Résumé : Le “Suppressor of cytokine signaling -1” (SOCS1) est une protéine de 24 kD qui fonctionne principalement comme un régulateur négatif des voies de signalisation intracellulaires. SOCS1 inhibe l’axe JAK-STAT et induit l’ubiquitylation et la dégradation de certaines protéines cibles. L’expression de SOCS1 est diminuée par l’hyperméthylation de son promoteur dans plus de 65% des cas de carcinome hépatocellulaire. Les souris déficientes en SOCS1 ne survivent que trois semaines après la naissance à cause d’une hyperinflammation induite par IFN-[gamma]. Afin d’étudier le rôle anti tumoral de SOCS1 dans le foie, nous avons utilisé les souris Socs1[indice supérieur -/-]Ifng[indice supérieur -/-], Ifng[indice supérieur -/-] et les souris de type sauvage. Nous avons démontré que le taux de la régénération du foie après une hépatectomie partielle était augmenté chez les souris déficientes en SOCS1. De plus, les souris Socs1[indice supérieur -/]-Ifng[indice supérieur -/-] étaient plus susceptibles pour le développement des nodules hépatiques suite à un traitement avec diethylnitrosamine (DEN). Par contre, les souris déficientes en IFN-[gamma] ont démontré une résistance contre le cancer du foie. Néanmoins, au contraire de nos attentes préliminaires, nous n’avons pas observé une augmentation des taux sériques d’IL-6. Pourtant, la prolifération compensatoire et la synthèse de l’ADN étaient élevées chez les souris SOCS1 KO. Afin d’expliquer cette observation, nous avons étudié l’activation de p53. Nous n’avons pas trouvé une réponse différente de stabilisation ni de phosphorylation de p53 (Ser15) après traitement au cisplatin (in vitro) ou DEN (in vivo). Par contre, nous avons observé que l’expression du gène Cdkn1a était élevée chez les hépatocytes déficients en SOCS1. De plus, l’expression ectopique de SOCS1 pouvait supprimer l’expression de p21 chez les cellules HepG2 traitées au cisplatin. Nous avons aussi constaté que la stabilité de p21 était augmentée chez les hépatocytes primaires déficients en SOCS1. En effet, SOCS1 induisait l’ubiquitylation et la dégradation de p21. SOCS1 pouvait interagir avec p21 par son domaine SH2. De plus, SOCS1 pouvait contrôler la localisation cytoplasmique de p21 en régulant l’activité d’AKT. Bien que p21 soit connu comme un inhibiteur du cycle cellulaire, il peut également participer à l’assemblage des complexes CDK4-Cyclin D. Nous avons démontré que l’expression de p21 et des cyclines de type D était augmentée chez les souris déficientes en SOCS1 après l’hépatectomie partielle. En diminuant l’expression de p21 par shRNA, nous avons empêché la réponse proliférative des hépatocytes SOCS1 KO. Finalement, nous avons trouvé que l’expression élevée de p21 chez les hépatocytes déficients en SOCS1 rendait les cellules plus résistantes contre l’apoptose. En conclusion, nos résultats suggèrent que SOCS1 protège contre le cancer du foie par la régulation des activités oncogéniques de p21. // Abstract : Suppressor of cytokine signaling - 1 (SOCS1) is an inducible 24 kD protein that principally acts as a negative regulator of different intracellular signaling pathways. SOCS1 exerts its regulatory feedback by blocking the JAK - STAT axis and inducing ubiquitylation and subsequent proteasomal degradation of target proteins. The gene coding for Socs1 has a CpG - rich promoter and can be methylated by methyltransferases. SOCS1 is silenced due to hypermethylation of its promoter in almost 65% of hepatocellular carcinoma cases. SOCS1 deficient mice cannot survive more than three weeks of age because of enhanced IFN - [gamma] induced inflammation. To better understand the tumor suppressor role of SOCS1 in the liver we used Socs1[superscript - / -]Ifng[superscript - / -], while Ifng[superscript - / -] and wild type mice served as controls. We found that SOCS1 deficient mice showed accelerated liver regeneration following standard partial hepatectomy (PH). Moreover, Socs1 null mice were susceptible to development of hepatic nodules after treatment with diethylnitrosamine (DEN). Interestingly, the IFN - [gamma] deficient mice showed reduced number of liver tumors. In contrast to our preliminary expectations, we did not observe elevated IL - 6 serum levels in SOCS1 deficient mice compared to the controls. Nevertheless, loss of SOCS1 was associated with increased compensator y proliferation and DNA synthesis after PH and DEN treatment. To find an explanation for the increased tumorigeneis in the