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Estudo do limiar de positividade do método imunoenzimático (ELISA) para pesquisa de coproantígenos de Giardia lamblia Stiles, 1915. Sua utilização como exame de controle de cura após terapêutica /

Castanho, Roberto Esteves Pires. January 2004 (has links)
Orientador: João Aristeu da Rosa / Banca: Herminia Yohko Kanamura / Banca: Semiramis Guimarães Ferraz Viana / Banca: Vera Lucy de Santi Alvarenga / Banca: Lúcia Pagliusi Castilho / Resumo: Devido à baixa sensibilidade do exame parasitológico de fezes (EPF) para o diagnóstico laboratorial da giardíase, o método imunoenzimático (ELISA – Enzyme – linked immunosorbent assay) para pesquisa de coproantígenos de Giardia tem sido utilizado, mostrando alta sensibilidade e especificidade. Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de se avaliar a eficácia do ELISA ProSpecT Giardia (Alexon, Inc. BioBrás) anti-GSA65 (antígeno fecal específico de Giardia - peso molecular 65.000 Da) como instrumento de controle de cura da giardíase e o seu limiar de positividade. A contagem de cistos por grama de fezes foi feita utilizando a câmara de Neubauer em amostras positivas para G.lamblia de 100 pacientes. Os resultados mostraram eliminação de 3,6 x 106 cistos por grama de fezes em média. Em gráfico esses resultados desenharam uma curva assimétrica positiva, sugerindo a ocorrência de falso-negativos. Avaliou-se também a eficácia do ELISA anti-GSA65 e o método de Faust e Cols (MFc) em detectar mínimas concentrações de cistos de G. lamblia em amostras fecais. Fezes positivas foram diluídas em fezes negativas de modo a se obter amostras com 100, 1.000 e 10.000 cistos por grama de fezes. O ELISA anti-GSA65 mostrou uma positividade significativamente maior que o MFc. Amostras contendo 10.000 cistos por grama de fezes apresentaram 84,7% de positividade pelo ELISA anti-GSA65 e 34,7% pelo MFc. A eficácia do ELISA anti-GSA65, como instrumento de controle de cura após o tratamento pelo metronidazol em 91 pacientes com giardíase, foi avaliada e mostrou que o ELISA anti-GSA65 pode ser usado para monitorar a cura de pacientes utilizando apenas uma amostra fecal, coletada entre o 4º e 7º dias após o tratamento. Pelo MFc seriam necessárias a coleta de duas ou três amostras. Foi avaliada também comparativamente a eficácia do ELISA anti-GSA65 e do... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: Due to the low sensitivity of the fecal examination (EPF) in detecting cysts of Giardia lamblia, the imunoenzimatic assay (ELISA enzyme linked immunosorbent assay) to detect G.lamblia coproantigens have been used and have showed high sensibility and specificity. With the ain of evaluating the efficacy of ELISA ProSpecT Giardia (Alexon, Inc. BioBrás) anti-GSA65 (Giardia stool specific antigens - molecular weigh 65.000 Da) as monitoring of the cure of giardiasis and its threshold of positivity it was developed this research. The cysts count per grama of faeces was calculated using Neubauer camera in positive fecal samples for Giardia in 100 patients. It was found a concentration of 3.6 X 106 cyst per grama of faeces as average. In a graph the data draw an assymmetrical positive curve, suggesting occurrence of false negative results. It was evaluated the efficacy of ELISA anti-GSA65, and fecal examination by Faust and colls. procedure (MFc), in detecting minimum concentrations of Giardia cysts in fecal samples. To obtain samples with 100, 1.000 and 10.000 cysts per grama, positive samples were diluted in negative samples. ELISA showed a positivity significative higher than MFc. Samples with 10.000 cystis per grama showed 84,7% of positivity by ELISA anti GSA65 and 34,7% by MFc. The efficacy of ELISA anti-GSA65 as cure monitoring after treatment with metronidazole in 91 patients with giardiasis, was evalued and showed that ELISA anti-GSA65 can be used to monitor the cure of patients, using only single sample of each patients, collected between the 4th and 7th days after treatment, whereas with MFc it would be necessary the exam of two or tree samples. It was also evaluated the efficacy of ELISA-anti-GSA65 and MFc in fecal samples of 96 patients. Considering 38 Giardia true positives and 58 true negatives, the ELISA anti-GSA65 showed 100% of sensibility... (Complete abstract, click electronic address below). / Doutor
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Influencia do tabagismo na secreção de citocinas inflamatorias em pacientes com periodontite cronica severa / Impact of tobaccoism on the cytokine secretion of patients with chronic severe periodontitis

Gonçalves, Thais Oliveira 26 January 2007 (has links)
