Orientador: Tomomasa Yano / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:05:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Turri_RosimarydeJesusGomes_D.pdf: 4713341 bytes, checksum: a2618f7a635a48396756637f024bcee9 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A patogênese da K.pneumoniae e Ecoli pode ser diretamente influenciada pelos fatores de virulência, dentre os quais encontram-se polissacarídeos capsulares, lipopolissacarídeos tóxicos, adesinas e sistema de aquisição de ferro. Além desses fatores de virulência, muito pouco é conhecido sobre outros fatores que podem participar da patogênese da K.pneumoniae. O presente trabalho estuda os fatores de virulência de K.pneumoniae e Ecoli isoladas de infecções nosocomiais em amostras ESBL (+) e ESBL (-), tendo como objetivos a comparação do grau de patogenicidade e produção de fatores de virulência por essas amostras in vivo e in vitro; a verificação da influência das condições de cultivo sobre a expressão de citotoxinas; o estudo do padrão de adesão em linhagens celulares; análise da influência da dose subinibitória de antibióticos beta-Iactâmicos sobre a produção de fatores de virulência pelas amostras ESBL (+). K.pneumoniae e Ecoli ESBL (+) apresentaram atividades hemolíticas moduladas pelo meio de cultura e pelas condições de cultivo, frente a sangue de eqüino e carneiro. A dose subinibitória do antibiótico estimulou a produção da hemolisina, sobre hemácias de eqüinos em meio Müller-Hinton apenas na presença do oxigênio. A carência de ferro nos meios induziu a produção de hemolisina, independente da aeração para hemácias eqüinas pelas amostras ESBL (+). O sobrenadante das culturas bacterianas apresentou atividade citotóxica em culturas de células HeLa, Vero e HT-29. Amostras ESBL (+) foram mais resistentes à ação bactericida do soro humano normal Que as ESBL (-). O padrão de adesão predominante entre amostras foi do tipo agregativo. Não foi observada diferença no grau de virulência para camundongos entre amostras ESBL (+) e ESBL(-) / Abstract: Virulence factors, such endotoxin, adhesins, cell envelope and the acquisition of iron system may be associated with K. pneumoniae and E. coli pathogenicity. However others virulence factors are not yet studied for understanding pathogeneses of K. pneumoniae. The aim of the present study is the comparation of potential virulence factors in strains of K. pneumoniae and E.coli ESBL (+) and ESBL (-) isolated from nosocomial infections, such characterization of adhesive properties in eukaryotic cells , influence of sub inhibitory dose of beta-Iactams antibiotics in toxins expression and virulence factors production in ESBL (+) strains. K. pneumonia e and E. coli ESBL (+) showed hemolytic activity towards sheep and horse erythrocytes regulated by culture conditions. The sub inhibitory dose of beta lactams antibiotics increased the hemolysin production in Mueller-Hinton agar with horse erythrocytes in oxygen presence. The iron absence in media culture improved the hemolytic activity expression, with horse erythrocytes in ESBL (+) strains independent of oxygen. The bacterial supematant culture showed cytotoxic activity in HeLa, Vero and HT -29 cell lines. The ESBL (+) strains were more resistant to the bactericidal action of normal human serum than the ESBL (-). The aggregative pattern of adherence was the predominant among E. colí and K. pneumoniae and was not observed virulence differences in mice in ESBL (+) and ESBL (-) strains / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Stephen Hyslo / Texto em portugues e ingles / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T22:16:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Buzin_MartaPitali_M.pdf: 1367075 bytes, checksum: 0cb4a0823b2f60768cef97911f39e13a (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Os venenos de insetos da Classe Hymenoptera contêm enzimas, peptídeos, aminas e aminoácidos excitatórios. Neste trabalho, investigamos as atividades enzimáticas e biológicas de um extrato aquoso do saco de veneno (ESV) da vespa social Po/istes lanio lanio. O ESV