SOCS1 deficient liver, we examined the activation of p53 and its target genes. Although we observed neither a variable phosphorylation (Ser15), nor an impaired stabilization of p53 after cisplatin ( in vitro ) or DEN treatment ( in vivo ), Cdkn1a expression was increased in the absence of SOCS1. We also found that ectopic expression of SOCS1 could suppress the mRNA levels of p21 in HepG2 cells treated with cisplatin. In addition, we found that loss of SOCS1 increased p21 stability in hepatocytes and that SOCS1 could induce p21 ubiquitylation and subsequent proteasomal degradation. We showed that SOCS1 could bind directly to p21 via its SH2 domain. Furthermore, in SOCS1 deficient hepatocytes, p21 was retained in the cytosol in an AKT dependent fashion. While classically known as a cell cycle inhibitor, p21 can promote the assembly and kinase activity of CDK4 - cyclin D complexes. We showed that D - type cyclins and p21 levels were increased in the liver of SOCS1 deficient mice following PH. Suppression of p21 by transient shRNA transfection in SOCS1 deficient primary hepatocytes could reverse their increased proliferative response to mitogens. Finally, we found that increased p21 expression in SOCS1 deficient hepatocytes renders them resistant to apoptosis. In conclusion, our findings suggest that SOCS1 protects against liver cancer via inhibiting the oncogenic potential of p21.

Le carcinome hépatocellulaire (CHC) présente des mutations génétiques qui altèrent les principales voies de signalisation, notamment la voie Wnt/β-caténine. En absence de mutation génétique, certains CHC peuvent montrer une activité Wnt exacerbée suite à une inactivation épigénétique d’inhibiteurs ou à une surexpression de ligands Wnts ou de ses récepteurs. De plus, le remodelage de la matrice extracellulaire favorise la progression du CHC. Nous avons montré une association entre l’activation du signal Wnt et le remodelage de la matrice extracellulaire (MEC) dans les cirrhoses et le CHC. Puis modélisé in vitro, les effets des stimuli Wnt extracellulaires sur le phénotype de cellules hépatiques, en absence de mutation de la β-caténine. En effet, les cellules HepaRG ne présentent pas de mutations de la β-caténine, de l’axine et de p53. Ainsi, la stimulation Wnt3a des cellules HepaRG induisait la formation de palissades de cellules fusiformes. De plus, les cellules traitées exprimaient des taux élevés de αSMA, COLIV, c-MYC, CK19 et LGR5 suggérant un phénotype myofibroblastique, en accord avec l’expression des marqueurs de transition épithélio-mésenchymateuse (TEM), SNAIL et TWIST. Ces données sont en faveur du rôle déterminant du microenvironnement Wnt activé dans la progression du CHC entrainant les cellules vers un phénotype progéniteur plus agressif via une TEM. En outre, l'analyse in silico de la signature transcriptomique de l'activation non mutationnelle de la voie Wnt a révélé un réseau de gènes impliqués dans le remodelage de la MEC, la TEM et la différenciation cellulaire. Les résultats suggèrent le rôle de HAPLN1 qui affecterait la migration cellulaire et l'expression des gènes de la MEC. De plus, LGR5 semble favoriser la dédifférenciation des hépatocytes. Au total, 8 gènes marqueurs obtenus in vitro ont été validés in vivo dans une série de 81 CHC humains, par qPCR et immunohistochimie en utilisant des tissus micro-array (78 CHC et 5 foies contrôles). Au total, l'ensemble des données suggère que HAPLN1 a une valeur pronostique sur la récidive et la survie globale du CHC. HAPLN1semble être indépendant du statut mutationnel la β-caténine et des variables cliniques. De plus, sa valeur pronostique est additive avec celle de CK19 + EpCAM et il semble agir en synergie avec NOG. / Hepatocellular carcinoma (HCC) displays signaling pathway disorders, including Wnt/β-catenin. Up-regulation of extracellular Wnt pathway agonists and down-regulation of extracellular Wnt pathway inhibitors result in non-mutational activation of Wnt signaling. In addition, increased extracellular matrix remodeling fosters HCC progression. Thus, we showed that enhanced Wnt signaling is associated with extracellular matrix remodeling in human cirrhosis and cancer. To further investigate non-mutational Wnt pathway activation, we established a model of Wnt activation in HepaRG human HCC progenitor cells carrying wild-type β-catenin, axin and p53. HepaRG progenitor cells treated with Wnt3a became fusiform and grew in palisades with enhanced expression of