O uso de antimicrobianos de forma terapêutica, preventiva e promotora de crescimento trouxe inúmeras vantagens para a avicultura mundial, entretanto a utilização excessiva dos antimicrobianos e de maneira indevida tem estimulado um aumento no número de micro-organismos resistentes. Entre eles, destaca-se o Campylobacter jejuni, bactéria frequentemente associada a enterites em humanos, sendo o frango a principal reservatório e fonte de transmissão deste patógeno para o homem. A transmissão de bactérias resistentes entre animais e seres humanos pode resultar em infecções multirresistentes e insucesso no tratamento terapêutico, sendo a exposição continua destes micro-organismos a esses medicamentos o fator mais importante na origem da resistência. Diante desse cenário, objetivou-se nesse trabalho investigar e caracterizar, através de métodos fenotípico e genotípico, a susceptibilidade antimicrobiana de 54 isolados de C. jejuni coletados em diferentes etapas do processamento da carne de frango de matadouro-frigoríficos da região do Rio Grande do Sul. Para a determinação do MIC, os isolados foram testados frente aos seguintes antimicrobianos: ácido nalidíxico, ciprofloxacina, cloranfenicol, eritromicina, gentamicina e tetraciclina. Dos 54 isolados de C. jejuni, 94,4% foram resistentes a ciprofloxacina, 83,3% ao ácido nalidíxico, 51,8% a tetraciclina e 48% a eritromicina. Todos os isolados foram sensíveis a gentamicina e ao cloranfenicol. Doze isolados foram resistentes a três classes diferentes de antibióticos, sendo assim considerados multi-resistentes. Para verificar a presença da mutação gênica da Região Determinante de Resistência à Quinolona (RDRQ) no gene gyrA, foi realizado sequenciamento gênico de 31 isolados considerados resistentes por métodos fenotípicos. Todos os isolados possuíam a mutação Tre-86-Ile na RDRQ do gene gyrA, que confere resistência às fluoroquinolonas, confirmando a predominância dessa mutação em Campylobacter spp. resistentes a esses antimicrobianos. A ocorrência do gene de resistência à tetraciclina foi verificada por PCR. Dos 28 isolados considerados resistentes por métodos fenotípicos, 42,8% possuíam o gene tet(O), que confere resistência as tetraciclinas. Os resultados mostram um alto nível de resistência antimicrobiana em C. jejuni evidenciando a necessidade da implementação de políticas de uso prudente de antimicrobianos na medicina veterinária. / The use of antimicrobials in a therapeutic, preventive and growth promoting way has brought numerous advantages to the world poultry industry; however, the excessive and undue use of antimicrobials has stimulated an increase in the number of resistant microorganisms. Among them, we highlight Campylobacter jejuni, a bacterium frequently associated with enteritis in humans, with chicken being the main reservoir and source of transmission of this pathogen to man. The transmission of resistant bacteria between animals and humans can result in multi resistant infections and failure in therapeutic treatment, and the continued exposure of these microorganisms to these drugs is the most important factor in the source of resistance. Therefore, the aim of this study was to investigate and characterize, through phenotypic and genotypic methods, the antimicrobial susceptibility of 54 C. jejuni isolates collected at different stages of the processing of chicken meat from slaughterhouse in Rio Grande do Sul. For MIC determination, strains were tested against the following antimicrobials: nalidixic acid, ciprofloxacin, chloramphenicol, erythromycin, gentamicin and tetracycline. Of the 54 isolates of C. jejuni, 94.4% were resistant to ciprofloxacin, 83.3% to nalidixic acid, 51.8% to tetracycline and 48% to erythromycin. All isolates were sensitive to gentamicin and chloramphenicol. Twelve strains were resistant to three different classes of antibiotics, thus being considered multi resistant. To verify the presence of the gene mutation of the Quinolone Resistance Determinant Region (QRDR) in the gene gyrA, gene sequencing of 31 strains considered resistant by phenotypic methods was performed. All strains had the Tre-86-Ile mutation in the QRDR of the gyrA gene, which confers resistance to fluoroquinolones, confirming the predominance of this mutation in Campylobacter spp. resistant to these antimicrobials. The occurrence of tetracycline resistance gene was verified by PCR. Of the 28 strains considered resistant by phenotypic methods, 42.8% had the tet(O) gene. The results show a high level of antimicrobial resistance in C. jejuni that evidences the need for implementation of policies in the prudent use of antimicrobials in veterinary medicine.

