Orientador: Albina Messias de Almeida Milani Altemani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T05:51:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soares_AndresaBorges_D.pdf: 9373793 bytes, checksum: c79095bbf9f926b5658e0a10dfc3f94c (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Carcinoma ex-adenoma pleomórfico (CXAP) é uma neoplasia geralmente de alto grau, com risco moderado para metástase cervical. O objetivo do trabalho foi analisar a vascularização tumoral sanguínea e linfática numa série de CXAP, que representam as diferentes fases da seqüência adenoma-carcinoma. Em oito CXAP precoces (intracapsulares ou minimamente invasores), oito avançados (francamente invasores) e 10 adenomas pleomórficos (AP) sem transformação maligna usamos os seguintes anticorpos: D2-40, Ki-67, CD34, CD105, a- SMA, CK7 e 14. A vascularização sanguínea foi estudada através da microdensidade vascular intratumoral (MDV) e área vascular total (AVT). A vascularização linfática, através da microdensidade vascular linfática (MVL) intratumoral e peritumoral. Em relação à vascularização sanguínea, a MDV pelo CD 105 mostrou forte correlação positiva com a progressão tumoral, enquanto que a MDV pelo CD 34 e a ATV não apresentaram nenhuma correlação. Carcinomas com diferenciação mioepitelial apresentavam MDV pelo CD 105 mais baixa, mas os mais altos valores de ATV. Quanto à vascularização linfática, em AP e CXAP precoces, foram encontrados raros, se algum, linfático intratumoral, enquanto que em CXAP avançados eles eram mais numerosos, porém Ki 67 negativos. Êmbolos peri e intratumorais foram vistos apenas nos CXAP sem diferenciação mioepitelial. Em conclusão, com o CD 105 demostrou-se forte correlação positiva entre angiogênese e progressão tumoral. A vascularização linfática é formada predominantemente por vasos pré-existentes, encontrados principalmente nos CXAP avançados. Tanto linfáticos intratumorais como peritumorais são condutores de êmbolos neoplásicos. CXAP com diferenciação mioepitelial mostram atividade angiogênica mais baixa associada a valores mais altos de área vascular e capacidade mais baixa para invadir vasos linfáticos / Abstract: Carcinoma ex pleomorphic adenoma (CXPA) usually is a high-grade carcinoma with a moderate risk for neck metastasis. In a series of CXPAs, which represent the different phases of the adenoma¿carcinoma sequence, we investigated lymphatic vascular density (LVD), lymph vessel endothelial proliferation and whether an angiogenic switch would take place during the malignant transformation of PA into carcinoma and during tumor progression. The CXPAs were classified into two main groups: early tumors - 8 cases (4 intracapsular and 4 minimally invasive carcinomas), and advanced tumors ¿ 8 cases (8 widely invasive carcinomas). In addition, 10 cases of pleomorphic adenoma (PA) without malignant transformation were also analyzed. The following antibodies were used: CD34, CD 105, D2-40, Ki-67, a-smooth-muscle actin, vimentin, cytokeratins 7 and 14. Microvascular density (MVD) for CD 105 increased significantly during tumor progression whereas this was not the case for CD 34 MVD. Comparing widely invasive CXPA with and without myoepithelial differentiation, CXPA with myoepithelial differentiation showed a significantly lower number of CD 105 positive vessels but revealed higher total vascular area (TVA) values. In terms of lymph vessels, PA without malignant transformation and early CXPA contained rare, if any, lymph vessels whereas in widely invasive carcinomas they were more numerous but Ki-67 negative. Carcinomatous emboli were found in peritumoral as well as in intratumoral lymphatics only in advanced CXPA without myoepithelial differentiation. In conclusion, the antibody CD 105 shows an angiogenic switch during the progression from adenoma to carcinoma in salivary glands. In terms of lymphatic vessels, in CXPA, the lymphatic network is mainly composed of pre-existing lymphatics which are mainly found in advanced CXPA. In the widely invasive CXPA, intratumoral as well as peritumoral lymphatics are a conduit for carcinoma cells. Carcinomas with myoepithelial differentiation show low angiogenesis associated with high TVA value and the neoplastic cells seem to have a lower vascular invasion capacity / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

