Orientador: Rinaldo Poncio Mendes / Coorientador: James Venturini / Coorientador: Ana Pardini Vicentini / Coorientador: Daniela Vanessa Moris de Oliveira / Banca: Mário León Silva-Vergara / Banca: Anamaria Mello Miranda Peniago / Resumo: O reaparecimento de manifestações clínicas após tratamento eficaz, neste texto identificado como recaída, tem sido pouco avaliado. Assim, foram estudados os casos de recaída observados em 400 pacientes, 93 com a forma aguda/subaguda (FA) e 307 com a crônica (FC), que já tinham apresentado cura aparente, isto é, com cura clínica, normalização da velocidade de hemossedimentação e cura sorológica - caracterizada pela presença de teste negativo à imunodifusão dupla em gel de agar por dois anos. Vinte e um (5,2%) desses pacientes apresentaram recaídas da doença. Três (14,3%) eram do sexo feminino e 18 (85,7%) do masculino, com razão de masculinidade de 6:1. Dos 21 pacientes com recaída, 15 (4,8%) apresentavam a FC e 6 (6,4%) a FA (p>0,05). As reativações ocorreram de 46 a 296 meses após introdução do tratamento (Md=96) e de 4 a 267 meses (Md= 60) após sua suspensão. As formas clínicas não diferiram quanto aos tempos decorridos até a reativação. O diagnóstico sorológico de recaída pela IDD foi feito em apenas 45% dos casos, o que levou à avaliação de outros testes para esse fim. Assim, foi realizado o enzimaimunoensaio (ELISA) e o immunoblotting (IB). A sensibilidade da IDD e do ELISA / 0,710 foi 76,1% em amostras de soro obtidos no pré-tratamento (p=0,25). No diagnóstico de recaída, a sensibilidade da IDD foi menor que no pré-tratamento (80% vs 45%; p=0,017), enquanto o ELISA / 0,710 foi igual (80% vs 65%;p=0,125). A sensibilidade do IB para diagnóstico de recaída foi de 12,5% na identificação da gp70 e 43,8% na da gp43 (p<0,05). A avaliação da acurácia do teste ELISA revelou sensibilidade de 96%, especificidade de 95%, valor preditivo positivo de 95%, valor preditivo negativo de 96% e acurácia de 95,5% quando o cut-off utilizado foi a densidade óptica de 0,710, obtido em função da construção da receiver operator characteristc - ROC, para um intervalo de confiança ... / Abstract: The reappearance of clinical manifestations after efficacious treatment, here identified as relapse, has been rarely evaluated. Thus, the cases of relapse observed in a cohort of 400 patients, 93 with acute/subacute form (AF) and 307 with chronic form (CF) were studied. They had already reached apparent cure, characterized as clinical cure, normalization of the erythrocyte sedimentation rate and serological cure, with a negative double agar gel immunodiffusion test (DID) for two years after antifungal discontinuation. Twenty-one (5.2%) of these patients had relapses. Three (14.3%) were female and 18 (85.7%) were male, with a male:female ratio of 6:1. Of the 21 relapsed patients, 15 (4.8%) presented the CF and 6 (6.4%) the AF (p>0.05). The relapse occurred 46-296 months after introduction of the treatment (Md=8 yrs) and from 4 to 267 months (Md=5 yrs) after withdrawal. Clinical forms did not differ regarding to the time elapsed until relapse. DID was positive in only 45% of the relapsed cases, which led to the evaluation of other tests to diagnose this condition. Thus, the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was standardized and the cut off was determined using the curve receiver operator characteristic - ROC and confidence intervals of 95% and 99%, showing optical densities of 0.710 and 0.850, respectively. Then, serological evaluation was performed using ELISA/0.710 and ELISA/0.850, and immunoblotting identifying gp43 (IBgp43) and gp70 (IBgp70). ELISA 0.710 and DID showed the same sensitivity, 76.1%, in serum samples obtained before treatment (p=0.25). DID sensitivity was lower at relapse than before the initial treatment (45% vs 80%; p=0.017), whereas ELISA/0,710 was the same (65% vs 80%; p=0.125). IBgp70 showed a 12.5% and IBgp43 a 43.8% sensitivity for diagnosing relapse (p<0.05). ELISA/0.710 showed a 96% sensitivity, 95% specificity, 95% positive predictive value, 96% negative ... / Mestre

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Ricardo Luiz Moro de Souza / Resumo: A nucleoproteína (NP) do Vírus da Influenza Aviária (VIA) é um importante alvo antigênico no imunodiagnóstico desta doença, devido à sua baixa variabilidade entre as diferentes estirpes do VIA, resultando em uma elevada reatividade cruzada, e por ser também uma proteína altamente imunogênica para hospedeiros vertebrados. Neste estudo, o gene codificador da NP do VIA foi parcialmente clonado e expresso em Escherichia coli como uma proteína recombinante fusionada ao polipeptídeo SUMO e uma etiqueta de poli-histidina para seu uso no desenvolvimento de um ensaio de ELISA indireto para a detecção de anticorpos específicos contra o VIA. A NP recombinante foi expressada na fração solúvel e foi mais facilmente purificada. Após análise em relação aos seus principais sítios de antigenicidade e caracterização por meio de Western blotting, a NP recombinante foi utilizada como uma preparação antigênica no ELISA indireto para detecção de anticorpos contra o VIA presentes em amostras de soro de galinha. A análise comparativa do teste desenvolvido no presente estudo com um ELISA comercial apresentou valores de 95%, 97% e 96,7% de sensibilidade, especificidade e acurácia, respectivamente e