Os procedimentos de limpeza e desinfecção usados na produção frangos de corte são fundamentais para a manutenção do alto nível de saúde do plantel, reduzindo o risco de ocorrência de enfermidades e melhorando o desempenho produtivo das aves. Existe a possibilidade de contaminação dos produtos desde a chegada das aves às instalações até o abate. Campylobacter é uma bactéria constantemente encontrada no trato gastrointestinal das aves e merece destaque na produção avícola devido a sua capacidade de provocar enfermidades em humanos. Para evitar a ocorrência de surtos de doenças transmitidas por alimentos como a campilobacteriose, para manutenção da saúde de plantéis avícolas e o aumento da produtividade de lotes de frangos de corte é necessário a realização das práticas preventivas como a limpeza e desinfecção. Desta maneira, o presente estudo teve como objetivos avaliar: o desempenho produtivo em lotes de frangos de corte desafiados com Campylobacter jejuni, a redução da pressão de infecção em instalações submetidas a diferentes protocolos de limpeza e desinfecção, e sua viabilidade econômico-financeira. Foi conduzido protocolo experimental no Laboratório de Pesquisa em Aves do departamento de Nutrição e Produção Animal, da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, Campus Pirassununga. Foram realizados dois alojamentos cada um com 960 pintos de um dia de idade. No primeiro alojamento, todas as aves foram inoculadas com uma cepa conhecida de Campylobacter jejuni (atcc 33560) a fim de contaminar o ambiente criando desafio sanitário. No segundo alojamento foram realizados dois protocolos de limpeza e desinfecção, constituindo os dois tratamentos experimentais (Comum e Proposto). Neste lote, para avaliação da produtividade, foram mensurados os parâmetros: viabilidade, mortalidade, conversão alimentar, ganho de peso e consumo de ração. Para avaliação microbiológica do ambiente e das carcaças foi realizada a contagem total de microrganismos para ambiente e a identificação de Campylobacter spp.. As amostras positivas foram submetidas a um ensaio de PCR multiplex para identificação de espécies de Campylobacter spp. Para avaliação econômica financeira dos lotes de frangos de corte foram utilizados e adaptados os dados de custos de produção elaborados pela Embrapa Suínos e Aves às condições de criação e resultados obtidos no presente estudo. O tratamento Proposto demonstrou influências positivas no desempenho das aves, na redução da contagem total de microrganismos, na eliminação de Campylobacter spp. e viabilidade econômico-financeira / The procedures of cleaning and disinfection used in broiler production are necessary to maintaining a high standard of birds health, decreasing the risk of diseases, optimizing the animal performance, as well as to ensure sanitary quality of meat. There is possibility of contamination in all farming steps, since chicks arrival until the end of slaughter. Campylobacter is a bacteria constantly found at gastrointestinal tract of the birds, and so, a special concern must be given since it can cause human diseases. In order to avoid foodborne illness outbreaks such as campylobacteriosis, to ensure poultry flocks health maintenance and to improve broilers productivity, adopting preventive practices such as cleaning and disinfection is required. Thus, this study aimed to evaluate: the animal performance of broilers challenged with Campylobacter jejuni; the reduction of infection pressure in housing plants subjected to different cleaning protocols and disinfection, and its economic and financial viability. Experimental protocol was conducted at the Research Laboratory of Poultry of Nutrition and Animal Production Department, College of Veterinary Medicine and Animal Science, University of São Paulo, Campus Pirassununga. Two housings each with 960 day-old chicks of age were performed. In the first housing, all birds were inoculated with a known strain of Campylobacter jejuni (ATCC 33560) to contaminate the environment in order to create health challenge. In the second housing were performed two cleaning and disinfection protocols, featuring two experimental treatments (Common and Proposed). In this lot, to evaluate animal performance, the parameters were measured: feasibility, mortality, feed conversion, weight gain and feed intake. For microbiological evaluation of environment and of carcasses, was performed a total count of microorganisms for environmental and identification of Campylobacter spp. The positive samples were subjected to a multiplex PCR assay identification of species of Campylobacter spp. For economic and financial evaluation of batches, the data of husbandry costs elaborated by Embrapa Swine and Poultry were adapted to conditions and rsults obtained in this study. Based on results, the Proposed treatment has shown positive influences on bird performance, reduction of total count of microorganisms, on elimination of Campylobacter spp. and on economic and financial viability

