Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-23T15:39:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1177179 bytes, checksum: dec9ea9972e24062fd20a5915e37c787 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-23T15:39:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1177179 bytes, checksum: dec9ea9972e24062fd20a5915e37c787 (MD5) Previous issue date: 2015-07-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A estocagem de leite cru sob temperatura de refrigeração não impede o crescimento de bactérias psicrotróficas produtoras de proteases termorresistentes que comprometem a qualidade e reduzem a vida de prateleira de produtos lácteos. Para minimizar os problemas tecnológicos resultantes da atividade proteolítica, é desejável que proteases sejam detectadas e quantificadas em leite cru por um método rápido. No entanto, não existe um método eficiente para este fim. Este trabalho teve como objetivos identificar as espécies psicrotróficas com potencial de deterioração predominantes em leite cru brasileiro; identificar e caracterizar as proteases resistentes ao calor produzidas por esta microbiota e desenvolver um método rápido para detectar estas proteases em amostras de leite. As condições de armazenamento sob refrigeração foram simuladas e as bactérias psicrotróficas proteolíticas foram isoladas. As bactérias produtoras de proteases termorresistentes foram agrupadas após análise por Rep-PCR. Os testes bioquímicos e o sequenciamento dos genes rDNA 16S e rpoB foram utilizados para identificar representantes de cada grupo. Uma protease termorresistente produzida por Serratia liquefaciens foi caracterizada e o gene que codifica esta enzima foi identificado após análise dos peptídeos trípticos da protease por espectrometria de massa. Placas de microtitulação revestidas com caseína marcada com biotina foram utilizadas para quantificar a atividade proteolítica de amostras de leite e de proteases diluídas em solução tampão. Os isolados bacterianos altamente proteolíticos foram separados em oito grupos diferentes e quatro padrões únicos. Os isolados com potencial proteolítico são correspondentes à espécie Serratia liquefaciens e ao gênero Pseudomonas. Isolados de S. liquefaciens podem produzir uma metaloprotease termorresistente ao tratamento de 95 °C por 8,45 min, identificada como Ser2, com massa molar de, aproximadamente, 52 kDa e semelhante à protease AprX de Pseudomonas spp. Embora sequências de nucleotídeos do gene ser2 sejam conservadas entre os isolados de S. liquefaciens, o potencial de deterioração das estirpes é heterogêneo indicando diferenças nos níveis de expressão gênica, enzima viii ou modificações pós-transcricionais. O imunoensaio desenvolvido neste estudo foi eficiente para a quantificação da atividade de tripsina, papaína, pepsina, termolisina e protease de pâncreas bovino. No entanto, novas pesquisas devem ser realizadas para minimizar a influência dos componentes da amostra de leite nesta técnica para permitir a detecção acurada de proteases. Este trabalho destaca o elevado potencial de deterioração da microbiota encontrada em amostras de leite cru, além do desenvolvimento de um ensaio promissor, útil para a indústria de lacticínios, para detecção e quantificação de atividade proteolítica resultante das práticas agrícolas inadequadas nas propriedades produtoras de leite. / The storage of raw milk at cold temperatures does not prevent growth of psychrotrophic bacteria, which can produce heat-resistant proteases that compromise the quality and reduce the shelf life of dairy products. To minimize the technological problems resulting from proteolytic activity, these enzymes should be detected and quantified in raw milk before processing by a rapid method. However, there is no efficient method for this purpose. This work aimed to identify the predominant psychrotrophic species with spoilage potential in Brazilian raw milk, to identify and characterize the heat-resistant proteases produced by this microbiota and to developed a rapid method to detect these proteases in raw milk samples. The cold storage conditions were simulated and the psychrotrophic proteolytic bacteria isolated. The heat-resistant protease-producing bacteria were typing by Rep-PCR and clustered. Biochemical tests, 16S rDNA and rpoB gene sequencing were used for identifying one representative isolate from each cluster. The heat-resistant protease produced by Serratia liquefaciens was characterized. The encoding gene was identified after mass spectrometry analysis of tryptic peptides from the heat-resistant protease. The biotinylated casein was coated on microtiter plates and used as substrate to quantify proteolytic activity in solution and milk samples. Highly proteolytic strains were identified and characterized. The isolates were separated into eight different clusters and four solitary fingerprints. The most proteolytic isolates belonged to Serratia liquefaciens and Pseudomonas species. The S. liquefaciens isolates may produce Ser2, which is a a metalloprotease resistant to the heat treatment of 95 °C for 8.45 min. This metalloprotease showed a molecular weight of approximately, 52 kDa and a heat- resistance similar to AprX from Pseudomonas spp. Although nucleotide sequences of ser2 gene were conserved among S. liquefaciens isolates, the spoilage potential among them was heterogeneous indicating differences in enzyme expression levels or post-transcriptional modifications. The developed immunoassay was efficient for quantification of trypsin, papain, pepsin, thermolysin and protease from bovine x pancreas activity. However, further research should be performed to minimize the influence of milk components on the developed assay for detecting proteases in milk samples. This work highlighted the poor conditions of hygiene in milk farms and the high spoilage potential of the microbiota found in raw milk samples besides the development of a promising assay for detection and quantification of proteolytic activity useful for dairy industry.