de P. l. lanio possui baixa atividade fosfodiesterásica, elastásica, fosfatásica (ácida e alcalina) e L-amino-ácido oxidase; moderados níveis de hialuronidase e protease e um alto nível de fosfolipase. A eletroforese (SDS-P AGE) revelou a presença de mais de 10 componentes com pesos moleculares variando de 14.000-100.000. A cromatografia de ESV em Sephacryl S200 HR resultou em sete picos, o primeiro destes contém atividades hemolítica e fosfolipásica. O ESV exibiu uma potente atividade hemolítica direta em eritrócitos humanos, sendo dose (12,5-200 ~g/ml) e tempo (até 5 h) dependente (n=3). Eritrócitos humanos e de cão não foram aglutinados pelo ESV (2,5 mg/ml; n=3). Comparado ao ADP (3 lJM), ESV (50-400 ~g/ml) produziu uma agregação dose¬ dependente fraca em plasma humano rico em plaquetas (n=3). Por outro lado, ESV (400 ~g/ml) não agregou plaquetas humanas lavadas, porém desencadeou agregação por doses não agregantes de trombina (n=3). Em íleo isolado de rato, o ESV produziu contrações dose-dependente (4-16 ~g/ml), as quais não foram afetadas pelo pré-tratamento do tecido com atropina (antagonista de receptor muscarínico, 0,6 ~g/ml) ou ciproheptadina (antagonista de histamina e serotonina, 0,2 ~g/ml), mas foram completamentes abolidas pelo HOE-140 (1 ~g/ml, n=3), antagonista do receptor B2 da bradicinina, sugerindo a presença de cininas no ESV. Estes resultados indicam que as atividades enzimáticas e biológicas do ESV de P. l. lanio são similares às de outras vespas sociais / Abstract: Hymenopteran venoms contain enzymes, peptides, amines and excitatory amino acids. We have examined the enzymatic and biological activities of an aqueous venom sac extract (VSE) ITom the Brazilian social wasp Po/istes lanio lanio. The VSE had low phosphodiesterase, elastase, acid and alkaline phosphatase and L-amino acid oxidase activities, moderate levels of hyaluronidase and protease and high phospholipase activity. SDS-P AGE revealed the presence of several components with molecular weights of 14,000-100,000. Gel filtration ofVSE resulted in seven peaks, the first ofwhich contained the hemolytic and phospholipase activities. The VSE exhibited potent direct hemolytic activity on human erythrocytes which was dose- (12.5-200 ~g!ml) and time- (up to 5 h) dependent. VSE (50-400 ~g!ml) produced weak, dose-dependent aggregation of human platelet-rich plasma and did not aggregate human washed platelets (400 ~g!ml), but potentiated the responses to non-aggregatory doses of thrombin. Dog and human erythrocytes were not agglutinated by VSE (2.5 mg!ml). In the rat isolated ileum, VSE (4-16 ~g!ml) produced contractions which were not prevented by atropine (muscarinic receptor antagonist, 0.6 ~g!ml) or cyproheptadine (histamine and serotonin receptor antagonist, 0.2 ~g!ml), but were abolished by the bradykinin B2 receptor antagonist HOE¬140 (1 ~g/ml), suggesting the presence of kinins. These results indicate that the composition of P. 1. lanio VSE is similar to that of other wasp species / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Konradin Metze, Miriam Aparecida da Silva Trevisan / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-01T21:40:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sa_AngelaCurydeMello_M.pdf: 10579190 bytes, checksum: 3e04615de323eedfeef98ac978015de8 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A saponina é um grupo de hemolisinas enzimáticas derivado de uma variedade de plantas, pode ser útil na preparação de amostras hemorrágicas, limpando as hemácias do material de fundo da lâmina. O objetivo de nosso estudo foi investigar se a saponina pode ser usada na remoção de hemácias do material de fundo na rotina, esfregaços citológicos secos ao ar em comparação com fixados imediatamente. A preparação de amostra citológica de figado e linfonodo de cães foi realizada em quadruplicata (imediatamente após a morte do animal) e processada da seguinte maneira: 1. Grupo SFX - Esfregaços foram imediatamente colocados na solução fixadora SFX, composta por 1:1 de álcool a 95% e de formalina tamponada ,e 0,1% de saponina. 2. Coloração convencional (SE) - Esfregaços foram deixados secar ao ar por 30 minutos depois corados por Leishmann. 3. Pós-fixação com álcool 95% (AL) - Esfregaços secos ao ar foram reidratados e incubados em solução de saponina a 0,1%. Depois fixados em álcool 95% e corados pela técnica de coloração modificada GiemsalHematoxilina-Eosina. 4. Pós-fixação com álcool-formol (ALFO) - Esfregaços secos ao ar foram reidratados e incubados em solução de saponina a 0,1%. Depois fixados em álcool-formol e corados pela técnica de coloração modificada Giemsa/Hematoxilina-Eosina...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Saponins, a group of enzyrnatic hemolysins derived from a variety of plants, may be helpful in the preparation of hemorrhagic cell samples by clearing the background. The aim of our study was to investigate, whether saponin may be helpful in removing the red cell background in routine, air-dried cytologic preparations in comparison with immediately fixed slides. Cytologic touch preparations from liver and lymph nodes from mongrel dogs were processed as following: 1. SFX group - Smears were immediately put into the fixative SFX, composed of an aqueous, phosphate buffered solution containing 50% ethanol and 2% formldehyde and 0,1% saponin. 2. Conventional staining (SE) - Smears were air-dried for at least 30 minutes and than stained according to Leishmann. 3. Alcohol- postfixation (AL) - Air dried smears were rehydrated and incubated in a 0,1% saponin solution and then fixed in 95% alcohol and stained with the modified Giemsa-haematoxilin staining. 4. Formol-Alcohol postfixation(FoAL)- Air dried smears were rehydrated and ineubated in a 0,1% saponin solution and then fixed in formalin-alcohol solution and stained with the modified Giemsa-haematoxilin staining...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Anatomia Patologica / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Nilce Correa Meirelles / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T14:46:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Malheiros_SoniaValeriaPinheiro_D.pdf: 7935126 bytes, checksum: 3b030641c196f94bbc7a635c9b2d7f7d (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: O presente trabalho reporta um estudo da interação do antipsicótico trifluoperazina (TFP), do anestésico local dibucaína (OSC) e do antihelmíntico praziquantel (PZQ) com membranas biológicas e sintéticas. A interação droga-membrana foi estudada através da determinação do coeficiente de partição das drogas entre vários sistemas de membrana e água, e também pela monitoração da atividade hemolítica (determinação das razões efetivas drogas/lipídio para proteção e indução de lise, determinação do efeito térmico envolvido na hemólise, análise morfológica e determinação do perfil de eluição de lipídios). Além do estudo da contribuição do grau de ionização da TFP e da OSC na interação com membranas. A TFP apresentou o maior coeficiente de partição em todas as membranas e a melhor eficácia hemolítica, seguida pela OSC e pelo PZQ. A maior partição da TFP em relação à OSC deve-se às interações específicas com as proteínas da membrana bem como à contribuição da maior concentração da forma neutra em pH 7,4. A proteção induzida pelos xenobióticos em condições hiposmóticas está diretamente relacionada à hidrofobicidade dos compostos e é produzida pela inserção das formas monoméricas na membrana em concentrações inferiores às de saturação da membrana. A razão efetiva drogallipídio para a hemólise isosmótica induzida pela TFP ocorre muito antes de uma real saturação da membrana, enquanto que as razões efetivas drogallipídio para OSC e PZQ refletem uma real saturação da membrana. A hidrofobicidade parece ser um fator determinante na lise isosmótica induzida pelos xenobióticos embora fatores como a propriedade de agregação da TFP e a baixa solubilidade do PZQ tenham sido fundamentais para a indução ou inibição da hemólise. A hemólise induzida pela TFP e pela OSC são processos predominantemente entálpicos onde os eventos que mais contribuem são: a interação específica com proteínas da