O uso de antimicrobianos de forma terapêutica, preventiva e promotora de crescimento trouxe inúmeras vantagens para a avicultura mundial, entretanto a utilização excessiva dos antimicrobianos e de maneira indevida tem estimulado um aumento no número de micro-organismos resistentes. Entre eles, destaca-se o Campylobacter jejuni, bactéria frequentemente associada a enterites em humanos, sendo o frango a principal reservatório e fonte de transmissão deste patógeno para o homem. A transmissão de bactérias resistentes entre animais e seres humanos pode resultar em infecções multirresistentes e insucesso no tratamento terapêutico, sendo a exposição continua destes micro-organismos a esses medicamentos o fator mais importante na origem da resistência. Diante desse cenário, objetivou-se nesse trabalho investigar e caracterizar, através de métodos fenotípico e genotípico, a susceptibilidade antimicrobiana de 54 isolados de C. jejuni coletados em diferentes etapas do processamento da carne de frango de matadouro-frigoríficos da região do Rio Grande do Sul. Para a determinação do MIC, os isolados foram testados frente aos seguintes antimicrobianos: ácido nalidíxico, ciprofloxacina, cloranfenicol, eritromicina, gentamicina e tetraciclina. Dos 54 isolados de C. jejuni, 94,4% foram resistentes a ciprofloxacina, 83,3% ao ácido nalidíxico, 51,8% a tetraciclina e 48% a eritromicina. Todos os isolados foram sensíveis a gentamicina e ao cloranfenicol. Doze isolados foram resistentes a três classes diferentes de antibióticos, sendo assim considerados multi-resistentes. Para verificar a presença da mutação gênica da Região Determinante de Resistência à Quinolona (RDRQ) no gene gyrA, foi realizado sequenciamento gênico de 31 isolados considerados resistentes por métodos fenotípicos. Todos os isolados possuíam a mutação Tre-86-Ile na RDRQ do gene gyrA, que confere resistência às fluoroquinolonas, confirmando a predominância dessa mutação em Campylobacter spp. resistentes a esses antimicrobianos. A ocorrência do gene de resistência à tetraciclina foi verificada por PCR. Dos 28 isolados considerados resistentes por métodos fenotípicos, 42,8% possuíam o gene tet(O), que confere resistência as tetraciclinas. Os resultados mostram um alto nível de resistência antimicrobiana em C. jejuni evidenciando a necessidade da implementação de políticas de uso prudente de antimicrobianos na medicina veterinária. / The use of antimicrobials in a therapeutic, preventive and growth promoting way has brought numerous advantages to the world poultry industry; however, the excessive and undue use of antimicrobials has stimulated an increase in the number of resistant microorganisms. Among them, we highlight Campylobacter jejuni, a bacterium frequently associated with enteritis in humans, with chicken being the main reservoir and source of transmission of this pathogen to man. The transmission of resistant bacteria between animals and humans can result in multi resistant infections and failure in therapeutic treatment, and the continued exposure of these microorganisms to these drugs is the most important factor in the source of resistance. Therefore, the aim of this study was to investigate and characterize, through phenotypic and genotypic methods, the antimicrobial susceptibility of 54 C. jejuni isolates collected at different stages of the processing of chicken meat from slaughterhouse in Rio Grande do Sul. For MIC determination, strains were tested against the following antimicrobials: nalidixic acid, ciprofloxacin, chloramphenicol, erythromycin, gentamicin and tetracycline. Of the 54 isolates of C. jejuni, 94.4% were resistant to ciprofloxacin, 83.3% to nalidixic acid, 51.8% to tetracycline and 48% to erythromycin. All isolates were sensitive to gentamicin and chloramphenicol. Twelve strains were resistant to three different classes of antibiotics, thus being considered multi resistant. To verify the presence of the gene mutation of the Quinolone Resistance Determinant Region (QRDR) in the gene gyrA, gene sequencing of 31 strains considered resistant by phenotypic methods was performed. All strains had the Tre-86-Ile mutation in the QRDR of the gyrA gene, which confers resistance to fluoroquinolones, confirming the predominance of this mutation in Campylobacter spp. resistant to these antimicrobials. The occurrence of tetracycline resistance gene was verified by PCR. Of the 28 strains considered resistant by phenotypic methods, 42.8% had the tet(O) gene. The results show a high level of antimicrobial resistance in C. jejuni that evidences the need for implementation of policies in the prudent use of antimicrobials in veterinary medicine.