Empregando di-dodecil-dissulfeto, sintetizado no nosso laboratório, ácidos naftênicos comerciais extraídos de petróleo peruanos (Liovac 255, IAT=266) e óleo neutro pesado, produzido pela PETROBRÁS, foi preparado um gasóleo "sintético" para avaliação de sua corrosividade frente ao aço-liga 5%Cr e 0,5%Mo. Corrosividade sulfídrica "pura", corrosividade naftênica "pura" e corrosividade "mista" foram avaliadas frente a corpos-de-prova em forma de disco, girando durante 48 horas a 2000 rpm no óleo aquecido. Vinte e três ensaios de corrosão foram realizados obedecendo procedimento estatístico, conhecido por projeto fatorial, cobrindo os intervalos: de 0 a 2% de enxofre, de 0 a 10 de índice de acidez total e de 220C a 275C de temperatura. Cada ensaio foi realizado com quatro discos montados num carretel: um disco imerso no vapor do óleo, dois imersos no óleo líquido e o quarto situado na interface líquido/vapor. As taxas de corrosão e os índices de corrosividade naftênica foram calculados por medidas de massa dos corpos-de-prova antes e após os ensaios, incluindo eventuais produtos de corrosão aderentes (sulfeto de ferro) e após a remoção destes por decapagem. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre as taxas de corrosão dos quatro discos de cada ensaio. Assim, a média das quatro medidas representa o resultado de cada ensaio. A corrosividade sulfídrica pura medida para o óleo aditivado com di-dodecil-dissulfeto mostrou-se bem mais elevada do que a que é normalmente apresentada pelo petróleo de igual teor de enxofre, na mesma temperatura. A corrosividade naftênica pura medida para o óleo aditivado pelos ácidos naftênicos é consistente com a descrita na literatura para outros óleos para outros intervalos de temperatura e de IAT (Índice de Acidez Total) e para outras condições dinâmicas dos corpos-de-prova. Óleos que contêm ácidos naftênicos e di-dodecil-dissulfeto não apresentam corrosividade superior a cada um dos agentes corrosivos isoladamente. Pelo contrário, a presença de um agente atenua a ação do outro. Óleos que contêm di-dodecil-dissulfeto em quantidade suficiente para conter 1 a 2%S tem sua corrosividade sulfídrica reduzida pelo acréscimo de ácidos naftênicos até IAT=10. Este comportamento não é relatado na literatura especializada. Óleos que contêm ácidos naftênicos, quando aditivados com di-dodecil-dissulfeto, têm sua corrosividade reduzida até um valor mínimo que depende do teor de ácidos naftênicos e da temperatura. Este comportamento não é relatado na literatura especializada embora tenha sido aventada, por mais de um autor e sem provas experimentais, a hipótese da ação inibidora de compostos sulfurados sobre a corrosividade naftênica de petróleos. Foi deduzida uma equação empírica que relaciona a taxa de corrosão com o teor de enxofre, o IAT e a temperatura para os componentes e os valores de composição e de temperatura definidos nesta tese. É discutida a validade dessa equação para petróleos naturais.

Made available in DSpace on 2018-08-01T23:19:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9498_Resumo Dissertação Final - Letícia Ricieri Bastos PDF.pdf: 97079 bytes, checksum: be4f629a910ed776dd9aa6ffbadced09 (MD5) Previous issue date: 2016-11-24 / A pecuária de leite é uma atividade importante no Brasil e no Espírito Santo. As pequenas propriedades fornecem 80% da produção estadual. Haja vista a importância do agronegócio do leite e os problemas relacionados à sua qualidade no país, o Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (Mapa) aprovou a Instrução Normativa (IN) n⁰ 51 em 2002. Mesmo com adoção dessas medidas, o leite ordenhado em condições inadequadas de higiene pode apresentar alta contaminação por bactérias mesófilas aeróbias e psicrotróficas. Em dezembro de 2011 o Mapa publicou a IN n⁰ 62 que alterou alguns artigos da IN n⁰ 51, estabelecendo novos prazos para a redução de CBT (contagem bacteriana total) e CCS (contagem de células somáticas). O trabalho teve como objetivo avaliar a qualidade do leite produzido em unidades de produção familiares, no sul do Espírito Santo, em relação às exigências da IN 62/2011 do Mapa e outros parâmetros de qualidade. Um total de 29 tanques comunitários distribuídos em 13 munícipios do sul do estado foram avaliados. Questionários foram aplicados aos responsáveis pelos tanques e a 122 produtores que os utilizam. Foram realizadas três coletas de leite cru refrigerado nos tanques, totalizando 87 amostras, para realização das análises: CBT, CTP (contagem total de psicrotróficos), alizarol 72%, acidez titulável, densidade, gordura, EST (extrato seco total), ESD (extrato seco