um índice κappa de 0,88. Os resultados permitem concluir que a NP recombinante do VIA desenvolvida neste estudo possui características favoráveis para ser aplicada como antígeno no ELISA indireto, constituindo-se em um método sensível e específico para o imunodiagnóstico da Influenza Aviária em galinhas / Abstract: The nucleoprotein (NP) of Avian Influenza Virus (AIV) is an important antigenic target for immunodiagnosis of this disease, due to its low variability among different AIV strains, resulting in high cross-reactivity, and the also highly immunogenic for vertebrate hosts. In this study, the gene enconding NP of AIV was cloned and expressed in Escherichia coli as a recombinant protein fused to SUMO polypeptide with a polyhistidine tag and used to develop an indirect ELISA for the detection of AIV-specific antibodies. The recombinant NP was expressed in the soluble fraction and easily purified. After Analysis of the main sites of antigenicity and characterization in Western-Blotting, the recombinant NP was optimized as an antigen preparation for indirect ELISA to detect anti-AIV antibodies in chicken serum samples. The comparative analysis of this ELISA with a commercial ELISA showed values of 95%, 97%, 96.7% of sensitivity, specificity and accuracy, respectively, and an agreement of k=0.88. In conclusion, the results indicated that the recombinant NP of AIV produced in this study is a good source of antigen for indirect ELISA and provides a sensitive and specific method for the immunodiagnosis of Avian Influenza in chickens / Mestre

A esporotricose é uma micose causada pela inoculação traumática na pele com material contaminado com o fungo dimórfico Sporothrix schenckii. As formas clínicas mais comuns são a linfocutânea e a cutânea fixa. A prevalência é maior em área tropical e em zona temperada. No entanto, a prevalência real da esporotricose em áreas urbanas e rurais é desconhecida, pois não há notificação compulsória. O aumento do número de casos, nos últimos anos, está relacionado à transmissão feita por animais de estimação. Os métodos de diagnóstico diretos disponíveis demoram dias para serem concluídos. Por sua vez, métodos sorológicos podem gerar resultados falsos positivos ou negativos devido a reações cruzadas entre antígenos do S. schenckii com de outros fungos. Por esse motivo, é necessário o desenvolvimento de testes sorológicos, com alta sensibilidade e especificidade, que garantam um diagnóstico confiável. Este estudo teve por objetivo padronizar um ensaio imunoenzimático (ELISA), com maior sensibilidade e especificidade, para diagnóstico sorológico da esporotricose. Nesse trabalho, placas de poliestireno foram sensibilizadas com exoantígenos de cultura da forma leveduriforme de S. schenckii e testadas utilizando soros de pacientes com esporotricose, soros de pacientes com paracoccidioidomicose (PCM), assim como de indivíduos esporotriquina negativos. Duas estratégias foram utilizadas, uma tratando o antígeno com metaperiodato de sódio e outra tratando os soros com uréia 6M em diferentes tempos de incubação. Os resultados mostraram que a estratégia utilizando metaperiodato de sódio não melhorou o poder do ensaio em discriminar os soros dos pacientes com esporotricose daqueles sem esporotricose ou com PCM. No entanto, a estratégia utilizando uréia 6M melhorou significativamente o poder de discriminação do método. As melhores condições do teste foram tratamento com uréia por 5, 10 e 20 minutos e diluição dos soros a 1\800 e 1\1600. / Sporotrichosis is a fungal infection caused by traumatic inoculation in the skin with contaminated material with the dimorphic fungus Sporothrix schenckii. The most common clinical forms are fixed cutaneous and lymphocutaneous. Its prevalence is higher in the tropical and temperate zone. However, the actual prevalence of sporotrichosis in urban and rural areas is unknown because there is no mandatory reporting. The number of cases is increasing in the last years mainly due to transmission made by pets. The results of direct diagnostic methods take days to be released. In turn, serological methods may lead to false positive or negative results due to cross-reactions between antigens from S. schenckii with others fungi. Therefore, it is necessary to develop serological tests with high sensitivity and specificity to ensure a reliable diagnosis. This study aimed to standardize an enzyme immunoassay (ELISA) with higher sensitivity and specificity for serological diagnosis of sporotrichosis. In this work, polystyrene plates were sensitized with exoantigens obtained from yeast form of S. schenckii and tested using sera from patients with sporotrichosis, sera from patients with paracoccidioidomycosis (PCM), as well as individuals with sporotrichinin negative tests. Two strategies were used, one treating the antigen with sodium metaperiodate and another treating the serum with 6M urea at different incubation times. The results showed that the strategy using sodium metaperiodate not improved the discriminating power of the test sera from patients with sporotrichosis from those without sporotrichosis or with PCM. However, the strategy using 6M urea significantly improved discrimination power of the method. The best conditions of the test were the dilution of the sera to 1\800 and 1\1600 and treatment with urea for 5, 10 and 20 minutes.