O uso de antimicrobianos de forma terapêutica, preventiva e promotora de crescimento trouxe inúmeras vantagens para a avicultura mundial, entretanto a utilização excessiva dos antimicrobianos e de maneira indevida tem estimulado um aumento no número de micro-organismos resistentes. Entre eles, destaca-se o Campylobacter jejuni, bactéria frequentemente associada a enterites em humanos, sendo o frango a principal reservatório e fonte de transmissão deste patógeno para o homem. A transmissão de bactérias resistentes entre animais e seres humanos pode resultar em infecções multirresistentes e insucesso no tratamento terapêutico, sendo a exposição continua destes micro-organismos a esses medicamentos o fator mais importante na origem da resistência. Diante desse cenário, objetivou-se nesse trabalho investigar e caracterizar, através de métodos fenotípico e genotípico, a susceptibilidade antimicrobiana de 54 isolados de C. jejuni coletados em diferentes etapas do processamento da carne de frango de matadouro-frigoríficos da região do Rio Grande do Sul. Para a determinação do MIC, os isolados foram testados frente aos seguintes antimicrobianos: ácido nalidíxico, ciprofloxacina, cloranfenicol, eritromicina, gentamicina e tetraciclina. Dos 54 isolados de C. jejuni, 94,4% foram resistentes a ciprofloxacina, 83,3% ao ácido nalidíxico, 51,8% a tetraciclina e 48% a eritromicina. Todos os isolados foram sensíveis a gentamicina e ao cloranfenicol. Doze isolados foram resistentes a três classes diferentes de antibióticos, sendo assim considerados multi-resistentes. Para verificar a presença da mutação gênica da Região Determinante de Resistência à Quinolona (RDRQ) no gene gyrA, foi realizado sequenciamento gênico de 31 isolados considerados resistentes por métodos fenotípicos. Todos os isolados possuíam a mutação Tre-86-Ile na RDRQ do gene gyrA, que confere resistência às fluoroquinolonas, confirmando a predominância dessa mutação em Campylobacter spp. resistentes a esses antimicrobianos. A ocorrência do gene de resistência à tetraciclina foi verificada por PCR. Dos 28 isolados considerados resistentes por métodos fenotípicos, 42,8% possuíam o gene tet(O), que confere resistência as tetraciclinas. Os resultados mostram um alto nível de resistência antimicrobiana em C. jejuni evidenciando a necessidade da implementação de políticas de uso prudente de antimicrobianos na medicina veterinária. / The use of antimicrobials in a therapeutic, preventive and growth promoting way has brought numerous advantages to the world poultry industry; however, the excessive and undue use of antimicrobials has stimulated an increase in the number of resistant microorganisms. Among them, we highlight Campylobacter jejuni, a bacterium frequently associated with enteritis in humans, with chicken being the main reservoir and source of transmission of this pathogen to man. The transmission of resistant bacteria between animals and humans can result in multi resistant infections and failure in therapeutic treatment, and the continued exposure of these microorganisms to these drugs is the most important factor in the source of resistance. Therefore, the aim of this study was to investigate and characterize, through phenotypic and genotypic methods, the antimicrobial susceptibility of 54 C. jejuni isolates collected at different stages of the processing of chicken meat from slaughterhouse in Rio Grande do Sul. For MIC determination, strains were tested against the following antimicrobials: nalidixic acid, ciprofloxacin, chloramphenicol, erythromycin, gentamicin and tetracycline. Of the 54 isolates of C. jejuni, 94.4% were resistant to ciprofloxacin, 83.3% to nalidixic acid, 51.8% to tetracycline and 48% to erythromycin. All isolates were sensitive to gentamicin and chloramphenicol. Twelve strains were resistant to three different classes of antibiotics, thus being considered multi resistant. To verify the presence of the gene mutation of the Quinolone Resistance Determinant Region (QRDR) in the gene gyrA, gene sequencing of 31 strains considered resistant by phenotypic methods was performed. All strains had the Tre-86-Ile mutation in the QRDR of the gyrA gene, which confers resistance to fluoroquinolones, confirming the predominance of this mutation in Campylobacter spp. resistant to these antimicrobials. The occurrence of tetracycline resistance gene was verified by PCR. Of the 28 strains considered resistant by phenotypic methods, 42.8% had the tet(O) gene. The results show a high level of antimicrobial resistance in C. jejuni that evidences the need for implementation of policies in the prudent use of antimicrobials in veterinary medicine.