O adenoma pleomórfico (AP) é a neoplasia mais frequente das glândulas salivares e a sua transformação maligna em um carcinoma ex-adenoma pleomórfico (CXAP) é um evento incomum que ocorre em menos de 10% dos casos. O CXAP é tipicamente uma neoplasia infiltrativa, de alto grau e associada com metástase linfonodal no momento do diagnóstico. Acredita-se que a patogênese do CXAP tenha como base o acúmulo de alterações genéticas em APs de longa duração. Evidências recentes têm demonstrado que neoplasias podem conter subpopulações de células raras, com capacidade de auto-renovação e potencial proliferativo indefinido, as chamadas células-tronco neoplásicas (CTN). As CTN parecem estar envolvidas nos processos de iniciação e progressão neoplásicas, assim como metástases e resistência terapêutica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão imuno-histoquímica, tanto nas áreas benignas quanto nas malignas, dos fatores de transcrição relacionados à pluripotência de células-tronco Bmi-1, SOX2 e Nanog em CXAPs em fases precoces (7 intracapsulares e 3 minimamente invasivos) e avançada (14 francamente invasivos) de progressão histológica. A análise dos resultados de imuno-histoquímica foi realizada de maneira semi-quantitativa de acordo com o escore 0 (ausência de células positivas), 1 (<30% de células positivas), 2 (30-60% de células positivas e 3 (>60% de células positivas). Correlacionou-se, ainda, esses resultados com parâmetros anatomopatológicos de agressividade neoplásica através do teste Exato de Fisher. A parótida foi a glândula mais acometida em ambos os grupos (62,5%), e homens e mulheres foram igualmente acometidos. A média de idade foi 61,1 anos. No grupo de CXAPs precoces, Bmi-1 foi expresso no componente carcinomatoso de todos os casos e em escassas células das áreas benignas de 1 caso. O fator SOX2 foi expresso pelas células carcinomatosas em 90% desses casos e em escassas células do AP residual de 1 caso. Já Nanog foi expresso apenas no componente maligno de 60% dos casos. Por outro lado, Bmi-1 foi expresso nas áreas malignas de 71,4% dos CXAPs avançados e em ocasionais células da área benigna de 1 caso. O AP residual de nenhum caso desse grupo foi positivo para SOX2 e Nanog, que foram expressos pelas áreas malignas em 92,8% e 35,7% dos casos, respectivamente. Assim, notou-se queda na expressão de Bmi-1 e Nanog na progressão do CXAP. Ainda, a expressão de SOX2 parece correlacionar-se com necrose neoplásica (p=0,06) e metástase linfonodal ao diagnóstico (p=0,08), entretanto a amostra estudada parece pequena para evidenciar esse dado estatístico. Concluiu-se que Bmi-1, SOX2 e Nanog são superexpressos na transformação maligna do AP. Entretanto, Bmi-1 e Nanog aparentemente não exercem função determinante no processo de progressão neoplásica, ao passo que SOX2 parece contribuir com o processo de metástase em CXAP. / Pleomorphic adenoma (PA) is the most common salivary gland tumor and its malignant transformation into a carcinoma ex pleomorphic adenoma (CXPA) is an unusual event occuring in less than 10% of the cases. The CXPA is typically an infiltrative and high-grade neoplasm at diagnosis associated with lymph node metastases. It is believed that the pathogenesis of CXPA is based on the accumulation of genetic changes in long-standing PAs. Recent evidences have shown that tumors may contain subpopulations of rare cells, capable of self-renewal, and with indefinite proliferative potential, the so-called neoplastic stem cells (NSC). The NSC appears to be involved in neoplastic initiation and progression, as well as metastasis and treatment resistance. The objective of this study was to evaluate the immunohistochemical expression of stem cell-related pluripotency transcription factors Bmi-1, SOX2, and Nanog in benign and malignant areas of CXPA at early (7 intracapsular and 3 minimally invasive) and advanced (14 frankly invasive) stages of histological progression. Immunohistochemical analysis was performed