a group of tumors that affect a variety of sites in the upper aero-digestive tract, including oral cavity, oropharynx, hypopharynx and larynx. These carcinomas are clinically heterogeneous and result from cumulative changes in genes that regulate cell proliferation, migration and death. It is estimated that approximately 500,000 new cases of HNSCC are diagnosed worldwide each year. In Brazil, about 14,000 new cases are expected in the year 2010, only in oral cavity. The morbidity and mortality rates and the limitations of therapeutic strategies emphasize the need for a better understanding of the molecular pathways involved in the initiation and progression of these tumors and for effective preventive and therapeutic approaches. Unfortunately, despite intense research, few molecular markers are known to exhibit sensitivity and specificity for the diagnosis or prognosis of HNSCC. In a previous study, we evaluated data from three SAGE libraries of larynx carcinoma in order to identify events associated with the development and aggressiveness of HNSCCs. Using statistical and bioinformatic tools, we identified sixty top-up and 60 top-downregulated genes in metastatic versus non-metastatic tumors and in both these tumors versus normal tissues. The objective of the present study was to evaluate the expression of four genes from this list, keratin 6A (KRT6A), keratin 19 (KRT19), mesothelin (MSLN) and kallikrein 8 (KLK8), in a set of 63 primary carcinomas of head and neck and their surgical margins and in four cell lines (Hep-2, FaDu, SCC9 and UM-SSC-38) by real time RT-PCR. As a reference sample for cell lines, we used normal human oral keratinocytes grown on irradiated fibroblast feeder layer. All genes exhibited no or decreased levels of transcripts in the cell lines, except MSLN, which displayed an irregular pattern of expression. In primary tumors, KRT19 and MSLN genes were downregulated in larynx, and KLK8 in metastatic tongue tumors. In addition, MSLN and KLK8 were upregulated in non-metastatic floor of the mouth tumors and KRT19 was down regulated in metastatic floor of the mouth and tongue tumors. The results open questions about the role of these genes on biological processes related to head and neck tumorigenesis and on neoplastic phenotype.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:27:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:57:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A proteína ribossomal L10 (RP L10) é uma forte candidata a ser incluída na classe de proteínas supressoras de tumor. Também denominada QM, a proteína em questão é conhecida por participar da ligação das subunidades ribossomais 60S e 40S e da tradução de mRNAs. Possui massa molecular entre 24 a 26 kDa e ponto isoelétrico (pI) 10,5. A seqüência da proteína QM é bastante conservada em mamíferos, plantas, invertebrados, insetos e leveduras indicando que esta possui funções críticas na célula. Com função supressora de tumor, a proteína RP L10 foi estudada em linhagens de tumor de Wilm (WT-1) e em células tumorais de estômago, nas quais se observou uma diminuição na quantidade de seu mRNA. Mais recentemente a RP L10 foi encontrada em baixas quantidades nos estágios iniciais de adenoma de próstata e com uma mutação em câncer de ovário, indicando uma participação no desenvolvimento destas doenças. Como proteína, já foi descrito que esta interage com as proteínas c-Jun e c-Yes, inibindo a ação ativadora de fatores de crescimento e divisão celular. Este trabalho tem um papel importante no estabelecimento da expressão desta proteína solúvel, para estudos posteriores que tenham como objetivo avaliar a ação de regiões específicas que atuam na ligação das subunidades ribossomais 60S e 40S e tradução, bem como nas regiões que se ligam a proto-oncogenes. O cDNA para proteína QM foi amplificado por PCR e clonado no vetor de expressão periplásmica p3SN8. A proteína QM foi expressa em E.coli BL21 (DE3) no citoplasma e periplasma bacteriano e na melhor condição, a expressão de QM de bactérias transformadas pelo plasmídeo recombinante p1813_QM em 25°C ou 30°C, a proteína foi obtida solúvel e com quantidad es muito pequenas de contaminantes. Os ensaios de estrutura secundária demonstraram que a proteína QM tem predominância de a-hélice, mas quando do seu desenovelmento, essa condição muda e a proteína passa a ter característica de folhas β. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:34:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:00:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A radioterapia interna seletiva é uma alternativa para o tratamento do carcinoma hepatocelular. Nesta terapia, microesferas de vidro contendo radionuclídeos são introduzidas no fígado por meio de um cateter acoplado à artéria hepática dos pacientes e são retidas em regiões microvasculares que alimentam o tecido lesado. Estas micropartículas aniquilam as células cancerosas por meio da radiação β-, e, quando simultaneamente emitem raios γ, podem também ser utilizadas para imageamento do tumor. As partículas vítreas devem possuir o formato esférico para não provocar hemorragias desnecessárias e também diâmetro adequado para otimizar o bloqueio efetivo da alimentação do tumor e evitar a migração para outros órgãos que poderia causar doses em tecidos sadios. Além disso, devem ter durabilidade química adequada e não serem citotóxicas. A distribuição do tamanho de microesferas depende de muitos parâmetros como a razão de aspecto, formação de aglomerados, e temperatura de processamento. No presente trabalho é apresentado um estudo do processo de esferolização de partículas vítreas caracterizadas por difração de raios X, espectrometria de fluorescência de raios X por energia dispersiva, área superficial específica, teste de citotoxicidade e calorimetria exploratória diferencial. Foram determinadas a taxa de dissolução do vidro em água destilada a 90oC (DR~10-8g.cm-2.min-1), densidade (2,79g.cm-3), viscosidade e granulometria. A morfologia das microesferas foi avaliada por microscopia eletrônica de varredura antes e após os testes de dissolução em SBF e irradiação por feixe de nêutrons. Propõem-se o peneiramento para seleção das microesferas apropriadas para o tratamento pretendido e testes in vivo visando a sua aplicação em radioterapia interna seletiva. / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP