Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In the last decades the invasive mycoses caused by opportunistic fungi has showed a significant growth. The extensive use of azoles showed that the development of resistance of Candida species to these drugs is an emergent phenomenon. C. glabrata typically presents high degree of primary resistance to fluconazole what determine additional difficulties in the therapies. Here two groups of C. glabrata isolates were evaluated: the first formed by strains primarily fluconazole-susceptible and the second generated by the first, was composed by the same isolates after induction of the fluconazole-resistance. The susceptibility tests detected even in the first group, strains azole-resistant as against itraconazole and voriconazole. The induction of resistance to fluconazole was carried out in order to compare the susceptibilities between the two groups against combined drugs. The fluconazole-resistant strains (Group 2) showed MIC ≥ 64 μg/ml and cross-resistance was either detected with fluconazole, voriconazole and itraconazole as well as to other antifungal agents as amphotericin B and caspofungine. The more frequent interaction observed was indifference, however important synergisms were showed against fluconazole-resistant isolates. The best synergism was registered with amphotericin B+ flucytosine (G1 = 61,77% and G2=76,47%). Other synergistic interactions were amphotericin B+ketoconazole (G2=73,53%), amphotericin B+voriconazole (G2=55,88%), amphotericin B+voricoonazole (G2=55,88%), all of them without antagonisms. The highest percentage of the antagonism were observed with ketoconazole+flucytosine (G1=61,77% and G2= 55,88%). / A freqüência de micoses invasivas devido a fungos oportunistas tem evidenciado significativo aumento nas duas últimas décadas. O uso prolongado e indiscriminado dos azólicos evidenciou o desenvolvimento de resistência a estes fármacos nas espécies de Candida. A espécie C. glabrata caracteriza-se por elevados percentuais de resistência primária ao fluconazol fato que determina dificuldades terapêuticas adicionais. No presente estudo, dois grupos de isolados de C. glabrata foram avaliados: o primeiro formado por isolados clínicos sensíveis ao fluconazol, e o segundo, derivado do primeiro, foi formado pelos mesmos isolados, após terem sido induzidos a resistência ao fluconazol in vitro. Mesmo neste grupo de C. glabrata sensíveis ao fluconazol, os testes de suscetibilidade já evidenciaram resistência frente a outros azólicos como ao itraconazol e voriconazol. Os derivados resistentes ao fluconazol evidenciaram concentrações inibitórias mínimas maiores ou iguais a 64 g/mL. Neste grupo de isolados fluconazol-resistentes, os testes de suscetibilidade detectaram resistência cruzada com cetoconazol, voriconazol e itraconazol bem como com outros agentes de outras classes como a anfotericina B e caspofungina. A indução da resistência foi realizada com o objetivo de se comparar a suscetibilidade entre os dois grupos, frente a fármacos combinados. As associações de antifúngicos entre os grupos sensíveis e resistentes ao fluconazol resultaram, em maior parte, interações indiferentes. No entando as associações mostraram-se mais eficazes nos isolados resistentes ao fluconazol. Em ambos os grupos, a combinação que resultou em maior sinergismo foi anfotericina B com flucitosina (.G1 = 61,77%.% e G2 = 76,47%); outras combinações sinérgicas foram anfotericina B + cetoconazol (G2 = 73,53%), anfotericina B + voriconazol (G2 = 55,88%), todos com ausência de antagonismo. Os maiores percentuais de antagonismo foram observados na combinação cetoconazol + flucitosina (G1 = 61,77% e G2 = 55,88%).