Orientadores: Getulio da Rocha Nogueira Filho, Marcio Zaffalon Casati / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T08:10:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_ThaisOliveira_M.pdf: 417152 bytes, checksum: 96fa74e7d71636ea7faaeda12f95d0f4 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O hábito de fumar representa um dos principais fatores de risco no desenvolvimento e progressão da periodontite, entretanto ainda não foram totalmente esclarecidos os mecanismos patogênicos da doença periodontal relacionados ao tabagismo. Logo, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do tabagismo pesado (consumo > 20cig/dia) sobre as células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de pacientes periodontais, quando comparados a controles saudáveis e não fumantes. As CMSP foram isoladas pelo método Ficoll a partir de 20mL de sangue obtidos de 20 doadores divididos por conveniência em 4 grupos experimentais: fumantes saudáveis (FS), fumantes com periodontite crônica severa (FP), não fumantes saudáveis (FS) e não fumantes com periodontite crônica severa (NFP). As células foram incubadas por 24/48 horas em poços contendo 500µL de meio de cultura e ativadas com 1,0ng/mL de LPS (E.coli). A partir dos sobrenadantes coletados após a ativação, procedeu-se a dosagem das interleucinas IL-6, IL8 e IL-10 e do fator de necrose tumoral TNF-a através do teste ELISA, de acordo com cada grupo experimental. Os resultados mostraram que houve redução significativa da secreção de TNF-a (p=0,05) no grupo FP quando comparado aos outros grupos (p<0,05), sem diferenças estatísticas na secreção de IL-8, IL-6 e IL-10 entre os grupos (p>0,05). Concluise, dentro dos limites deste estudo, que o tabagismo pesado reduz a secreção de TNF-a em pacientes com periodontite crônica severa / Abstract: Tobaccoism is a major risk factor in the development and further progression of periodontitis however the pathogenesis of tobacco-related periodontal disease is not well understood. Thus, the purpose of this study was to evaluate heavy tobacco smoking effects (consuming = 20 cigarettes/day) on cytokine secretion by peripheral mononuclear cells (PBMC) obtained from periodontal patients compared with healthy non-smokers donors. PBMC were isolated by Ficoll method from 20mL of blood obtained from 20 subjects distributed in four experimental groups: healthy current smokers (FS), periodontitis current smokers (FP), healthy non-smokers (NFS) and periodontitis non-smokers (NFP) donors. Cells were incubated for 24/48 hours in wells containing 500µL RPMI 1640 and activated with 1,0ng/mL LPS (E.coli). Culture supernatants were assessed for interleukins IL-8, IL-6, IL-10 and tumor necrosis factor TNF-a by the ELISA test. Results showed that tobaccoism appears to down-regulate TNF-a (p=0,05) secretion by mononuclear cells from FP subjects although did not appear to interfere on IL-8, IL-6 and IL-10 between groups (p>0,05). Within the limits of this study, it could be concluded that heavy tobacco smoking reduces TNF-a secretion in patients with chronic severe periodontitis / Mestrado / Periodontia / Mestre em Clínica Odontológica
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Ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para detecção da resposta sorológica contra Salmonella Gallinarum, Salmonella Pullorum, Salmonella Enteritidis e Salmonella Typhimurium em aves /

Oliveira, Gláucia Helaine de. January 2004 (has links)
Resumo: Foi desenvolvido um ensaio imunoenzimático do tipo ELISA indireto para a detecção de resposta sorológica de aves para Salmonella sorotipos Gallinarum, Pullorum, Enteritidis e Typhimurium. Utilizou-se antígeno solúvel obtido por meio de sonicação de cultura de Salmonella Gallinarum (AgSG), Salmonella Enteritidis cepa aflagelar (AgSE) e Salmonella Typhimuirum cepa aflagelar (AgTM), os conjugados peroxidase e fosfatase alcalina e amostras de soros positivos e negativos de vários sorotipos de salmonelas. Os resultados demonstraram que o AgSG pode ser utilizado diluído a 1:25.000 (peroxidase e fosfatase alcalina). Observou-se que o ELISA contendo S. Gallinarum como antígeno e fosfatase alcalina como enzima, propicia a separação de reações positivas para Gallinarum e Pullorum de Enteritidis. O AgSE pode ser utilizado diluído a 1:10.000 (peroxidase) ou 1:5.000 (fosfatase alcalina). Nestas condições, o ELISA/AgSE detectou resposta sorológica para os sorotipos Enteritidis, Gallinarum e Pullorum. O ELISA com o AgTM demonstrou que o antígeno pode ser diluído a 1:20.000 para ambos os conjugados. O ELISA/AgTM demonstrou reatividade entre salmonelas dos grupos B e D. Todas as amostras de soros testes devem ser analisadas diluídas a 1:1.000. Concluindo, o ELISA mostrou-se um teste útil para identificar aves com reação sorológica contra S. Gallinarum, S. Pullorum, S. Enteritidis e S. Typhimurium, podendo ainda identificar aves com sorologia positiva para S. Gallinarum, S. Pullorum sem que haja reação cruzada com amostras de soro de aves vacinadas ou infectada por S. Enteritidis. / Abstract: This study was done to assess the enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) for detection chicken serologic response against Salmonella enterica sorotypes Gallinarum, Pullorum, Enteritidis and Typhimurium. The test was performed using soluble