Os trabalhos existentes sobre protozoários pertencentes à família Sarcocystidae em morcegos são escassos e desatualizados. No Brasil, a ocorrência de Toxoplasma gondii é bem documentada nas espécies domésticas e no Homem, existindo relatos em diversos hospedeiros selvagens. Mundialmente, existe um grande interesse no conhecimento da variedade genética de T. gondii realizada por meio da Reação em Cadeia pela Polimerase Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos de DNA gerados por Enzimas de Restrição (PCR-RFLP). No presente trabalho, objetivou-se pesquisar a frequência de ocorrência de anticorpos anti-T. gondii, isolar e caracterizar molecularmente T. gondii e investigar a presença de coccídios da família Sarcocystidae em morcegos de vida livre no estado de São Paulo. Um total de 1921 morcegos, provenientes de 15 municípios do estado de São Paulo, foi examinado durante o período de março de 2010 a março de 2011. Obteve-se 14,89% (28/188) de positividade para T. gondii na Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI ≥ 16) e 18,61% (35/188) no Teste de Aglutinação Modificado (MAT ≥ 25), com baixa concordância entre as técnicas utilizando o índice Kappa (K=0,046). De um total de 282 bioensaios em camundongos, foram obtidos dois isolados, sendo TgBatBr1 proveniente de Molossus molossus, insetívoro, macho e adulto, e TgBatBr2 proveniente de Desmodus rotundus, hematófago, macho e adulto, ambos causando 100% de mortalidade em camundongos. A genotipagem dos isolados e das amostras primárias de morcegos positivas para T. gondii foi feita por meio da PCR-RFLP com os marcadores SAG1, 5\'3\'SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, alt. SAG2, c22-8, c29-2, PK1, Apico, L358 e CS3, revelando os genótipos ToxoDB-RFLP #162 e #19, respectivamente, para os isolados TgBatBr1 e TgBatBr2. Para a investigação molecular dos sarcocistídeos foram utilizados primers que amplificam a região 18S do DNA ribossomal e as amostras positivas foram sequenciadas. A análise de sequências pôde ser realizada em 48 das amostras positivas para Sarcocystidae, encontrando-se 100% de identidade com T. gondii em quatro morcegos e também 100% de identidade com Neospora caninum, Hammondia hammondi, Cystoisospora ohioensis e Frenkelia glareoli em um morcego, respectivamente. Outras 39 amostras apresentaram identidade de 94-98% com outros sarcocistídeos e, provavelmente, devem ser novas espécies. Foi possível a genotipagem de amostras primárias positivas para T. gondii de um morcego insetívoro (Eumops glaucinus), correspondendo ao genótipo #69 e de outro morcego insetívoro (E. glaucinus), apresentando o genótipo #6, que corresponde ao Tipo BrI. Há uma necessidade de se investigar a importância dos morcegos como reservatórios de doenças infecciosas, podendo-se sugerir a inclusão do diagnóstico de T. gondii como diferencial para raiva. Ressalta-se também a importância do compartilhamento dos genótipos de T. gondii dos morcegos com hospedeiros terrestres e dos estudos sobre sarcocistídeos em morcegos, a fim de compreender melhor as relações parasita-hospedeiro. / The existing studies on protozoa belonging to the Sarcocystidae family are scarce and outdated in free-living bats. In Brazil, the occurrence of Toxoplasma gondii is well documented in domestic animals and humans, with reports in several wild hosts. Worldwide, there is a great interest in understanding the genetic variation of T. gondii using differen molecular tools as the Polymerase Chain Reaction Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP). The present study aimed to research the frequency of occurrence of anti-T. gondii antibodies, to isolate and molecularly characterize T. gondii and to investigate the presence of coccidia from Sarcocystidae family in free-living bats from São Paulo state. A total of 1921 bats from 15 municipalities in São Paulo state were examined from March 2010 to March 2011. It was obtained 14.89% (28/188) of positivity for T. gondii by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA ≥ 16) and 18.61% (35/188) by Modified Agglutination Test (MAT ≥ 25) with low agreement between techniques when using Kappa (K = 0.046). From a total of 282 bioassays in mice, two bat isolates were obtained, TgBatBr1 from Molossus molossus, an insectivorous, male, adult bat, and TgBatBr2 from Desmodus rotundus, a vampire, male, adult bat, both causing 100% of mouse mortality. Genotyping of isolates and T. gondii positive primary samples from bats were performed by PCR-RFLP using markers SAG1, 5\'3\'SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, alt. SAG2, c22-8, c29-2, PK1, Apico, L358 and CS3, revealing ToxoDB-RFLP genotypes #162 and #19, respectively, for isolates TgBatBr1 and TgBatBr2. Primers that amplify the 18S ribosomal DNA region were employed for molecular investigation of Sarcocystidae in primary samples and the positive samples were sequenced. Analysis of sequence could be accomplished for 48 Sarcocystidae positive samples. A 100% identity with T. gondii was found in four bats, and with Neospora caninum, Hammondia hammondi, Cystoisospora ohioensis and Frenkelia glareoli in a bat, respectively. Thirty-nine samples showed 94-98% identity with other Sarcocystidae and, probably, these are new species. Genotyping of positive primary samples for T. gondii was complete from one insectivorous bat (Eumops glaucinus), corresponding to genotype # 69 and from other insectivorous bat (E. glaucinus), showing genotype # 6, which corresponds to the Type BrI. It is necessary to investigate the importance of bats as reservoirs of infectious diseases, and it could be suggested the inclusion of the diagnosis of T. gondii as a differential to rabies. We also emphasize the importance of T. gondii genotypes from bats being shared with terrestrial hosts and of studies on Sarcocystidae in bats in order to better understand the host-parasite relationship.