desengordurado), CCS e pesquisa de resíduos de antibióticos. Coletou-se 6 amostras de leite pasteurizado no mercado para verificar atendimento da RDC n⁰ 12/2001 da Anvisa (Agência Nacional de Vigilância Sanitária). Após avaliação das respostas dadas pelos responsáveis pelos tanques, constatou-se que: 45% não haviam sido treinados; 7% dos tanques não mantinham resfriamento ligado 24 horas; em 25% não era realizada análise antes de adicionar o leite ao tanque; 55% não realizavam sanitização do tanque; em 10,3% a água era proveniente de rio/córrego. Falhas nos procedimentos realizados pelos produtores também foram identificadas: 57% não faziam a limpeza do local da ordenha; o teste da caneca era realizado diariamente por apenas 27%; a lavagem dos tetos não era feita por 57%; pré e pós-dipping era realizado por somente 16%; 44% não tratavam a mastite; a água utilizada em 9% das propriedades era de rio/córrego. Dos tanques analisados, 41% apresentaram valores para as três coletas fora do padrão para CBT. Para CTP, nenhum dos tanques apresentou as três contagens fora do valor máximo considerado (5,7 log UFC/mL). Na acidez titulável, todas as médias dos tanques apresentaram resultado dentro do padrão. Para densidade relativa, 3% dos tanques apresentaram valores fora do padrão. Todos os tanques e amostras atenderam a legislação em relação ao teor de gordura. Para ESD, 90% dos tanques apresentaram-se fora do padrão. Em relação a CCS, 17% dos tanques apresentaram valores fora do padrão para as três contagens. Nenhuma amostra de leite cru apresentou presença de resíduos de antibióticos. Todas as amostras de leite pasteurizado estavam dentro do padrão. A fim de que o leite atinja os padrões aceitáveis pela legislação, recomenda-se a implementação de programas de treinamento para melhor instrução dos envolvidos na cadeia produtiva.

Made available in DSpace on 2014-06-12T17:38:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4087_1.pdf: 3717955 bytes, checksum: c558abb160a867b5f16716ff3c05269c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / O petróleo bruto é uma substância altamente corrosiva, por isso, provoca rápida degradação das superfícies metálicas com as quais tem contato direto, como no caso de tanques de armazenamento e transporte desse material. Dessa forma, uma alternativa para solucionar esse problema é utilizar um tipo de revestimentos inerte a essa corrosão. Materiais cerâmicos geralmente apresentam essa característica e podem ser uma opção de material para esse revestimento. Esse estudo é de suma importância, pois com a abertura da refinaria de petróleo no estado de Pernambuco, a necessidade de armazenar e transportar petróleo cru irá crescer e com isso serão necessárias formas de transporte e armazenamento que sejam resistentes a corrosão provocada por esse petróleo. Nesse sentido é importante investigar novos materiais cerâmicos de alto desempenho que sejam inertes a corrosão e que possam ser utilizados como revestimentos para tanques. Neste contexto, o trabalho destina-se ao processamento e caracterização de compósitos cerâmicos, através da produção de peças com matriz metálica, e posterior análise de viabilidade na aplicação, por processos adequados, em tanques e tubulações em escala laboratorial, revestidas com as cerâmicas Al2O3-ZrO2 variando entre 5 a 20% (em peso) de ZrO2, com aditivos de óxido de terra rara CeO2 e a avaliação do desempenho em condições reais de petróleo cru oriundo de diferentes poços de petróleo do nordeste. O objetivo deste trabalho é estudar materiais intrinsecamente suscetíveis à fratura devido a sua pouca deformação plástica e destina-se ao desenvolvimento e caracterização de compósitos cerâmicos alumina-zircônia-céria compatíveis ao problema em questão. As cerâmicas foram produzidas por reação em estado sólido e sinterizadas de maneira direta (1200ºC à 1400ºC) num intervalo de até 24hrs e produzidas por processo; de moagem, termo-mecânico, e tratamentos térmicos em proporções adequadas. A caracterização estrutural e microestrutural foi realizada por método de difração de raio-X (DRX) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). As propriedades mecânicas foram avaliadas por ensaios de densidade e dureza Vickers (HV). Na fase final foi avaliado o desempenho do revestimento em petróleo cru. Os resultados das propriedades mecânicas encontradas em 0,20 de ZrO2 se mostram superiores aos outros analisados, mostrando-se mais adequados a aplicação em questão