A paracoccidioidomicose (PCM) micose sistêmica granulomatosa crônica, endêmica em países da América Latina, causada pelo fungo termo-dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. A endemicidade está relacionada com regiões agrícolas, onde o fungo encontra condições ecológicas favoráveis para seu desenvolvimento. Se não diagnosticada e tratada a tempo, pode levar a formas disseminadas graves e letais, com rápido envolvimento dos pulmões, tegumento, gânglios, baço, fígado e órgãos linfóides do tubo digestivo. O surgimento da doença depende da interação entre o fungo e a resposta imune do hospedeiro, o qual pode evoluir à cura espontânea ou disseminar-se pelo organismo causando reação granulomatosa crônica. O diagnóstico da PCM é feito por exame clínico e laboratorial. Os exames laboratoriais são auxiliares no diagnóstico. Entres estes destacam a biopsia e a cultura, que visam identificar o fungo em amostras biológicas. No entanto, existe a possibilidade da ocorrência de resultado falso-positivo. Por sua vez, os testes sorológicos como imunodifusão dupla (IDD), contraimunoeletroforese (CIE), imunofluorescência indireta (IFI), ensaio imunoenzimático (ELISA) e imunoblot (IB) são auxiliares no diagnóstico e, permitem avaliar de forma indireta a presença de anticorpos do hospedeiro contra antígenos do fungo. A IDD, o teste de referência, apresenta alta sensibilidade e especificidade, no entanto, requer que o paciente apresente altos títulos de anticorpos, período onde a doença já esta instalada. O teste de ELISA é um método sensível, rápido e apropriado para análise de grande amostragem, porém, apresenta como desvantagem a reatividade cruzada entre diferentes espécies de fungos. O projeto tem como objetivo a realização de ensaios de ELISA utilizando amostras de soros de moradores da zona rural de Alfenas, Minas Gerais, na presença ou ausência de solução de ureia 6M. Comparando-se o teste de ELISA sem ureia e com ureia, pode-se observar uma redução do número de resultados positivos em todas as faixas etárias tanto no sexo feminino, quanto no sexo masculino e um aumento no número de resultados negativos em ambos os sexos, e também em todas as faixas etárias. Ao se avaliar a região rural de Alfenas, MG utilizando o teste de ELISA tratado com ureia 6M, a soroprevalência obtida foi de 55,75%. / Paracoccidioidomycosis (PCM), a chronic granulomatous systemic mycosis, endemic in Latin America, is caused by the thermo-dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. The endemicity is associated with agricultural areas where the fungus has favorable ecological conditions for its development. If the disease is not diagnosed and treated in time, it can lead to severe and lethal dissemination with rapid involvement of the lung, integument, lymph nodes, spleen, liver and lymphoid organs of the digestive tract. The emergence of the disease depends on the interaction between the fungus and the host immune response, which may progress to spontaneous cure or it may spread through the body causing chronic granulomatous reaction. The diagnosis of PCM is made by clinical examination and laboratory tests. The latter are used as a diagnostic aid. Among these stand out biopsy and culture, aimed at identifying the fungus in biological samples. However, the occurrence of false negative is high. In turn, these serological tests as double immunodiffusion (DID), counterimmunoelectrophoresis (CIE), indirect immunofluorescence (IIF), enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and immunoblotting (IB) are auxiliary in the diagnosis and allows to indirectly assessing the presence of antibodies against the host fungus antigens. DID, the reference test has high sensitivity and specificity, but requires that the patient has high levels of antibodies, a period when the disease is already installed. The ELISA assay is sensitive, fast, and suitable for large sample analysis. It has the disadvantage of crossreactivity between different species of fungi. The project aims to carry out ELISA assays using sera samples from residents of rural areas in Alfenas, Minas Gerais, in the presence or absence of 6M urea solution. Comparing the results of ELISA in the presence or absence of urea we can observe a reduction in the number of positives cases in all age groups, both female as male and an increasing number of negative outcomes in both sexes, and in all age groups. When evaluating the rural of Alfenas, MG using the ELISA treated with 6M urea, the seraprevalence obtained was 55.75%.