αSMA, COLIV, CK19, c-MYC, LGR5, SNAIL and TWIST, suggesting that enhanced extracellular Wnt signaling may drive HCC cells toward a more aggressive progenitor and epithelial mesenchymal transition (EMT) phenotype. Moreover, in silico analysis of the transcriptomic signature of non-mutational Wnt activation revealed a gene network involved in ECM remodeling, EMT and cell fate. Results suggest a role of HAPLN1, affecting extracellular matrix gene expression and cell migration and of LGR5 in hepatocyte dedifferentiation. Eight genes among the HepaRG gene expression dataset were validated in vivo in a collection of 81 human HCC samples and controls by qPCR and immunohistochemistry using tissue micro-arrays (78 HCC samples and 5 normal livers) in the light of β-catenin activation and mutational status. In conclusion, data suggest that HAPLN1 has a prognostic value on overall survival and recurrence of HCC. HAPLN1 appears to be independent of clinical features and β-catenin mutationnal status. Moreover, HAPLN1 appears to have an additive prognostic value with CK19 + EpCAM and act synergistically with NOG.

Le stress oxydatif peut conduire à la sénescence, à l'apoptose et à la mutagenèse. Les cellules cancéreuses peuvent développer un avantage prolifératif sur les cellules normales dans un environnement de stress oxydatif, qui de ce fait, participe à la progression tumorale. Nous émettons l'hypothèse que MK2, une cible directe de la p38 MAPK, pourrait conférer aux cellules de cancer du foie une résistance au stress oxydatif. Dans quatre lignées cellulaires tumorales hépatobiliaires, l'inhibition pharmacologique de MK2, MK2i, augmente la mort cellulaire induite par le stress oxydatif par une diminution de l'activité de Hsp27 et une augmentation du niveau du suppresseur de tumeur p53. MK2 favorise la survie cellulaire via l'activation de la réponse anti-oxydante Nrf2 et de la voie d'HB-EGF/EGFR. MK2 est également responsable de la production d'Il-8 induite par le stress oxydatif. Cette augmentation semble dépendre de Hsp27. De plus, nous avons identifié la protéine d'échafaudage EBP50 comme une nouvelle protéine de liaison de MK2. Dans les cellules cancéreuses hépatobiliaires, EBP50 contribue à la régulation de la voie MK2/Hsp27. La déplétion d'EBP50 provoque une diminution de la phosphorylation de Hsp27, de la survie cellulaire ainsi qu'une baisse des taux d'ARNm de HB-EGF et d'IL-8. Dans les échantillons de tissus humains, l'expression de MK2, de Hsp27 et d'EBP50 est augmentée dans le carcinome hépatocellulaire par rapport au tissu hépatique non tumoral. En résumé, ces données fournissent la preuve d'un rôle prépondérant de l'axe MK2/EBP50/Hsp27 dans la progression du cancer du foie en conférant aux cellules tumorales hépatobiliaires une résistance au stress oxydatif. / Oxidative stress leads to senescence, apoptosis and mutagenesis. Cancer cells can develop a proliferative advantage over normal cells in an environment of oxidative stress, which thereby, participates in tumor progression. We hypothesized that MK2, a direct target of p38 MAPK, could mediate the resistance of liver cancer cells to oxidative stress. In four hepatocellular and biliary cancer cell lines, pharmacological inhibition of MK2 by MK2i enhanced oxidative stress-induced cell death through a decrease in Akt and Hsp27 activity and an increase in tumor suppressor p53 level. MK2 promoted cell survival via activation of the anti-oxidant Nrf2 response and the EGFR pathway. The expression of the EGFR agonist, Hb-EGF, increased in response to oxidative stress. In turn, Hb-EGF induced Hsp27 phosphorylation that was down-regulated by MK2i in liver cancer cells, indicating that EGFR activation by Hb-EGF is a potent activator of MK2. MK2 also increased oxidative stress-induced IL-8 production that depends on Hsp27. Furthermore, we found that MK2 was a binding partner of the scaffolding protein EBP50. In liver cancer cells, EBP50 contributed to up-regulate the MK2/Akt/Hsp27 pathway. Silencing of EBP50 by siRNA in these cells caused a decrease in the phosphorylation of Akt/Hsp27 and in the mRNA levels of Hb-EGF and IL-8. In human tissue samples, MK2, Hsp27 and EBP50 expressions were found to be increased in hepatocellular carcinoma compared with the matched non-tumor liver tissue. Overall, these data provide evidence for a preponderant role of MK2/EBP50/Akt/Hsp27 axis in liver cancer progression by mediating oxidative stress resistance in liver tumor cells.