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Widespread and prolonged usage of azoles in recent years has led to the rapid development of drug resistance in Candida species. In Candida albicans, resistance to fluconazole causes cross-resistance to other antifungals and an increase in virulence, making treatment still more difficult because of the limited therapeutical options. Nonetheless, similar phenomenon has been observed for Candida glabrata, specie that has emerged as a pathogen of clinical importance. Fluconazole resistance has been clinically described in Candida glabrata isolates and it is easily induced by in vitro exposure to the drug, but little is known about its consequences. In the present study, two groups of C. glabrata isolates were evaluated. One group was composed by fluconazole-susceptible clinical isolates (FS), and the other was composed by fluconazole-resistant (FR) laboratory derivatives from the former through an in vitro method of fluconazole resistance induction, in order to compare the activitie of the three major antifungal agent classes azoles, echinocandins and poliens. Resistant derivatives showed minimal inhibitory concentrations equal or higher than 64 μg/mL. All yeasts were tested by the broth microdilution method. Based on susceptibility parameters (MIC range, MIC50, MIC90 and geometric mean), the fluconazole-susceptible C. glabrata group (FS) was susceptible to amphotericin B (MIC90 of 0.125 μg/ml). For inhibition, the fluconazole-resistant C. glabrata group (FR) required higher concentrations of amphotericin B (MIC90 of 2 μg/ml). C. glabrata FR group showed cross-resistance with voriconazole (MIC90 of 16 μg/ml). Echinocandins showed the lowest MICs against to both group, flucoanzole-susceptible and resistant. Micafungin demostrated the lowest MIC values among all antifungal agents evaluated (MIC90 of 0.008 μg/ml in FS and 0.015 μg/ml in FR). Our results showed that resistance to fluconazole affected voriconazole susceptibility but not the echinocandin susceptibility, which demonstrated excellent activitie against tested C. glabrata groups. / O uso prolongado e indiscriminado dos azólicos nos últimos anos permitiu um rápido desenvolvimento de resistência aos fármacos nas espécies de Candida. Em Candida albicans, a resistência ao fluconazol causa resistência cruzada a outros antifúngicos e aumento na virulência, tornando o tratamento ainda mais complicado por causa das opções terapêuticas limitadas. Ainda assim, fenômeno semelhante tem sido observado para Candida glabrata, espécie que emergiu como patógenos de importância clínica. A resistência ao fluconazol tem sido clinicamente descrita em isolados de Candida glabrata, e é facilmente induzida pela exposição in vitro ao azólico, mas pouco se conhece sobre suas conseqüências. No presente estudo, dois grupos de isolados de C. glabrata foram avaliados. Um grupo era composto de isolados clínicos sensíveis ao fluconazol (FS), e o outro, derivado do primeiro através de técnica de indução de resistência, era composto de isolados resistentes ao fluconazol (FR), com o intuito de comparar a atividade das três maiores classes de agentes antifúngicos azóis, equinocandinas e poliênicos. Os derivados resistentes obtidos evidenciaram concentrações inibitórias mínimas (CIMs) maiores ou iguais a 64 μg/mL. Foram realizados testes de suscetibilidade aos antifúngicos através da técnica de microdiluição em caldo. Com base nos parâmetros de suscetibilidade (faixa de CIM, CIM50, CIM90 e média geométrica), o grupo FS foi suscetível à anfotericina B (CIM90 de 0,125 μg/ml). Entretanto, o grupo FR requereu doses maiores do antifúngico para ser inibido (CIM90 de 2 μg/ml). O grupo de C. glabrata FR evidenciou resistência cruzada com voriconazol (CIM90 de 16 μg/ml). As equinocandinas mostraram os melhores resultados frente a ambos os grupos, sensíveis e resistentes. Micafungina demonstrou os menores valores de CIM entre todos os agentes antifúngicos estudados (CIM90 de 0.008 μg/ml para FS e 0.015 μg/ml para FR). Os resultados deste estudo mostraram que a resistência ao fluconazol afeta a suscetibilidade do voriconazol, mas não das equinocandinas, as quais mostraram excelente atividade frente aos grupos de C. glabrata testados.

In the present study, in vitro antifungal activity of essential oils obtained from Origanum vulgare (oregano), Cinnamomum zeylanicum (cinnamon), Lippia graveolens (Mexican oregano), Thymus vulgaris (thyme), Salvia officinalis (sage), Rosmarinus officinalis (rosemary), Ocimum basilicum (basil) e Zingiber officinale (ginger) was assessed against Candida glabrata isolates. A group of 36 fluconazole-susceptible C. glabrata isolates were used and another group, derived from the first, obtained after in vitro induction of the fluconazole-resistance, totalizing 72 isolates tested. The methodology used was broth microdilution, cancentrations of 50 μg/mL, 100 μg/mL, 200 μg/mL, 400 μg/mL, 800 μg/mL, 1600 μg/mL and 3200 μg/mL were used, through which Minimal Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal Fungicidal Concentration (MFC) were determined. Thyme, sage, rosemary, basil and ginger essential oils showed no antifungal activity on the tested concentrations. Antimicrobial activity lower than or equal to 3200 μg/mL was observed for oregano, Mexican oregano and cinnamon essential oils, being oregano essential oil the most potent. Oregano essential oil has shown the best antifungal activity against fluconazole-susceptible C. glabrata group. Likely, Mexican oregano essential oil has shown the best antifungal activity against fluconazole-susceptible C. glabrata group. And cinnamon essential oil has shown the best antifungal activity against fluconazole-resistant isolates of C. glabrata. / No presente estudo, avaliou-se a atividade antimicrobiana in vitro dos óleos essenciais obtidos de Origanum vulgare (orégano), Cinnamomum zeylanicum (canela), Lippia graveolens (orégano mexicano), Thymus vulgaris (tomilho), Salvia officinalis (sálvia), Rosmarinus officinalis (alecrim), Ocimum basilicum (manjericão) e Zingiber officinale (gengibre) frente aos isolados de Candida glabrata. Foi utilizado um grupo de 36 isolados de C. glabrata sensíveis ao fluconazol e outro grupo, derivado do primeiro, obtido após indução a resistência ao fluconazol in vitro, totalizando 72 isolados testados. Empregou-se a metodologia de microdiluição em caldo, utilizando-se concentrações de 50 μg/mL, 100 μg/mL, 200 μg/mL, 400 μg/mL, 800 μg/mL, 1600 μg/mL e 3200 μg/mL, através do qual se determinou Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM). Os óleos essenciais de tomilho, sálvia, alecrim, manjericão e gengibre não evidenciaram atividade antifúngica nas concentrações testadas. Atividade antimicrobiana inferior ou igual à máxima testada (3200 μg/mL) foi observada para os óleos essenciais de orégano, orégano mexicano e canela. O óleo essencial de orégano apresentou a atividade antimicrobiana mais potente. Quando analisada a diferença entre os dois grupos de micro-organismos, C. glabrata sensível ao fluconazol mostrou-se mais suscetível ao óleo essencial de orégano e orégano mexicano, e C. glabrata resistente ao fluconazol mostrou-se mais suscetível ao óleo essencial de canela.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2017-07-14T18:15:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE - ficha catalográfica (Roberto Lima).pdf: 2704286 bytes, checksum: 196684c3e7fdeb681a04b47be121d8d8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-14T18:15:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE - ficha catalográfica (Roberto Lima).pdf: 2704286 bytes, checksum: 196684c3e7fdeb681a04b47be121d8d8 (MD5) Previous issue date: 2014-06-16 / Capes / Avanços tecnológicos buscam recursos naturais adequados e disponíveis para obtenção de produtos sustentáveis e economicamente viáveis. Neste trabalho foi estudada a produção de metabólitos como os biossurfactante, lipídeos e Coenzima Q10 por Candida glabrata (UCP 1002 e 1556), por processo biotecnológico. O cultivo foi realizado em meio de baixo custo a base de resíduos agroindustriais (milhocina e soro de leite). Inicialmente neste estudo foi realizado um processo de produção de biossurfactante por C. glabrata (UCP 1002 e 1556), utilizando resíduos agroindustriais como fonte de carbono e nitrogêncio em substituição ao meio sintético, sendo observado que as duas linhagens produziram similares quantidades de biossurfactante. Foi realizado um processo de otimização do meio a base de resíduos agroindustriais por Delineamento Composto Central (DCC) 22. Os resultados obtidos evidenciaram que no segundo planejamento com 40% de soro de leite e 20% de milhocina foi mais eficiente na produção de biossurfactante utilizando a C. glabrata 1556, com uma redução da tensão superficial de 72 para 28,8mN/m. O biossurfactante foi caracterizado e classificado como lipoproteína e além disso demonstrou se seu caráter aniônico. O meio otimizado empregou se na produção e caracterização da CoQ10 por C. glabrata (UCP 1556), ficando evidenciado a presença significativa do composto e sua ação antioxidante. Neste meio foi testado o potencial das duas linhagens de C. glabrata (UCP 1002 e 1556) na produção de lipídeos e ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) e uma quantidade elevada de ácido γ-ácido linolênico (ω6) e α-ácido linolênico (ω3) foi detectada. Os resíduos agroindustriais são substratos nutritivos que representam uma redução econômica para a produção compostos limpos que podem ser aplicados na indústria de cosmética e farmacêutica. / Technological advances seek appropriate natural resources and available for achieving of sustainable products and viable economically. In this work was studied the production of metabolites as biosurfactant, Coenzyme Q10 and lipids by Candida glabrata (UCP 1002 and 1556) for biotechnological process. The cultivation was carried in medium of low cost the base of agroindustrial waste (whey and corn steep liquor). Initially this study was performed a process of biosurfactant production by C. glabrata (UCP 1002 and 1556), using agroindustrial residues as a carbon source and nitrogen replacing the synthetic medium, it was observed that both strains produced similar amounts of biosurfactant. It was performed a optimization process of the medium the base of agroindustrial waste by Central Composite Design (CCD) 22. The results showed that the second planning with 40% of whey and 20% of corn steep liquor it was more efficient in the biosurfactant production using C. glabrata (UCP 1556), with a reduction in surface tension from 72 to 28,8mN/m. The biosurfactant was characterized and classified as lipoprotein and furthermore it was demonstrated its anionic character. The optimized medium was performed in the production and characterization of CoQ10 by C. glabrata (UCP 1556), getting evidenced the significant presence of the compound and its antioxidant action. In this medium was tested the potential of two strains of C. glabrata (UCP 1002 e 1556) in the production of lipids and polyunsaturated fatty acids (PUFAs) and a high quantity of γ-linoleic acid (ω6) and e α- linoleic acid (ω3) was detected. The agroindustrial wastes are nutritious substrates which represent an economic cost reduction in the production of clean compounds that it can be applied in cosmetic and pharmaceutical industry.

Candida glabrata, geralmente comensal, surgiu como uma causa comum de infecções fúngicas graves com risco de morte. Dada a resistência crescente aos azóis, a orientação recente é utilizar as equinocandinas como a primeira escolha para o tratamento de infecções sistêmicas por C. glabrata. No entanto, esta é a primeira espécie de Candida que foi detectada com resistência significativa às equinocandinas. Esta levedura é capaz de colonizar tecidos do hospedeiro, bem como superfícies abióticas (catéteres, próteses) onde desenvolve um crescimento em multicamadas caracterizado como biofilme. A natureza da estrutura do biofilme e os atributos fisiológicos a ele conferidos resultam em uma resistência inerente a agentes antimicrobianos, impactando negativamente na saúde do paciente. Este estudo teve como objetivo a indução in vitro de resistência à anidulafungina em células planctônicas e sésseis de sete cepas sensíveis de C. glabrata, além da verificação do desenvolvimento de resistência cruzada com fluconazol. A indução de resistência foi realizada submetendo as cepas a concentrações sub-inibitórias do antifúngico. A determinação de concentração inibitória mínima através de microdiluição em caldo foi realizada previamente e posteriormente à indução de resistência e, também, para a verificação de resistência cruzada com fluconazol. O método de indução de resistência resultou em cepas fortemente resistentes à anidulafungina, com concentrações inibitórias mínimas variando de 1 a 2 μg/mL. Antes da indução da resistência, as formas planctônica e séssil das cepas eram todas sensíveis ou sensíveis dose-dependente ao fluconazol. Após a indução de resistência à anidulafungina esta sensibilidade ao fluconazol não foi mantida, tornando as cepas resistentes a este antifúngico. Clinicamente, esta resistência cruzada poderia implicar em falha terapêutica ao utilizar o fluconazol em pacientes previamente expostos a concentrações sub-inibitórias de anidulafungina por longos períodos. / Candida glabrata, usually commensal, has emerged as a common cause of serious life threatening fungal infections. Given the increasing resistance to azoles, the recent guidance is to use echinocandins as the first choice for the treatment of systemic infections by C. glabrata. However, C. glabrata is the first species of Candida that has been detected with significant resistance to echinocandins. This yeast is able to colonize host tissues as well as abiotic surfaces (catheters, prostheses) where it develops a multi-layer growth characterized as biofilm. The nature of the biofilm structure and the physiological attributes conferred on it, result in an inherent resistance to antimicrobial agents, negatively impacting the patient's health. This study aimed to induce in vitro resistance to anidulafungin in planktonic and sessile cells of seven sensitive C. glabrata strains, as well as to verify the development of cross-resistance with fluconazole. The induction of resistance was performed by subjecting the isolates to sub-inhibitory concentrations of the antifungal. The determination of minimum inhibitory concentration by broth microdilution was performed before and after induction of resistance and also for fluconazole cross-resistance verification. The resistance induction test resulted in strains strongly resistant to anidulafungin, with minimum inibitory concentrations ranging from 1 to 2 μg mL-1. Prior to induction of resistance, the planktonic and sessile forms of the strains were all sensitive or sensitive dose-dependent to fluconazole. However, after the induction of resistance to anidulafungin, this sensitivity to fluconazole was not maintained, making the strains resistant to this antifungal. Clinically, this cross-resistance could lead to therapeutic failure when using fluconazole in patients previously exposed to sub-inhibitory concentrations of anidulafungin for long periods.