membrana e a formação de micelas mistas, no caso da TFP, e, a intercalação do monômero na membrana, no caso da OSC. Todos os xenobióticos estudados induziram estomatocitose e promoveram eluição de fosfolipídios e colesterol, no entanto a saída de lipídios não está proporcionalmente relacionada à hemólise. Os resultados obtidos sugerem que distintos mecanismos celulares de interação com a membrana são responsáveis pelos mecanismos de citotoxicidade de cada droga e revelam a multiplicidade de fatores (hidrofobicidade, solubilidade, grau de ionização, propriedades de agregação, afinidade específica por determinado componente da membrana e efeitos estéricos) que devem ser considerados na interpretação do fenômeno hemolítico ou, de uma maneira mais genérica, da interação de anfifílicos com membranas biológicas / Abstract: The present work reports a study of the interaction of the antipsychotic trifluoperazine (TFP), the local anesthetic dibucaine (DBC) and the antihelminthic praziquantel (PZQ) with biological and synthetic membranes. The drug-membrane interaction was studied by the determination of the partition coefficient of the drugs between various membrane systems and water, and by monitoring the hemolytic activity (determination of drugllipid ratios for protection and Iysis), determination of the thermal effect involved in hemolysis, morphological analysis and determination of the release of membrane lipids). In addition the study of TFP and DBC ionization contribution to membrane interaction was performed. TFP presented the higher partition coefficient in ali studied membranes and the higher hemolytic efficacy, followed by OSC and PZQ. The higher partition of TFP in relation to OSC is due to the specific interaction with membrane proteins and to the greater contribution of the neutral form at pH 7.4. The protection induced by the drugs in hyposmotic conditions is directly related to the compounds' hydrophobicity and it is triggered by the monomeric drug partition into membrane, in lower concentrations than those required for membrane saturation. The effective drugllipid ratio in the isosmotic hemolysis induced by TFP occurs before membrane saturation while for OSC and PZQ the Iytic drugllipid ratio reflect a real membrane saturation. The hydrofobicity seems to be a determinant factor in the induced Iysis although factors as TFP aggregative property and the low solubility of PZQ have became incisive to the induction or inhibition of hemolysis. The TFP and OSC induced Iysis are primarily enthalpyc process in which the events that more effectively contribute are the specific membrane protein interaction and micelle-mixed formation in case of TFP, and the monomer intercalation into membrane, for DBC. Ali the studied drugs induced stomatocytosis. The phospholipid and cholesterol release induced by the drugs are not directly related to hemolysis. The results presented suggest that distinct pathways are responsible for the Iytic effect induced for each drug and reveal the plurality of factors (hydrofobicity, solubility, ionization degree, aggregative properties, specific affinity for membrane components and steric effects) that must be considered in the interpretation of the hemolytic phenomenon or, in a more general view, the interaction of amphiphiles with biological membranes / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Ciências Biológicas

Orientadores: Tomomasa Yano, Gleize Villela Carbonell / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:30:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simi_Silvia_D.pdf: 1868819 bytes, checksum: 9a81841182a9a5aad432040a917e03f8 (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-11-24Bitstream added on 2014-06-13T19:49:43Z : No. of bitstreams: 1 pigossi_ft_me_araiq.pdf: 1126356 bytes, checksum: 760162fd7a380d3e6dcbce0c956356a5 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Stichodactyla helianthus é uma anêmona relativamente abundante nos mares de Cuba apresentando grande potencialidade como fonte de peptídeos biologicamente ativos. Dentre estes peptídeos, estão duas