proteins from Salmonella Gallinarum strain 9 (AgSG), from non-flagellate Salmonella Enteritidis strain (AgSE) and from not flagellate Salmonella Typhimurium (AgTM) strain as detecting antigen and peroxidase and alkaline phosphatase enzymes, as conjugate. According to the results, the antigen has to be diluted at 1:25.000 (AgSG, peroxidase and alkaline phosphatase). In addition, using alkaline phosphatase enzyme, the assay was helpful to separate positive serological reaction to serotypes Gallinarum and Pullorum from Enteritidis. To the ELISA/AgSE, the antigen has to be diluted at 1:10.000 for peroxidase assay and at 1:5.000 for alkaline phosphatase assay. In this condition, the ELISA/AgSE can detect serological reaction to S. Enteritidis, S. Gallinarum and S. Pullorum. To the ELISA/AgTM the antigen has to be diluted at 1:20.000 to both enzymes. In this condition the ELISA/AgTM showed sensibility but was no possible to separate positive serological reaction to serotype concerning at the group B and group D. In all test, the sample of serum has to be diluted at 1:1.000. Therefore, the ELISA was able to identity reactors birds to Salmonella antigens and also to detect serological response to S. Gallinarum, S. Pullorum antigen with no cross-reaction with serum samples taken from birds either challenged or vaccinated against S. Enteritidis. / Orientador: Angelo Berchieri Júnior / Coorientador: Hélio José Montassier / Banca: Raul José Silva Girio / Banca: Fernando Antonio de Ávila / Banca: Paulo Lourenço da Silva / Banca: Ana Maria Iba Kanashiro / Doutor
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Perfil de citocinas de indivíduos com diagnóstico de Tuberculose Infecção Latente e Tuberculose a Antígenos de Mycobacterium Tuberculosis no QuantiFERON®-tb Gold Test in Tube - Cellestis limited, Carnegie, Austrália

Batista, Marilda Casela 28 November 2011 (has links)
Submitted by Barroso Patrícia (barroso.p2010@gmail.com) on 2013-04-04T20:10:18Z No. of bitstreams: 1 BATISTA, MC.pdf: 1852522 bytes, checksum: bed699e8555a1c9a88ac11e384126fe6 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-04T20:10:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BATISTA, MC.pdf: 1852522 bytes, checksum: bed699e8555a1c9a88ac11e384126fe6 (MD5) Previous issue date: 2011 / A tuberculose continua sendo um grave problema social e de saúde pública. O diagnóstico da tuberculose, em seus estágios iniciais, e da tuberculose, infecção latente, pode contribuir para o controle da doença. Novos métodos, conhecidos como IGRA, detectam a infecção tuberculosa latente, medindo interferongama em resposta à liberação de antígenos presentes no complexo Mycobacterium tuberculosis, mas ausente na vacina BCG e em micobactérias saprófitas. Estudos vêm demonstrando uma possível superioridade na especificidade desses testes em relação ao teste tuberculínico (PPD). O objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil de citocinas de indivíduos com diagnóstico de Tuberculose infecção latente e os antígenos de Mycobacterium tuberculosis no QuantiFERON®-TB Gold Test In Tube- Cellestis Limited, Carnegie, Austrália (QFT-IT). Os níveis plasmáticos das citocinas interferon-gama (IFN-), foram avaliados com o método ELISA do kit QuantiFERON®-TB Gold Test In Tube, enquanto que os de fator de necrose tumoral (TNF), fator de transformação do crescimento beta (TGF-β) e interleucina-12/23 (IL-12/23) foram quantificados pelo método de ELISA (Duo-Set-R&D Systems-USA) nos grupos estudados. Cerca de 30% dos indivíduos do grupo controle foram responsivos, produzindo IFN-, quando estimulados com os antígenos específicos do Mycobacterium tuberculosis (Mtb). No grupo latente, 29% dos indivíduos ficaram abaixo do cut-off do kit QFT-IT. Indivíduos do grupo tuberculose em tratamento responderam menos aos antígenos de Mtb, quando comparados com grupo sem tratamento. A produção de TGF-β foi elevada em todos os grupos. Em indivíduos com tuberculose sem tratamento, a produção mostrou-se elevada em relação ao grupo de indivíduos com tuberculose em tratamento. Os níveis de TNF dos indivíduos com tuberculose sem tratamento foram menores em comparação aos grupos controle e latente, ratificando dados anteriores sobre a importância desta citocina na formação e manutenção do granuloma. Observou-se também que a resposta a fitohemaglutinina (PHA) não difere significativamente entre os grupos, porém o grupo latente apresentou resposta mais baixa. A citocina IL-12/23 não foi detectada nos grupos estudados. O índice de estímulo entre o TST e o QFT-IT mostrou uma concordância moderada (0,6) pelo índice kappa. Os resultados obtidos sugerem que, em nossa população vacinada e endêmica, esses antígenos não são bons preditores de doença, portanto mais estudos são necessários para avaliar a resposta celular utilizando o QFT-IT em nossa população. / Universidade Federal da Bahia, Instituto de Ciências da Saúde
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Avaliação clínico-laboratorial através de ensaio imunoenzimático (Elisa) na esporotricose