Orientador: Ana Lucia Machado / Banca: Wander José da Silva / Banca: Helena de Freitas Oliveira Paranhos / Banca: Francisco de Assis Mollo Junior / Banca: Gelson Luis Adabo / Resumo: A adesão de Candida às superfícies protéticas é o passo inicial para ocorrência da estomatite protética. Entre os diversos fatores envolvidos na adesão de Candida spp. às superfícies poliméricas estão as interações hidrofóbicas e eletrostáticas, a rugosidade superficial e a película salivar. Assim, os objetivos deste estudo foram: investigar o potencial de diferentes tratamentos a plasma (Ar/50W; ArO2/70W; AAt/130W; ArSF6/70W) de modificar uma resina acrílica para base de prótese (VIPIWAVE) para reduzir a aderência de Candida albicans (ATCC 90028), avaliada pelo ensaio de XTT e cristal violeta. O efeito da rugosidade de superfície e do pré-condicionamento com saliva também foram avaliados; investigar se modificações de superfícies por meio de dois tratamentos a plasma (Ar/50W; AAt/130W) reduziriam a aderência de Candida glabrata (ATCC 2001), avaliada pela coloração cristal violeta, sobre superfícies lisas de resina acrílica. Além disso, o efeito do pré-condicionamento com saliva também foi avaliado; e ainda, avaliar se variações nos períodos de pré-condicionamento com saliva (0 min; 30 min; 60 min; 180 min; 720 min), nos parâmetros de centrifugação (velocidade e tempo) e número de doadores de saliva influenciariam os resultados de adesão de Candida albicans a uma resina acrílica para base de prótese, avaliada por meio do ensaio de XTT e coloração cristal violeta. Além disso, a correlação entre os dois métodos utilizados para avaliação da adesão de Candida albicans também foi avaliada. Os resultados obtidos demonstraram que os tratamentos a plasma são efetivos para modificação da hidrofobicidade de superfície ou incorporação de átomos de flúor na superfície da resina acrílica. Entretanto, após os tratamentos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The adhesion of Candida to denture surfaces is the initial step for occurrence of denture stomatitis. Among the various factors involved on Candida adhesion to polymeric surfaces are the hydrophobic and eletrostatic interactions, surface roughness and pellicle salivary. Hence, the aims of this study were: to investigate the potential of different plasma treatments (Ar/50W; ArO2/70W; AAt/130W; ArSF6/70W) to modify a denture base acrylic resin (VIPIWAVE) to reduce the Candida albicans adhesion (ATCC 90028), evaluated by XTT reduction assay and crystal violet staining. The effect of surface roughness and saliva coating was also evaluated; to investigate the potential of two plasma treatments (Ar/50W; AAt/130W) to modify a denture base acrylic resin to reduce the Candida glabrata adhesion (ATCC 2001), evaluated by crystal violet staining. Moreover, the effect of saliva coating was also evaluated; and to assess the effect of different periods of preconditioning with saliva (0 min; 30 min; 60 min; 180 min; 720 min), variations in the centrifugation parameters (speed and time) and number of donors of saliva on Candida albicans adhesion to a denture base resin using crystal violet staining and XTT reduction assay. Additionally, the correlation between the two methods used for assessing Candida albicans adhesion was also evaluated. The results obtained demonstrated that the plasma treatments were effective in modifying hydrophobicity or incorporation of fluorine into acrylic resin. However, there were significant alterations in the contact angle measured after immersion in water. Groups ArO2/70W and ArSF6/70W showed significantly lower absorbance readings to Candida albicans adhesion than the other groups. No statistically significant difference in the adherence of Candida albicans, evaluated by... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Debora de Barros Barbosa / Banca: Luiz Fernando Gorup / Banca: Aimée Maria Guiotti / Resumo: O presente estudo revisou na literatura trabalhos entre 2006 e 2017 relacionados à fitossíntese de nanopartículas de prata (AgNP) e destacar a variedade de plantas passíveis de serem utilizadas e o quanto estas influenciam as características e propriedades dessas nanopartículas. Avaliou-se também como a temperatura (25, 50, 70 e 95°C) e a concentração de extrato da casca de romã (Punica granatum) (7, 14 e 28 mg mL-1) interferem na efetividade da reação fitoquímica por meio da quantificação dos íons Ag+ livres na solução de AgNP. A atividade antifúngica das AgNP produzidas foi avaliada por meio do método da microdiluição (CLSI M27-A2) contra cepas padrão (ATCC) de Candida albicans e Candida glabrata. As AgNP foram caracterizadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV), difração