citolisinas: as esticolisinas I (St I) e II (St II). Essas duas toxinas possuem como principal característica a capacidade de formação de poros em eritrócitos, ou seja, alta atividade hemolítica (AH), no entanto a St II é mais hemolítica que a St I. Tendo em vista que as principais alterações que diferenciam estas citolisinas (St I e St II) estão na região amino-terminal (primeiros 30 resíduos), este trabalho teve como um dos objetivos sintetizar e comparar fragmentos amino-terminais destes polipeptídeos, visando entender a diferença de atividade hemolítica. Os resultados obtidos mostraram que os peptídeos St I 12-31 e St II 11-30 possuem a mesma atividade hemolítica. Esse dado mostra que a alteração de Glu por Gly e de Gln por Glu não afeta a atividade hemolítica dos mesmos. Já os peptídeos St I 1-31 e St II 1-30, respectivamente, mostraram diferenças em suas atividades hemolíticas, estas diferenças de atividade podem estar relacionadas à região dos resíduos de 1 a 10 da seqüência peptídica. Outro resultado interessante foi que o peptídeo St I 2-31 (sem o resíduo de serina N-terminal) apresentou AH intermediária entre os St I 1-31 e St II 1-30, mostrando que a adição da serina à St I é responsável por parte da perda da atividade desta citolisina. Outro objetivo deste trabalho foi avaliar a importância da polaridade da extremidade amino-terminal da esticolisina II. Para isto, fragmentos peptídicos contendo a região amino-terminal da St II, marcado com Trp na posição 2, foi sintetizado alterando-se a carga desta extremidade (acetilado, acrescido de Ser, Asp ou Lys) / Stichodactyla helianthus is a relatively abundant sea anemone found in the seas of Cuba, presenting a largely potent source of biologically active peptides. Among these peptides, are two citolysins: the sticholysins I (St I) and II (St II). These two toxins possess as main characteristic the capacity of forming pores in erythrocytes, in other words, high hemolytic activity (HA), however, the St II is more hemolytic than the St I. As far as we know that the main alterations that differentiate the proteins St I and St II are in the region amino-terminal (first 30 residues), this study has as one of the objectives the synthesizing and comparing of amino-terminal fragments of those polypeptides aiming to understand the difference of hemolytic activities. The results obtained had shown that the peptides St I 12-31 and St II 11-30 possess the same hemolytic activity. This data sample shows that the alteration of Glu for Gly and Gln for Glu does not affect the hemolytic degree of the same ones. Even then the peptides St I 1-31 and St II 1-30, respectively, had sample differences in its hemolytic activity, indicating that the different activities can be related within the region of 1 the 10 of the sequence. Another interesting result was that the peptides St I 2-31 (without the serine residue N-terminal) presented intermediary AH between St I 1-31 and St II 1-30, showing that the addition of the serine to St I is responsible for part of the losing activity in this citolysin. Another objective of this study is to evaluate the importance of polarity of the extremity amino-terminal of sticholysin II. To do this, the peptides containing the region amino-terminal of St II, marked with Trp in position 2, was synthesized changing the load of this extremity (acetylated, increased of Ser, Asp or Lys)

Orientadores: Sonia Valeria P. Malheiros Marques Fernandes, Eneida de Paula / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:19:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Domingues_CleytonCrepaldi_M.pdf: 4439591 bytes, checksum: 806cbfd68fabc115f2daee1adf79c396 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: No processo de solubilização de lipídios e proteínas de membrana a escolha do surfatante é um passo fundamental. Um conhecimento detalhado das propriedades do surfatante se faz necessário na sua utilização em membranas biológicas. Neste trabalho determinamos algumas propriedades físico-químicas de dois novos surfatantes zwiteriônicos do tipo amidosulfobetaína, ASB-14 e