Submitted by FELIPE ANDREOTTA CAVAGNA null (cavfelipe@hotmail.com) on 2017-05-31T19:17:37Z No. of bitstreams: 1 Tese completa.pdf: 2237650 bytes, checksum: 4aa0720ebf0372b66b313eb30f80bbb1 (MD5) / Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-05-31T19:26:49Z (GMT) / Submitted by FELIPE ANDREOTTA CAVAGNA null (cavfelipe@hotmail.com) on 2017-06-23T20:07:51Z No. of bitstreams: 1 Tese completa.pdf: 2237650 bytes, checksum: 4aa0720ebf0372b66b313eb30f80bbb1 (MD5) / Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-06-28T16:19:54Z (GMT) / Submitted by FELIPE ANDREOTTA CAVAGNA null (cavfelipe@hotmail.com) on 2017-06-29T13:35:32Z No. of bitstreams: 2 Tese completa.pdf: 2237650 bytes, checksum: 4aa0720ebf0372b66b313eb30f80bbb1 (MD5) ficha catalografica.pdf: 3431 bytes, checksum: 21058e205bea5ad945658a418056a793 (MD5) / Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: A ficha catalográfica deve ser inserida na página subsequente à folha de rosto, de acordo com as normas de sua unidade. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-06-30T12:25:51Z (GMT) / Submitted by FELIPE ANDREOTTA CAVAGNA null (cavfelipe@hotmail.com) on 2017-07-03T18:22:57Z No. of bitstreams: 1 Tese completa com ficha catalográfica.pdf: 2297427 bytes, checksum: 8e382c810380d26d332762e12fa2ab64 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-07-04T16:36:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cavagna_fa_me_bot.pdf: 2297427 bytes, checksum: 8e382c810380d26d332762e12fa2ab64 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-04T16:36:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cavagna_fa_me_bot.pdf: 2297427 bytes, checksum: 8e382c810380d26d332762e12fa2ab64 (MD5) Previous issue date: 2017-04-07 / O câncer de mama é uma doença maligna relativamente comum em mulheres adultas jovens, justificando a preocupação com a potencial toxicidade gonadal relacionada à quimioterapia. É importante considerar o encaminhamento precoce de pacientes jovens com câncer de mama que tenham desejos reprodutivos para especialistas, a fim de discutir sobre a preservação da fertilidade. A criopreservação de embriões ou de oócitos estão entre os principais métodos à disposição, e para conseguir isso, estimulação ovariana controlada (EOC) é o primeiro passo a ser considerado. O presente estudo tem como objetivo apresentar protocolo de estimulação ovariana em para preservação da fertilidade em pacientes com câncer de mama. De novembro de 2014 a dezembro de 2016, 109 pacientes com câncer de mama com menos de 40 anos de idade foram selecionadas para preservar seu potencial reprodutivo. Elas foram divididas de acordo com a fase do ciclo menstrual em que o estímulo ovariano foi iniciado: fase folicular inicial, fase folicular tardia e fase lútea. Para reduzir o tempo necessário da obtenção dos oócitos, este estudo utilizou o princípio do início aleatório, no qual a EOC pode ser iniciada durante qualquer período do ciclo menstrual sem consequências negativas. O letrozol foi utilizado durante toda a estimulação para diminuir as concentrações de estradiol, independentemente da imunohistoquímica tumoral. Na presença de tumores positivos ao estradiol, e indicação de quimioterapia neoadjuvante, o tamoxifeno foi utilizado como uma medida de proteção adicional. Um agonista do GnRH foi utilizado para desencadear a maturação folicular final, diminuindo o risco de síndrome de hiperestimulação ovariana. Foram analisados os seguintes parâmetros: idade das pacientes, dia de início da EOC, número de dias de EOC, dose total de FSH, níveis de estradiol no dia de maturação folicular final, número de oócitos coletados e número de oócitos vitrificados. A idade média dos pacientes foi de 31,27 ± 4,22 anos. A duração média da EOC foi de 10,0 ± 1,39 dias. O número médio de oócitos coletados foi de 11,62 ± 7,96 e o número médio de oócitos vitrificados foi de 9,60 ± 6,87. A concentração média de estradiol no dia do desencadeamento da ovulação foi de 706,30 ± 450,48 pg / mL, e a dose média de FSH administrada foi 2610,00 ± 716,51 UI. Ao comparar os resultados de acordo com a fase do ciclo no qual a EOC foi iniciada, não houve diferenças significativas no número de oócitos colhidos e vitrificados, duração da estimulação ovariana e dos níveis de estradiol no dia do desencadeamento da ovulação. Observou-se uma diminuição estatisticamente significativa da dose total de FSH administrada nos grupos que iniciaram a EOC na fase folicular tardia e na fase lútea, quando comparada com a fase folicular inicial. Esses resultados sugerem que a criopreservação de oócitos ou embriões com um protocolo específico para pacientes com câncer de mama, é eficaz e pode ser oferecida a mulheres jovens submetidas a tratamento citotóxico que têm preocupações relacionadas ao seu futuro reprodutivo. / Breast cancer is a relatively common malignancy in young adult women, justifying the concern about the potential gonadal toxicity related to chemotherapy. It is important to consider early referral of young breast cancer patients with reproductive desires to fertility specialists, in order to discuss the fertility preservation. Embryos or oocytes cryopreservation are among the main methods available, and to achieve that, controlled ovarian stimulation (COS) is the first step to be considered. From November 2014 to December 