de raios-X e espectroscopia UV/visível. O extrato da casca desidratada da romã foi obtido por maceração seguido de percolação em etanol (70%) e desidratado em rota-evaporador. Quantificou-se os fenóis totais expressos em ácido gálico por método colorimétrico e o ácido elágico por HPLC, sendo respectivamente 158,61 e 4,21 mg mL-1. Foram revisados mais de duzentos artigos relacionados à fitossintese de AgNP, onde cerca de cento e setenta plantas foram utilizadas para esta síntese e sendo a maioria delas geograficamente concentradas nos continentes asiático e europeu. As AgNP fitossintezadas no presente estudo apresentaram concentração de íons livres de Ag+ proporcional à quantidade de extrato utiliz... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present work reviewed in the literature studies of phythosynthesis of silver nanoparticles (AgNP) between 2006 and 2017, highlighting the variety of plants used to and how they can influence the characacteristics and properties of AgNP. This work also evaluated the influence of temperature (25, 50, 70 and 95°C) and concentration of peel extract of pomegranate (Punica granatum) (7, 14 and 28 mg mL-1) on the effectiveness of phytosynthesis reaction by quantifying the free Ag+ ions in the AgNP soluction. The antifungal activity of AgNP against reference strains (ATCC) of Candida albicans and Candida glabrata were evaluated by the microdilution method (CLSI M27-A2). AgNP were characterized through scanning electron microscopy (SEM), X-Ray diffraction and UV-Vis spectroscopy. The pomegranate peel was dehydrated and the hydroalcoholic extract was obtained by maceration followed by percolation, and then obtained the crude extract using a rotary evaporator. Total phenols expressed in galic acid and elagic acid were quantified in the extract using a colorimetric method and by HPLC, and the values found were 158.61 and 4.21 mg mL-1, respectively. It was found more than two hundred studies using about an hundred seventy plants to synthesize AgNP, being the majority of those plants from the Asiatic and European Continents. The AgNp phytosynthesized in the present study presented the concentration of free Ag+ ions proportional with the quantity of pomegranate peel extract and it was high when the temepratures used in the reaction were above 50ºC. Also, AgNP were effective against both Candida reference strains evaluated / Mestre

Candida glabrata, geralmente comensal, surgiu como uma causa comum de infecções fúngicas graves com risco de morte. Dada a resistência crescente aos azóis, a orientação recente é utilizar as equinocandinas como a primeira escolha para o tratamento de infecções sistêmicas por C. glabrata. No entanto, esta é a primeira espécie de Candida que foi detectada com resistência significativa às equinocandinas. Esta levedura é capaz de colonizar tecidos do hospedeiro, bem como superfícies abióticas (catéteres, próteses) onde desenvolve um crescimento em multicamadas caracterizado como biofilme. A natureza da estrutura do biofilme e os atributos fisiológicos a ele conferidos resultam em uma resistência inerente a agentes antimicrobianos, impactando negativamente na saúde do paciente. Este estudo teve como objetivo a indução in vitro de resistência à anidulafungina em células planctônicas e sésseis de sete cepas sensíveis de C. glabrata, além da verificação do desenvolvimento de resistência cruzada com fluconazol. A indução de resistência foi realizada submetendo as cepas a concentrações sub-inibitórias do antifúngico. A determinação de concentração inibitória mínima através de microdiluição em caldo foi realizada previamente e posteriormente à indução de resistência e, também, para a verificação de resistência cruzada com fluconazol. O método de indução de resistência resultou em cepas fortemente resistentes à anidulafungina, com concentrações inibitórias mínimas variando de 1 a 2 μg/mL. Antes da indução da resistência, as formas planctônica e séssil das cepas eram todas sensíveis ou sensíveis dose-dependente ao fluconazol. Após a indução de resistência à anidulafungina esta sensibilidade ao fluconazol não foi mantida, tornando as cepas resistentes a este antifúngico. Clinicamente, esta resistência cruzada poderia implicar em falha terapêutica ao utilizar o fluconazol em pacientes previamente expostos a concentrações sub-inibitórias de anidulafungina por longos períodos. / Candida glabrata, usually commensal, has emerged as a common cause of serious life threatening fungal infections. Given the increasing resistance to azoles, the recent guidance is to use echinocandins as the first choice for the treatment of systemic infections by C. glabrata. However, C. glabrata