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine vétérinaire : Toulouse 3 : 2007. / Titre provenant de l'écran titre. Bibliogr. p. 85-90.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:36:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6822_RESUMO FRANCISCA.pdf: 13192 bytes, checksum: 8b66f796d2b432970c19871b9a83fbd0 (MD5) Previous issue date: 2013-06-26 / Na produção de leite exerce importância socioeconômica para produtores familiares do Estado do Espírito Santo e do município de Alegre-ES. O objetivo deste trabalho foi avaliar as condições de produção e a qualidade higiênico-sanitária do leite cru obtido de tanques de refrigeração localizado em comunidades rurais no município de Alegre-ES e investigar a presença de resíduos de antibiótico no leite. Aplicou-se um questionário previamente estruturado com base nas exigências da legislação do Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (BRASIL, 2008) em 34 propriedades rurais entre fevereiro de 2012 a junho de 2012. Foram feitas coletas de dados sobre a limpeza e a estrutura física do estábulo, a origem e a existência de tratamento da água, tipo de ordenha, conduta e higiene dos manipuladores, controle de saúde dos manipuladores, procedimentos de higienização e sanitização dos tetos, tipo de material utilizado para secagem dos tetos e a realização do controle sanitário com relação à mastite, além do tratamento dado, e transporte do leite. Em resposta ao questionário aplicado aos produtores, observou-se que o baixo nível de escolaridade prepondera entre os produtores. A localização dos currais era boa: eram arejados, secos e limpos, todos os currais são cobertos e a minoria possuía piso cimentado e sala de ordenha. A quase totalidade das propriedades produzia menos de 100 litros.dia-1 e usavam ordenha manual. Todos faziam controle de endoparasitos, ectoparasitos e vacinavam contra a febre aftosa, 94,1% contra a raiva e 91,2% contra brucelose. Metade fazia a higienização dos tetos e úbere antes da ordenha, poucos realizavam o pré-dipping e o pós-dipping. Todos faziam tratamento para mastite, mas apenas 1/5 faziam o teste da caneca para mastite. E não faziam nenhum tipo de tratamento da água usada nos currais. Todo o leite produzido é transportado através de caminhão isotérmico e a grande maioria dele tem as cooperativas como destino. Todos os equipamentos usados na ordenha eram higienizados, mas a minoria utilizava produtos sanitizantes. Já poucos ordenhadores adotavam o hábito de banhar-se antes de realizar a ordenha. Poucos tiveram treinamento ou palestras sobre as normas instituídas pela IN 62. No Diagnóstico da coleta de leite cru refrigerado junto aos trabalhadores e nos pontos de coleta, observou-se que nenhuma instalação tinha proteção contra entrada de insetos e roedores e contaminantes ambientais; não possuíam tanque para lavagem de latões e de utensílios de coleta; eram mal dimensionadas e não permitiam a aplicação de medidas sanitárias adequadas; as condições higiênicas eram extremamente deficitárias e prejudicavam a manutenção da qualidade do leite; não possuíam um procedimento adequado de higienização de equipamentos. Os trabalhadores dos tanques de expansão não se banhavam antes de iniciar as atividades e nem usavam roupas específicas; não realizavam exames de saúde pessoal com periodicidade; e não adotavam nenhum sistema de tratamento da água usada nos tanques. Avaliou-se também a qualidade higiênico-sanitária e físico-química de amostras xiii de leite cru pertencentes a quatro tanques de refrigeração denominados T1, T2, T3 e T4. Os resultados encontrados nas análises físico-químicas apresentaram-se em sua maioria em conformidade com as normas estabelecidas pela IN 62, com exceção do valor do pH que apresentou alteração, o que pode ser indicativo de adição de álcalis ou possível presença de mastite no rebanho. Os valores médios encontrados nas análises microbiológicas foram: Contagem Bacteriana Total CBT 1,4x106 UFC.mL-1, bactérias psicrotróficas 6,1x105 UFC.mL-1, coliformes totais 8,5x104 UFC.mL-1, Staphylococcus spp. 2,9x105 UFC.mL-1, e Escherichia coli 4,4x104 UFC.mL-1. Os resultados das análises do leite apresentaram-se fora dos padrões microbiológicos exigidos pela legislação. Os valores encontrados para alguns tanques nas análises de CBT 6,0x105 UFC.mL-1, encontraram-se fora dos padrões estabelecidos pela IN 62, em 50% das amostras analisadas. Não havia resíduo de antibiótico no leite analisado. Existe a necessidade de adequações e melhorias nas características de produção de leite e nos tanques de refrigeração, bem como a implementação das Boas Práticas Pecuárias de Produção nas propriedades rurais de forma a garantir a segurança dos alimentos e a sustentabilidade da atividade leiteira da região.