Pimenta, Monique Amorim January 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2014-03-18T17:13:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 monique_pimenta_ipec_mest_2009.pdf: 1163623 bytes, checksum: 5dc211aca9c9d9abe2ea14f0c292f834 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A esporotricose é a micose subcutânea mais freqüente no Brasil. O diagnóstico definitivo dessa doença se dá com o isolamento em cultivo do fungo, o que em algumas vezes não é possível. Portanto, o desenvolvimento de métodos sorológicos que venham auxiliar no diagnóstico da esporotricose e na avaliação terapêutica dos pacientes é de grande interesse. No presente estudo foi empregada uma técnica imunológica aplicada à detecção de anticorpos em soro, no formato de ELISA, em pacientes com esporotricose cutânea confirmada por isolamento do fungo (n=58), assim como em pacientes com indicação clínico-epidemiológica de esporotricose, mas sem isolamento do fungo em cultivo (n=23). A avaliação da especificidade da técnica foi feita utilizando-se soros heterólogos. Os resultados demonstraram uma sensibilidade de 98% para ensaios de detecção de IgG e de 99% para ensaios de detecção de IgM, e a especificidade de ambos os testes foi de 89%. Reações cruzadas foram observadas, da mesma forma como em outros imunoensaios para o diagnóstico da esporotricose. Foram colhidas três amostras de soro, uma no momento do diagnóstico (tempo 1), uma três a seis meses após o início da micose (tempo 2) e uma de nove a 12 meses após início da micose (tempo 3). A avaliação dos anticorpos ao longo do tratamento mostra que na forma fixa da doença não foram observadas diferenças estatisticamente significantes, tanto nos ensaios de IgG como de IgM Apenas nos ensaios do grupo de pacientes com forma linfocutânea, observou uma diferença estatisticamente significante ente os tempos 2 [1,498 (IIQ: 1,026-2,009)] e tempo 3 [1,398 (IIQ: 0,925-1,678] com p=0,004 nos ensaio de IgG e uma diferença entre os tempos 1 [1,263 (IIQ: 0,639-1,658)] e tempo 2 [1,015 (IIQ: 0,511-1,336)], tempos 2 e 3 [0,853 (IIQ: 0,453-1,173)] e tempos 1 e 3 nos ensaios de detecção de IgM. Paralelamente foram analisados também, soros de 15 pacientes com infecção pelo HIV e esporotricose de diferentes formas clínicas nos quais a técnica de ELISA mostrou uma sensibilidade de 90% nos ensaios de detecção de IgG e sensibilidade de 80% nos ensaios de detecção de IgM. Concluímos que a técnica de ELISA pode ser utilizada como ferramenta de auxílio diagnóstico para pacientes com esporotricose e para pacientes com esporotricose infectados pelo HIV. Um maior tempo de acompanhamento de pacientes é necessário para melhor se estabelecer a importância da detecção de anticorpos como critério de cura da esporotricose. A técnica de ELISA é uma excelente ferramenta diagnóstica para pacientes de esporotricose sem confirmação micológica / The sporotrichosis is the most common subcutaneous mycosis in Braz il. The definitive diagnosis of this disease occurs in isolation with the fungal culture, which some times is not possible. Therefore, the development of serological methods that may assist in the diagnosis of sporotrichosis and in evaluating treatment of patients is of great interest. In the present study employed a technique applied to the detection of immune antibodies in serum, the ELISA format, in patients with cutaneous sporotrichosis confirmed by isolation of the fungus (n = 58) and in patients with clinical and epidemiological aspects of sporotrichosis, but without isolation of the fungus in culture (n = 23). The evaluation of the specificity of the technique was performed using heterologous sera. The results showed a sensitivity of 98% for testing t he detection of IgG and 99% for testing the detection of IgM, and specificity of both tests was 89%. Cross - reactions were observed in the same way as in other immunoassays for the diagnosis of sporotrichosis. Were harvested three serum samples, one at the time of diagnosis (time 1), a three to six months after the onset of mycosis (time 2) and one of nine to 12 months after onset of mycosis (time 3). Evaluation of antibodies during the treatment shows that the fixed form of the disease shows no statisticall y significant differences in both tests for IgG and IgM. Only the tests of the group of patients with linfocutânea way, was a statistically significant difference between the time 2 [1498 (IQR: 1026 - 2009)] and time 3 [1398 (IQR: 0925 - 1678] with p = 0004 in the testing of IgG and a difference between times 1 [1263 (IQR: 0639 - 1658)] and time 2 [1015 (IQR: 0511 - 1336)], times 2 and 3 [0853 (IQR: 0453 - 1173)] and days 1 and 3 in tests for detection of IgM. At was also studied, sera from 15 patients with HIV infec tion and different clinical forms of sporotrichosis which the technique of ELISA showed a sensitivity of 90% in tests for detection of IgG and sensitivity of 80% in tests for IgM detcção. We conclude that the ELISA technique could be used as a tool to aid diagnosis in patients with sporotrichosis and sporotrichosis patients with HIV. A longer follow - up of patients is needed to better establish the importance of detection of antibodies as a criterion for cure of sporotrichosis. The technique of ELISA is an e xcellent diagnostic tool for patients with sporotrichosis without mycological confirmation