semiquantitatively according to the scores 0 (no positive cell), 1 (<30% positive cells), 2 (30-60% of cells positive, and 3 (>60% positive cells). These results were also correlated with pathological parameters of neoplastic aggressiveness using the Fisher\'s Exact test. The parotid gland was the most affected site in both groups (62.5%), and men and women were equally affected. The mean age was 61.1 years. In the early CXPA group, Bmi-1 was expressed in carcinomatous component of all cases and in occasional cells of benign areas of 1 case. The SOX2 factor was expressed by the carcinomatous cells in 90% of cases and scant cells in residual PA of 1 case. Nanog was expressed in 60% of cases, only in the malignant component. On the other hand, Bmi-1 was expressed in malignant areas of 71.4% of advanced CXPAs and in occasional cells of benign area of 1 case. The residual PA of none of the cases in this group was positive to SOX2 and Nanog, which were expressed by carcinomatous areas in 92.8% and 35.7% of cases, respectively. Thus, it was noted that Bmi-1 and Nanog expression decreases in CXPA progression. Yet, SOX2 expression seems to be correlated with neoplastic necrosis (p= 0.06) and lymph node metastasis at diagnosis (p=0.08), but the current sample seems to be small to evidence this statistic data. It was concluded that Bmi-1, Nanog, and SOX2 are overexpressed in malignant transformation of PA. However, Bmi-1 and Nanog apparently do not exert a decisive role in the process of neoplastic progression, while SOX2 seems to contribute to the process of metastasis in CXPA.

O carcinoma ex-adenoma pleomórifoco (CXAP) é a contraparte maligna do Adenoma pleomórfico (AP), sendo sua malignização descrita em 10% dos AP. Histológicamente o CXAP apresenta grande variação morfológica vista a capacidade do componente maligno se originar de diferentes estruturas do componente misto do AP. Nota-se que grande parte dos CXAP apresentam caráter infiltrativo, metástase linfonodal e metástase tardia. Para que as células neoplásicas adquiram um fenótipo com maior capacidade infiltrava é necessário que passem por um processo de transição de um fenótipo epitelial para mesenquimal. Este processo é conhecido como Transição epitélio-mesênquima (TEM). Tal processo é visto em situações fisiológicas, tais quais, migração de células ectodérmicas durante o período embriológico, reparação e cicatrização e também em processos neoplásicos. O objetivo deste trabalho é avaliar a presença de proteínas inerentes ao processo de transição epitélio mesênquima e comparar a expressão destas proteínas com achados histopatológicos sugestivos de invasão e mestástase. A análise das proteínas E-caderina e Beta-catenina em células neoplásicas de CXAP foi realizada de forma semi-quantitativa conforme sugerido pela literatura. Os casos foram subdividos de acordo com a positividade da reação de imunohistoquímica. Onde houve ausência de células positivas o caso recebeu escore 0, casos onde houve <10% de células positivas o escore foi 1, casos onde 10- 75% de células positivas escore 2 e consequentemente 3 para casos em que >75% das células eram positivas. Tais achados foram relacionados com presença de invasão angiolinfática, perineural, metástase tardia, recorrência e metástase linfonodal. De um total de 16 casos de CXAP, o sitio mais acometido foi a parótida e 53% da nossa amostra era composta por homens, a idade média foi de 52,9 anos e a parótida foi o sitio mais acometido. A análise histopatológica demonstrou que quando havia marcação para E-caderina a mesma se dava em membrana celular. 