Le microbiote du lait cru est un déterminant majeur de sa qualité et de celle des produits dérivés. Dans les fermes laitières, l'hygiène et la santé du pis, les fèces, la litière et les fourrages conservés sont les principales sources de microorganismes qui contaminent l'environnement de l'étable et qui peuvent se retrouver dans le lait. Les ensilages de légumineuses et de graminées produits par fermentation lactique, outre les bactéries lactiques, sont riches en espèces microbiennes dont la prévalence, la diversité et l'abondance dépendent de facteurs incontrôlables tels que les paramètres environnementaux, et de facteurs contrôlables tels que les pratiques de gestion adoptées par les fermiers. Le choix du type de fourrages parmi lesquels le foin, les ensilages d'herbe/légume ou de maïs, l'utilisation ou non d'inoculants, le type d'inoculant commercial utilisé et les types de structures d'entreposage sont autant d'éléments qui influencent la composition microbienne des ensilages et dont la gestion a un impact peu documenté sur la qualité microbiologique du lait cru. Les travaux de cette thèse portent sur l'écologie microbienne des fourrages préservés et l'évaluation de leur contribution à la contamination du lait cru de vache. Pour ce faire, des méthodes de préservation d'échantillons de lait cru à base d'azidiol ou de bronopol ont été évaluées pour leur capacité à maintenir intactes la viabilité et l'abondance des communautés bactériennes présentes. Des échantillons de foin, d'ensilages inoculés et non inoculés, et de lait cru ont été prélevés deux fois, à l'automne 2015 et au printemps 2016 dans 24 fermes laitières au Québec. Les analyses métataxonomiques et des charges microbiennes déterminées par PCR quantitative après le traitement ou non des cellules microbiennes au propidium monoazide ont montré que l'azidiol combiné au diméthyle sulfoxide et une température de -20 °C permet de stabiliser le microbiote du lait cru pendant au moins 30 jours, et que l'azidiol seul maintient l'intégrité des communautés bactériennes pendant 10 jours à 4 °C. Ces études ont également démontré que le séquençage à haut-débit des régions V3-V4 et V6-V8 du gène codant pour l'ARN ribosomique 16S génère des données dont l'exploitation peut conduire à des conclusions plus ou moins divergentes selon les hypothèses de départ. L'importance d'un choix judicieux de la région hyper variable à séquencer est soulignée. Nos résultats ont révélé des différences entre le microbiote du foin et celui des ensilages, ainsi qu'entre les types d'ensilage inoculés et non inoculés. De plus, les rations alimentaires à base de foin, d'ensilage d'herbe/légume non inoculé, d'un mélange d'ensilage d'herbe/légume non inoculé et d'ensilage de maïs inoculé, ou d'un mélange d'ensilage d'herbe/légume et de maïs inoculés et non inoculés partagent jusqu'à 31 % de leur microbiote identifié au niveau de variants de séquences avec le lait cru produit dans les fermes correspondantes. Les taxons plausiblement transférés des fourrages au lait appartiennent surtout aux Proteobacteria, Firmicutes et Actinobacteria. Les résultats obtenus suggèrent que la contamination bactérienne du lait cru par les fourrages se fait de manière aléatoire. Il ressort de nos études que ces taxons supposément transférés des ensilages sont en grande partie responsables des différences observées entre les communautés bactériennes du lait des cinq types de rations. Bien que les structures phylogénétiques des échantillons de lait produits par les vaches alimentées avec les rations d'ensilages non inoculés ou inoculés se soient montrées significativement différentes, il est difficile de conclure sur l'impact réel des inoculants sur la qualité microbiologique du lait cru. L'analyse des réseaux de co-occurrence et de co-exclusion au sein du microbiote a révélé d'une part, dans les ensilages les interactions entre les bactéries lactiques et non-lactiques qui pourraient considérablement influencer le processus de fermentation et ultimement la qualité du produit final, et d'autre part, dans le lait des niches microbiennes associées aux sites de contamination du lait dans l'environnement à la ferme. Par l'implémentation des méthodes d'analyses multivariées et multi-table intégrant le microbiote et les paramètres physico-chimiques des matrices alimentaires échantillonnées, cette thèse propose une approche d'exploitation des données de métataxonomique permettant d'approfondir nos connaissances de la microbiologie du lait cru et des produits laitiers. / The microbiota of raw bovine milk is tightly associated with its quality and that of derivatives. On dairy farms, udder health, faeces, beddings, and fermented forage are among the main sources of milk microbial contaminants. Grass/legume and corn silage obtained by lactic fermentation harbour complex microbial community of which the diversity, the prevalence, and abundance are driven by uncontrollable factors such as environmental conditions, or controllable factors inherent to farm management practices. Forage types including hay, grass/legume or corn silage, the use of microbial additives and their commercial types, and the types of storage structures may influence community assembly of mature silage. However, the impact of forage management practices on the raw milk microbiota is not fully understood. This thesis aimed at investigating the microbial ecology of preserved forage and assessing their contribution to the raw milk contamination. To do so, the ability of milk sample preservation methods based on azidiol or bronopol to maintain viable and stable microbiota over time was assessed. Forage and raw milk samples were collected twice from 24 dairy farms in Quebec, in the fall 2015 and the spring 2016. Analyses of metataxonomic and qPCR-based bacterial load data derived from cells treated or not with propidium monoazide to account for viability showed that azidiol combined with dimethyl sulfoxide prevented the microbiota instability of raw milk stored at -20 °C for at least 30 days. Azidiol used alone was additionally found to keep the microbiota in milk samples intact for up to 10 days when stored at 4 °C. It was demonstrated that for hypothesis-driven microbiota studies, divergent conclusions can be