Os trabalhos existentes sobre protozoários pertencentes à família Sarcocystidae em morcegos são escassos e desatualizados. No Brasil, a ocorrência de Toxoplasma gondii é bem documentada nas espécies domésticas e no Homem, existindo relatos em diversos hospedeiros selvagens. Mundialmente, existe um grande interesse no conhecimento da variedade genética de T. gondii realizada por meio da Reação em Cadeia pela Polimerase Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos de DNA gerados por Enzimas de Restrição (PCR-RFLP). No presente trabalho, objetivou-se pesquisar a frequência de ocorrência de anticorpos anti-T. gondii, isolar e caracterizar molecularmente T. gondii e investigar a presença de coccídios da família Sarcocystidae em morcegos de vida livre no estado de São Paulo. Um total de 1921 morcegos, provenientes de 15 municípios do estado de São Paulo, foi examinado durante o período de março de 2010 a março de 2011. Obteve-se 14,89% (28/188) de positividade para T. gondii na Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI ≥ 16) e 18,61% (35/188) no Teste de Aglutinação Modificado (MAT ≥ 25), com baixa concordância entre as técnicas utilizando o índice Kappa (K=0,046). De um total de 282 bioensaios em camundongos, foram obtidos dois isolados, sendo TgBatBr1 proveniente de Molossus molossus, insetívoro, macho e adulto, e TgBatBr2 proveniente de Desmodus rotundus, hematófago, macho e adulto, ambos causando 100% de mortalidade em camundongos. A genotipagem dos isolados e das amostras primárias de morcegos positivas para T. gondii foi feita por meio da PCR-RFLP com os marcadores SAG1, 5\'3\'SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, alt. SAG2, c22-8, c29-2, PK1, Apico, L358 e CS3, revelando os genótipos ToxoDB-RFLP #162 e #19, respectivamente, para os isolados TgBatBr1 e TgBatBr2. Para a investigação molecular dos sarcocistídeos foram utilizados primers que amplificam a região 18S do DNA ribossomal e as amostras positivas foram sequenciadas. A análise de sequências pôde ser realizada em 48 das amostras positivas para Sarcocystidae, encontrando-se 100% de identidade com T. gondii em quatro morcegos e também 100% de identidade com Neospora caninum, Hammondia hammondi, Cystoisospora ohioensis e Frenkelia glareoli em um morcego, respectivamente. Outras 39 amostras apresentaram identidade de 94-98% com outros sarcocistídeos e, provavelmente, devem ser novas espécies. Foi possível a genotipagem de amostras primárias positivas para T. gondii de um morcego insetívoro (Eumops glaucinus), correspondendo ao genótipo #69 e de outro morcego insetívoro (E. glaucinus), apresentando o genótipo #6, que corresponde ao Tipo BrI. Há uma necessidade de se investigar a importância dos morcegos como reservatórios de doenças infecciosas, podendo-se sugerir a inclusão do diagnóstico de T. gondii como diferencial para raiva. Ressalta-se também a importância do compartilhamento dos genótipos de T. gondii dos morcegos com hospedeiros terrestres e dos estudos sobre sarcocistídeos em morcegos, a fim de compreender melhor as relações parasita-hospedeiro. / The existing studies on protozoa belonging to the Sarcocystidae family are scarce and outdated in free-living bats. In Brazil, the occurrence of Toxoplasma gondii is well documented in domestic animals and humans, with reports in several wild hosts. Worldwide, there is a great interest in understanding the genetic variation of T. gondii using differen molecular tools as the Polymerase Chain Reaction Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP). The present study aimed to research the frequency of occurrence of anti-T. gondii antibodies, to isolate and molecularly characterize T. gondii and to investigate the presence of coccidia from Sarcocystidae family in free-living bats from São Paulo state. A total of 1921 bats from 15 municipalities in São Paulo state were examined from March 2010 to March 2011. It was obtained 14.89% (28/188) of positivity for T. gondii by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA ≥ 16) and 18.61% (35/188) by Modified Agglutination Test (MAT ≥ 25) with low agreement between techniques when using Kappa (K = 0.046). From a total of 282 bioassays in mice, two bat isolates were obtained, TgBatBr1 from Molossus molossus, an insectivorous, male, adult bat, and TgBatBr2 from Desmodus rotundus, a vampire, male, adult bat, both causing 100% of mouse mortality. Genotyping of isolates and T. gondii positive primary samples from bats were performed by PCR-RFLP using markers SAG1, 5\'3\'SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, alt. SAG2, c22-8, c29-2, PK1, Apico, L358 and CS3, revealing ToxoDB-RFLP genotypes #162 and #19, respectively, for isolates TgBatBr1 and TgBatBr2. Primers that amplify the 18S ribosomal DNA region were employed for molecular investigation of Sarcocystidae in primary samples and the positive samples were sequenced. Analysis of sequence could be accomplished for 48 Sarcocystidae positive samples. A 100% identity with T. gondii was found in four bats, and with