Os procedimentos de limpeza e desinfecção usados na produção frangos de corte são fundamentais para a manutenção do alto nível de saúde do plantel, reduzindo o risco de ocorrência de enfermidades e melhorando o desempenho produtivo das aves. Existe a possibilidade de contaminação dos produtos desde a chegada das aves às instalações até o abate. Campylobacter é uma bactéria constantemente encontrada no trato gastrointestinal das aves e merece destaque na produção avícola devido a sua capacidade de provocar enfermidades em humanos. Para evitar a ocorrência de surtos de doenças transmitidas por alimentos como a campilobacteriose, para manutenção da saúde de plantéis avícolas e o aumento da produtividade de lotes de frangos de corte é necessário a realização das práticas preventivas como a limpeza e desinfecção. Desta maneira, o presente estudo teve como objetivos avaliar: o desempenho produtivo em lotes de frangos de corte desafiados com Campylobacter jejuni, a redução da pressão de infecção em instalações submetidas a diferentes protocolos de limpeza e desinfecção, e sua viabilidade econômico-financeira. Foi conduzido protocolo experimental no Laboratório de Pesquisa em Aves do departamento de Nutrição e Produção Animal, da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, Campus Pirassununga. Foram realizados dois alojamentos cada um com 960 pintos de um dia de idade. No primeiro alojamento, todas as aves foram inoculadas com uma cepa conhecida de Campylobacter jejuni (atcc 33560) a fim de contaminar o ambiente criando desafio sanitário. No segundo alojamento foram realizados dois protocolos de limpeza e desinfecção, constituindo os dois tratamentos experimentais (Comum e Proposto). Neste lote, para avaliação da produtividade, foram mensurados os parâmetros: viabilidade, mortalidade, conversão alimentar, ganho de peso e consumo de ração. Para avaliação microbiológica do ambiente e das carcaças foi realizada a contagem total de microrganismos para ambiente e a identificação de Campylobacter spp.. As amostras positivas foram submetidas a um ensaio de PCR multiplex para identificação de espécies de Campylobacter spp. Para avaliação econômica financeira dos lotes de frangos de corte foram utilizados e adaptados os dados de custos de produção elaborados pela Embrapa Suínos e Aves às condições de criação e resultados obtidos no presente estudo. O tratamento Proposto demonstrou influências positivas no desempenho das aves, na redução da contagem total de microrganismos, na eliminação de Campylobacter spp. e viabilidade econômico-financeira / The procedures of cleaning and disinfection used in broiler production are necessary to maintaining a high standard of birds health, decreasing the risk of diseases, optimizing the animal performance, as well as to ensure sanitary quality of meat. There is possibility of contamination in all farming steps, since chicks arrival until the end of slaughter. Campylobacter is a bacteria constantly found at gastrointestinal tract of the birds, and so, a special concern must be given since it can cause human diseases. In order to avoid foodborne illness outbreaks such as campylobacteriosis, to ensure poultry flocks health maintenance and to improve broilers productivity, adopting preventive practices such as cleaning and disinfection is required. Thus, this study aimed to evaluate: the animal performance of broilers challenged with Campylobacter jejuni; the reduction of infection pressure in housing plants subjected to different cleaning protocols and disinfection, and its economic and financial viability. Experimental protocol was conducted at the Research Laboratory of Poultry of Nutrition and Animal Production Department, College of Veterinary Medicine and Animal Science, University of São Paulo, Campus Pirassununga. Two housings each with 960 day-old chicks of age were performed. In the first housing, all birds were inoculated with a known strain of Campylobacter jejuni (ATCC 33560) to contaminate the environment in order to create health challenge. In the second housing were performed two cleaning and disinfection protocols, featuring two experimental treatments (Common and Proposed). In this lot, to evaluate animal performance, the parameters were measured: feasibility, mortality, feed