is the first species of Candida that has been detected with significant resistance to echinocandins. This yeast is able to colonize host tissues as well as abiotic surfaces (catheters, prostheses) where it develops a multi-layer growth characterized as biofilm. The nature of the biofilm structure and the physiological attributes conferred on it, result in an inherent resistance to antimicrobial agents, negatively impacting the patient's health. This study aimed to induce in vitro resistance to anidulafungin in planktonic and sessile cells of seven sensitive C. glabrata strains, as well as to verify the development of cross-resistance with fluconazole. The induction of resistance was performed by subjecting the isolates to sub-inhibitory concentrations of the antifungal. The determination of minimum inhibitory concentration by broth microdilution was performed before and after induction of resistance and also for fluconazole cross-resistance verification. The resistance induction test resulted in strains strongly resistant to anidulafungin, with minimum inibitory concentrations ranging from 1 to 2 μg mL-1. Prior to induction of resistance, the planktonic and sessile forms of the strains were all sensitive or sensitive dose-dependent to fluconazole. However, after the induction of resistance to anidulafungin, this sensitivity to fluconazole was not maintained, making the strains resistant to this antifungal. Clinically, this cross-resistance could lead to therapeutic failure when using fluconazole in patients previously exposed to sub-inhibitory concentrations of anidulafungin for long periods.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-30Bitstream added on 2014-06-13T19:45:07Z : No. of bitstreams: 1 zamperini_ca_dr_arafo.pdf: 1388179 bytes, checksum: 6b6bce25f31321d415cd6c36937b0ae0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A adesão de Candida às superfícies protéticas é o passo inicial para ocorrência da estomatite protética. Entre os diversos fatores envolvidos na adesão de Candida spp. às superfícies poliméricas estão as interações hidrofóbicas e eletrostáticas, a rugosidade superficial e a película salivar. Assim, os objetivos deste estudo foram: investigar o potencial de diferentes tratamentos a plasma (Ar/50W; ArO2/70W; AAt/130W; ArSF6/70W) de modificar uma resina acrílica para base de prótese (VIPIWAVE) para reduzir a aderência de Candida albicans (ATCC 90028), avaliada pelo ensaio de XTT e cristal violeta. O efeito da rugosidade de superfície e do pré-condicionamento com saliva também foram avaliados; investigar se modificações de superfícies por meio de dois tratamentos a plasma (Ar/50W; AAt/130W) reduziriam a aderência de Candida glabrata (ATCC 2001), avaliada pela coloração cristal violeta, sobre superfícies lisas de resina acrílica. Além disso, o efeito do pré-condicionamento com saliva também foi avaliado; e ainda, avaliar se variações nos períodos de pré-condicionamento com saliva (0 min; 30 min; 60 min; 180 min; 720 min), nos parâmetros de centrifugação (velocidade e tempo) e número de doadores de saliva influenciariam os resultados de adesão de Candida albicans a uma resina acrílica para base de prótese, avaliada por meio do ensaio de XTT e coloração cristal violeta. Além disso, a correlação entre os dois métodos utilizados para avaliação da adesão de Candida albicans também foi avaliada. Os resultados obtidos demonstraram que os tratamentos a plasma são efetivos para modificação da hidrofobicidade de superfície ou incorporação de átomos de flúor na superfície da resina acrílica. Entretanto, após os tratamentos... / The adhesion of Candida to denture surfaces is the initial step for occurrence of denture stomatitis. Among the various factors involved on Candida adhesion to polymeric surfaces are the hydrophobic and eletrostatic interactions, surface roughness and pellicle salivary. Hence, the aims of this study were: to investigate the potential of different plasma treatments (Ar/50W; ArO2/70W; AAt/130W; ArSF6/70W) to modify a denture base acrylic resin (VIPIWAVE) to reduce the Candida albicans adhesion (ATCC 90028), evaluated by XTT reduction assay and crystal violet staining. The effect of surface roughness and saliva coating was also evaluated; to investigate the potential of two plasma treatments (Ar/50W; AAt/130W) to modify a denture base acrylic resin to reduce the Candida glabrata adhesion (ATCC 2001), evaluated by crystal violet staining. Moreover, the effect of saliva coating was also evaluated; and to assess the effect of different periods of preconditioning with saliva (0 min; 30 min; 60 min; 180 min; 720 min), variations in the centrifugation parameters (speed and time) and number