Neospora caninum, Hammondia hammondi, Cystoisospora ohioensis and Frenkelia glareoli in a bat, respectively. Thirty-nine samples showed 94-98% identity with other Sarcocystidae and, probably, these are new species. Genotyping of positive primary samples for T. gondii was complete from one insectivorous bat (Eumops glaucinus), corresponding to genotype # 69 and from other insectivorous bat (E. glaucinus), showing genotype # 6, which corresponds to the Type BrI. It is necessary to investigate the importance of bats as reservoirs of infectious diseases, and it could be suggested the inclusion of the diagnosis of T. gondii as a differential to rabies. We also emphasize the importance of T. gondii genotypes from bats being shared with terrestrial hosts and of studies on Sarcocystidae in bats in order to better understand the host-parasite relationship.

Cryptosporidium é um coccídeo que acomete peixes, répteis, anfíbios, aves e mamíferos. O papel dos animais na dinâmica de transmissão deste agente ao homem é pouco conhecido e a ocorrência na população animal é motivo de preocupação para a saúde pública, devido ao potencial zoonótico. O objetivo deste estudo foi obter informações de natureza epidemiológica pela caracterização genotípica de isolados de gatos, cães e bovinos do Estado de São Paulo e avaliar a diversidade nucleotídica das seqüências obtidas. Foi realizada a extração de DNA dos oocistos e a amplificação destes pela reação em cadeia da polimerase (Nested PCR) utilizando primers específicos para a amplificação de fragmentos do gene codificador da subunidade 18S do RNA ribossômico e posterior sequenciamento. Através do exame de fezes de 106 amostras de felinos, 119 de caninos e 123 de bovinos foi observada positividade em três (2,8%), 15 (12,6%) e 21 (17,1%), respectivamente. Nas amostras positivas de bovinos a análise morfológica revelou 16 (76,2%) como Cryptosporidium tipo parvum e cinco (23,8%) como Cryptosporidium andersoni. Para a análise genotípica amostras anteriormente obtidas, foram associadas, sendo analisadas sete amostras de gatos, nove de cães e nove de bovinos. Das sete amostras de gatos a análise genotípica revelou, em todas, Cryptosporidium felis, sendo estas as primeiras caracterizações genotípicas de isolados de felinos domésticos no Brasil. Nas nove amostras de cães seqüenciadas revelou-se identidade genotípica compatível com Cryptosporidium canis em todas as amostras, sugerindo que esta espécie está conservada no Estado de São Paulo. A análise genotípica das amostras de bovinos revelou Cryptosporidium parvum Eire I em duas amostras, Cryptosporidium parvum genótipo bovino em seis amostras e Cryptosporidium bovis em outra amostra sendo, esta última espécie, não zoonótica, e não relacionada a sintomas clínicos e sendo descrita pela primeira vez no Brasil. / Cryptosporidium is a coccidia which contaminates fish, reptiles, amphibians, birds and mammals. The animals role in the transmission dynamics of this protozoa to man is not well known and its occurrence in the animal population is a cause for concern to public health due to its zoonotic potential. The objective of this study was to obtain information of epidemiological nature by genotypic characterization of isolates from dogs, cats and bovine from the State of São Paulo and to evaluate nucleotidic diversity of the existing sequences. The extraction of DNA from oocysts was carried out and the amplification was made by the polymerase chain reaction (Nested PCR) using specific primers for the amplification of fragments from the code gene of subunit 18S of ribosomal RNA and post sequencing. Through a feces examination, in 106 cat samples, 119 dog samples and 123 bovine samples, positivity was observed in three (2.8%), 15 (12.6%) and 21 (17.1%), respectively. In the positive bovine samples the morphologic analysis revealed 16 (76.2%) as Cryptosporidium type parvum and five (23.8%) as Cryptosporidium andersoni. For the purpose of genotypic analyses, previously obtained samples, were associated, with analyses of seven cat samples, nine dog samples and nine bovine samples. From the seven cat samples the genotypic analyses, revealed Cryptosporidium felis in all. These were the first genotypic characterizations of Cryptosporidium from domestic felines in Brazil. In nine sequenced samples from dogs, genotypic identities compatible with Cryptosporidium canis, were revealed in all samples, suggesting that this species is conserved in State of São Paulo. The genotypic analysis in bovines revealed Cryptosporidium parvum Eire I in two samples, Cryptosporidium parvum bovine genotype in six samples and Cryptosporidium bovis in another sample, the last one being a non zoonotic species, not related to clinical symptoms and described for the first time in Brazil.