A doença de Chagas é uma doença endêmica causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi que assola cerca de 15 milhões de pessoas na América Latina. Na busca de uma alternativa mais econômica e eficiente para o tratamento desta doença, Kiushi e colaboradores isolaram da planta Darcocephalum komarovi, a komaroviquinona. Após estudos \"in vitro\" de células humanas contaminadas com tripomastigotos do Trypanosoma cruzi, a komaroviquinona mostrou ser 15 a 300 vezes mais eficiente que os tratamentos atualmente disponíveis. Mesmo com este resultado animador, pouco se tem relatado sobre a síntese da komaroviquinona, existindo apenas 4 rotas sintéticas descritas na literatura, sendo duas delas enantiosseletivas. Baseado neste fato, o presente trabalho visa estudar uma forma de se obter a komaroviquinona de forma rápida e eficaz, utilizando, para tal fim, a estratégia de abertura de epóxidos por um aril-magnésio ou aril-lítio, como etapa chave. Pretende-se com esta estratégia sintetizar a komaroviquinona em 9 etapas, partindo de reagentes disponíveis comercialmente. Cabe ressaltar que esta estratégia possibilita a síntese de outros produtos naturais como o brussonol, que apresentou citotoxidade moderada em células de ovários do inseto Spodoptera frugiperda (Sf9) e células de ovário do mamífero hamster chinês (CHO), além de atividade citotoxicológica às células P388 leucêmicas de camundongo. Alguns resultados promissores foram obtidos como a preparação \"one pote\" da cetona 2-alil-3,3-dimetil-cicloexanona com rendimento na faixa entre 54-65 % e a preparação do respectivo epóxido com rendimento de 89 %. Além destes resultados, a reação de abertura de epóxido se mostrou eficiente quando utilizados organometálicos modelo (disponíveis comercialmente), sendo que os rendimentos foram de 53 % e 62%, dependendo do reagente de Grignard utilizado. Entretanto ainda se faz necessário otimizar as condições reacionais para aplicação dos organometálicos reais, precursores da komaroviquinona e do brussonol. / Chagas\'s disease is an endemic infection caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, affecting near 15 milion of people in Latin America. In a search of an economical and efficient alternative for the treatment of this disease, Kiushi and colleagues isolated Komaroviquinone from the plant Darcocephalum komarovi. After in vitro studies of human cells (infected with trypomastigotes of Trypanosoma cruzi), komaroviquinone proved to be 15 to 300 times more efficient than the currently available prescriptions. Even with this encouraging result, little has been reported on the synthesis of komaroviquinone, and only four synthetic routes are described in the literature (two being enantioselective). Based on this fact, the present work deals with the study of a new strategy to synthesize komaroviquinone quickly and effectively, employing an epoxide ring-opening approach with aryl-magnesium and aril-lithium compounds as the key step. Using this strategy, komaroviquinone may be synthesized in 9 steps, starting from commercially starting materials. It should be noted that this strategy enables the synthesis of other natural products such as brussonol, which showed moderate cytotoxicity on insect-derived Spodoptera frugiperda pupal ovarian cells (Sf9), mammalian Chinese hamster ovary cell (CHO), and P388 murine leukemia cells. Some promising results were already obtained as the preparation one pote of ketone with yield in range of 54-65 % and the preptaration of the corresponding epoxide with 89 % yield. Besides this, the epoxide ring-opening approach could be applied with some aromatic model compounds (commercially available) with 53 % and 62 % yield, depending on the Grignard reagents employed. However, in order to prepare komaroviquinone, it is still necessary to optimize the reaction conditions so that the real aromatic derivatives (precursors of komaroviquinone and brussonol) may be used.