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Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est la deuxième cause de mortalité par cancer dans le monde. Plusieurs études attestent du rôle du microenvironnement tumoral (MET) comme acteur fondamental de la carcinogenèse. A l’aide de modèles murins mimant un sous groupe de CHC fréquent, notre équipe avait identifié la molécule LECT2 comme un effecteur moléculaire important du MET dans le contrôle de l’agressivité tumorale.L'objectif de ma thèse a été d’adresser le rôle fonctionnel de LECT2 dans le microenvironnement immunitaire au cours du CHC.A l’aide de modèles murins, nous observons que l’absence de LECT2 entraine une accumulation importante de cellules myéloïdes dans le MET. Nous montrons que ces cellules myéloïdes sont immatures, arborent des capacités immunosuppressives puissantes vis-à-vis des lymphocytes T et ont un programme transcriptionnel permettant une action promotrice de tumeurs. De façon intéressante, l’accumulation de ces acteurs dans le microenvironnement est associée à l’émergence de nodules tumoraux indifférenciés exprimant des marqueurs de transition épithélio-mésenchymateuse/cellules progénitrices/métastases.D’un point de vue mécanistique, nous avons démontré une perte de différenciation plus importante des hépatocytes en absence de LECT2 dans des conditions d’activation de la signalisation β-caténine. Nous montrons également par des expériences de co-culture que les cellules myéloïdes infiltrant les tumeurs en absence de LECT2 ont une forte capacité à induire une perte de différenciation des hépatocytes.Enfin, nous avons analysé l'expression de LECT2 dans une vaste cohorte d’échantillons humains de CHC. Nous montrons que la diminution d’expression de LECT2 corrèle fortement avec 1)- la présence d’invasion vasculaire, 2)- la perte de différenciation des hépatocytes tumoraux et 3)- la présence d’infiltrats inflammatoires.L’ensemble de ces données démontre que LECT2 agit comme un régulateur essentiel dans la cancérogénèse hépatique à travers son action double sur les hépatocytes et sur la fonction des cellules myéloïdes infiltrant les tumeurs. Ainsi, ces travaux identifient LECT2 comme un biomarqueur potentiel ouvrant de nouvelles perspectives de traitement du CHC. / Hepatocellular carcinoma (HCC) is the second cause of cancer-rel ated death worldwide. Several studies highlighted the tumor microenvironment (TEM) as a key player in cancer from initiation to progression steps of tumorigenesis. Using relevant HCC mouse models, our team identified the chemokine-like LECT2 as a critical actor of liver TEM in the control of tumor aggressiveness.The aim of my thesis was to address functionally the role of LECT2 in the immune microenvironment during HCC.Using mouse models, we observed that the absence of LECT2 induces a significant accumulation of myeloid cells in the TEM. We showed that these myeloid cells were immature, harbored strong immunosuppressive capabilities on T cells and expressed a transcriptional program sustaining tumor progression. Interestingly, the accumulation of these actors in the microenvironment is associated with the emergence of poorly differentiated tumor nodules expressing epithelial-to-mesenchymal transition / progenitor / metastasis markers.Mechanistically, we demonstrated that LECT2-deficient hepatocytes in the context of β-catenin activation were able to perform EMT like WT hepatocytes do after TGF-β1 challenge. In co-culture experiments, we demonstrated that tumor-infiltrating myeloid cells in the absence of LECT2 have a strong ability to induce hepatocyte EMT.Finally, we analyzed the expression of LECT2 in a vast cohort of HCC liver samples and found that downregulation of LECT2 expression strongly correlates with 1) - the presence of vascular invasion, 2) – histological grade and 3) - the presence of inflammatory infiltrates.Altogether, our data demonstrate that LECT2 acts as a strong regulator of liver tumor aggressiveness through its dual action on hepatocytes and impact on the function of tumor infiltrating myeloid cells. This work identifies LECT2 as a new biomarker for HCC and pave the way to new therapeutic strategies.