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-03-01T13:35:46Z No. of bitstreams: 1 Marcio Andre da Silva.pdf: 5241571 bytes, checksum: dd6c19190122b09d3dc1755501398c93 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-01T13:35:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcio Andre da Silva.pdf: 5241571 bytes, checksum: dd6c19190122b09d3dc1755501398c93 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Toxoplasma gondii is a wide world distribution parasite and has a clonal population structure. Recent studies have shown greater genetic variability of this protozoan in Brazil in domestic and wild animals, needing more research with this last group. The aim of this study was to isolate and make genotypic characterization of Toxoplasma gondii in tissues of naturally infected wild mammals and birds, from free ranging and captivity at Pernambuco, and verify antibodies occurrence against this parasite in samples were sera was obtained. From 2014 March to 2015 September, 233 biological samples were collected from 113 birds and 120 mammals. Considering origin, 77 animals were from free ranging and 156 were from captivity, from a zoo and a wildlife rehabilitation center. Serological exam was performed in 165 animals (59 birds and 106) mammals) by Modified Agglutination Test (MAT). In 105 animals there was gathering of heart, brain, skeletal muscle and diaphragm fragments. From those 105 samples, 32 were submitted to mouse bioassay and 73 were submitted to direct molecular diagnosis by PCR from a fragment of B1 gene 155-pb. For virulence analysis, mice used in bioassays were evaluated for four weeks in search of toxoplasmosis clinical signs. Positive samples of wild animals and mice were submitted to genotyping by PCR-RFLP technique, using markers SAG1, 5’3’SAG2, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico and CS3. Anti-T. gondii antibodies were found in 52,7% (87/165) of the samples, with higher percentages in captivity animals (61,6%, 78/125), than in free ranging ones (22,5%, 9/40). In bioassays, one non virulent sample was isolated, of genotype #13 from a free ranging striated heron (Butorides striata) from Recife. From the 73 primary samples submitted to PCR, seven were positive, with identification of genotype Type BrIII in a captive tropical otter (Lontra longicaudis). Both genotypes identified corroborate with the existence of genetic variability of T. gondii in Pernambuco. Two blonde capuchin monkeys (Sapajus flavius) positive by PCR had necropsy findings compatible with death by acute toxoplasmosis. The enhancement of preventive veterinary medicine and biosecurity programs for toxoplasmosis must be performed in institutions that keep captive wildlife. / Toxoplasma gondii é um parasito de ampla distribuição mundial e apresenta uma estrutura populacional clonal. Estudos recentes evidenciaram maior variabilidade genética deste protozoário no Brasil em animais domésticos e silvestres, necessitando-se de maiores pesquisas neste último grupo. Objetivou-se isolar e caracterizar genotipicamente Toxoplasma gondii em tecidos de mamíferos e aves silvestres naturalmente infectados, provenientes de vida livre e de cativeiro, no estado de Pernambuco e verificar a ocorrência de anticorpos contra o parasito nas amostras em que foi possível obter o soro. De março de 2014 a setembro de 2015, foram colhidas amostras biológicas de 233 animais, sendo 113 aves e 120 mamíferos. Considerando a origem, 77 foram de vida livre e 156 de cativeiro, oriundos de um zoológico e de um Centro de Triagem de Animais Silvestres (CETAS). O exame sorológico foi realizado em 165 animais (59 aves e 106 mamíferos) por meio do Teste de Aglutinação Modificado (MAT). Em 105 animais (71 aves e 34 mamíferos) houve colheita de fragmentos de coração, cérebro, músculo esquelético e diafragma. Destas 105 amostras, 32 foram submetidas ao bioensaio em camundongos e 73 foram submetidas a diagnóstico molecular direto por PCR a partir de um fragmento de 155-pb do gene B1. Para a análise de virulência das cepas, os camundongos utilizados nos bioensaios foram avaliados por quatro semanas quanto à manifestação de sinais clínicos de toxoplasmose. As amostras positivas de animais silvestres e camundongos foram submetidas à genotipagem pela técnica de PCR-RFLP, utilizando os marcadores SAG1, 5’3’SAG2, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3. Anticorpos anti-T. gondii foram encontrados em 52,7% (87/165) das amostras, com maiores percentuais em animais de cativeiro (61,6%, 78/125) do que em animais de vida livre (22,5%, 9/40). No bioensaio, isolou-se uma amostra não virulenta, do genótipo #13 em um socozinho (Butorides striata) de vida livre proveniente de Recife. Das 73 amostras primárias submetidas à PCR, sete foram positivas, com identificação o genótipo Type BrIII em uma lontra (Lontra longicaudis) de cativeiro. Os dois genótipos identificados corroboram com a existência da variabilidade genética de T. gondii em Pernambuco. Dois macacos-pregos-galegos (Sapajus flavius) positivos pela PCR tiveram achados de necropsia compatíveis com óbito por toxoplasmose aguda. O aprimoramento de programas de medicina veterinária preventiva e biossegurança para o controle da toxoplasmose deve ser realizado em instituições que mantém fauna silvestre ex situ.