drawn from hight-throughput sequencing of the V3-V4 and V6-V8 hypervariable regions of the 16S rRNA gene pool. The importance of the hypervariable region to target is therefore highlighted. Our study revealed differences between hay microbiota and that of silage, whether inoculated or not. Moreover, forage ration combinations shared up to 31 % of their bacterial phylotypes with raw milk samples produced in the corresponding farms. Taxa that were probably transferred from forage ration combinations to raw milk encompassed the phyla Proteobacteria, Firmicutes, and Actinobacteria. Our results suggested that raw milk contamination on the farm occurs erratically, and that transferred taxa were mainly involved in differential abundance outcomes. Although the microbiota of milk samples associated with the five forage ration combinations exhibited differences in phylogenetic composition, concluding on the effects of microbial additives used for ensiling is a challenge. In this thesis, the analysis of bacteria interaction networks showed that co-occurrence or co-exclusion of lactic and non-lactic bacteria might considerably affect the microbiological quality of mature silage at feed-out. On the other hand, the same analysis performed with milk samples revealed microbial niches associated with milk contamination points on the farm environment. Through the implementation of multivariate multi-table analysis methods that integrated data from the microbiota and from the physicochemical characteristics of the sampled matrices, this thesis suggests methodological approaches that exploit metataxonomic data to deepen our knowledge of the raw milk microbiota and dairy products.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-07-07T16:13:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 828438 bytes, checksum: b6bd4b6a2ecc5e2ab936b04cd38b353b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-07T16:13:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 828438 bytes, checksum: b6bd4b6a2ecc5e2ab936b04cd38b353b (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A ATP-bioluminescência é uma técnica com grande potencial para avaliação rápida da qualidade de alimentos. Entretanto, não se sabe ao certo a relação entre o ATP e os constituintes dos alimentos. O presente trabalho teve como objetivo determinar o conteúdo de ATP presente no leite cru por meio da bioluminescência e avaliar a sua correlação com a qualidade do leite. Foram realizadas a Contagem de Células Somáticas (CCS), a Contagem Bacteriana Total (CBT), Contagem celular diferencial (CCD) e composição centesimal de 15 amostras compostas de leite cru em equipamentos eletrônicos baseados na citometria de fluxo. O conteúdo de ATP do leite foi avaliado utilizando kits para a avaliação da quantidade de ATP total para amostras líquidas e a leitura da bioluminescência foi realizada em luminômetro comercial, com os resultados expressos em Unidades Relativas de Luz (URL). Para a avaliação do procedimento de higienização dos equipamentos e mão de manipuladores, os kits empregados foram para determinação de ATP total em superfícies. Os resultados demonstraram que 9 amostras de leite apresentaram baixa CCS ( log de cel·mL -1 ≤ 5,0), 2 amostras apresentaram média CCS (5,0<log de cel·mL -1 ≤ 5,7) e 4 amostras apresentaram alta CCS (log de cel·mL -1 >5,7), indicando aproximadamente uma prevalência de 27% de vacas com mastite no rebanho. Entretanto, 93% das amostras de leite apresentaram valores de CBT abaixo do limite (log de UFC·mL -1 ≤ 5,5), atualmente estabelecido pela Instrução Normativa no 62, evidenciando qualidade microbiológica satisfatória das amostras em estudo. Em relação ao perfil celular das amostras, observou- se que a CCD boa correlação (r=0,83) com a contagem de células somáticas e que os animais com processe infeccioso na glândula mamária foram aquele que além de possuírem alta CCS, apresentaram porcentagem de macrófagos acima de 26%. Os resultados da bioluminescência, demonstraram que o conteúdo médio de ATP, em log de URL·mL -1 , nas amostras de leite foi 4,22, variando de 3,58 a 4,87. Em relação aos efeitos da bioluminescência sobre os constituintes do leite, observou-se que um aumento no valor de ATP acarreta em um acréscimo da porcentagem de CCS (r= 0,720). O mesmo pode ser visualizado para a porcentagem de CBT (r= 0,614). Entretanto, para a porcentagem de lactose, foi encontrada correlação negativa (r= -0,570). Da mesma maneira, com base em regressão não linear, observou-se correlação positiva entre o aumento de ATP (log de URL·mL -1 ) e o incremento nos valores de CBT (R 2 =0,61) e CCS (R 2 =0,81). Assim, constatou-se resposta para qualidade microbiológica e celular do leite em função da ATP-bioluminescência, quando o conteúdo de ATP (log de URL·mL -1 ) foi acima de 4,21 e 4,44 para CCS e CBT, respectivamente. No que se refere a avalição da higienização dos equipamentos e mão de manipuladores, constatou-se uma redução significativa (P<0,05) nos valores de URL após a limpeza e sanitização dos mesmos. Os resultados podem no futuro contribuir para o desenvolvimento e aplicação de ATP-bioluminescência na avaliação da qualidade de leite cru. / ATP-bioluminescence is a technique with great potential for rapid assessment of the quality of food. However, no one knows for sure the relationship between the ATP and the constituents of food. This study aimed to determine the ATP content present in raw milk by means of bioluminescence and evaluate their correlation with the quality of milk. We performed a Somatic Cell Count (SCC), the Total Bacterial Count (TBC), Count differential cell (CCD) and chemical composition of 15 composite samples of raw milk in electronic equipment based on flow cytometry. The ATP content of the milk was assessed using kits for evaluating the total amount of ATP for liquid samples and reading the bioluminescence was performed on a commercial luminometer, with the results expressed in Relative Light Units (URL). For the evaluation of the cleaning procedure of the equipment and manipulators hand, the kits were used to determine ATP full surfaces. Results showed that 9 samples showed low SCC milk (cel log · mL -1 ≤ 5.0), 2 samples showed an average CCS (5.0 <cel log · mL -1 ≤ 5.7) and 4 samples