conversion, weight gain and feed intake. For microbiological evaluation of environment and of carcasses, was performed a total count of microorganisms for environmental and identification of Campylobacter spp. The positive samples were subjected to a multiplex PCR assay identification of species of Campylobacter spp. For economic and financial evaluation of batches, the data of husbandry costs elaborated by Embrapa Swine and Poultry were adapted to conditions and rsults obtained in this study. Based on results, the Proposed treatment has shown positive influences on bird performance, reduction of total count of microorganisms, on elimination of Campylobacter spp. and on economic and financial viability

Orientador: Tomomassa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas,. Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-14T11:00:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thome_JacquelineDarcSilva_M.pdf: 1223668 bytes, checksum: 17699f260f82fb8a09136004fcc1e28a (MD5) Previous issue date: 2006 / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

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This epidemiological investigation focussed on <i>Campylobacter jejuni </i>and <i>Campylobacter coli</i> in the north east of Scotland (Grampian). Scotland, in 2007, had an annual incidence of 101.5 cases/100,000 people, while in Grampian this figure was 120/100,000.  <i>C. jejuni </i>and <i>C. coli </i>are ubiquitous and are natural commensals of a range of animals, therefore understanding the epidemiology of these organisms involves identifying their putative sources and monitoring their dynamics in such hosts.  In this study, the use of various epidemiological tools showed that humans are infected from different sources and notably by chicken. Between 2001 and 2006, the population structure of <i>Campylobacter </i>in retail chicken changed  more than in humans, as shown by characterisation by Multilocus sequence typing (MLST).  There was however a high degree of overlap between these respective strains suggesting that chickens are a major source of human infection.  Furthermore, comparison of the same strains using antimicrobial resistance profiles revealed the same commonality of strains. Infection in the high risk 0-4 year old age group was shown to be attributable mainly to chicken in an urban environment but more attributable to cattle in rural areas.  This may reflect relative rates of exposure to these important sources of <i>Campylobacter.</i> Characterisation of a large outbreak in north east Scotland using various typing techniques identified chicken liver paté as a vehicle for <i>C. jejuni </i>infection; multiple strains were identified in the food and more than one patient displayed co-infection with different strains. These investigations have provided useful information which contributes to the overall surveillance of human campylobacteriosis and the epidemiology of <i>Campylobacter </i>in different hosts.

Con el objetivo de caracterizar la fosfolipasa A de la membrana externa (OMPLA E.C. 3.1.1.32) de Campylobacter jejuni aislado de pollos de carne, se estandarizaron métodos para el aislamiento e identificación de la bacteria a partir de hisopados rectales de aves comerciales. Para ello, primero se analizó la presencia de C. jejuni en hisopados cloacales mediante técnicas bacteriológicas y la reacción en cadena de la polimerasa anidada en base a los genes ribosómicos 16S e hipO, las cuales permitierón detectar Campylobacter jejuni en 29/50 (58%) y 48/50 (96%) de las muestras respectivamente. Después, se determinó la secuencia nucleotídica de los genes ribosómicos 16S y flaA del aislado MP4 con la finalidad de tener una cepa nativa de C. jejuni bien caracterizada que se utilice como modelo de estudio para la fosfolipasa A, las secuencias nucleotídicas de estos dos genes mostraron 98% y 92% de similiitud nucleotídica con las de Campylobacter jejuni subs. jejuni ATCC 33560. Las actividades hemolítica y de fosfolipasa A de C. jejuni MP4 fue dependiente de calcio, cuando este ión se reemplazó con EDTA, las actividades disminuyeron de 4119.4 a 44.78 U/mg de proteína. Utilizando cebadores específicos se amplificó y secuenció la parte central del gen pldA de C. jejuni MP4, se obtuvo 225 