Cryptosporidium é um coccídeo que acomete peixes, répteis, anfíbios, aves e mamíferos. O papel dos animais na dinâmica de transmissão deste agente ao homem é pouco conhecido e a ocorrência na população animal é motivo de preocupação para a saúde pública, devido ao potencial zoonótico. O objetivo deste estudo foi obter informações de natureza epidemiológica pela caracterização genotípica de isolados de gatos, cães e bovinos do Estado de São Paulo e avaliar a diversidade nucleotídica das seqüências obtidas. Foi realizada a extração de DNA dos oocistos e a amplificação destes pela reação em cadeia da polimerase (Nested PCR) utilizando primers específicos para a amplificação de fragmentos do gene codificador da subunidade 18S do RNA ribossômico e posterior sequenciamento. Através do exame de fezes de 106 amostras de felinos, 119 de caninos e 123 de bovinos foi observada positividade em três (2,8%), 15 (12,6%) e 21 (17,1%), respectivamente. Nas amostras positivas de bovinos a análise morfológica revelou 16 (76,2%) como Cryptosporidium tipo parvum e cinco (23,8%) como Cryptosporidium andersoni. Para a análise genotípica amostras anteriormente obtidas, foram associadas, sendo analisadas sete amostras de gatos, nove de cães e nove de bovinos. Das sete amostras de gatos a análise genotípica revelou, em todas, Cryptosporidium felis, sendo estas as primeiras caracterizações genotípicas de isolados de felinos domésticos no Brasil. Nas nove amostras de cães seqüenciadas revelou-se identidade genotípica compatível com Cryptosporidium canis em todas as amostras, sugerindo que esta espécie está conservada no Estado de São Paulo. A análise genotípica das amostras de bovinos revelou Cryptosporidium parvum Eire I em duas amostras, Cryptosporidium parvum genótipo bovino em seis amostras e Cryptosporidium bovis em outra amostra sendo, esta última espécie, não zoonótica, e não relacionada a sintomas clínicos e sendo descrita pela primeira vez no Brasil. / Cryptosporidium is a coccidia which contaminates fish, reptiles, amphibians, birds and mammals. The animals role in the transmission dynamics of this protozoa to man is not well known and its occurrence in the animal population is a cause for concern to public health due to its zoonotic potential. The objective of this study was to obtain information of epidemiological nature by genotypic characterization of isolates from dogs, cats and bovine from the State of São Paulo and to evaluate nucleotidic diversity of the existing sequences. The extraction of DNA from oocysts was carried out and the amplification was made by the polymerase chain reaction (Nested PCR) using specific primers for the amplification of fragments from the code gene of subunit 18S of ribosomal RNA and post sequencing. Through a feces examination, in 106 cat samples, 119 dog samples and 123 bovine samples, positivity was observed in three (2.8%), 15 (12.6%) and 21 (17.1%), respectively. In the positive bovine samples the morphologic analysis revealed 16 (76.2%) as Cryptosporidium type parvum and five (23.8%) as Cryptosporidium andersoni. For the purpose of genotypic analyses, previously obtained samples, were associated, with analyses of seven cat samples, nine dog samples and nine bovine samples. From the seven cat samples the genotypic analyses, revealed Cryptosporidium felis in all. These were the first genotypic characterizations of Cryptosporidium from domestic felines in Brazil. In nine sequenced samples from dogs, genotypic identities compatible with Cryptosporidium canis, were revealed in all samples, suggesting that this species is conserved in State of São Paulo. The genotypic analysis in bovines revealed Cryptosporidium parvum Eire I in two samples, Cryptosporidium parvum bovine genotype in six samples and Cryptosporidium bovis in another sample, the last one being a non zoonotic species, not related to clinical symptoms and described for the first time in Brazil.