had high SCC (cel log · mL -1 > 5.7), approximately indicating a prevalence of 27% of cows with mastitis in the herd.However, 93% of milk samples showed CBT values below the limit (CFU log · mL -1 ≤ 5.5), currently established by Instruction No. 62, indicating a satisfactory microbiological quality of samples analyzed. Regarding the cellular profile of the samples it was observed that the CCD good correlation (r = 0.83) with somatic cell count and the animals with infectious process in the mammary gland were one that besides having high SCC, presented percentage macrophage above 26%. The results of bioluminescence show that the average ATP content, URL log · ml -1 in the milk samples was 4.22, ranging from 3.58 to 4.87. In relation to the effects of bioluminescence on the milk constituent, it was observed that an increase in the amount of ATP causes an increase in the percentage of CCS (r = 0.720). The same can be displayed for the percentage of CBT (r = 0.614). However, for the percentage of lactose, found a negative correlation (r= -0.570). Similarly, based on non-linear regression, there was a positive correlation between increased ATP (URL log · ml -1) and the increase in CBT (r 2 = 0.61) and CCS (2 R = 0.81). Thus, it was found answer to microbiological quality of the milk and cell function in the ATP-bioluminescence, when the content of ATP (URL log · ml -1) was above 4.21 and 4.44 for SCC and TBC, respectively. As regards This evaluation of the cleanliness of equipment and manipulators hand, we found a significant reduction (P <0.05) values for the URL after cleaning and sanitizing the same. The results may eventually contribute to the development and application of ATP-bioluminescence in assessing the quality of raw milk.

Este trabalho tem por finalidade reunir informações para que em um local de produção de leite com finalidade econômica se possa ter um produto com o minimo possível de bactérias, não patogênicas para o consumo humano. Descrevemos o desenvolvimento da glândula mamária, porque, é aí que começa o problema do leite: podemos chamá-la de \"Fábrica de leite\", com todos os seus incovenientes. Tomamos a precaução de informar sobre os cuidados higiênicos e mecânicos quando houver a manipulação do úbere para a extração do leite. Ressaltamos as possíveis fontes de contaminação do lei te iniciando com o animal passando pelo meio ambiente, pelo ordenhador, transporte e distribuição. Relacionamos os locais utilizados para o manejo dos animais em produção e as condições higiênicas necessárias para tal. Sobre microrganismos, lembramos os que se desenvolvem no leite e os transformam causando alterações prejudiciais ao produto e os outros que prejudicam os consumidores causando-lhe doenças, algumas muito graves, outras menos graves; mas todas quebrando a higidez do consumidor e por consequência avolumando o rol das doenças notificáveis. Analisamos os componentes do leite, frente a legislação vigente, apresentando uma tabela com a composição do leite das diversas espécies animais. Repassamos as análises químicas e físicas que os regulamentos impõem e apresentamos as recomendações do Ministério da Saúde quanto á flora bacteriana mínima permitida. Os objetivos são bem claros, pois há necessidade de uma assistência sanitária aos criadores, uma orientação aos comerciantes e esclarecimentos às autoridades administrativas, da saúde e educação. As tabelas obtidas com as análises realizadas, demonstram claramente as distorções encontradas nas amostras de leite colhidas nas regiões de Itapecerica da Serra e Juquitiba. A porcentagem de amostras de leite que estariam condenadas somam, para Itapecerica da Serra 76,18% e para Juquitiba 71,72%. Esse quadro dá idéia perfeita de que a produção de leite naquela região está abandonada pelas autoridades responsáveis pela Vigilância Sanitária (Setor Saúde) e pela Defesa Sanitária Animal (Setor Econômico). / This paper aims at assembling information in order that the least number possible of non-pathogenic bacteria for human consumption can be achieved in a site designed for a profitable dairy. The development of the mammary gland is described since it is there that the problem of milk begins; it can be called a \"milk-factory\", with all its inconveniences. All precautions are taken to inform about sanitary and mechanical procedures on the process of milk-extraction carried out by ubre handling. Some possible sources of milk contamination are emphasized, beginning with those related to the animal and going on with those originated from the enviroment, the milker, and the milk transportation and distribuition. The most common sites used for managing animals in production are mentioned, as well as the needed sanitary conditions for such end. In what microorganisms are concerned to, we point out the ones which are developed within the milk, transforming it and causing harmfull alterations to the product and others that injure the consumer\'s health causing diseases, some of them very serious, other less serious, but all of them breaking the consumer\'s state of health and, as a consequence, increasing the roll communicable diseases. Milk components are analysed in face of the current legislation with the presentation of a table containing the milk-composition concerning various animal species. A review on the chemical and psysical analyses required by law is made, presenting the recommendations of the Ministry oh Health as to the minimal bacterial flora allowed. The objectives of the paper are rather clear, since there is a need for sanitary assistance on the part of the cattle breeders, orientation to be provided to milk-traders and englightenment to both, the health and education administrative authorities. Data from the analyses carried out clearly demonstrate the distortions found out in milk-samples collected along the Itapecerica da Serra and Juquitiba regions. The percentage of milk-samples which would be condemned by health authorities sums up 76.18% for Itapecerica da Serra and 71.72% for Juquitiba. This picture gives a perfect idea of how the milk-production in that region is left abandonmed by the authorities in charge of the sanitary surveillance (Health sector) and the Animal sanitary Defense (Economic Sector).