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Avaliação clínico-laboratorial através de ensaio imunoenzimático (Elisa) na esporotricose

Pimenta, Monique Amorim January 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2014-08-11T12:37:16Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) monique_pimenta_ipec_mest_2009.pdf: 1163623 bytes, checksum: 5dc211aca9c9d9abe2ea14f0c292f834 (MD5) monique_pimenta_ipec_mest_2009.pdf.txt: 140620 bytes, checksum: bb365a50c641ebc127426b00325ad8af (MD5) monique_pimenta_ipec_mest_2009.pdf.jpg: 1440 bytes, checksum: 06136ba9e03bb5038426117c5efe979b (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A esporotricose é a micose subcutânea mais freqüente no Brasil. O diagnóstico definitivo dessa doença se dá com o isolamento em cultivo do fungo, o que em algumas vezes não é possível. Portanto, o desenvolvimento de métodos sorológicos que venham auxiliar no diagnóstico da esporotricose e na avaliação terapêutica dos pacientes é de grande interesse. No presente estudo foi empregada uma técnica imunológica aplicada à detecção de anticorpos em soro, no formato de ELISA, em pacientes com esporotricose cutânea confirmada por isolamento do fungo (n=58), assim como em pacientes com indicação clínico-epidemiológica de esporotricose, mas sem isolamento do fungo em cultivo (n=23). A avaliação da especificidade da técnica foi feita utilizando-se soros heterólogos. Os resultados demonstraram uma sensibilidade de 98% para ensaios de detecção de IgG e de 99% para ensaios de detecção de IgM, e a especificidade de ambos os testes foi de 89%. Reações cruzadas foram observadas, da mesma forma como em outros imunoensaios para o diagnóstico da esporotricose. Foram colhidas três amostras de soro, uma no momento do diagnóstico (tempo 1), uma três a seis meses após o início da micose (tempo 2) e uma de nove a 12 meses após início da micose (tempo 3). A avaliação dos anticorpos ao longo do tratamento mostra que na forma fixa da doença não foram observadas diferenças estatisticamente significantes, tanto nos ensaios de IgG como de IgM Apenas nos ensaios do grupo de pacientes com forma linfocutânea, observou uma diferença estatisticamente significante ente os tempos 2 [1,498 (IIQ: 1,026-2,009)] e tempo 3 [1,398 (IIQ: 0,925-1,678] com p=0,004 nos ensaio de IgG e uma diferença entre os tempos 1 [1,263 (IIQ: 0,639-1,658)] e tempo 2 [1,015 (IIQ: 0,511-1,336)], tempos 2 e 3 [0,853 (IIQ: 0,453-1,173)] e tempos 1 e 3 nos ensaios de detecção de IgM. Paralelamente foram analisados também, soros de 15 pacientes com infecção pelo HIV e esporotricose de diferentes formas clínicas nos quais a técnica de ELISA mostrou uma sensibilidade de 90% nos ensaios de detecção de IgG e sensibilidade de 80% nos ensaios de detecção de IgM. Concluímos que a técnica de ELISA pode ser utilizada como ferramenta de auxílio diagnóstico para pacientes com esporotricose e para pacientes com esporotricose infectados pelo HIV. Um maior tempo de acompanhamento de pacientes é necessário para melhor se estabelecer a importância da detecção de anticorpos como critério de cura da esporotricose. A técnica de ELISA é uma excelente ferramenta diagnóstica para pacientes de esporotricose sem confirmação micológica / The sporotrichosis is the most common subcutaneous mycosis in Braz il. The definitive diagnosis of this disease occurs in isolation with the fungal culture, which some times is not possible. Therefore, the development of serological methods that may assist in the diagnosis of sporotrichosis and in evaluating treatment of patients is of great interest. In the present study employed a technique applied to the detection of immune antibodies in serum, the ELISA format, in patients with cutaneous sporotrichosis confirmed by isolation of the fungus (n = 58) and in patients with clinical and epidemiological aspects of sporotrichosis, but without isolation of the fungus in culture (n = 23). The evaluation of the specificity of the technique was performed using heterologous sera. The results showed a sensitivity of 98% for testing t he detection of IgG and 99% for testing the detection of IgM, and specificity of both tests was 89%. Cross - reactions were observed in the same way as in other immunoassays for the diagnosis of sporotrichosis. Were harvested three serum samples, one at the time of diagnosis (time 1), a three to six months after the onset of mycosis (time 2) and one of nine to 12 months after onset of mycosis (time 3). Evaluation of antibodies during the treatment shows that the fixed form of the disease