2016, 109 breast cancers patients under 40 years were enrolled to preserve their reproductive potential. They were divided according to the menstrual cycle status in: initial follicular phase, late follicular phase and luteal phase. In order to reduce the time necessary to obtain the oocytes, this study used the principle of random start, in which the COS can be initiated during any period of the menstrual cycle without negative consequences. Letrozole was used during all stimulation to reduce estradiol concentrations, regardless of tumor immunohistochemistry. In the presence of estradiol positive tumors, and indication of neoadjuvant chemotherapy, tamoxifen was administerd as an additional protective measure. A GnRH agonist was used to trigger ovulation, in order to mitigate the risk of ovarian hyperstimulation syndrome. The following parameters were analyzed: age, day of COS start, number of days required to COS, total FSH dosage, estradiol levels at final follicular maturation day, number of collected oocytes and number of vitrified oocytes. The mean age of patients was 31.27±4.22 years. The average duration of COS was 10.0±1.39 days. The mean number of collected oocytes was 11.62±7.96 and the mean number of vitrified oocytes was 9.60±6.87. The mean estradiol concentration on the day of the trigger was 706.30±450.48 pg/mL, and the mean dose of FSH administered was 2610.00±716.51 IU. When comparing the outcomes according to the phase of the cycle in which COS was commenced, there were no significant differences in the number of oocytes collected and vitrified, ovarian stimulation length and estradiol levels on the day of the trigger. It was observed a statistically decrease of the total FSH dose administered in the groups starting COS in the late follicular phase and in the luteal phase, when compared to the initial follicular phase These results suggest that oocyte or embryos cryopreservation with a specific protocol for breast cancer patients, is effective, safe, and may be offered to young women undergoing cytotoxic treatment who have concerns related to their reproductive future.

Submitted by JOÃO ALEXANDRE MATOS CARNEIRO (alexandre.med.vet@gmail.com) on 2017-07-27T10:18:47Z No. of bitstreams: 1 Tese João Alexandre Doutorado (2).pdf: 1015783 bytes, checksum: a8142e8dcbc1e5f6fb8d5b95daac3758 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-07-31T16:52:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carneiro_jam_dr_bot.pdf: 1015783 bytes, checksum: a8142e8dcbc1e5f6fb8d5b95daac3758 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-31T16:52:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carneiro_jam_dr_bot.pdf: 1015783 bytes, checksum: a8142e8dcbc1e5f6fb8d5b95daac3758 (MD5) Previous issue date: 2017-07-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Entre as vantagens da criopreservação seminal, destacam-se a otimização do uso de garanhões com comprovada superioridade genética, pela possibilidade do armazenamento de sêmen mesmo fora da estação de monta e a quebra das barreiras geográficas, que torna possível a remessa deste material para qualquer parte do mundo. Contudo, o processo de congelação de sêmen causa danos à célula espermática, sendo a peroxidação lipídica e o estresse oxidativo, ocasionada pela produção anormal de espécies reativas de oxigênio (EROs), as principais injúrias. Desta maneira, para se obter uma melhor qualidade seminal após a descongelação, é necessário adicionar aos diluentes seminais elementos que desempenhem função antioxidante, visando conter o aumento dos níveis dos agentes oxidantes. Coenzima Q10 (CoQ10) é um agente lipossolúvel promotor de energia, tendo como principal função transportar prótons e elétrons no processo de síntese de ATP na membrana mitocondrial interna, através da cadeia de transporte de elétrons. Ainda, a CoQ10 atua como um potente antioxidante em diversos sistemas biológicos, tais como, lipoproteínas e membranas, protegendo-os contra a oxidação, inibindo a formação de hidroperóxidos e, consequentemente, prevenindo a peroxidação lipídica. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a ação da coenzima Q10 (CoQ10) no espermatozoide de garanhões resistentes (RC) e sensíveis (SC) a congelação. Cada ejaculado (n=24) foi dividido em nove tratamentos e submetido à congelação, sendo a CoQ10 adicionada ao diluente de centrifugação, nas concentrações de 25 μmol/L (CE25), 50 μmol/L (CE50), 75 μmol/L (CE75) e 100 μmol/L (CE100), ou ao de congelação nas mesmas concentrações, 25 μmol/L (FE25), 50 μmol/L (FE50), 75 μmol/L (FE75) e 100 μmol/L (FE100). No grupo controle não houve adição da CoQ10 em nenhum dos meios diluentes. O processo de descongelação foi realizado à 37ºC/30 segundos (T0) e, para avaliação após estresse térmico, 37ºC/30minutos (T30). Posteriormente, as células espermáticas foram avaliadas quanto a cinética, integridade da membrana plasmática (IMP), desestabilização da membrana (NCAP), produção de espécies reativas ao oxigênio (H2O2 e O2 -), atividade mitocondrial e peroxidação lipídica. De acordo com os resultados, não houve diferença significativa entre os grupos, tanto no momento T0 quanto no momento T30, para os garanhões classificados como RC (p>0,05), com exceção da peroxidação lipídica, que em ambos os momentos, os grupos tratados apresentaram valores