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Marcia Marinho / Banca: Marcia Dalastra Laurenti / Os anexos referem-se a resultados individuais da pesquisa / Resumo: Leishmaniose felina foi descrita pela primeira vez por Sergent e colaboradores em 1912 e, desde então, vários relatos de casos clínicos encontramse dispostos na bibliografia mundial. O objetivo do presente estudo foi pesquisar a infecção por Leishmania chagasi em 55 gatos com dermatopatias provenientes do município de Araçatuba, São Paulo, Brasil, área endêmica para leishmaniose visceral. A avaliação desses animais foi realizada por meio de exame parasitológico direto de órgãos linfóides; exame histopatológico e reação de imunoistoquímica para pesquisa de formas amastigotas do parasito em pele hígida e lesionada; ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto e a reação de imunofluorescência indireta para pesquisa de anticorpos antiLeishmania chagasi; além da pesquisa de coinfecções por vírus da imunodeficiência felina e vírus da leucemia felina e ainda, nas lesões cutâneas, a pesquisa de ácaros, fungos e bactérias coexistentes. Dos 55 gatos avaliados, foram identificados 27 animais com leishmaniose visceral. Destes, 12 (44,4%) foram positivos nos exames parasitológicos de órgãos linfóides e da pele, 11 (40,7%) por sorologia e quatro (14,8%) por ambos os métodos. O exame histopatológico evidenciou a presença de formas amastigotas de Leishmania chagasi no interior de macrófagos da derme em apenas um dos gatos e, a reação de imunoistoquímica identificou o parasito em nove animais, incluindo aquele positivo na histopatologia de pele. Do total de animais positivos para leishmaniose visceral foi possível identificar a presença de anticorpos antivírus da imunodeficiência felina em cinco (18,5%). Ainda nesses animais, observouse o crescimento de colônias de Trichophytom spp., Microsporum spp., Aspergillus spp., Candida spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp. e Pseudomonas spp. Levandose em consideração a elevada ocorrência de Leishmania chagasi em gatos com lesões cutaneas / Abstract: Feline leishmaniasis was first described by Sergent et al. in 1912 and since then several reports of clinical cases were reported worldwide . The aim of this study was to investigate the infection by Leishmania chagasi in 55 cats with skin diseases from the municipality of Araçatuba, São Paulo, Brazil, an endemic area for visceral leishmaniasis. The evaluation of these animals consisted in direct parasitological examination of lymphoid organs, histopathological and immunohistochemical reaction for detection of amastigotes in healthy and lesioned skin and serology for visceral leishmaniasis by immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescence. We also searched for possible coinfections with feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV), and for the presence of mites, fungi or bacteria in skin lesions. From the 55 cats studied, we identified 27 animals with visceral leishmaniasis. Of these, 12 (44.4%) were positive in parasitological evaluation of lymphoid organs and skin, 11 (40.7%) by serology and four (14.8%) by both methods. Amastigote forms of Leishmania chagasi were evidenced, by histopathology, within macrophages in the dermis of only one cat. Immunohistochemical reaction identified the parasite in nine animals, including the one positive by histopathological examination. In five cats infected by Leishmania chagasi we identified the presence of antibodies against feline immunodeficiency virus (FIV). We also observed Trichophytom spp., Microsporum spp., Aspergillus spp., Candida spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp. and Pseudomonas spp. in one animal. Based on the evidence of the high occurrence of Leishmania chagasi infection in cats with skin lesions of this study, one must include visceral leishmaniasis in the differential diagnosis of skin diseases in cats from endemic areas / Mestre

Orientador: Sergio Ricardo Batlouni / Coorientador: Rafael Yutaka Kuradomi / Banca: Fábio Rosa Sussel / Banca: Laura satiko Okada Nakaghi / Resumo: O principal objetivo deste trabalho foi determinar as concentrações plasmáticas de 17α,20β-dihidroxi-4-pregnen-3-one (DHP), Estradiol 17β (E2), Testosterona (T) e Prostaglandina F2α (PGF2α) e a distribuição percentual dos diferentes tipos de ovócitos presentes nos ovários ao longo do processo de hipofisação de pacu (Piaractus mesopotamicus) com ou sem uso de PGF exógena. Para isto, 23 fêmeas foram distribuídas em cinco tratamentos, com indução dividida em duas doses com intervalo de 24 horas: (0,2 mL.kg-1 solução salina) + (0,2 mL.kg-1 solução salina) (T1); (0,2 mL.kg-1 solução salina) + (0,2 mL.kg-1 solução salina e 2 ml PGF2α) (T2); (0,6 mg.kg-1 EBHC (extrato bruto de hipófise de carpa)) + (0,2 mL.kg-1 solução salina e 2 mL PGF2α) (T3); (0,6 mg.kg-1 EBHC) + (5,4 mg.kg-1 EBHC) (T4); (0,6 mg.kg-1 EBHC) + (5,4 mg.kg-1 EBHC e 2 mL PGF2α) (T5). Foram coletadas amostras de