Este trabalho tem por finalidade reunir informações para que em um local de produção de leite com finalidade econômica se possa ter um produto com o minimo possível de bactérias, não patogênicas para o consumo humano. Descrevemos o desenvolvimento da glândula mamária, porque, é aí que começa o problema do leite: podemos chamá-la de \"Fábrica de leite\", com todos os seus incovenientes. Tomamos a precaução de informar sobre os cuidados higiênicos e mecânicos quando houver a manipulação do úbere para a extração do leite. Ressaltamos as possíveis fontes de contaminação do lei te iniciando com o animal passando pelo meio ambiente, pelo ordenhador, transporte e distribuição. Relacionamos os locais utilizados para o manejo dos animais em produção e as condições higiênicas necessárias para tal. Sobre microrganismos, lembramos os que se desenvolvem no leite e os transformam causando alterações prejudiciais ao produto e os outros que prejudicam os consumidores causando-lhe doenças, algumas muito graves, outras menos graves; mas todas quebrando a higidez do consumidor e por consequência avolumando o rol das doenças notificáveis. Analisamos os componentes do leite, frente a legislação vigente, apresentando uma tabela com a composição do leite das diversas espécies animais. Repassamos as análises químicas e físicas que os regulamentos impõem e apresentamos as recomendações do Ministério da Saúde quanto á flora bacteriana mínima permitida. Os objetivos são bem claros, pois há necessidade de uma assistência sanitária aos criadores, uma orientação aos comerciantes e esclarecimentos às autoridades administrativas, da saúde e educação. As tabelas obtidas com as análises realizadas, demonstram claramente as distorções encontradas nas amostras de leite colhidas nas regiões de Itapecerica da Serra e Juquitiba. A porcentagem de amostras de leite que estariam condenadas somam, para Itapecerica da Serra 76,18% e para Juquitiba 71,72%. Esse quadro dá idéia perfeita de que a produção de leite naquela região está abandonada pelas autoridades responsáveis pela Vigilância Sanitária (Setor Saúde) e pela Defesa Sanitária Animal (Setor Econômico). / This paper aims at assembling information in order that the least number possible of non-pathogenic bacteria for human consumption can be achieved in a site designed for a profitable dairy. The development of the mammary gland is described since it is there that the problem of milk begins; it can be called a \"milk-factory\", with all its inconveniences. All precautions are taken to inform about sanitary and mechanical procedures on the process of milk-extraction carried out by ubre handling. Some possible sources of milk contamination are emphasized, beginning with those related to the animal and going on with those originated from the enviroment, the milker, and the milk transportation and distribuition. The most common sites used for managing animals in production are mentioned, as well as the needed sanitary conditions for such end. In what microorganisms are concerned to, we point out the ones which are developed within the milk, transforming it and causing harmfull alterations to the product and others that injure the consumer\'s health causing diseases, some of them very serious, other less serious, but all of them breaking the consumer\'s state of health and, as a consequence, increasing the roll communicable diseases. Milk components are analysed in face of the current legislation with the presentation of a table containing the milk-composition concerning various animal species. A review on the chemical and psysical analyses required by law is made, presenting the recommendations of the Ministry oh Health as to the minimal bacterial flora allowed. The objectives of the paper are rather clear, since there is a need for sanitary assistance on the part of the cattle breeders, orientation to be provided to milk-traders and englightenment to both, the health and education administrative authorities. Data from the analyses carried out clearly demonstrate the distortions found out in milk-samples collected along the Itapecerica da Serra and Juquitiba regions. The percentage of milk-samples which would be condemned by health authorities sums up 76.18% for Itapecerica da Serra and 71.72% for Juquitiba. This picture gives a perfect idea of how the milk-production in that region is left abandonmed by the authorities in charge of the sanitary surveillance (Health sector) and the Animal sanitary Defense (Economic Sector).