ASB-16, e avaliamos seus efeitos sobre a solubilização de membranas eritrocitárias e suas proteínas. O ASB-16 por apresentar maior cauda hidrofóbica apresentou valor de CMC (concentração micelar crítica) cerca de 10 vezes menor que seu análogo ASB-14 nas condições estudadas (em água e em tampão PBS 5 mM, pH 7,4 a 25°C). Aplicando-se o tratamento clássico de Lichtenberg aos testes hemolíticos encontramos que o ASB-16 possui maior afinidade pelo ambiente membranar e seu efeito de solubulização sobre membranas eritrocitárias ocorre, portanto, em baixas razões surfatante/lipídio. O maior valor de partição e menor valor de CMC obtidos para o ASB-16 justificam seu efeito hemolítico superior. Além disso, ASB-14 e ASB-16 apresentaram efeitos hemolíticos superiores ao clássico Triton X-100. Dessa forma, esses resultados demonstraram que o comportamento agregativo e a interação hidrofóbica estão fortemente relacionados ao processo de solubilização. A solubilização das proteínas da membrana eritrocitária promovida pelo uso dos surfatantes ASB-14, ASB-16, CHAPS e Triton X-100 foi avaliada através da técnica de eletroforese bidimensional. Apesar do CHAPS solubilizar o maior número de proteínas que os demais surfatantes utilizados, o ASB-14 e ASB-16 mostraram-se capazes de solubilizar proteínas diferentes além de promoverem um aumento da solubilização de algumas proteínas. Portanto, nas condições experimentais utilizadas, a diferença entre o perfil de solubilização das proteínas e o efeito hemolítico induzido pelos surfatantes sugere que o fenômeno de hemólise não ocorre proporcionalmente à saída de proteínas da membrana. Os resultados obtidos nesse estudo sugerem que o uso de ASB-14 e ASB-16 em processos de solubilização de membranas e suas proteínas pode ser promissor e mais estudos sobre eles devem ser realizados / Abstract: The choice of a surfactant is one of the most important steps for lipid and membrane proteins solubilization. A detailed knowledge of the surfactant properties is very useful for its application into membrane studies. In this work, we determined physicochemical properties of two novel zwitterionic amidosulfobetaine surfactants, ASB14 and ASB-16, and their solubilization properties on erythrocyte membrane's lipids and proteins. For ASB-16, with a longer hydrophobic tail, the value of CMC (critica I micelle concentration) was about ten times smaller than that of ASB-14, both in water and in 5 mM PBS, pH 7.4, at 25°C. By applying a classical treatment for the interpretation of the hemolytic tests, we found that ASB-16 presents higher affinity for the membrane environment, 50 that, its effect on the erythrocyte membrane solubilization occurs at a small surfactant/lipid molar ratio. The higher partition coefficient value and lower CMC value obtained for ASB-16 explain its higher hemolytic effect, in comparison to ASB-14. Furthermore, ASB-14 and ASB-16 showed higher hemolytic activity than Triton X-100, a classic surfactant. These results showed that the aggregative phenomenon and hydrophobic interaction are strongly involved in the membrane solubilization process. The solubilization of erythrocyte membrane associated proteins, using ASB-14, ASB-16, CHAPS and Triton X-100, was evaluated through two-dimensional electrophoresis. Although CHAPS have solubilized more proteins than the others surfactants, ASB-14 and ASB-16 increased the solubilization of some proteins and different spots were observed. In the experimental conditions studied, the difference between the protein solubilization and the Iytic effect induced by surfactants suggest that the hemolytic phenomenon does not occur proportionally with the proteins release from the membrane. The results obtained in this study suggest that the use of ASB-14 and ASB-16 on biomembranes and their protein solubilization can be promising and further studies about them should be carried out / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Eduardo Maffud Cilli / Banca: Antonio de Miranda / Banca: Hosana Maria Debonsi Navickiene / Resumo: A Stichodactyla helianthus é uma anêmona relativamente