sangue e ovócitos para análise dos níveis plasmáticos de PGF2α, DHP, E2 e T e avaliação dos tipos de ovócitos em quatro períodos após a segunda dose. O uso de PGF2α exógena provocou um pico plasmático de PGF2α uma hora após a segunda dose hormonal. A hipofisação, com ou sem o uso de PGF2α exógena, provocou pico plasmático de PGF2α no momento da desova. O uso de PGF2α exógena juntamente hipofisação (T5) eleva a taxa de ovulação de pacu em relação a fêmeas apenas hipofisadas (T4), provavelmente em função de níveis de GVBD e de PGF2α superiores de T5, quatro horas após a segunda dose hormonal. / Abstract: The main objective of this study was to determine the plasma concentrations of 17α, 20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one (DHP), 17β-Estradiol (E2), Testosterone (T) and Prostaglandin F2α (PGF2α) and the different types of oocytes present in the ovaries throughout the pacu (Piaractus mesopotamicus) hypophysation process with or without the use of exogenous PGF2α. To that, 23 females were distributed in five treatments, with induction divided into two doses with a 24-hour interval: (0.2 mL.kg-1 saline) + (0.2 mL.kg-1 saline) (T1); (0.2 mL.kg-1 saline) + (0.2 mL.kg-1 saline and 2 mL PGF2α) (T2); (0.6 mg.kg-1 CPE (crude pituitary extract)) + (0.2 mL.kg-1 saline and 2 mL PGF2α) (T3); (0.6 mg.kg-1 CPE) + (5.4 mg.kg-1 CPE) (T4); (0.6 mg.kg-1 CPE) + (5.4 mg.kg-1 CPE and 2 ml PGF2α) (T5). Blood and oocyte samples were collected for analysis of plasma levels of PGF2α, DHP, E2 and T in four periods after the second dose. The use of exogenous PGF2α caused a plasma peak of PGF2α one hour after the second hormonal dose. Hypophysation, with or without the use of exogenous PGF2α, caused a plasma peak of PGF2α at the time of spawning. The use of exogenous PGF2α together with hypophysation (T5) increased the pacu ovulation rate in relation to hypophysation only (T4), probably as a result of higher GVBD and PGF2α levels of T5, four hours after the second hormonal dose. / Mestre

Orientador: Sônia Regina Panzarini / Coorientador: Cláudio Aparecido Casatti / Banca: Sônia Regina Panzarini / Banca: Cláudio Aparecido Casatti / Resumo: A deficiência de estrógeno é uma condição sistêmica com a qual o cirurgião dentista pode se deparar na clínica e aparece durante a menopausa e após ovariectomia. Essa condição pode ocasionar o desenvolvimento da osteopenia e da osteoporose causando um desequilíbrio entre os processos de formação/absorção óssea. Considerando a escassez da literatura no estudo do reimplante dentário em indivíduos com deficiência de estrógeno e que são submetidos a tratamento de reposição hormonal, o objetivo do estudo foi analisar o efeito da ovariectomia e da terapia de reposição hormonal com 17-β estradiol no processo de reparo do reimplante dentário imediato por meio da análise histomorfométrica e imunoistoquímica. Ratas foram submetidas ao estudo do ciclo estral e após esse procedimento foram selecionados para o estudo sessenta animais que apresentaram ciclo regular. Os animais foram submetidos à cirurgia de exposição e/ou remoção dos ovários constituindo os grupos: Sham, ovariectomizados (OVX) e OVX com reposição hormonal (OVX/E2). No 8º dia foram implantados no dorso dos animais pellets subcutâneos com óleo de milho (grupo OVX) e com 17-β estradiol (grupo OVX/E2). Os pellets foram mantidos por 60 dias. No 1º dia de tratamento (grupo 60 dias) e no 45º dia (grupo 15 dias) após o início do tratamento os animais foram submetidos à exodontia e reimplante dentário imediato. Os animais sofreram eutanásia por meio de perfusão 60 dias após o início do tratamento de reposição hormonal. Nesse momento foi realizada a coleta de sangue para a dosagem do estradiol. O nível de estradiol no plasma foi elevado no grupo OVX/E2, baixo no OVX e flutuante no grupo Sham de acordo com as distintas fases do ciclo estral no momento da coleta. O ligamento periodontal apresentou-se inserido no osso e na raiz em grande parte da superfície radicular... / Abstract: Estrogen deficiency is a systemic condition that is frequently encountered by dental surgeons in the clinic and appears during menopause and after ovariectomy. This condition can lead to the development of osteopenia and osteoporosis affecting the maxillary bones by promoting bone loss of the alveolar process causing an imbalance between the processes of bone formation and resorption. Considering the shortage of literature in the study of dento-alveolar trauma in individuals with estrogen deficiency and individuals undergoing estrogen replacement therapy (E2), the aim of this study is to analyze the repair process in immediate dental replanting after ovariectomy and estrogen replacement therapy with 17-β estradiol by means of histomorphometric and immunohistochemistry analysis. Sixty female rats with regular estrous cycle were selected for the experimental study. The animals were either ovariectomized (OVX) or sham-operated and divided into three groups: Sham, OVX and OVX/E2. Pellets