menores quando comparados ao controle (p<0,05). Já para os animais classificados como SC, houve uma superioridade das células espermáticas tratadas com a CoQ10 (p<0,05), com exceção da concentração de O2 - e potencial mitocondrial no T0, em que não apresentaram diferença entre os grupos (p>0,05). As células espermáticas do grupo CE75 se mostraram superiores aos parâmetros avaliados em relação aos demais grupos. Podemos concluir que a CoQ10 promove uma diminuição do estresse oxidativo e maior viabilidade ao espermatozoide de garanhões sensíveis ao processo de congelação espermática. / Among the advantages of seminal cryopreservation, the optimization of using stallions with proven genetic superiority, the possibility of storing semen even outside the breeding season and the breaking of geographical barriers, which makes it possible to send this material to any part of the world can de highlighted. However, the process of semen freezing causes damage to the sperm cell, and the abnormal production of reactive oxygen species is caused by lipid peroxidation of the sperm membrane, which is a major cause of such injury. Thus, in order to obtain a better seminal quality after thawing, it is necessary to add to the diluents substances that play an antioxidant function, limiting levels of the oxidizing agents increase. Coenzyme Q10 is a liposoluble energy-promoting agent, whose main function is to transport protons and electrons in the process of ATP synthesis in the internal mitochondrial membrane, through the electron transport chain. Furthermore, CoQ10 (ubiquinol) acts as a potent antioxidant in several biological systems, such as lipoproteins and membranes, protecting them against oxidation, inhibiting the hydroperoxides formation and, consequently, preventing lipid peroxidation. In this way, the objective of this study was to discuss how CoQ10 may help reducing the oxidative stress caused by seminal cryopreservation process. This form, the objective of this study was to evaluate the antioxidant action of coenzyme Q10 (CoQ10) on spermatozoa from good freezers (GF) and bad freezers (BF) stallions. Each ejaculate (n=15) was divided into nine treatments and subject to freezing process. The CoQ10 was added to centrifugation extender at concentrations 25 μmols/L (CE25), 50 μmols/L (CE50), 75 μmols/L (CE75) and 100 μmols/L (CE100), or at the freezer extender at the same concentrations, 25 μmols/L (FE25), 50 μmols/L (FE50), 75 μmols/L (FE75) and 100 μmols/L (FE100). In the control group there was no addition of CoQ10 in any of the extenders. The thawing process was performed at 37ºC/30 seconds (T0) and at 37ºC/30 minutes (T30). Posteriorly, sperm cells were evaluated for kinetics, plasma membrane integrity (PMI), membrane desestabilization (NCAP), reactive oxygen species production (H2O2 and O2 -), mitochondrial activity and lipid peroxidation. According to the results, there was no significant difference between the groups, as well T0 moment as T30 moment, for good freezer stallions (p>0.05). However for bad freezer stallions, there was a superiority of the sperm cells that came into contact with CoQ10 (p <0.05), except for the O2 - concentration and mitochondrial potential (T0) in which there was no significant difference between the Groups (p> 0.05). The sperm cells of the CE75 group were superior in the evaluated parameters in relation to the other groups. We can conclude that CoQ10 promotes a reduction of oxidative stress and greater viability to the spermatozoa from bad freezer stallions at the freezing process.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-18Bitstream added on 2014-06-13T19:17:41Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_fm_me_jabo.pdf: 732796 bytes, checksum: 9bcaa86558c023e3a8b866ae27e2da36 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As alterações constantes do meio ambiente com diminuição do habitat natural dos primatas brasileiros têm estimulado o desenvolvimento de biotecnologias na área da reprodução, visando à preservação de espécies. Este estudo teve por objetivo avaliar, pela primeira vez, técnicas de criopreservação de sêmen de Alouatta caraya. Foram colhidas 26 amostras de sêmen de seis Alouatta caraya machos adultos e sadios, mantidos em cativeiro no Centro Nacional de Primatas (CENP), Ananindeua, PA. As amostras foram analisadas imediatamente após a colheita quanto aos parâmetros volume, pH, concentração, motilidade total e progressiva, integridade de membrana plasmática, integridade de acrossoma, atividade citoquímica mitocondrial, estresse oxidativo (TBARS) e fragmentação de DNA (SCSA). Após as análises iniciais, as amostras foram congeladas com quatro diluidores diferentes – Test-gema de ovo com glicerol 3 ou 4% e Test-lecitina de soja com glicerol 3 ou 4%, utilizando máquina de congelação automática TK 3000. As amostras foram descongeladas e analisadas aos 10, 40 e 80 minutos pós-descongelação. Diluidores à base de gema de ovo foram mais adequados para congelação de sêmen dessa espécie, quando comparados aos diluidores à base de lecitina de soja. Não houve diferença estatística quanto à concentração de glicerol, porém para o diluidor à base de gema de ovo, a concentração de 4% apresentou melhores resultados. Este trabalho trouxe informações inéditas a respeito de características