Submitted by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2017-03-14T14:40:28Z No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Andrea Ferreira de Oliveira.pdf: 1343240 bytes, checksum: f3c795b84863003dd18f3429beee0ae5 (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2017-03-14T16:01:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Andrea Ferreira de Oliveira.pdf: 1343240 bytes, checksum: f3c795b84863003dd18f3429beee0ae5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T16:01:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Andrea Ferreira de Oliveira.pdf: 1343240 bytes, checksum: f3c795b84863003dd18f3429beee0ae5 (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / CAPES / A elevada manipulação, distribuição e armazenamento dos combustíveis e seus compostos, como os hidrocarbonetos de petróleo, aumenta a probabilidade de acidentes ambientais podendo causar contaminação de solo e fontes de abastecimento público, tais como as águas subterrâneas. Atualmente, a biorremediação destaca-se como uma das técnicas mais utilizadas para recuperação ambiental, empregando bactérias na degradação dos compostos contaminantes. A pesquisa foi realizada em Alta Floresta – MT, e dividida em dois trabalhos. O primeiro verificou se os hidrocarbonetos de petróleo interferem na densidade populacional das comunidades bacterianas de ambientes contaminados nos períodos sazonais de seca e cheia, e o segundo analisou a similaridade bacteriana entre dois poços de monitoramento contaminados. Foram coletadas amostras de água subterrânea e solo do local contaminado utilizando bailers e frascos de plástico estéreis, as amostras foram acondicionadas e transportadas refrigeradas de acordo com técnicas padronizadas. No primeiro trabalho foi avaliada a área contaminada em Alta Floresta, BTEX, variáveis ambientais, e densidade bacteriana de coliformes totais, Escherichia coli, bactérias heterotróficas totais (BHT) e bactérias degradadoras de hidrocarbonetos de petróleo. O levantamento para determinação das áreas contaminadas foi realizado na SEMA-MT, sendo que para os BTEX foi utilizado cromatógrafo a gás, detector de massas e injetor. A sonda multiparâmetros, por sua vez, foi usada para aferir as variáveis ambientais enquanto que as técnicas convencionais de microbiologia foram utilizadas para determinar as densidades bacterianas. No segundo trabalho foram analisadas as variáveis ambientais, BTEX, densidade e diversidade de bactérias degradadoras de hidrocarbonetos, tendo sido utilizada sonda multiparâmetros para as variáveis ambientais, cromatógrafo a gás, detector de massas e injetor para os BTEX, além de técnicas de microbiologia convencional para determinar a densidade bacteriana e técnicas moleculares (BOX-PCR e aplicativo Bionumerics 7.1) para determinar a diversidade. A pesquisa feita no primeiro trabalho confirmou que na cidade de Alta Floresta constava apenas dois postos de combustíveis contaminados (dados da Secretaria Estadual de Meio Ambiente), e as análises realizadas na área de estudo constatou contaminação por BTEX no posto onde o estudo foi realizado, sendo que em alguns pontos o valor encontrado foi elevado como no PM2 apresentou 597,05 μg/L. Durante a primeira coleta, os resultados mais elevados para as variáveis ambientais foram de 6,87 para pH, 29,7 °C de temperatura, 6,96 mg/L de oxigênio dissolvido e 604 mS/m de condutividade elétrica. O PM4 foi o que apresentou maior densidade de coliformes totais (5,95 Log NMP/100 mL) durante a segunda coleta e ausência de E. coli durante ambos os períodos. Para o solo, o ponto com maior densidade de BHT foi o S8 com 5,92 Log UFC/g e para água foi no PM4, durante a primeira coleta com 4,30 Log UFC/mL. A densidade das bactérias degradadoras de hidrocarbonetos foi mais elevada no PM4 (3,68 Log UFC/mL) na primeira coleta. No segundo trabalho o ponto mais contaminado foi o PM1, sendo que o Tolueno foi o composto mais encontrado (267,08 μg/L), a densidade mais elevada das bactérias degradadoras de petróleo, por sua vez, foi no PM2 com 4,05 Log UFC/mL. A diversidade foi maior no PM1, sendo que apenas 20% das linhagens apresentaram similaridade de 100%. De forma geral os postos de combustíveis são áreas suscetíveis a contaminação, os BTEX e as variáveis ambientais podem alterar a densidade e diversidade das comunidades bacterianas do local contaminado. Com os resultados encontrados na pesquisa observa-se que a contaminação no local ocorre de forma difusa e que a hipótese de biorremediação na área não pode ser descartada. / The high handling, distribution and storage of fuels and their compounds such as petroleum hydrocarbons, increases the likelihood of environmental accidents may cause soil contamination and public sources of supply, such