Orientador: Maria Esther de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T09:30:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_AndersonPachecodos_M.pdf: 3380754 bytes, checksum: 9736aa6f219de1691e4d55d474a7d293 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: As zonas endêmicas de leishmanioses e doença de Chagas, duas grandes endemias causadas por cinetoplastídeos, sobrepõe-se na América do Sul, especialmente na região Sudeste do Brasil, o que pode gerar casos de co-infecção entre Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi. Ocorrem reações cruzadas, mesmo com baixos títulos, em inquéritos sorológicos de pacientes infectados com os parasitas, o que leva a falsas estimativas de prevalência de ambas as infecções. Este trabalho tem o objetivo de observar o efeito de um diluente de amostra proposto para reduzir a ocorrência de reações cruzadas em testes sorológicos para doenças causadas por cinetoplastídeos e outros parasitas. Foram selecionadas 585 amostras de sangue provenientes de quatro regiões do Estado de São Paulo, entre litoral e planalto, colhidas no período compreendido entre 1996 a 2003, durante atividades do Programa de Controle da Doença de Chagas. As análises das amostras foram feitas através das Reações de Imunofluorescência (RIFI) e do ensaio imunoenzimático (ELISA). Com as amostras reagentes (onze no total), para doença de Chagas e leishmaniose em ambas as técnicas, foi realizado o teste ELISA alta avidez, que utiliza um diluente com caotrópico, que demonstrou redução nos títulos da reação positiva falsa, restando apenas uma amostra sem redução significativa do seu título, que sugeriu ser um caso de co-infecção de doença de Chagas e leishmaniose, epidemiologicamente factível dada a existência de ambas as infecções na área estudada. O uso deste diluente em estudos clínicos e epidemiológicos pode aprimorar o diagnóstico para a identificação de soropositivos em regiões de sobreposição de endemias causadas por cinetoplastídeos / Abstract: Leishmaniases and Chagas disease are endemic in extensive areas of the American Continent. These parasitic diseases can occur together in South America, particularly in southwestern regions of Brazil, which poses a serious epidemiological problem due to the observed serological cross-reactivity between Leishmania spp. and Trypanosoma cruzi, even at low titers. As false prevalence estimates of these agents are critically misleading, we designed an experiment aiming at analyzing the effect of a diluent intended to reduce the chances of false positive tests resulting from serological cross-reactivity between these kinetoplastids and other parasites. As a part of the activities of the Program for the Control of Chagas disease, we selected 585 blood samples collected, during the period from 1996 to 2003, from residents in four regions situated between the seacoast and the plateau of the State of São Paulo. The serological tests used (IFAT and ELISA) produced a total of eleven positive reactions. Lower false positive titers resulted from the use of high avidity ELISA plus a chaotropic diluent. The only serological result in which titers corresponding to both infections were not significantly reduced was suggestive of mixed infection, on the basis of the fact that it was connected to a patient evidently exposed to both agents. This experiment suggests that the use of a chaotropic diluent can be a useful tool to reduce the proportion of such false parasitic mixed infection results as those investigated by us / Mestrado / Mestre em Parasitologia

A doença de Chagas é uma doença endêmica causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi que assola cerca de 15 milhões de pessoas na América Latina. Na busca de uma alternativa mais econômica e eficiente para o tratamento desta doença, Kiushi e colaboradores isolaram da planta Darcocephalum komarovi, a komaroviquinona. Após estudos \"in vitro\" de células humanas contaminadas com tripomastigotos do Trypanosoma cruzi, a komaroviquinona mostrou ser 15 a 300 vezes mais eficiente que os tratamentos atualmente disponíveis. Mesmo com este resultado animador, pouco se tem relatado sobre a síntese da komaroviquinona, existindo apenas 4 rotas sintéticas descritas na literatura, sendo duas delas enantiosseletivas. Baseado neste fato, o presente trabalho visa estudar uma forma de se obter a komaroviquinona de forma rápida e eficaz, utilizando, para tal fim, a estratégia de abertura de epóxidos por um aril-magnésio ou aril-lítio, como etapa chave. Pretende-se com esta estratégia sintetizar a komaroviquinona em 9 etapas, partindo de reagentes disponíveis comercialmente. Cabe ressaltar que esta estratégia possibilita a síntese de outros produtos naturais como o brussonol, que apresentou citotoxidade moderada em células de ovários do inseto Spodoptera frugiperda (Sf9) e células de ovário do mamífero hamster chinês (CHO), além de atividade citotoxicológica às células P388 leucêmicas de camundongo. Alguns resultados promissores foram obtidos como a preparação \"one pote\" da cetona 2-alil-3,3-dimetil-cicloexanona com rendimento na faixa entre 54-65 % e a preparação do respectivo epóxido com rendimento de 89 %. Além destes resultados, a reação de abertura de epóxido se mostrou eficiente quando utilizados organometálicos modelo (disponíveis comercialmente), sendo que os rendimentos foram de 53 % e 62%, dependendo do reagente de Grignard utilizado. Entretanto ainda se faz necessário otimizar as condições reacionais para aplicação dos organometálicos reais, precursores da komaroviquinona e do brussonol. / Chagas\'s disease is an endemic infection caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, affecting near 15 milion of people in Latin America. In a search of an economical and efficient alternative for the treatment of this disease, Kiushi and colleagues isolated Komaroviquinone from the plant Darcocephalum komarovi. After in vitro studies of human cells (infected with trypomastigotes of Trypanosoma cruzi), komaroviquinone proved to be 15 to 300 times more efficient than the currently available prescriptions. Even with this encouraging result, little has been reported on the synthesis of komaroviquinone, and only four synthetic routes are described in the literature (two being enantioselective). Based on this fact, the present work deals with the study of a new strategy to synthesize komaroviquinone quickly and effectively, employing an epoxide ring-opening approach with aryl-magnesium and aril-lithium compounds as the key step. Using this strategy, komaroviquinone may be synthesized in 9 steps, starting from commercially starting materials. It should be noted that this strategy enables the synthesis of other natural products such as brussonol, which showed moderate cytotoxicity on insect-derived Spodoptera frugiperda pupal ovarian cells (Sf9), mammalian Chinese hamster ovary cell (CHO), and P388 murine leukemia cells. Some promising results were already obtained as the preparation one pote of ketone with yield in range of 54-65 % and the preptaration of the corresponding epoxide with 89 % yield. Besides this, the epoxide ring-opening approach could be applied with some aromatic model compounds (commercially available) with 53 % and 62 % yield, depending on the Grignard reagents employed. However, in order to prepare komaroviquinone, it is still necessary to optimize the reaction conditions so that the real aromatic derivatives (precursors of komaroviquinone and brussonol) may be used.