seminais e aspectos da criopreservação de sêmen dessa espécie, todavia os protocolos de congelação testados não foram considerados adequados para a preservação das amostras estudadas / The constant environmental changes with reduction of the natural habitat of the Brazilian primates require the development of assisted reproductive techniques (ARTs) for species conservation. The objective of this study was to evaluate, for the first time, cryopreservation techniques for Alouatta caraya semen. Twenty-six semen samples were collected from six captive adult Alouatta caraya from the National Primate Center, Ananindeua, PA – Brazil. Samples were analyzed immediately after collection for the following parameters: volume, pH, concentration, total and progressive motility, plasma membrane integrity, acrosome integrity, oxidative stress (TBARS), and DNA fragmentation (SCSA). After initial evaluation, samples were frozen in four different extenders – Test-egg yolk with 3 or 4% glycerol and Test-soy lecithin with 3 or 4% glycerol – using an automatic freezer TK 3000. Samples were thawed and analyzed for the same parameters at 10, 40 and 80 minutes post-thaw. Egg yolk-based extenders seemed better for cryopreservation of semen from this species when compared to soy lecithin-based extenders. Although there was no statistical difference between the different glycerol concentrations, for the egg yolk-based extenders, 4% glycerol had better results. This study brought novel information on semen characteristics and cryopreservation aspects for this species, although the protocols tested were not considered suitable for the cryopreservation of the samples studied

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-02-14Bitstream added on 2014-06-13T19:17:42Z : No. of bitstreams: 1 lima_mm_me_jabo.pdf: 215055 bytes, checksum: 1a2d1414c1ce8862b1dc8a0b31b6a6b5 (MD5) / A utilização da L-carnitina - ácido y-trimethilamino- ß-hidróxido butírico - visando melhorar os parâmetros espermáticos tem sido intensivamente utilizado em medicina humana e em menor escala em medicina veterinária com resultados satisfatórios. O objetivo deste estudo foi verificar a influência da suplementação oral de L-carnitina em sêmen criopreservado de garanhões. Utilizou-se neste experimento quatro garanhões submetidos a duas colheitas de sêmen por semana por um período de quatro semanas durante o mês de agosto de 2001; amostras se sêmen desses animais, agora denominado TO, foram criopreservadas. Os mesmos quatro garanhões receberam uma suplementação oral de quinze gramas de L-carnitina uma vez ao dia nos meses de maio, junho, julho e agosto de 2002 e no mês de agosto de 2002 foram submetidos a duas colheitas de sêmen semanais, tendo suas amostras também criopreservadas, que passaram a ser denominado tratado (T1). Foram analisados e comparados entre si os seguintes parâmetros espermáticos:- total de espermatozóides no ejaculado e integridade da membrana espermática e através de análise computadorizada as variáveis motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP), linearidade (LIN), velocidade de trajeto (VAP), velocidade progressiva (VSL) e velocidade curvilinear (VCL) antes e após da realização de um teste de termo-resistência (TTR). Foi realizado um delineamento casualizado com oito repetições (dois tratamentos e quatro garanhões); empregou-se análise de variância - ANOVA - com posterior desdobramento para estudar o efeito dos tratamentos em cada um dos garanhões - Teste de Tukey - o nível de significância adotado foi p<0,05... / Owing its positive effect on the improvement of spermatic parameters, L- carnitine - ?-trimethilamino- ß-hidroxid butiric acid - has been intensively utilized in human medicine and in a lower scale in veterinary medicine with satisfactory results. The objective of this study was to verify the influence of oral supplementation with L-carnitine on cryopreserved stallion semen. Four stallions were submitted to semen collection twice a week during a four week period in August of 2001. The collected samples from those horses were then cryopreserved and they were assigned as a control group (T0). The same horses received fifteen grams of L- carnitine by oral supplementation, once a day, during May, June, July and August of 2002, and then they were submitted to semen collection twice a week in August of 2002. Those collected samples were also equally cryopreserved, and assigned as treatment group (T1). The following spermatic parameters were analyzed and submitted to a pair wise comparison: total sperm number in the ejaculate and sperm membrane integrity and by computer analyze, variables as: total motility (TM), progressive motility (PM), linearity (LIN), path velocity (VAP), progressive velocity (VSL), and track speed (VCL). Those variables were then determined before and after a term resistance test (TRT). A casual design was established using eight repetitions (two treatments and four stallions). To investigate the treatment effect, analysis of variance (ANOVA) was performed and to investigate de effect within stallion, the Tukey's test - significance level was established as p£ 0.05. The means and standard errors of means for the variable total motility, determined before and after the term resistance test, total sperm number in the ejaculate and sperm