12,5% ausência de marcação, 50% dos casos com marcação fraca 31,25% dos casos com expressão moderada e 6,25% dos casos com marcação intensa. Já para Beta-catenina um caso apresentou marcação citoplasmática e os restantes em membrana celular.18,75% ausente de marcação, 25 % com marcação fraca, 50% dos casos com marcação moderada e 6,25 dos casos com marcação intensa. A imuno-marcação estava distribuída de forma difusa tanto no front de invasão quanto no parênquima do carcinoma. Casos com maior presença de E-caderina apresentaram mais metástases linfonodais, p=0,035. Para outros critérios de invasão nenhuma relação estatística significante foi observada. Sugere-se que E-caderina e Beta-catenina não fazem parte do processo de invasão e metástase de CXAP nem são fatores relacionados a invasão dos tecidos adjacentes. / Carcinoma ex-pleomorphic adenoma (CXAP) is the malignant counterpart of pleomorphic adenoma(PA), although malignant transformation of PA is unusual occurring in 10% of the PA cases. The CXAP histologically presents an intense morphologic variation due to the ability of the malignant tissue to originate from any structure of de mixed component. A significant number of CXAPs show an infiltrative behavior, lymph node metastasis and late metastasis. The cell component must undergo a morphologic alteration changing the epithelial phenotype to a mesenchymal one. That development process is known as epithelial-mesenchymal transiction (MET). This process is seen in physiologic situations, like cell migration on embryologic ectodermal evolution, tissue repair and int neoplastic processes. The main objective of this study was to evaluate immunohistochemical expression of epithelial-mesenchymal transiction proteins, e-caderin and beta-catenin in malignant areas of CXAP and correlate with pathologic parameters that indicates migration, like perineural and angiolymphatic invasion and metastasis as suggested by the literature. Immunohistochemical analysis was performed semiquantitatively according to the scores 0 (no positive cell), 1 (<10% positive cells), 2 (10-75% of cells positive, and 3 (>75% positive cells). These results were also correlated with pathological parameters of neoplastic aggressiveness using the Fisher\'s exact test. Of the16 cases, the parotid gland was the most involved site and men were affected in 53.8 % of our sample. The mean age was 52.9 year. The histopathological analysis showed that in all cases in which e-caderin was positive, the immunoreaction was of the cell membrane 12,5% of the cases showed absent of e-caderin expression, 50% showed weak expression, 31,25% showed moderate expression and 6,25 show strong one. In the other hand, b-catenin showed cytoplasmic expression in one case, all other cases showed protein in cell membrane. 18,75 showed absent expression, 25% showed weak expression, 50% showed moderate and 6,25% showed intense one. The immunohistochemical reaction was diffuse and presented itself in invasion front as well as in the carcinoma parenchyma. Cases presenting high expression of e-caderin developed more lymph node metastasis, p=0,035. For the others invasion parameters there was no statistic summary observed. This work suggest that e-caderin and b-catenin have no relation to CXAP carcinogenesis or invasion process

O adenoma pleomórfico (AP) é a neoplasia mais frequente das glândulas salivares e a sua transformação maligna em um carcinoma ex-adenoma pleomórfico (CXAP) é um evento incomum que ocorre em menos de 10% dos casos. O CXAP é tipicamente uma neoplasia infiltrativa, de alto grau e associada com metástase linfonodal no momento do diagnóstico. Acredita-se que a patogênese do CXAP tenha como base o acúmulo de alterações genéticas em APs de longa duração. Evidências recentes têm demonstrado que neoplasias podem conter subpopulações de células raras, com capacidade de auto-renovação e potencial proliferativo indefinido, as chamadas células-tronco neoplásicas (CTN). As CTN parecem estar envolvidas nos processos de iniciação e progressão neoplásicas, assim como metástases e resistência terapêutica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão imuno-histoquímica, tanto nas áreas benignas quanto nas malignas, dos fatores de transcrição relacionados à pluripotência de células-tronco Bmi-1, SOX2 e Nanog em CXAPs em fases precoces (7 intracapsulares e 3 minimamente invasivos) e avançada (14 francamente invasivos) de progressão histológica. A análise dos resultados de imuno-histoquímica foi realizada de maneira semi-quantitativa de acordo com o escore 0 (ausência de células positivas), 1 (<30% de células positivas), 2 (30-60% de células positivas e 3 (>60% de células positivas). Correlacionou-se, ainda, esses