as groundwater. Currently, bioremediation stands out as one of the most widely used techniques for environmental restoration, using bacteria in degradation of the contaminating compounds. The survey was conducted in Alta Floresta - MT, and split into two pieces. The first verified that the petroleum hydrocarbons interfere with the population density of the bacterial communities of contaminated environments in seasonal periods of drought and flood, and the second examined the bacterial similarity between two contaminated monitoring wells. Ground water and local soil samples were collected using bailers contaminated and sterile plastic bottles, the samples were chilled packaged and transported according to standard techniques. In the first study evaluated the contaminated area in Alta Floresta, BTEX, environmental variables, and bacterial density of coliforms, Escherichia coli, total heterotrophic bacteria (THB) and degrading bacteria petroleum hydrocarbons. The survey to determine the contaminated areas was held at the SEMA-MT, and for BTEX was used gas chromatograph, mass detector and gun. The Multiparameter probe, in turn, was used to measure environmental variables, while the conventional microbiological techniques were used to determine the bacterial densities. In the second study analyzed environmental variables, BTEX, density and diversity of hydrocarbon degrading bacteria, having been used probe multiparameter to environmental variables, gas chromatograph, mass detector and gun for BTEX, in addition to conventional microbiological techniques for determine the bacterial density and molecular techniques (BOX-PCR and application Bionumerics 7.1) to determine the diversity. The research done in the first work confirmed that the city of Alta Floresta contained only two contaminated gas stations (data from the State Department of the Environment), and the analyzes performed in the study area found contamination by BTEX in the position where the study was conducted, and in some places the value was high as the PM2 had 597.05 μg/L. During the first collection, the highest results for the environmental variables were 6.87 for pH, 29.7°C, 6.96 mg/L of dissolved oxygen and 604 mS /m conductivity. The PM4 was the one with the highest density of coliform (5.95 Log MPN/100mL) during the second collection and absence of E. coli during both periods. To the ground, the point with greatest density was HBT S8 to 5.92 Log FUC/g and the water was PM4, during the first sample with Log 4.30 FUC/mL. The density of hydrocarbon degrading bacteria was higher in PM4 (3.68 Log FUC/mL) in the first collection. In the second working point the most contaminated was M1, and the t luene was und m e c mp und (267.08 μg/L), the highest density of petroleum degrading bacteria, in turn, was in PM2 to 4.05 Log FUC/mL. Diversity was higher in the PM1, with only 20% of the strains showed similarity of 100%. In general, the gas stations are areas susceptible to contamination, BTEX and environmental variables can alter the density and diversity of the bacterial communities of the contaminated site. With the results found in the study it was observed that the contamination at the site occurs diffusely and bioremediation hypothesis in the area can not be ruled out.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-19T14:26:43Z No. of bitstreams: 1 Mayra Zilta Perminio Rodrigues Bezerra Almeida.pdf: 885886 bytes, checksum: 6037f5e7b77593c2f32547d40123421b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-19T14:26:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mayra Zilta Perminio Rodrigues Bezerra Almeida.pdf: 885886 bytes, checksum: 6037f5e7b77593c2f32547d40123421b (MD5) Previous issue date: 2008-02-04 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The aim of this work was to accomplish a study of subclinical mastitis in ewes of Santa Inês breed and the influence over the physical-chemical characteristics. It was analyzed 31 flocks totalizing 135 primiparous and multiparous ewes in different lactation stages. It was examined 244 mammary glands before the milking samples was collected to realization of Califórnia Mastitis Testis (CMT), somatic cell direct count (SCC), bacteriological analysis and physicalchemical milk compounds (Dornic acidity, chloride concentration, density, fat and pH ). The main epidemiological characteristics of the herds was marked as well as the genotypic characterization of the 18 S.aureus isolates by the PFGE (pulsed-field gel electhrophoresis). Of the 244 analysed samples by CMT, 172 were negative and 72 positive. It was observed in the CMT positive samples, bacterial growth in 73,61%, whislt in the negative 27,32 with association between CMT and bacterial growth (P<0,05). The SCC mean values related to negative CMT was 1,57 x 105 cells/mL, and the positive samples 1+, 2+ and 3+, respectely, 1,01 x 106 cells/mL, 3,23 x 106 cells/mL and 8,41 x 106 cells/mL. With strong dependency between SCC in relation to the intensity of CMT reaction. The microorganisms isolated were Staphyloccus coagulase negative (65,09%), Staphylococcus aureus (13,21%), Staphylococus hyicus (1,88%), Streptococcus spp.