membrane integrity was significantly higher in the treatment group (T1) when compared to the control group (T0)... (complete abstract, access undermentioned eletronic address)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-26Bitstream added on 2014-06-13T18:58:59Z : No. of bitstreams: 1 rodello_l_me_botfmvz.pdf: 226950 bytes, checksum: b009f4db5df84afd8c9c3af24e35fe7b (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Objetivou-se avaliar e validar o sistema automatizado de refrigeração e congelação de fabricação nacional TK 3000, comparativamente ao sistema de refrigeração e de congelação pelo método geladeira/vapor de nitrogênio líqüido. Foram utilizados dez carneiros da raça Santa Inês sendo colhidos, por meio de vagina artificial, três ejaculados de cada reprodutor. Após as avaliações do ejaculado, o sêmen foi diluído em meio para congelação Glicina-Gema-Leite e envasado em palhetas de 0,25 Ml com 100 x 106 espermatozóides totais/doses, sob temperatura de 32° C. As amostras foram refrigeradas em geladeira e/ou com controle automatizado e posteriormente congeladas em vapor de nitrogênio líqüido e/ou com controle automatizado. Os resultados foram similares (P<0,05) entre a refrigeração em geladeira e a refrigeração com controle automatizados em todos os parâmetros avaliados pós descongelação e ao final do teste de exaustão, o mesmo observou-se entre a refrigeração em geladeira e congelação em vapor de nitrogênio líqüido e refrigeração e congelação com controle automatizado e as combinações refrigeração em geladeira e congelação com controle automatizado e refrigeração com controle automatizado e congelação em vapor de nitrogênio líqüido. Concluí-se que o sistema automatizado TK 3000 é adequado a criopreservação do sêmen ovino, com qualidade equivalente àquela processada no sistema geladeira/vapor de nitrogênio líqüido. / The objectives of the present study were to validate and evaluate a programmed automatic system for freezing and cooling, using a national equipment TK 3000, compared to a method using refrigerator and liquid nitrogen for the same procedures. Ten rams from Santa Ines breed were submitted to semen collection by artificial vagina, with a total of three ejaculates from each sire. After the ejaculate evaluation, semen was diluted in a freezing extender Egg- Glycine - Milk and stored in a 0.25 mL straws with a total of 100 x 10 6 sperm per dose at 32° C. The samples were cooled inside a refrigerator and /or utilizing an automatic programmed system, being then frozen in liquid nitrogen vapor and/ or using automatic control. The results were simmilar (P< 0.05) between samples submitted to cooling using refrigerator and automatic control for all analyzed parameters after thawing and at the end of the resistant test. The same was observed among samples submitted to cooling in refrigerator followed by liquid nitrogen vapor for freezing, samples cooled and frozen both using an automatic control, samples processed by the combinations of cooling in refrigerator followed by freezing with an automatic control, and samples cooled with automatic control followed by freezing in liquid nitrogen vapor. In conclusion, the TK 3000 is an adequate automatic system for ovine semen cryopreservation and it provides a quality which is equivalent to semen processed in refrigerator/ liquid nitrogen vapor system.

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Coorientador: Eliandra Antônia Pires Büttler / Coorientador: Juliana Côrrea Borges / Coorientador: Maria Emília Franco / Banca: Giuliano Queiroz Mostachio / Banca: Fabiana Azevedo Voorwald / Banca: Tathiana Ferguson Motheo / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Resumo: O objetivo foi verificar se a suplementação do meio diluente Tris-gema com Trolox, N-acetilcisteína (NAC) ou a associação de ambos, em três concentrações distintas (0,15; 0,25 e 0,35mM), possibilitaria ou não a melhora na qualidade da preservação das células espermáticas nos processos de refrigeração e congelação. Foram utilizadas 15 unidades experimentais (UE), cada qual constituído pelo recuperado espermático de cinco cães hígidos (n=75) submetidos à orquiectomia eletiva. Estes, por sua vez, foram igualmente divididos em três grupos experimentais: grupo I (GI), II (GII) e III (GIII), os quais tiveram a adição de antioxidantes nas concentrações de 0,35, 0,25 e 0,15mM, respectivamente. Cada UE foi dividido em três partes, uma foi avaliada a In Natura, outra após a refrigeração por 48 horas, e a terceira após a congelação/ descongelação. Ato continuo, cada parte foi subdividida em quatro amostras de igual volume, que foram centrifugadas e o sobrenadante armazenado. O concentrado de espermatozoides foi ressuspendido em meio diluente Tris-gema, puro, ou acrescido de Trolox, NAC ou de ambas. Os espermatozoides foram avaliados quanto à motilidade, vigor, teste vital, índice de atividade citoquímica, integridade de membrana, mensuração do total das espécies reativas de oxigênio e radical hidroxila. Os dados obtidos foram submetidos à análise de regressão logística Proc Glimmix e teste de correlação de Pearson (p<0,05). Após a criopreservação foi observado que adição dos antioxidant... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to evaluate whether the supplementation of the Tris egg-yolk extender with three different concentrations (0,15; 0,25 and 0,35mM) of N-acetyl cysteine (NAC), Trolox or the association of both, would improve the quality of sperm cells after chilling and freezing. Fifteen experimental units (EU), each one consisted by epidydimal sperm recovered from five healthy dogs (n=75) after elective orchiectomy were used in this study. The EU were equally divided into three experimental groups. Group I (GI), II (GII) and III (GIII) had the addition of 0.35, 0.25 and 0.15mM of antioxidants, respectively. Each group was divided into three aliquots, the first one was evaluated at the moment of the collection, the second aliquot was chilled for 48 h and the third was frozen. Subsequently, each EU was divided into four aliquots of equal volume and immediately centrifuged, the supernatant was discarded and the concentrated sperm resuspended in TRIS extender supplemented with Trolox and/or N-acetyl cysteine. Sperm total and progressive motility, vital test, cytochemical activity indexes membrane integrity, and measurement of reactive oxygen species (ROS) by TBARS and TAC were performed. Data were statistically analyzed by logistic regression analysis Proc GLIMMIX and Pearson correlation test (P <0.05). After cryopreservation the addition of antioxidants reduced total production of ROS. The concentrations and antioxidants chosen in this study were sufficient to ma... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: José Antônio Dell'Aqua Junior / Banca: Frederico Ozanan Papa / Banca: André Maciel Crespilho / Resumo: A biotécnica mais utilizada em equinos no Brasil é a inseminação artificial com sêmen refrigerado. Apesar dos avanços, ainda há uma grande variação nos resultados de fertilidade em programas reprodutivos. A carnitina é um composto vitamínico que desempenha um papel importante no metabolismo energético, já que ela garante a produção de energia pelo espermatozoide através do estímulo de vias metabólicas. Além disso, ascarnitinas apresentam potente poder antioxidante, conferindo maior proteção durante o armazenamento.No entanto, sua utilização pós-ejaculação é pouco estudada, já que existem poucos relatos deste tipo de aplicação, sendo nenhum deles em equinos. Devido a isso, este trabalho foi dividido em dois experimentos. O objetivo do experimento 1 foi determinar a concentração ideal l-carnitina (LC) e acetil-l-carnitina (AC) na refrigeração de sêmen equino a 5ºC. No experimento 2, o objetivo foi avaliar os efeitos da melhor dose de LC e AC e sua associação sobre a viabilidade espermática através da citometria de fluxo. No experimento 1 foram utilizados dois ejaculados de 12 garanhões. Após a diluição com Botu-Sêmen® na concentração de 50 x 106 espermatozoides/mL, os ejaculados foram divididos em sete grupos: controle (C), tratado com 5 mmol/L (LC-1), 10 mmol/L (LC-2), 15 mmol/L (LC-3)de LC, tratado com 5 mmol/L (AC-1), 10 mmol/L (AC-2) e 15 mmol/L (AC-3) de AC e após foram refrigerados a 5ºC por 48 horas. Para o experimento 2 foram utilizados os mesmos animais e manipulação dos experimentos anteriores, entretanto, os grupos testados foram: Controle (C), tratado com 10 mmol/L de LC (LC), tratado com 10 mmol/L de AC (AC) e 10 mmol/L de LC + 10 mmol/L AC (LC+AC). A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada do movimento espermático e a integridade de membrana plasmática (IMP) por microscopia de epifluorescência no experimento 1 e 2, entretanto, ... / Abstract: Over the years, technology for cooling semen has developed. However, despite progress, pregnancy rates are still variable between reproductive programs.Carnitine is a vitamin compound which plays an important role in energy metabolism, since it guarantees the sperm energy production by stimulating metabolic pathways. Furthermore, carnitine has a powerful antioxidant effect, providing greater protection to plasma membrane during storage.However, post-ejaculation use is poorly studied, being none in horses. The aim of experiment 1 was determine optimal concentration of lcarnitine (LC) and acetyl-l-carnitine (AC) in equine semen cooled at 5°C. In experiment 2, the objective was evaluate dose effects between LC, AC and their association on sperm viability by flow citometry. Two ejaculates from 12 stallions were used in both experiments. After dilution with Botu-Semen®to 50 x 106 spermatozoa/ml, each ejaculate was split into seven groups: control (C), treated with 5 mmol/L (LC-1), 10 mmol/L (LC -2), 15 mmol/L (LC-3) of LC, treated with 5 mmol /L (AC-1), 10 mmol/L (AC-2) and 15 mmol/L (AC-3) of ACand then cooled at 5°C for 48 hours. In second experiment, groups were divided in: control (C), treated with 10 mmol /l of LC (LC), treated with 10 mmol /L of AC (AC) and 10 mmol/L of LC + 10 mmol/L of AC (LC+AC).In both experiments,sperm kinetics was evaluated by computerized analysis (CASA) and plasma membrane integrity (IMP) by epifluorescence microscopy.Moreover, in experiment 2 were assessed DNA, ROS and Lipid Peroxidation (PEROX) by flow cytometry.All analysis were performed before cooling (T0), 24 (T24) and 48 hours (T48) after. According to the results of first experiment, LC groups had higher IMP and better values of kinetic than control. Groups treated with AC showed higher results of sperm kinetics after 24 hours of refrigeration and IMP in all analysed times. In second experiment, treated groups were ... / Mestre