Megazol (1-metil-2-(5-amino-1,3,4-tiadiazolil)-5-nitroimidazol) (MZ) tem sido descrito como um composto efetivo contra Tripanossoma cruzi, agente causador da Doença de Chagas. Contudo, este composto mostrou efeitos mutagênicos e baixa solubilidade em água. O primeiro objetivo desta pesquisa foi avaliar o potencial carcinogênico de três doses de MZ através do teste de Indice de Homozigotização (HI). Este teste mostra alterações nas frequências de crossing-over mitótico eventualmente envolvidas com genes heterozigotos auxotróficos em linhagens de Aspergillus nidulans. O teste HI mostrou alterações nas frequências de crossing-over mitótico quando o tratamento com MZ foi aplicado. O segundo objetivo foi o preparo de nanopartículas de poli(<font face=\"Symbol\">e-caprolactona) contendo MZ a partir do método de nanoprecipitação. O tamanho das nanopartículas obtidas foi de 280±1,34 nm e polidispersão de 0,13±0,003 nm. A análise de Microscopia Eletrônica (MEV) revelou nanopartículas de superfície lise e esférica. Uma eficiência de encapsulação de 24% foi alcançada para as nanopartículas de MZ. / Megazol (1-metil-2-(5-amino-1,3,4-tiadiazolil)-5-nitroimidazol) (MZ) has been describe as an effective compound against Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas\'s disease. Nevertheless this compound has showed mutagenic effects and lower solubility in aqueous systems. The one aim of this research was evaluate the carcinogenic potential of three doses of megazol (MZ) through of homozygation index assay (HI). This short-term assay shows alterations in mitotic crossing-over frequencies eventually involving heterozygous auxotrophic genes in diploid strains of Aspergillus nidulans. The HI assay showed to mitotic crossing-over alteration in their frequency when the MZ was present. While the second aim was prepare poly-<font face=\"Symbol\">e-caprolactone nanoparticles by nanoprecipitation method loaded with MZ. The particle size of the prepared nanoparticles was the 280±1,34 nm and polydispersity was 0,13±0,003. Scanning electron microscopy (SEM) analyze reveled a smooth surface and spherical. The encapsulation efficiency about 24% was achieved to MZ nanoparticles.

Megazol (1-metil-2-(5-amino-1,3,4-tiadiazolil)-5-nitroimidazol) (MZ) tem sido descrito como um composto efetivo contra Tripanossoma cruzi, agente causador da Doença de Chagas. Contudo, este composto mostrou efeitos mutagênicos e baixa solubilidade em água. O primeiro objetivo desta pesquisa foi avaliar o potencial carcinogênico de três doses de MZ através do teste de Indice de Homozigotização (HI). Este teste mostra alterações nas frequências de crossing-over mitótico eventualmente envolvidas com genes heterozigotos auxotróficos em linhagens de Aspergillus nidulans. O teste HI mostrou alterações nas frequências de crossing-over mitótico quando o tratamento com MZ foi aplicado. O segundo objetivo foi o preparo de nanopartículas de poli(<font face=\"Symbol\">e-caprolactona) contendo MZ a partir do método de nanoprecipitação. O tamanho das nanopartículas obtidas foi de 280±1,34 nm e polidispersão de 0,13±0,003 nm. A análise de Microscopia Eletrônica (MEV) revelou nanopartículas de superfície lise e esférica. Uma eficiência de encapsulação de 24% foi alcançada para as nanopartículas de MZ. / Megazol (1-metil-2-(5-amino-1,3,4-tiadiazolil)-5-nitroimidazol) (MZ) has been describe as an effective compound against Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas\'s disease. Nevertheless this compound has showed mutagenic effects and lower solubility in aqueous systems. The one aim of this research was evaluate the carcinogenic potential of three doses of megazol (MZ) through of homozygation index assay (HI). This short-term assay shows alterations in mitotic crossing-over frequencies eventually involving heterozygous auxotrophic genes in diploid strains of Aspergillus nidulans. The HI assay showed to mitotic crossing-over alteration in their frequency when the MZ was present. While the second aim was prepare poly-<font face=\"Symbol\">e-caprolactone nanoparticles by nanoprecipitation method loaded with MZ. The particle size of the prepared nanoparticles was the 280±1,34 nm and polydispersity was 0,13±0,003. Scanning electron microscopy (SEM) analyze reveled a smooth surface and spherical. The encapsulation efficiency about 24% was achieved to MZ nanoparticles.