resultados com parâmetros anatomopatológicos de agressividade neoplásica através do teste Exato de Fisher. A parótida foi a glândula mais acometida em ambos os grupos (62,5%), e homens e mulheres foram igualmente acometidos. A média de idade foi 61,1 anos. No grupo de CXAPs precoces, Bmi-1 foi expresso no componente carcinomatoso de todos os casos e em escassas células das áreas benignas de 1 caso. O fator SOX2 foi expresso pelas células carcinomatosas em 90% desses casos e em escassas células do AP residual de 1 caso. Já Nanog foi expresso apenas no componente maligno de 60% dos casos. Por outro lado, Bmi-1 foi expresso nas áreas malignas de 71,4% dos CXAPs avançados e em ocasionais células da área benigna de 1 caso. O AP residual de nenhum caso desse grupo foi positivo para SOX2 e Nanog, que foram expressos pelas áreas malignas em 92,8% e 35,7% dos casos, respectivamente. Assim, notou-se queda na expressão de Bmi-1 e Nanog na progressão do CXAP. Ainda, a expressão de SOX2 parece correlacionar-se com necrose neoplásica (p=0,06) e metástase linfonodal ao diagnóstico (p=0,08), entretanto a amostra estudada parece pequena para evidenciar esse dado estatístico. Concluiu-se que Bmi-1, SOX2 e Nanog são superexpressos na transformação maligna do AP. Entretanto, Bmi-1 e Nanog aparentemente não exercem função determinante no processo de progressão neoplásica, ao passo que SOX2 parece contribuir com o processo de metástase em CXAP. / Pleomorphic adenoma (PA) is the most common salivary gland tumor and its malignant transformation into a carcinoma ex pleomorphic adenoma (CXPA) is an unusual event occuring in less than 10% of the cases. The CXPA is typically an infiltrative and high-grade neoplasm at diagnosis associated with lymph node metastases. It is believed that the pathogenesis of CXPA is based on the accumulation of genetic changes in long-standing PAs. Recent evidences have shown that tumors may contain subpopulations of rare cells, capable of self-renewal, and with indefinite proliferative potential, the so-called neoplastic stem cells (NSC). The NSC appears to be involved in neoplastic initiation and progression, as well as metastasis and treatment resistance. The objective of this study was to evaluate the immunohistochemical expression of stem cell-related pluripotency transcription factors Bmi-1, SOX2, and Nanog in benign and malignant areas of CXPA at early (7 intracapsular and 3 minimally invasive) and advanced (14 frankly invasive) stages of histological progression. Immunohistochemical analysis was performed semiquantitatively according to the scores 0 (no positive cell), 1 (<30% positive cells), 2 (30-60% of cells positive, and 3 (>60% positive cells). These results were also correlated with pathological parameters of neoplastic aggressiveness using the Fisher\'s Exact test. The parotid gland was the most affected site in both groups (62.5%), and men and women were equally affected. The mean age was 61.1 years. In the early CXPA group, Bmi-1 was expressed in carcinomatous component of all cases and in occasional cells of benign areas of 1 case. The SOX2 factor was expressed by the carcinomatous cells in 90% of cases and scant cells in residual PA of 1 case. Nanog was expressed in 60% of cases, only in the malignant component. On the other hand, Bmi-1 was expressed in malignant areas of 71.4% of advanced CXPAs and in occasional cells of benign area of 1 case. The residual PA of none of the cases in this group was positive to SOX2 and Nanog, which were expressed by carcinomatous areas in 92.8% and 35.7% of cases, respectively. Thus, it was noted that Bmi-1 and Nanog expression decreases in CXPA progression. Yet, SOX2 expression seems to be correlated with neoplastic necrosis (p= 0.06) and lymph node metastasis at diagnosis (p=0.08), but the current sample seems to be small to evidence this statistic data. It was concluded that Bmi-1, Nanog, and SOX2 are overexpressed in malignant transformation of PA. However, Bmi-1 and Nanog apparently do not exert a decisive role in the process of neoplastic progression, while SOX2 seems to contribute to the process of metastasis in CXPA.