abundante nos mares de Cuba apresentando grande potencialidade como fonte de peptídeos biologicamente ativos. Dentre estes peptídeos, estão duas citolisinas: as esticolisinas I (St I) e II (St II). Essas duas toxinas possuem como principal característica a capacidade de formação de poros em eritrócitos, ou seja, alta atividade hemolítica (AH), no entanto a St II é mais hemolítica que a St I. Tendo em vista que as principais alterações que diferenciam estas citolisinas (St I e St II) estão na região amino-terminal (primeiros 30 resíduos), este trabalho teve como um dos objetivos sintetizar e comparar fragmentos amino-terminais destes polipeptídeos, visando entender a diferença de atividade hemolítica. Os resultados obtidos mostraram que os peptídeos St I 12-31 e St II 11-30 possuem a mesma atividade hemolítica. Esse dado mostra que a alteração de Glu por Gly e de Gln por Glu não afeta a atividade hemolítica dos mesmos. Já os peptídeos St I 1-31 e St II 1-30, respectivamente, mostraram diferenças em suas atividades hemolíticas, estas diferenças de atividade podem estar relacionadas à região dos resíduos de 1 a 10 da seqüência peptídica. Outro resultado interessante foi que o peptídeo St I 2-31 (sem o resíduo de serina N-terminal) apresentou AH intermediária entre os St I 1-31 e St II 1-30, mostrando que a adição da serina à St I é responsável por parte da perda da atividade desta citolisina. Outro objetivo deste trabalho foi avaliar a importância da polaridade da extremidade amino-terminal da esticolisina II. Para isto, fragmentos peptídicos contendo a região amino-terminal da St II, marcado com Trp na posição 2, foi sintetizado alterando-se a carga desta extremidade (acetilado, acrescido de Ser, Asp ou Lys) / Abstract: Stichodactyla helianthus is a relatively abundant sea anemone found in the seas of Cuba, presenting a largely potent source of biologically active peptides. Among these peptides, are two citolysins: the sticholysins I (St I) and II (St II). These two toxins possess as main characteristic the capacity of forming pores in erythrocytes, in other words, high hemolytic activity (HA), however, the St II is more hemolytic than the St I. As far as we know that the main alterations that differentiate the proteins St I and St II are in the region amino-terminal (first 30 residues), this study has as one of the objectives the synthesizing and comparing of amino-terminal fragments of those polypeptides aiming to understand the difference of hemolytic activities. The results obtained had shown that the peptides St I 12-31 and St II 11-30 possess the same hemolytic activity. This data sample shows that the alteration of Glu for Gly and Gln for Glu does not affect the hemolytic degree of the same ones. Even then the peptides St I 1-31 and St II 1-30, respectively, had sample differences in its hemolytic activity, indicating that the different activities can be related within the region of 1 the 10 of the sequence. Another interesting result was that the peptides St I 2-31 (without the serine residue N-terminal) presented intermediary AH between St I 1-31 and St II 1-30, showing that the addition of the serine to St I is responsible for part of the losing activity in this citolysin. Another objective of this study is to evaluate the importance of polarity of the extremity amino-terminal of sticholysin II. To do this, the peptides containing the region amino-terminal of St II, marked with Trp in position 2, was synthesized changing the load of this extremity (acetylated, increased of Ser, Asp or Lys) / Mestre