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Carlos Antonio de Miranda Bomfim / Banca: André Luis Rios Rodrigues / Resumo: Objetivou-se avaliar e validar o sistema automatizado de refrigeração e congelação de fabricação nacional TK 3000, comparativamente ao sistema de refrigeração e de congelação pelo método geladeira/vapor de nitrogênio líqüido. Foram utilizados dez carneiros da raça Santa Inês sendo colhidos, por meio de vagina artificial, três ejaculados de cada reprodutor. Após as avaliações do ejaculado, o sêmen foi diluído em meio para congelação Glicina-Gema-Leite e envasado em palhetas de 0,25 Ml com 100 x 106 espermatozóides totais/doses, sob temperatura de 32° C. As amostras foram refrigeradas em geladeira e/ou com controle automatizado e posteriormente congeladas em vapor de nitrogênio líqüido e/ou com controle automatizado. Os resultados foram similares (P<0,05) entre a refrigeração em geladeira e a refrigeração com controle automatizados em todos os parâmetros avaliados pós descongelação e ao final do teste de exaustão, o mesmo observou-se entre a refrigeração em geladeira e congelação em vapor de nitrogênio líqüido e refrigeração e congelação com controle automatizado e as combinações refrigeração em geladeira e congelação com controle automatizado e refrigeração com controle automatizado e congelação em vapor de nitrogênio líqüido. Concluí-se que o sistema automatizado TK 3000 é adequado a criopreservação do sêmen ovino, com qualidade equivalente àquela processada no sistema geladeira/vapor de nitrogênio líqüido. / Abstract: The objectives of the present study were to validate and evaluate a programmed automatic system for freezing and cooling, using a national equipment TK 3000, compared to a method using refrigerator and liquid nitrogen for the same procedures. Ten rams from Santa Ines breed were submitted to semen collection by artificial vagina, with a total of three ejaculates from each sire. After the ejaculate evaluation, semen was diluted in a freezing extender Egg- Glycine - Milk and stored in a 0.25 mL straws with a total of 100 x 10 6 sperm per dose at 32° C. The samples were cooled inside a refrigerator and /or utilizing an automatic programmed system, being then frozen in liquid nitrogen vapor and/ or using automatic control. The results were simmilar (P< 0.05) between samples submitted to cooling using refrigerator and automatic control for all analyzed parameters after thawing and at the end of the resistant test. The same was observed among samples submitted to cooling in refrigerator followed by liquid nitrogen vapor for freezing, samples cooled and frozen both using an automatic control, samples processed by the combinations of cooling in refrigerator followed by freezing with an automatic control, and samples cooled with automatic control followed by freezing in liquid nitrogen vapor. In conclusion, the TK 3000 is an adequate automatic system for ovine semen cryopreservation and it provides a quality which is equivalent to semen processed in refrigerator/ liquid nitrogen vapor system. / Mestre

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: André Maciel Crespilho / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: José Antonio Dell'aqua Junior / Banca: Fabíola Soares Zahn / Resumo: Apesar dos benefícios proporcionados pelo plasma seminal durante a cobertura, quando biotecnologias são utilizadas, como a inseminação artificial, sua função é questionável, visto que trabalhos utilizando espermatozoides da cauda do epidídimo acrescido ou não do plasma seminal não apresentaram diferença nas taxas de concepção. Além disso, estudos relataram efeito deletério das secreções das glândulas anexas sobre a viabilidade espermática e taxa de concepção, principalmente em garanhões com baixa qualidade seminal. Neste sentido, o objetivo do presente estudo é: 1) comparar os parâmetros de cinética espermática, viabilidade estrutural e fertilidade dos espermatozoides recuperados do ejaculado e da cauda do epidídimo de garanhões subférteis; 2) avaliar diferenças na composição eletrolítica do plasma seminal de animais com alta e baixa fertilidade. 3) comparar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e viabilidade dos espermatozoides do ejaculado e da cauda do epidídimo de garanhões subférteis. As avaliações das amostras seminais consistiram na análise computadorizada das características da motilidade (CASA, Thorne Research - HTM IVOS) e nas análises de citometria de fluxo da integridade da membrana plasmática, da integridade acrossomal, da peroxidação das membranas espermáticas, da fragmentação do DNA, da capacitação espermática, da translocação de fosfatidilserina da membrana e da ativação de caspase. Os espermatozoides do epidídimo após descongelação apresentaram superioridade nos parâmetros de cinética e viabilidade espermática, além de melhor fertilidade, demonstrando que estes espermatozoides são mais resistentes ao processo de congelação quando comparado aos espermatozoides do ejaculado. O plasma seminal de garanhões subférteis apresentou maiores concentrações de sódio ... / Abstract: Despite the benefits provided by seminal plasma during natural cover when biotechnology are used as artificial insemination, its function is questionable, since studies using spermatozoa from cauda epididymis with or without the addition of seminal plasma showed no difference in conception rates. Furthermore, studies have reported deleterious effects of secretions from accessory glands on sperm viability and conception rate, especially in stallions with poor semen quality. Thus the aims of this study were: 1) compare the kinetic parameters, structural viability and fertility of sperm recovered from ejaculate and cauda epididymis of subfertile stallions. 