of donors of saliva on Candida albicans adhesion to a denture base resin using crystal violet staining and XTT reduction assay. Additionally, the correlation between the two methods used for assessing Candida albicans adhesion was also evaluated. The results obtained demonstrated that the plasma treatments were effective in modifying hydrophobicity or incorporation of fluorine into acrylic resin. However, there were significant alterations in the contact angle measured after immersion in water. Groups ArO2/70W and ArSF6/70W showed significantly lower absorbance readings to Candida albicans adhesion than the other groups. No statistically significant difference in the adherence of Candida albicans, evaluated by... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Luana Sauvesuk null (luana_sauvesuk@hotmail.com) on 2017-10-26T17:07:51Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado- Luana Sauvesuk - UNESP-FOA 26.10 pós defesa.pdf: 4367747 bytes, checksum: 5e1aa26820a5d96f8ddb932295fee7aa (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-10-31T18:02:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sauvesuk_l_me_araca.pdf: 4367747 bytes, checksum: 5e1aa26820a5d96f8ddb932295fee7aa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-31T18:02:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sauvesuk_l_me_araca.pdf: 4367747 bytes, checksum: 5e1aa26820a5d96f8ddb932295fee7aa (MD5) Previous issue date: 2017-10-16 / O presente estudo revisou na literatura trabalhos entre 2006 e 2017 relacionados à fitossíntese de nanopartículas de prata (AgNP) e destacar a variedade de plantas passíveis de serem utilizadas e o quanto estas influenciam as características e propriedades dessas nanopartículas. Avaliou-se também como a temperatura (25, 50, 70 e 95°C) e a concentração de extrato da casca de romã (Punica granatum) (7, 14 e 28 mg mL-1) interferem na efetividade da reação fitoquímica por meio da quantificação dos íons Ag+ livres na solução de AgNP. A atividade antifúngica das AgNP produzidas foi avaliada por meio do método da microdiluição (CLSI M27-A2) contra cepas padrão (ATCC) de Candida albicans e Candida glabrata. As AgNP foram caracterizadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV), difração de raios-X e espectroscopia UV/visível. O extrato da casca desidratada da romã foi obtido por maceração seguido de percolação em etanol (70%) e desidratado em rota-evaporador. Quantificou-se os fenóis totais expressos em ácido gálico por método colorimétrico e o ácido elágico por HPLC, sendo respectivamente 158,61 e 4,21 mg mL-1. Foram revisados mais de duzentos artigos relacionados à fitossintese de AgNP, onde cerca de cento e setenta plantas foram utilizadas para esta síntese e sendo a maioria delas geograficamente concentradas nos continentes asiático e europeu. As AgNP fitossintezadas no presente estudo apresentaram concentração de íons livres de Ag+ proporcional à quantidade de extrato utilizada na reação e maior nas temperaturas mais elevadas, e foram efetivas contra ambas cepas padrão de Candida avaliadas. / The present work reviewed in the literature studies of phythosynthesis of silver nanoparticles (AgNP) between 2006 and 2017, highlighting the variety of plants used to and how they can influence the characacteristics and properties of AgNP. This work also evaluated the influence of temperature (25, 50, 70 and 95°C) and concentration of peel extract of pomegranate (Punica granatum) (7, 14 and 28 mg mL-1) on the effectiveness of phytosynthesis reaction by quantifying the free Ag+ ions in the AgNP soluction. The antifungal activity of AgNP against reference strains (ATCC) of Candida albicans and Candida glabrata were evaluated by the microdilution method (CLSI M27-A2). AgNP were characterized through scanning electron microscopy (SEM), X-Ray diffraction and UV-Vis spectroscopy. The pomegranate peel was dehydrated and the hydroalcoholic extract was obtained by maceration followed by percolation, and then obtained the crude extract using a rotary evaporator. Total phenols expressed in galic acid and elagic acid were quantified in the extract using a colorimetric method and by HPLC, and the values found were 158.61 and 4.21 mg mL-1, respectively. It was found more than two hundred studies using about an hundred seventy plants to synthesize AgNP, being the majority of those plants from the Asiatic and European Continents. The AgNp phytosynthesized in the present study presented the concentration of free Ag+ ions proportional with the quantity of pomegranate peel extract and it was high when the temepratures used in the reaction were above 50ºC. Also, AgNP were effective against both Candida reference strains evaluated.