with corn oil (sham and OVX groups) and 17-β estradiol (OVX/E2 group) were subcutaneously implanted on the back of the animals eight days after either OVX or Sham surgery. Estrogen replacement therapy was maintained for 60 days. At the 1st (60 days group) and 45th days (15 days group) post pellets implantation, the animals were subjected to the right upper incisor extraction and immediate tooth replantation. Animals were sacrificed by perfusion at 60th day of estrogen replacement therapy. Prior to sacrifice, blood samples were collected in order to measure plasma concentration of estrogen. Plasma estradiol level was high in OVX / E2 group, low in OVX and floating in the Sham group according to the different phases of the estrous cycle at the time of collection. Periodontal ligament was inserted into both the cementum and bone tissue in the three groups at 15th post-operative day... / Mestre

Orientador: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Banca: Marcia Carneiro Valera Garakis / Banca: Giulio Gavini / Banca: Aletéia Massula de Melo Fernandes / Banca: Frederico Canato Martinho / Resumo: O reimplante tardio de dentes avulsionados é uma realidade dentro dos consultórios odontológicos. Na tentativa de se restabelecer a arquitetura e a função do ligamento periodontal, além de se evitar a anquilose, evitando ou modulando a reabsorção por substituição, a superfície radicular dos dentes avulsionados pode ser tratada com diversas substâncias, dentre elas o EDTA (ácido etilenodiamino tetra-acético) a 17%, sempre visando uma menor chance de ocorrer reabsorção inflamatória e por substituição. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do tratamento de discos da superfície vestibular de raízes de dentes bovinos, com EDTA 17%, com Emdogain®, com ácido hialurônico e com colágeno, através de testes de viabilidade celular, quantificação das citocinas IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α por ensaio ELISA, além da ilustração por microscopia eletrônica de varredura da adesão dos fibroblastos sobre os discos de dentina. Foram cortados 155 discos de dentina, com 4,5 mm de diâmetro, da face vestibular da superfície radicular de dentes bovinos, previamente raspados ou não com cureta periodontal. Os discos foram regularizados, limpos e autoclavados. Os espécimes foram tratados com as substâncias preconizadas e colocados em placas de 96 poços onde foram semeadas células de culturas primárias de fibroblastos humanos de ligamento periodontal, que ficaram em contato com os discos por 48 horas. A sobrevivência e a viabilidade celular na superfície dos discos foram avaliadas através do ensaio de XTT. A microscopia eletrônica de varredura foi utilizada para verificar a adesão de fibroblastos à superfície dos discos. A detecção e quantificação das citocinas foram realizadas pelo teste ELISA. Os dados foram submetidos à análise estatística pelo teste ANOVA e Tukey (p < 0,05). Os resultados obtidos mostraram que o uso de EDTA 17% por 5 minutos sem agitação e o ácido hialurônio... / Abstract: The delayed reimplantation of avulsed teeth is a reality in dental offices. In an attempt to restore architecture and function of the periodontal ligament, avoiding ankylosis, preventing or modulating the replacement resorption, avulsed teeth root surface may be treated with various substances including EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) to 17%, always seeking a lower chance of occurring inflammatory or replacement resorption. Thus, the aim of this study was to evaluate the effectiveness of the treatment of discs cutted of the vestibular surface of bovine teeth roots with EDTA 17% with Emdogain® with hyaluronic acid and collagen through cell viability tests, quantification of cytokines IL -1ß, IL-6, IL-8, IL-10 and TNF-α by ELISA assay and, in addition, it was taken Illustrations by scanning electron microscopy of the accession of fibroblasts on the dentin disks. 155 dentin discs with 4,5 mm in diameter will be cut from the vestibular surface of the root surface of bovine teeth, previously scraped or not with periodontal curette. The discs were regularized, cleaned and autoclaved. The specimens were treated with the substances advocated and placed in 96 well plates are seeded in which primary cell cultures of human periodontal ligament fibroblasts that were in contact with the discs for 48 hours. The survival and cell viability on the surface of the disks are evaluated by XTT assay. The scanning electron microscopy was used to verify adherence of fibroblasts to the surface of the discs. Detection and quantification of cytokines were done by ELISA assay. The data were statistically analyzed by ANOVA and Tukey (p < 0.05). The results showed that the use of 17% EDTA for 5 minutes without stirring was more effective than the other protocols (p <0.05) and combined with hyaluronic acid was less cytotoxic promoting better cell viability. It was not possible to ensure the fibroblast of the periodontal... / Doutor