2) evaluate differences in electrolyte composition in the seminal plasma of animals with high and low fertility. 3) compare the effect of seminal plasma addition from stallions with high and low fertility on freezability and viability of sperm from the ejaculate and cauda epididymis of subfertile stallions. The assessment of each samples was determined by computer-assisted sperm analyses of motility (CASA, Thorne Research - HTM IVOS) and flow cytometry analyses of plasma membrane integrity, acrosome integrity, peroxidation of sperm membranes, DNA fragmentation index, degree of protein tyrosine phosphorylation in sperm surface and caspase activity. The epididymal sperm after thawing showed superiority in kinetic parameters and sperm viability, as well as better fertility, demonstrating that these spermatozoa are more resistant to freezing process when compared to sperm from the ejaculate. The seminal plasma of subfertile stallions has higher sodium concentrations in the seminal plasma than fertile stallions, what makes this finding a possible way to explain the deleterious effect of seminal plasma in these animals. Moreover, it was found that this deleterious effect is dose-dependent since the addition of 20% of seminal plasma from fertile and ... / Doutor

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Resumo: A recuperação de espermatozóides da cauda do epidídimo e sua criopreservação pode ser a última chance para recuperação do material genético quando ocorre morte súbita ou lesão grave em garanhões de alto valor genético. Sendo assim, o objetivo do experimento I foi comparar os parâmetros espermáticos dos espermatozóides da cauda do epidídimo recuperados imediatamente após orquiectomia e em diferentes momentos após armazenamento a 5°C e a temperatura ambiente. Já o experimento II, teve o objetivo de comparar os parâmetros espermáticos e fertilidade dos espermatozóides do ejaculado e do epidídimo recuperados logo depois da orquiectomia e após armazenamento por 24 horas a 5°C. No experimento I, 48 garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral, sendo que em oito a colheita dos espermatozóides do epidídimo foi realizada imediatamente após orquiectomia (grupo controle). Nos outros 40 garanhões, um epidídimo foi armazenado a temperatura ambiente e o contralateral armazenado a 5°C por 6, 12, 18, 24 e 30 horas, de acordo com o grupo. No experimento II, dois ejaculados de oito garanhões foram colhidos com vagina artificial e congelados (grupo EJ-0h). Uma semana após, os garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral, sendo que os espermatozóides de um epidídimo foram congelados imediatamente após orquiectomia (grupo EP-0h) e o epidídimo contralateral foi previamente armazenado por 24 horas a 5°C (EP-24h). O teste de fertilidade demonstrou que o grupo EP-0h (92,3%; n=13) tendem a ser maior que os grupos EJ-0h (61,5%; n=13) e EP-24h (61,5%; n=13). Conclui-se que o armazenamento dos testículos-epidídimos a 5°C proporcionou melhor preservação espermática e que, independente da temperatura, a motilidade progressiva é o parâmetro espermático mais sensível ao tempo de armazenamento. / Abstract: Cauda epididymis sperm recovery and cryopreservation may be the last chance to obtain genetical material when sudden death or serious injury occur in valuable stallions. Thus, the aim of experiment I was to compare sperm parameters of epididymal sperm recovered immediately after orchiectomy and at different moments after storage at 5°C and at room temperature. Experiment II aimed to compare sperm parameters and fertility of ejaculated sperm and epididymal sperm recovered immediately after orchiectomy and after storage for 24h at 5°C. In experiment I, 48 stallions were submitted to bilateral orchiectomy, in eight of those the sperm collection were done immediately after orchiectomy (control group). In the other 40 stallions, one epididymis was stored at room temperature and the other was stored at 5°C for 6, 12, 18, 24 and 30 hours accorded to groups. In experiment II, two ejaculated from eight stallions were obtained with artificial vagina and cryopreserved (group EJ-0h). One week later, the stallions were submitted to bilateral orchiectomy, and the sperm of one epididymal were frozen immediately after orchiectomy (group EP-0h) and the contralateral epididymal was previously storage for 24h at 5°C (EP-24h). Fertility test showed that group EP-0h (92,3%; n=13) tended to be higher than groups EJ-0h (61,5%; n=13) and EP-24h (61,5%; n=13). These results allowed concluding that storage of the testis-epididymis complex at 5°C is more efficient in preserving sperm parameters than room temperature storage and that progressive motility is the parameter that is more affected by storage period, regardless of the temperature. / Mestre