shows no statisticall y significant differences in both tests for IgG and IgM. Only the tests of the group of patients with linfocutânea way, was a statistically significant difference between the time 2 [1498 (IQR: 1026 - 2009)] and time 3 [1398 (IQR: 0925 - 1678] with p = 0004 in the testing of IgG and a difference between times 1 [1263 (IQR: 0639 - 1658)] and time 2 [1015 (IQR: 0511 - 1336)], times 2 and 3 [0853 (IQR: 0453 - 1173)] and days 1 and 3 in tests for detection of IgM. At was also studied, sera from 15 patients with HIV infec tion and different clinical forms of sporotrichosis which the technique of ELISA showed a sensitivity of 90% in tests for detection of IgG and sensitivity of 80% in tests for IgM detcção. We conclude that the ELISA technique could be used as a tool to aid diagnosis in patients with sporotrichosis and sporotrichosis patients with HIV. A longer follow - up of patients is needed to better establish the importance of detection of antibodies as a criterion for cure of sporotrichosis. The technique of ELISA is an e xcellent diagnostic tool for patients with sporotrichosis without mycological confirmation
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Efeito antimicrobiano e modulador da resposta imune dos peptídeos hBD-3 e LL-37 e dos polifenóis o chá verde e do cranberry

Bedran, Telma Blanca Lombardo [UNESP] 14 March 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-14. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:03Z : No. of bitstreams: 1 000830081_20160101.pdf: 121876 bytes, checksum: 342f21a15b1d2e738af168b1e2467da5 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-01-04T10:26:29Z: 000830081_20160101.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-04T10:28:25Z : No. of bitstreams: 1 000830081.pdf: 809941 bytes, checksum: ea53cd5ef0cec7fb993a2745e82dad53 (MD5) / The antimicrobial peptides LL-37, hBD-1, hBD-2 and hBD-3 are considered an endogenous antibiotic, with important role in the prevention of periodontal diseases due to their ability to regulate the immune response. However those peptides could be degraded by periodontal pathogens. Therefore, therapies able to up regulate the secretion of those peptides by human cells, and the association of antimicrobial peptides with natural compounds, which may act in synergism to modulate the immune response, may be a novel approach for effectively controlling periodontal diseases. The aim of this in vitro study were: i) investigate the ability of green tea extract and EGCG to induce hBD-1 and hBD-2 secretion and gene expression by gingival epithelial cells (B11) and to protect hBDs from degradation by P. gingivalis, ii) A 3D co-culture model of gingival epithelial cells and fibroblasts stimulated with A. actinomycetemcomitans LPS (1 μg/ml) were used to investigated the anti-inflammatory properties of the hBD-3, LL-37, ACPACs and EGCG and to determine whether LL-37 acts in synergy with AC-PACs, EGCG and hBD-3. Gingival epithelial cells were stimulated with green tea extract or EGCG in the presence and absence of specific inhibitors. The secretion and gene expression of hBD-1 and hBD-2 was respectively measured by ELISA and qPCR. The ability of green tea extract and EGCG to prevent hBDs degradation by P. gingivalis present in a bacterial culture supernatant was evaluated by ELISA. A 3D co-culture model composed of gingival fibroblasts embedded in a collagen matrix overlaid with gingival epithelial cells had a synergistic effect with respect to the secretion of IL-6 and IL-8 in response to A. actinomycetemcomitans LPS stimulation compared to fibroblasts and epithelial cells individually. The 3D co-culture model was stimulated with noncytotoxic concentrations of: i) hBD-3 (10 and 20 μM) ...(Complete abstract electronic access below)
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Influência das substâncias húmicas aquáticas na determinação de atrazina por imunoensaio (Elisa) /

Toscano, Ilda Antonieta Salata January 1999 (has links)
Orientador: Julio César Rocha / Resumo: Substâncias húmicas aquáticas (SHA) foram obtidas por processo de adsorção em resinas macroporosas não-iônicas, XAD 7 e XAD 2, dispostas em série. Após eluição com solução de NaOH, o extrato alcalino de SHA foi acidificado a pH 1,0 para separação em ácidos húmico (AH) que precipita, e ácido fúlvico (AF) o qual permanece em solução. Para caracterização físicoquímica do material húmico (AH e AF), foram feitas análise elementar, determinação do teor de substâncias húmicas e acidez total. Os resultados obtidos por UV-VIS e FTIR indicaram que AH apresenta maior número de grupos aromáticos em relação a AF, que em geral possui mais cadeias alifáticas. A aplicação da técnica imunoquímica, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), para a determinação do herbicida atrazina em águas foi avaliada em amostra de água contendo alto teor de matéria orgânica (~35 mg L-1) e baixo valor de pH (3,8). O efeito matriz devido a presença de SHA pode