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:39:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 carolina_aquino_ioc_mest_2013.pdf: 3546414 bytes, checksum: 50b9e1b7b83e8026e691cf54a5cbe6d8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A leptospirose é uma doença zoonótica causada por bactérias do gênero Leptospira sp. A ausência de um teste diagnóstico rápido e confiável dificulta o diagnóstico precoce e o acesso ao impacto da leptospirose na saúde pública. O Teste de Microaglutinação, considerado padrão-ouro pela Organização Mundial de Saúde, é realizado em poucos laboratórios de referência no mundo e, apesar de altamente específico, apresenta baixa sensibilidade na fase inicial da doença. O objetivo do presente estudo foi identificar novos alvos proteicos a serem empregados como marcadores diagnósticos para leptospirose. Para tal, foi construído um microarranjo de proteínas compreendendo 61% do genoma codificante de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni e investigou-se a resposta por anticorpos IgG de 274 indivíduos, sendo 80 pacientes em fase aguda da doença, 80 em fase convalescente e 114 indivíduos saudáveis provenientes de área com transmissão endêmica e não endêmica para doença Foram encontrados 16 antígenos capazes de identificar casos agudos de leptospirose e 18 capazes identificar casos convalescentes. Entre estes, antígenos como LipL32 e os domínios das proteínas Lig já foram previamente descritos como sendo reconhecidos por soros de pacientes humanos, atuando como prova de conceito para a plataforma de microarranjo proteico. Novos antígenos também foram identificados no estudo, como a proteína hipotética LIC10215, que mostrou alta acurácia na identificação de casos agudos e convalescentes de leptospirose. Os antígenos imunodominantes identificados demonstram potencial uso no desenvolvimento de novos ensaios diagnósticos e no melhoramento dos testes diagnósticos disponíveis no mercado. Estudos complementares serão realizados para avaliar o desempenho desses antígenos nos formatos de ELISA e/ou de teste rápido / Leptospirosis is a zoonotic disease caused by bacteria of the genus Leptospira sp. The lack of a rapid and reliable point-of-care diagnostic test is a major barrier not only to assess the global burden of the disease but also to provide an ear ly diagnosis. Despite the high specificity of the microaglutination test, which is the gold standard test for di agnosing leptospirosis according to the World Health Organization, it presents low sensitivity and is performed in few reference laboratories worldwide. Therefore, the aim of this work was to identify new protein targets to be used as diagnostic markers for leptospirosis. Accordingly, we developed a protein microarray chip comprising 61% of the Leptospira interrogans serovar Copenhageni coding genome and investigated the IgG response of 274 individuals, including 80 convalescent- and 80 acute-ph ase patients and 114 healthy i ndividuals from areas with endemic and non-endemic transmission of the dis ease. We found 16 antigens that identified acute leptospirosis cases and 18 antigens that identified convalescent cases. Among these antigens are LipL32 and the unique domains of the Lig proteins, which have already been described as seroreactive antigens among leptos pirosis patients, thus acting as a proof-of- concept for the protein microarray platform. Nove l antigens were also identified in this study, such as the hypothetical protein LIC10215, that showed high diagnostic accuracy for both acute and convalescent cases. The imunodominant antigens identified here are potential candidates for the development of new diagnosti c assays as well as for the improvement of currently available tests. Further studies are needed to evaluate their performance in ELISA and rapid test platforms

Made available in DSpace on 2016-05-16T12:51:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 marcos_almeida_ini_mest_2014.pdf: 14714832 bytes, checksum: be975491bb39d63940e3b535442ff649 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A histoplasmose é uma micose cosmopolita causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum, cujo habitat é o solo rico em excretas de aves e morcegos. Esta infecção ocorre a partir da inalação de propágulos de H. capsulatum e apresenta um amplo espectro clínico, variando de formas leves a disseminadas, a depender do inóculo infectante, do status imunológico do hospedeiro e da virulência da cepa. O diagnóstico da histoplasmose é baseado em aspectos clínicos, epidemiológicos, radiológicos e laboratoriais, embora alguns sintomas possam ser confundidos com outras doenças, tais como a tuberculose e outras micoses. O teste de referência para a confirmação do diagnóstico é o isolamento e identificação de H. capsulatum em cultivo. Entretanto, na ausência dos mesmos, a sorologia tem sido utilizada para o diagnóstico presuntivo da histoplasmose através da detecção de anticorpos. O principal