Les cellules de la lignée d'hépatome HepaRG sont des progéniteurs bipotents capables de se différencier à confluence en cellules biliaires et en hépatocytes exprimant un large éventail de fonctions spécifiques du foie notamment plusieurs enzymes clés de détoxication. Ce système cellulaire constitue un modèle unique pour mieux comprendre les mécanismes cellulaires et moléculaires régissant le processus de différenciation du progéniteur hépatique vers l'hépatocyte ou encore certains aspects de régulation du cycle cellulaire de l'hépatocyte. Par ailleurs, il offre un modèle cellulaire alternatif aux cultures primaires d'hépatocytes humains pour des applications en pharmacotoxicologie. Cependant, ces cellules expriment un niveau relativement limité d'un important cytochrome P450, le CYP2E1, restreignant leur utilisation pour les études de toxicologie des drogues métabolisées par cette voie. Nous avions comme objectif d'établir des protocoles efficaces de transfection afin d'augmenter l'expression du CYP2E1 dans les cellules HepaRG. Des protocoles de transfection efficaces ont été établis en utilisant l'électroporation et des lipides cationiques appartenant aux lipophosphonates et lipophosphoramidates. Ces approches nous ont permis d'augmenter significativement le niveau d'expression et d'activité du CYP2E1 dans les cellules HepaRG différenciées ouvrant de nouvelles perspectives pour des études de métabolisme et de toxicité des drogues dépendantes du CYP2E1. La mise au point de ces protocoles de transfection a été mise à profit pour aborder d'autres applications notamment la répression par siARN de l'expression du récepteur aux amines aromatiques hétérocycliques AhR. Nous avons pu par électroporation dans des cellules HepaRG différenciées démontrer que AhR est au moins en partie responsable de l'induction des CYP1A1 et 1A2 par les amines aromatiques hétérocycliques PhIP et MeIQx. Toujours en utilisant un protocole d'électroporation, nous avons également établi une lignée HepaRG recombinante exprimant de façon constitutive l'hepcidine en fusion avec la Green Fluorescent Protein (GFP). Cette lignée constitue un nouvel outil d'étude du processus de maturation et de sécrétion de l'hepcidine un régulateur hormonal central du métabolisme du fer. Enfin, dans une dernière partie du travail, nous avons abordé un nouveau type de vectorisation : des nanoparticules synthétisées à partir de poly-acide malique dans le but d'encapsuler des principes actifs anticancéreux pour des applications potentielles dans le ciblage du carcinome hépatocellulaire. Une première étape a consisté à étudier la toxicité in vitro de ces particules sur plusieurs lignées cellulaires puis d'évaluer leur potentiel d'encapsulation de principe actif en utilisant la doxorubicine comme molécule de référence.

Le cancer du foie est la deuxième cause de mortalité due au cancer dans le monde, avec près de 83% des cas et 84% des décès ayant lieu dans les pays en voie de développement. Le type histologique de cancer du foie le plus fréquemment répandu est le carcinome hépatocellulaire (HCC). Selon la littérature disponible, le HCC affecte électivement des sujets masculins de plus de 50 ans ayant développé préalablement une cirrhose hépatique. Nos objectifs étaient donc i) de confirmer au niveau moléculaire la singularité du HCC chez les patients péruviens, ii) d'évaluer les stratégies d'intervention chirurgicale dans le contexte clinique iii) d'étudier les pratiques de médecine traditionnelle, complémentaire et alternative (TCAM) chez les patients iv) d'étendre cette étude à d'autres pays en développement afin d'obtenir une vision plus globale de la problématique liée au cancer du foie. Nous avons montré que le HCC péruvien présentait un spectre de mutations unique. De plus, nous avons démontré que les arbres décisionnels thérapeutiques développés jusqu'alors ne sont pas adaptés au contexte clinique rencontré au Pérou, et qu'ils sont susceptibles d'être réévalués afin d'augmenter la proportion de patients pouvant être candidats à une intervention chirurgicale. Nous avons caractérisé le fait que la majorité des patients avec un HCC a recours à la phytothérapie de manière complémentaire et alternative. Enfin, nous avons réalisé une étude d'épidémiologie clinique préliminaire sur le cancer du foie au Cambodge. Nous avons décrit une situation clinique distincte de celle rencontrée au Pérou, mais qui nécessite également des recherches scientifiques et cliniques plus approfondies. / Liver cancer is the second leading cause of cancer related death in the world. About 83% of liver cancer cases occur in the developing world. The preeminent histotype of liver cancer is hepatocellular carcinoma (HCC). According to the relevant literature, HCC is defined by patient profile corresponding grossly to cirrhotic males over 50 years old. The aims of the present work were thus to i) confirm at the molecular level the pecularity of Peruvian HCC; ii) evaluate the surgical intervention strategies for HCC in the clinical context encountered in Peru; iii) study the practices of traditional, complementary and alternative medicine ( TCAM) among patients; iv) widen the study to other low- and middle income countries in order to provide deeper insights on liver cancer. We found that Peruvian HCC displayed a unique mutation spectrum. Furthermore, we demonstrated that current therapeutic algorithms for liver cancer are not suited to the clinical context found in Peru. These therapeutic algorithms should be reevaluated in order to increase the number of patients who could be eligible for surgical intervention. Moreover, we characterized the fact that the majority of Peruvian HCC patients rely on phytotherapy in a complementary and alternative way. Finally, we undertook a preliminary clinical, epidemiological study on liver cancer in Cambodia. We delineated a clinical context distinct from the one described in Peru that also requires further clinical and scientific investigation.