ser notado pela perda de sensibilidade da técnica, ou seja, os valores de IC50 variaram de 60 ng L-1, na ausência de SHA, para 112 ng L-1 em concentrações acima de 10,0 mg L-1 de material húmico e para 137 ng L-1 em pH < 5,0. Além disto, pode-se inferir que a luz solar aumentou a velocidade de degradação da atrazina na presença de SHA formando produtos, com partes de suas estruturas, semelhantes ao produto original levando a resultados falso-positivos. A quantidade de material húmico presente na amostra de água foi a principal fonte de erro na análise de atrazina, levando à interações não-específicas entre as SHA e os reagentes enzimáticos. O procedimento ELISA, aplicado neste estudo, pode ser utilizado para determinação de atrazina desde que se faça diluição da amostra até cerca de 2,5 mg L-1 de húmicos e em pH alcalino (7,0 - 9,0). / Abstract: Aquatic humic substances (AHS) were isolated from water samples using Amberlite XAD 7 and XAD 2. After elution with NaOH solution, the XAD concentrated AHS was fractioned at pH 1.0 resulting in fulvic acid (FA - supernatant) and humic acid (HA - slurry). All humic materials were characterized with respect to elemental analysis, amount of AHS and total acidity. UV and FTIR spectra showed HA aromatic character greater than FA. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was evaluated by analyzing atrazine in rich-humic matter water sample (~35 mg L-1) and acid water (pH 3.8). From all the conditions studied the low pH (pH < 5.0) and high humic substances concentrations (>10 mg L-1) showed the greatest influence. The IC50 values to control sample (no humic) decreased from 60 ng L-1 to 112 ng L-1 to humic solution at >10 mg L-1 and to 137 ng L-1 at pH < 5.0. The presence of AHS alters the photochemical behaviour of atrazine by accelerating its degradation forming metabolites which can be recognized by the antibodies. The assay performance showed a strong dependence on the pH values and amount of humic matter. However, analysis could be carried out directly in samples containing HA or FA that had been adjusted the pH in the range between 7.0 and 9.0, and humic concentration at 2.5 mg L-1. / Doutor
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Efeito antimicrobiano e modulador da resposta imune dos peptídeos hBD-3 e LL-37 e dos polifenóis o chá verde e do cranberry /

Bedran, Telma Blanca Lombardo. January 2014 (has links)
Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidório / Banca:Juliana Rico Pires / Banca: Shelon Cristina Souza Pinto / Banca: Luciene Cristina Souza Pinto / Banca: Joni Augusto Cirelli / Resumo:Os peptídeos antimicrobianos como por exemplo a catelicina (LL-37) e as defensinas humanas (hBD-1, hBD-2 e a hBD-3) são considerados antibióticos endógenos com importante papel na prevenção das doenças periodontais, devido a sua capacidade de regulação da resposta imune, sendo que os mesmos podem ser degradados pelos periodontopatógenos. Terapias que aumentem a produção destes peptídeos pelas próprias células do organismo, assim como a associação destes peptídeos com compostos naturais os quais possam agir em sinergismo na regulação da resposta imune, podem ser considerados novas estratégias para o melhor controle das doenças periodontais. Portanto os objetivos deste estudo in vitro foram: i) Avaliar a capacidade do extrato do chá verde (Camellia sinensis) e do seu polifenol, o EGCG, sobre a expressão gênica de hBD-1 e hBD-2 pelas células epiteliais gengivais (B11), sobre a degradação das mesmas frente ao P. gingivalis, ii) Através da utilização do modelo 3D de co-cultura celular, avaliar a capacidade antiinflamatória dos peptídeos hBD-3 e LL-37 quando em associação sobre a produção de citocinas, quimiocinas e fatores de crescimento, iii) Avaliar a capacidade anti-inflamatória da associação do EGCG e do polifenol proveniente do cranberry, o AC-PACs, com o peptídeo LL-37 sobre a produção de citocinas, quimiocinas e fatores de crescimento em modelo de co-cultura celular. As células epiteliais gengivais (B11) foram estimuladas com o extrato do chá verde e com o EGCG na presença e ausência de inibidores específicos. A produção e expressão gênica de hBD-1 e hBD-2 foram quantificados respectivamente pelas técnica de ELISA e qPCR. A capacidade do extrato do chá verde e do EGCG em proteger a degradação de hBDs pelo P. gingivalis foi mensurado através da técnica de ELISA. Foi desenvolvido um modelo em 3D de co-cultura de fibroblastos gengivais embebidos em....