nucleótidos y 75 aminoácidos. La comparación de la secuencia aminoácidica por el ClustalW mostró 99% y 98% de identidad con las proteínas OMPLA de las cepas de Campylobacter jejuni RM1221 y C.jejuni subsp. jejuni ATCC 33560 respectivamente; esta alta conservación de secuencia aminoacídica de la fosfolipasa A la convierte en una candidata potencial para el diseño de vacunas y pruebas diagnósticas. / --- In order to characterize the Campylobacter jejuni’s outer membrane phospholipase A (OMPLA E.C. 3.1.1.32) from broiler chickens, it was standarized suitable methods for isolation and identification of this bacterium from cloacal swabs of commercial chickens. To that end, first it was analized the presence of C. jejuni in cloacal swabs by using bacteriological techniques and nested-PCR based on 16S ribosomal and hipO genes. The approaches used detected C. jejuni in the 29/50 (58%) and 48/50 (96%) of the samples respectively. Then, it was determined the nucleotidic sequence of 16S ribosomal gene to have a well-characterized native strain for using it as a model in the study of phospholipase A. The nucleotidic sequence of both genes showed 98% and 92% of similarity with Campylobacter jejuni subs. jejuni ATCC 33560. The haemolytic and phospholipase A enzymatic activities of the C. jejuni MP4 strain was calcium-depended, when calcium was replaced by EDTA both activities significantly decreased of 4119.4 to 44.78 U/mg protein. It was amplified and sequenced the central side from pldA gen of C. jejuni MP4 using specific primers. By means of that, it was obtained 225 nucleotides and 75 aminoacids. The comparison of aminoacidic sequences by CLUSTALW showed 99% and 98% of identity with OMPLA proteins from C. jejuni RM1221 and C. jejuni subsp. jejuni ATCC 33560. This high conservation of the aminoacidic sequence of phospholipase A become it into a potential target to design vaccines and diagnostic tests.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Aunque la presencia de Campylobacter jejuni ha disminuido considerablemente en productos avícolas, esta bacteria sigue siendo un riesgo importante para la salud humana. Es por ello que se analizó la presencia de C. jejuni en carne de pollo congelado obtenido de una planta procesadora en Santiago, Chile. Las muestras provinieron de dos plantas faenadoras (A y B) ubicadas en la Región Metropolitana, pertenecientes a la misma planta procesadora. Un total de 300 muestras fueron analizadas, siendo la unidad de muestra una bolsa sellada de 500 gramos, la cual contenía distintos cortes de ave congelada. Las bolsas fueron transportadas manteniendo la cadena de frío y procesadas inmediatamente después de su descongelación. Submuestras de cada bolsa fueron sembradas en caldo de enriquecimiento (caldo Exeter modificado), y luego se determinó la presencia de C. jejuni utilizando paralelamente dos medios de cultivo (mCCDA y Skirrow). Todos los cultivos se observaron macroscópicamente, siendo aquellas colonias sospechosas, verificadas con tinción de gram (bacilo curvo negativo). La determinación de la especie se realizó mediante el esquema de bio-tipificación descrita por Lior (Nachamkin y Blaser, 2000). Según los análisis realizados, la presencia de C. jejuni en carne de ave congelada alcanzó un 12% (36/300). Los porcentajes de presencia en cada planta faenadora fue de 15,15% (20/132) y 9,52% (16/168), para A y B, respectivamente. De acuerdo con los análisis estadísticos realizados, la diferencia entre estas proporciones no fue significativa (p>0,05). Estos valores son menores a los encontrados por Figueroa et al. (1996), quienes determinaron un 37% para muestras similares, lo que podría deberse a un mejor manejo sanitario en el faenamiento de las aves u otros procedimientos realizados a las muestras evaluadas, como por ejemplo en la crianza o transporte. Es posible entonces concluir, según los resultados obtenidos, que C. jejuni estuvo presente en las muestras de carne de ave analizadas, en similar nivel e independientemente de la fuente muestreada (planta faenadora A y B). Los 2 resultados obtenidos muestran la urgente necesidad de determinar la situación actual nacional y específicamente definir los puntos de contaminación dentro del faenamiento, para establecer las posibles medidas de control.