Le développement de cancer entraîne une dérégulation du métabolisme du cuivre (Cu) qui a notamment été étudiée par analyse de la composition isotopique naturelle du Cu. Les cellules tumorales hépatiques sont enrichies en isotopes lourds du Cu par rapport aux cellules péri-tumorales. Le but de cette thèse est d'identifier les mécanismes responsables de cette différence, en utilisant la levure Saccharomyces cerevisiae dont les mécanismes de réduction et d'import du Cu sont proches de ceux de l'Homme. En mutant les gènes codants pour les importateurs ou les réductases du Cu, j’ai montré que son import protéique génère un enrichissement intracellulaire en isotopes légers du Cu, qui est modulé par l'activité des réductases. Une modélisation numérique m’a permis de montrer que le flux de Cu par les importateurs haute-affinité Ctr est linéairement et négativement corrélé à la composition isotopique du Cu. Ce flux étant modulé par la capacité de réduction membranaire du Cu, j’ai pu lier l'enrichissement en isotopes lourds du Cu des cellules hépatiques tumorales à une diminution de l'activité des réductases membranaires. Par ailleurs, pour un même fond génétique, j'ai mis en évidence une corrélation entre un moindre enrichissement en isotopes légers du Cu et une résistance accrue à un médicament anticancéreux, le cisplatine. De plus, le traitement au cisplatine entraîne un enrichissement des cellules en isotopes lourds du Cu d'autant plus petit que la souche est résistante au cisplatine. Ainsi, ces résultats montrent que la mesure de la composition isotopique du Cu avant et après traitement au cisplatine pourrait permettre de suivre l'apparition d’une chimiorésistance chez les malades, caractérisée par un enrichissement en isotopes lourds du Cu dans les tumeurs, ce qui ouvre la voie au développement d'un nouveau biomarqueur non-invasif de l'apparition d'une résistance au cisplatine. / Cancer development leads to Cu metabolism disregulation which were especially studied by the natural copper (Cu) isotopic composition. Hepatocellular carcinoma (hCC) are enriched in heavy Cu isotopes compared to peri-tumoral cells. The goal of this thesis is to identify the mechanism responsible for this difference. I used the yeast Saccharomyces cerevisiae where Cu reduction and Cu import mechanism are close to the human. By mutating the genes coding for Cu reductases or Cu importers, I showed that protein Cu import generate an intracellular light Cu enrichment which is modulated by Cu reductases activity. With a numerical modelisation I calculated that the Cu flux through high-affinity Cu importers is linearly and negatively correlated to the natural Cu isotopic composition. This flux is modulated by the cell reduction ability. Therefore, I have linked the heavy Cu isotopes enrichment in hCC to a lower reductases activity. Besides, for a same genetic background, I observed a correlation between a lower light Cu enrichment and an higher resistance to a anti-tumoral drug, the cisplatin. Moreover, I observed that cisplatin treatment leads to an enrichment in heavy Cu isotopes which is lower for resistant to cisplatin strains. Those results shown that the Cu isotopes measurement in tumors before and after the cisplatin treatment might be used to trace the chemoresistance apparition in patient with cancer which is characaterize by a tumoral heavy Cu isotopes enrichment. This results might pave the way to the development of a new prognosis biomarker of the cisplatin resistance apparition.