(Resumo completo, clicar acesso eletrôni / Abstract: The antimicrobial peptides LL-37, hBD-1, hBD-2 and hBD-3 are considered an endogenous antibiotic, with important role in the prevention of periodontal diseases due to their ability to regulate the immune response. However those peptides could be degraded by periodontal pathogens. Therefore, therapies able to up regulate the secretion of those peptides by human cells, and the association of antimicrobial peptides with natural compounds, which may act in synergism to modulate the immune response, may be a novel approach for effectively controlling periodontal diseases. The aim of this in vitro study were: i) investigate the ability of green tea extract and EGCG to induce hBD-1 and hBD-2 secretion and gene expression by gingival epithelial cells (B11) and to protect hBDs from degradation by P. gingivalis, ii) A 3D co-culture model of gingival epithelial cells and fibroblasts stimulated with A. actinomycetemcomitans LPS (1 μg/ml) were used to investigated the anti-inflammatory properties of the hBD-3, LL-37, ACPACs and EGCG and to determine whether LL-37 acts in synergy with AC-PACs, EGCG and hBD-3. Gingival epithelial cells were stimulated with green tea extract or EGCG in the presence and absence of specific inhibitors. The secretion and gene expression of hBD-1 and hBD-2 was respectively measured by ELISA and qPCR. The ability of green tea extract and EGCG to prevent hBDs degradation by P. gingivalis present in a bacterial culture supernatant was evaluated by ELISA. A 3D co-culture model composed of gingival fibroblasts embedded in a collagen matrix overlaid with gingival epithelial cells had a synergistic effect with respect to the secretion of IL-6 and IL-8 in response to A. actinomycetemcomitans LPS stimulation compared to fibroblasts and epithelial cells individually. The 3D co-culture model was stimulated with noncytotoxic concentrations of: i) hBD-3 (10 and 20 μM) ...(Complete abstract electronic access below) / Doutor
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Métodos estatísticos na avaliação de reações cruzadas entre Leishmania spp. E Ehrlichia spp. por meio de técnicas sorológicas e moleculares /

Nagata, Walter Bertequini. January 2017 (has links)
Orientador: Sílvia Helena Venturoli Perri / Coorientadora: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca:Sandra Valéria Inácio / Banca:Milena Arauz Viol / Resumo: O objetivo do presente estudo foi investigar, por métodos estatísticos, a ocorrência de reações cruzadas entre Leishmania spp. e Ehrlichia spp. com o uso de técnicas sorológicas e moleculares. Um total de 100 amostras sanguíneas de cães foram colhidas e processadas por meio do ELISA (Ensaio Imunoenzimático Indireto) e PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). A análise estatística consistiu nos testes de McNemar e Coeficiente de concordância Kappa. As estatísticas foram consideradas significativas quando p<0,05. A sensibilidade e especificidade dos testes foram determinadas pela curva ROC (Receiver Operator Characteristic), considerando o PCR como teste padrão ouro. A partir das análises pode-se verificar que 48,0% dos animais foram reativos na ELISA e 58,0% foram positivos na PCR, no caso da Leishmania spp. Para Ehrlichia spp., a ocorrência de anticorpos pelo ELISA foi de 54,0% e, pela PCR, 48,0% dos cães foram positivos. Nota-se, também, que 37,0% dos animais foram positivos para os dois patógenos por meio do teste molecular, e quatro cães foram reativos no teste ELISA para ambas as doenças e tiveram resultado negativo apenas no teste molecular de Ehrlichia spp. Estes resultados, na sorologia, podem sugerir possíveis casos de reatividade cruzada entre a Leishmania spp. e Ehrlichia spp.. Entretanto, é mais provável que estes resultados estejam relacionados com a coinfecção desses agentes. Por meio dos resultados obtidos, há mais evidências de coinfecção por estes dois agentes pa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study is to investigate, by statistical methods, the occurrence of cross - reactivity between Leishmania spp. and Ehrlichia spp. using serological and molecular techniques. A total of 100 blood samples from dogs were collected and processed b y ELISA (indirect Enzyme - Linked Immunosorbent Assay) and PCR (polymerase chain reaction). Statistical analysis consists of McNemar tests and agreement coefficient Kappa. The statistics were considered significant when p <0.05. The sensitivity and specifici ty of the tests were determined by ROC curve (Receiver Operator Characteristic), considering the PCR as gold standard. From the analysis it can be seen that 48,0% of the animals were reactive in ELISA and 58,0% were positive in PCR in the case of Leishmani a spp. For Ehrlichia spp., the occurrence of antibodies by ELISA was 54,0% and, by PCR, 48,0% of the dogs were positive. It can be noted also that 37,0% of the animals were positive for both parasites through molecular test and four dogs were reactive in t he ELISA test for both diseases and were negative only in molecular test for Ehrlichia spp. These results in serology can suggest possible cases of cross - reactivity between Leishmania spp. and Ehrlichia spp.. However, it is more likely that these results are related to coinfection of these agents. Through the results obtained, there are more evidences of coinfection by these two...(Compleyte abstract eletronic access below) / Mestre

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