Orientador: Joelcio Francisco Abbade / Banca: José Carlos Peraçoli / Banca: Francisco Lázaro Pereira de Souza / Resumo: INTRODUÇÃO: A síndrome HELLP é uma complicação severa da pré-eclâmpsia, caracterizada por hemólise, elevação das enzimas hepáticas e trombocitopenia. Apesar de haver padronização dos valores laboratoriais que definem a síndrome HELLP, ainda existe dificuldade para a caracterização da hemólise. OBJETIVO: Avaliar o valor de haptoglobina que determina a hemólise nas pacientes com síndrome HELLP. MÉTODOS: estudo transversal e prospectivo de gestantes e puérperas com de pré-eclâmpsia. Exame laboratorial avaliado: dosagem sérica de haptoglobina. Construção da curva ROC para determinar o valor de corte da haptoglobina para diagnóstico de hemólise na síndrome HELLP. RESULTADOS: O valor da haptoglobina para diagnóstico de hemólise em pacientes com síndrome HELLP foi de 0,26g/L. DISCUSSÃO: A melhor correlação observada foi a haptoglobina com a DHL, indicando que este é o melhor marcador de hemólise intravascular para o diagnóstico da síndrome HELLP. CONCLUSÃO: A dosagem sérica da haptoglobina nos casos de pré-eclâmpsia deve fazer parte dos exames de rotina para diagnóstico de hemólise intravascular da síndrome HELLP / Abstract: CONTEXT: HELLP syndrome is a severe complication of pre-eclampsia, caracterized by hemolysis, elevated liver enzymes and low platelet count. Although there are standardized laboratory values that define the HELLP syndrome, the difficulty still exists for the characterization of hemolysis. PURPOSE: to evaluate the haptoglobin value to diagnose the hemolysis in HELLP syndrome. METHODS: transversal and prospective study of pregnant and postdelivery women with pre-eclampsia. Laboratory tests evaluated: serum haptoglobin. ROC curve to determine the cutoff value of haptoglobin in the diagnosis of hemolysis in HELLP syndrome. RESULTS: The haptoglobin value for hemolysis diagnosis in HELLP syndrome was 0.26 g / L. DISCUSSION: The best correlation was with haptoglobin and DHL, indicating that this is the best marker of intravascular hemolysis for the diagnosis of HELLP syndrome. CONCLUSION: Serum haptoglobin in cases of pre-eclampsia should be part of routine tests for diagnosis of intravascular hemolysis in HELLP syndrome / Mestre

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-08Bitstream added on 2015-01-26T13:30:38Z : No. of bitstreams: 1 000797817.pdf: 449554 bytes, checksum: 7adc756b2ac04e5d1cbc6be34fa7a04e (MD5) / Introdução: A síndrome HELLP é uma complicação severa da pré-eclâmpsia, caracterizada por hemólise, elevação das enzimas hepáticas e trombocitopenia. Apesar de haver padronização dos valores laboratoriais que definem a síndrome HELLP, ainda existe dificuldade para a caracterização da hemólise. OBJETIVO: Avaliar o valor de haptoglobina que determina a hemólise nas pacientes com síndrome HELLP. MÉTODOS: estudo transversal e prospectivo de gestantes e puérperas com de pré-eclâmpsia. Exame laboratorial avaliado: dosagem sérica de haptoglobina. Construção da curva ROC para determinar o valor de corte da haptoglobina para diagnóstico de hemólise na síndrome HELLP. RESULTADOS: O valor da haptoglobina para diagnóstico de hemólise em pacientes com síndrome HELLP foi de 0,26g/L. DISCUSSÃO: A melhor correlação observada foi a haptoglobina com a DHL, indicando que este é o melhor marcador de hemólise intravascular para o diagnóstico da síndrome HELLP. CONCLUSÃO: A dosagem sérica da haptoglobina nos casos de pré-eclâmpsia deve fazer parte dos exames de rotina para diagnóstico de hemólise intravascular da síndrome HELLP / Context: HELLP syndrome is a severe complication of pre-eclampsia, caracterized by hemolysis, elevated liver enzymes and low platelet count. Although there are standardized laboratory values that define the HELLP syndrome, the difficulty still exists for the characterization of hemolysis. PURPOSE: to evaluate the haptoglobin value to diagnose the hemolysis in HELLP syndrome. METHODS: transversal and prospective study of pregnant and postdelivery women with pre-eclampsia. Laboratory tests evaluated: serum haptoglobin. ROC curve to determine the cutoff value of haptoglobin in the diagnosis of hemolysis in HELLP syndrome. RESULTS: The haptoglobin value for hemolysis diagnosis in HELLP syndrome was 0.26 g / L. DISCUSSION: The best correlation was with haptoglobin and DHL, indicating that this is the best marker of intravascular hemolysis for the diagnosis of HELLP syndrome. CONCLUSION: Serum haptoglobin in cases of pre-eclampsia should be part of routine tests for diagnosis of intravascular hemolysis in HELLP syndrome