(7,55%), Bacillus spp.(2,83%), Citrobacter freundi (0,94%)i, Pantoea agglomerans (0,94%), Enterobacter cloacae (1,88%), Escherichia coli (0,94%), Burkholderia cepacia (1,88%), Pseudomonas putida (0,94%), Pseudomonas stutzeri (0,94%) e Stenotrophomonas maltophilia (0,94%). In a general manner all isolates were sensitive to the antimicrobians tested. The CMT showed to be a good indicator of subclinical mastitis in this species. With recommendations to collect and to do bacterial isolation of the results 1+ and over. It was verified that the chances of infected glands dettection are higher in SCC results over 1 x 106 cells/mL. In consideration of the different bacterial agents isolated the intramammary infections by coagulase positive Staphylococci and Gram negative bacterias cause more intense alterations in the physical-chemical constituents. It was observed alterations (P<0,05) of the values of the Dornic acidity, chloride concentration, pH and density. Of the 31 analysed flocks 25 (80,65%) had reactive animals to the CMT. 61,97% of the cases were multiparous ewes, 56,34% in females with one lamb and 66,07% had one mammary gland compromised. In the genotypic characterization of the S. aureus strains, three lineages was observed of which LA and LC were the most prevalent ones with 38,9and 50,0%, respectively, with distribution in the flocks where this agent was isolated. / Este trabalho teve por objetivo realizar um estudo da mastite subclínica em ovelhas da raça Santa Inês e sua influência sobre as características físico-químicas do leite. Foram analisados 31 rebanhos, destes 135 ovelhas, primíparas e multíparas em diferentes estágios de lactação. Foram examinadas 244 glândulas mamárias, com posterior colheita do leite para realização do Califórnia Mastitis Test (CMT), contagem direta de células somáticas (CCS), análise bacteriológica e fisico-química dos componentes do leite (acidez Dornic, teor de cloretos, densidade, gordura e pH). Foram assinaladas as principais características epidemiológicas dos rebanhos estudados, assim como a caracterização genotípica de 18 isolados de S. aureus pela técnica de eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Das 244 amostras analisadas pelo CMT, 172 (70,49%) foram negativas e 72 (29,50%) positivas. Verificou-se nas amostras positivas ao CMT, crescimento bacteriano em 73,61%, enquanto nas negativas, 27,32%, sendo observada associação entre o CMT e o crescimento bacteriano (p<0,05). Os valores médios de CCS relacionados ao CMT negativo foram de 1,57 x 105 céls/mL e das amostras positivas de 1+; 2+ e 3+, respectivamente de 1,01 x 106 céls/mL, 3,23 x 106células/mL e 8,41x 106 céls/mL, existindo forte dependência da CCS em relação à intensidade da reação do CMT. Os microrganismos isolados foram Staphylococcus coagulase negativo (65,09%), Staphylococcus aureus (13,21%), Staphylococus hyicus (1,88%), Streptococcus spp. (7,55%), Bacillus spp. (2,83%), Citrobacter freündii (0,94%), Pantoea agglomerans (0,94%), Enterobacter cloacae (1,88%), Escherichia coli (0,94%), Burkholderia cepacia (1,88%), Pseudomonas putida (0,94%), Pseudomonas stutzeri (0,94%) e Stenotrophomonas maltophilia (0,94%). De maneira geral os isolados foram sensíveis aos antimicrobianos testados. O CMT demonstrou ser um bom indicador da mastite subclínica nesta espécie animal, sendo recomendado a colheita para isolamento bacteriano as amostras com resultados a partir de 1+. Constatou-se que as chances de detecção de glândulas infectadas são maiores em resultados de CCS a partir de 1 x 106 céls/mL. Considerando os diferentes agentes bacterianos isolados, as infecções intramamárias por Staphylococcus coagulase positivo e bactérias Gram-negativas acarretaram alterações mais intensas (P < 0,05) nos constituintes físico-químicos avaliados. Foi verificado alterações (P<0,05) nos valores da acidez Dornic, teor de cloretos, pH e densidade. Dos 31 rebanhos analisados, 25 (80,65%) tiveram animais reagentes ao CMT. 61,97% dos casos foram observados em ovelhas multíparas,56,34% em fêmeas com apenas uma cria e 66,07% destes animais tinham acometimento mamário unilateral. Na caracterização genotípica das cepas de S. aureus evidenciou-se três linhagens, destas LA e LC foram as mais prevalentes 38,9% e 50% respectivamente, estando distribuídas nos rebanhos em que este agente foi isolado.