complexo antigênico utilizado para a detecção de anticorpos anti-H. capsulatum é a histoplasmina, constituída principalmente pelos antígenos C, H e M. Estes últimos, em sua forma nativa, são glicoproteínas contendo epítopos protéicos específicos e glicosídicos inespecíficos. Deglicosilações químicas pelo metaperiodato de sódio (NaIO4) provaram aumentar a sensibilidade e especificidade em métodos imunoenzimáticos, tais como Western blot e ELISA, reduzindo a reatividade cruzada com outros fungos O principal objetivo do presente estudo foi validar o método imunoenzimático (Western blot) para a detecção de anticorpos no diagnóstico da histoplasmose. Desta forma, foi realizado um estudo casocontrole, utilizando 118 amostras de soro de pacientes com histoplasmose e 118 amostras de soro de indivíduos com história clínico-epidemiológica compatível com micose sistêmica, saudáveis ou acometidos por outra micose ou tuberculose, residentes no estado do Rio de Janeiro. As amostras foram coletadas no período de 2000 a 2013 e encaminhadas ao Laboratório de Micologia do Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Os parâmetros de validação diagnóstica foram calculados considerando a categorização dos resultados obtidos em uma tabela 2 X 2 e analisados pelo SPSS 17.0. O Western blot demonstrou uma sensibilidade de 94,9%, especificidade de 94,1%, acurácia de 94,5% e uma precisão quase perfeita. As fitas demonstraram-se viáveis para utilização por até cinco anos após a sensibilização com o antígeno HMIN-PT. Estes resultados comprovam a validade do ensaio imunoenzimático (Western blot) para detecção de anticorpos anti-H. capsulatum utilizando HMIN-PT como uma ferramenta de boa acurácia no diagnóstico da histoplasmose e reprodutível. Desta forma, contribuindo para o melhoramento do diagnóstico desta micose, uma vez que esta técnica permitirá a obtenção de resultados em menos de 24 horas, o que supõe um grande avanço a despeito das técnicas existentes na atualidade e poderá vir a ser implantada e disponibilizada para outros centros do Sistema Único de Saúde. / Histoplasmosis is a worldwide systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Histoplasma capsulatum. The fungus lives in soil that contains large amounts of birds or bats droppings. This infection occurs through inhalation of spores of H. capsulatum and has a wide clinical spectrum, ranging from mild to disseminated forms that depend on the infecting inoculum, the immune status of the host and the virulence of the strain. The diagnosis of histoplasmosis is based on clinical, epidemiological, radiological and laboratory aspects; however, some symptoms may be confused with other diseases, such as tuberculosis and other mycoses. The reference test for the confirmation of the diagnosis of histoplasmosis is the isolation and identification of H. capsulatum in culture. However, in the absence of it, serology has been used for the presumptive diagnosis of histoplasmosis through antibody detection. The principal antigenic complex used to detect antibodies anti-H. capsulatum is the histoplasmin, consisting mainly of antigens C, H and M. These antigens, in their native forms, are glycoproteins containing specie-specific protein epitopes and non-specific glycosides. Chemical deglycosylations by sodium metaperiodate (NaIO4) have shown to increase the sensitivity and specificity of immunoenzymatic methods, such as Western blot and ELISA, reducing cross-reactivity with other fungi. The aim of this study was to validate the immunoassay method (Western blot) to detect antibodies in the diagnosis of histoplasmosis Therefore, a case-control study was conducted using 118 serum samples from patients with histoplasmosis, and 118 serum samples from individuals with clinical and epidemiological history compatible with systemic mycosis, either healthy or suffering from other mycosis or tuberculosis. These patients were residents in the state of Rio de Janeiro and the samples, collected from 2000 to 2013, were sent to the Mycology Laboratory of the Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Diagnostic validation parameters were calculated based on the categorization of results obtained in a 2 x 2 table and analyzed using SPSS Statistics 17.0. The Western blot was shown sensitivity of 94.9%, specificity of 94.1%, accuracy of 94.5% and also almost perfect precision. Besides, the strips have been proved to be viable for use or at least five years after the sensitization with antigen HMIN-PT. These results prove the validity of the enzyme immunoassay (Western blot) for the detection of antibodies anti-H. capsulatum, using HMIN-PT as a good accuracy tool in the diagnosis of histoplasmosis and reproducible, contributing to improve the diagnosis of this mycosis, since this technique allows obtaining results in less than 24 hours which implies a breakthrough despite existing at present and will eventually be deployed and made available to other centers belonging to the Public Health System