O carcinoma ex-adenoma pleomórifoco (CXAP) é a contraparte maligna do Adenoma pleomórfico (AP), sendo sua malignização descrita em 10% dos AP. Histológicamente o CXAP apresenta grande variação morfológica vista a capacidade do componente maligno se originar de diferentes estruturas do componente misto do AP. Nota-se que grande parte dos CXAP apresentam caráter infiltrativo, metástase linfonodal e metástase tardia. Para que as células neoplásicas adquiram um fenótipo com maior capacidade infiltrava é necessário que passem por um processo de transição de um fenótipo epitelial para mesenquimal. Este processo é conhecido como Transição epitélio-mesênquima (TEM). Tal processo é visto em situações fisiológicas, tais quais, migração de células ectodérmicas durante o período embriológico, reparação e cicatrização e também em processos neoplásicos. O objetivo deste trabalho é avaliar a presença de proteínas inerentes ao processo de transição epitélio mesênquima e comparar a expressão destas proteínas com achados histopatológicos sugestivos de invasão e mestástase. A análise das proteínas E-caderina e Beta-catenina em células neoplásicas de CXAP foi realizada de forma semi-quantitativa conforme sugerido pela literatura. Os casos foram subdividos de acordo com a positividade da reação de imunohistoquímica. Onde houve ausência de células positivas o caso recebeu escore 0, casos onde houve <10% de células positivas o escore foi 1, casos onde 10- 75% de células positivas escore 2 e consequentemente 3 para casos em que >75% das células eram positivas. Tais achados foram relacionados com presença de invasão angiolinfática, perineural, metástase tardia, recorrência e metástase linfonodal. De um total de 16 casos de CXAP, o sitio mais acometido foi a parótida e 53% da nossa amostra era composta por homens, a idade média foi de 52,9 anos e a parótida foi o sitio mais acometido. A análise histopatológica demonstrou que quando havia marcação para E-caderina a mesma se dava em membrana celular. 12,5% ausência de marcação, 50% dos casos com marcação fraca 31,25% dos casos com expressão moderada e 6,25% dos casos com marcação intensa. Já para Beta-catenina um caso apresentou marcação citoplasmática e os restantes em membrana celular.18,75% ausente de marcação, 25 % com marcação fraca, 50% dos casos com marcação moderada e 6,25 dos casos com marcação intensa. A imuno-marcação estava distribuída de forma difusa tanto no front de invasão quanto no parênquima do carcinoma. Casos com maior presença de E-caderina apresentaram mais metástases linfonodais, p=0,035. Para outros critérios de invasão nenhuma relação estatística significante foi observada. Sugere-se que E-caderina e Beta-catenina não fazem parte do processo de invasão e metástase de CXAP nem são fatores relacionados a invasão dos tecidos adjacentes. / Carcinoma ex-pleomorphic adenoma (CXAP) is the malignant counterpart of pleomorphic adenoma(PA), although malignant transformation of PA is unusual occurring in 10% of the PA cases. The CXAP histologically presents an intense morphologic variation due to the ability of the malignant tissue to originate from any structure of de mixed component. A significant number of CXAPs show an infiltrative behavior, lymph node metastasis and late metastasis. The cell component must undergo a morphologic alteration changing the epithelial phenotype to a mesenchymal one. That development process is known as epithelial-mesenchymal transiction (MET). This process is seen in physiologic situations, like cell migration on embryologic ectodermal evolution, tissue repair and int neoplastic processes. The main objective of this study was to evaluate immunohistochemical expression of epithelial-mesenchymal transiction proteins, e-caderin and beta-catenin in malignant areas of CXAP and correlate with pathologic parameters that indicates migration, like perineural and angiolymphatic invasion and metastasis as suggested by the literature. Immunohistochemical analysis was performed semiquantitatively according to the scores 0 (no positive cell), 1 (<10% positive cells), 2 (10-75% of cells positive, and 3 (>75% positive cells). These results were also correlated with pathological parameters of neoplastic aggressiveness using the Fisher\'s exact test. Of the16 cases, the parotid gland was the most involved site and men were affected in 53.8 % of our sample. The mean age was 52.9 year. The histopathological analysis showed that in all cases in which e-caderin was positive, the immunoreaction was of the cell membrane 12,5% of the cases showed absent of e-caderin expression, 50% showed weak expression, 31,25% showed moderate expression and 6,25 show strong one. In the other hand, b-catenin showed cytoplasmic expression in one case, all other cases showed protein in cell membrane. 18,75 showed absent expression, 25% showed weak expression, 50% showed moderate and 6,25% showed intense one. The immunohistochemical reaction was diffuse and presented itself in invasion front as well as in the carcinoma parenchyma. Cases presenting high expression of e-caderin developed more lymph node metastasis, p=0,035. For the others invasion parameters there was no statistic summary observed. This work suggest that e-caderin and b-catenin have no relation to CXAP carcinogenesis or invasion process