Made available in DSpace on 2015-09-17T15:26:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-04. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:45:59Z : No. of bitstreams: 1 000848095.pdf: 3202726 bytes, checksum: 4a234b4aa9be90881753927f7511c6c3 (MD5) / A deficiência de estrógeno é uma condição sistêmica com a qual o cirurgião dentista pode se deparar na clínica e aparece durante a menopausa e após ovariectomia. Essa condição pode ocasionar o desenvolvimento da osteopenia e da osteoporose causando um desequilíbrio entre os processos de formação/absorção óssea. Considerando a escassez da literatura no estudo do reimplante dentário em indivíduos com deficiência de estrógeno e que são submetidos a tratamento de reposição hormonal, o objetivo do estudo foi analisar o efeito da ovariectomia e da terapia de reposição hormonal com 17-β estradiol no processo de reparo do reimplante dentário imediato por meio da análise histomorfométrica e imunoistoquímica. Ratas foram submetidas ao estudo do ciclo estral e após esse procedimento foram selecionados para o estudo sessenta animais que apresentaram ciclo regular. Os animais foram submetidos à cirurgia de exposição e/ou remoção dos ovários constituindo os grupos: Sham, ovariectomizados (OVX) e OVX com reposição hormonal (OVX/E2). No 8º dia foram implantados no dorso dos animais pellets subcutâneos com óleo de milho (grupo OVX) e com 17-β estradiol (grupo OVX/E2). Os pellets foram mantidos por 60 dias. No 1º dia de tratamento (grupo 60 dias) e no 45º dia (grupo 15 dias) após o início do tratamento os animais foram submetidos à exodontia e reimplante dentário imediato. Os animais sofreram eutanásia por meio de perfusão 60 dias após o início do tratamento de reposição hormonal. Nesse momento foi realizada a coleta de sangue para a dosagem do estradiol. O nível de estradiol no plasma foi elevado no grupo OVX/E2, baixo no OVX e flutuante no grupo Sham de acordo com as distintas fases do ciclo estral no momento da coleta. O ligamento periodontal apresentou-se inserido no osso e na raiz em grande parte da superfície radicular... / Estrogen deficiency is a systemic condition that is frequently encountered by dental surgeons in the clinic and appears during menopause and after ovariectomy. This condition can lead to the development of osteopenia and osteoporosis affecting the maxillary bones by promoting bone loss of the alveolar process causing an imbalance between the processes of bone formation and resorption. Considering the shortage of literature in the study of dento-alveolar trauma in individuals with estrogen deficiency and individuals undergoing estrogen replacement therapy (E2), the aim of this study is to analyze the repair process in immediate dental replanting after ovariectomy and estrogen replacement therapy with 17-β estradiol by means of histomorphometric and immunohistochemistry analysis. Sixty female rats with regular estrous cycle were selected for the experimental study. The animals were either ovariectomized (OVX) or sham-operated and divided into three groups: Sham, OVX and OVX/E2. Pellets with corn oil (sham and OVX groups) and 17-β estradiol (OVX/E2 group) were subcutaneously implanted on the back of the animals eight days after either OVX or Sham surgery. Estrogen replacement therapy was maintained for 60 days. At the 1st (60 days group) and 45th days (15 days group) post pellets implantation, the animals were subjected to the right upper incisor extraction and immediate tooth replantation. Animals were sacrificed by perfusion at 60th day of estrogen replacement therapy. Prior to sacrifice, blood samples were collected in order to measure plasma concentration of estrogen. Plasma estradiol level was high in OVX / E2 group, low in OVX and floating in the Sham group according to the different phases of the estrous cycle at the time of collection. Periodontal ligament was inserted into both the cementum and bone tissue in the three groups at 15th post-operative day...

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:02:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-14. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:29Z : No. of bitstreams: 1 000849126.pdf: 1214857 bytes, checksum: a2d47dd516d137071a1aa19d9f8af738 (MD5) / A nucleoproteína (NP) do Vírus da Influenza Aviária (VIA) é um importante alvo antigênico no imunodiagnóstico desta doença, devido à sua baixa variabilidade entre as diferentes estirpes do VIA, resultando em uma elevada reatividade cruzada, e por ser também uma proteína altamente imunogênica para hospedeiros vertebrados. Neste estudo, o gene codificador da NP do VIA foi parcialmente clonado e expresso em Escherichia coli como uma proteína recombinante fusionada ao polipeptídeo SUMO e uma etiqueta de poli-histidina para seu uso no desenvolvimento de um ensaio de ELISA indireto para a detecção de anticorpos específicos contra o VIA. A NP recombinante foi expressada na fração solúvel e foi mais facilmente purificada. Após análise em relação aos seus principais sítios de antigenicidade e caracterização por meio de Western blotting, a NP recombinante foi utilizada como uma preparação antigênica no ELISA indireto para detecção de anticorpos contra o VIA presentes em amostras de soro de galinha. A análise comparativa do teste desenvolvido no presente estudo com um ELISA comercial apresentou valores de 95%, 97% e 96,7% de sensibilidade, especificidade e acurácia, respectivamente e um índice κappa de 0,88. Os resultados permitem concluir que a NP recombinante do VIA desenvolvida neste estudo possui características favoráveis para ser aplicada como antígeno no ELISA indireto, constituindo-se em um método sensível e específico para o imunodiagnóstico da Influenza Aviária em galinhas / The nucleoprotein (NP) of Avian Influenza Virus (AIV) is an important antigenic target for immunodiagnosis of this disease, due to its low variability among different AIV strains, resulting in high cross-reactivity, and the also highly immunogenic for vertebrate hosts. In this study, the gene enconding NP of AIV was cloned and expressed in Escherichia coli as a recombinant protein fused to SUMO polypeptide with a polyhistidine tag and used to develop an indirect ELISA for the detection of AIV-specific antibodies. The recombinant NP was expressed in the soluble fraction and easily purified. After Analysis of the main sites of antigenicity and characterization in Western-Blotting, the recombinant NP was optimized as an antigen preparation for indirect ELISA to detect anti-AIV antibodies in chicken serum samples. The comparative analysis of this ELISA with a commercial ELISA showed values of 95%, 97%, 96.7% of sensitivity, specificity and accuracy, respectively, and an agreement of k=0.88. In conclusion, the results indicated that the recombinant NP of AIV produced in this study is a good source of antigen for indirect ELISA and provides a sensitive and specific method for the immunodiagnosis of Avian Influenza in chickens

Submitted by Walter Bertequini Nagata null (walter.bn@hotmail.com) on 2017-01-04T19:05:41Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO DE MESTRADO - Walter Bertequini Nagata.pdf: 726100 bytes, checksum: 44016cb83ccb52d2853fbd5e43a37790 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-01-06T13:34:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 nagata_wb_me_araca.pdf: 726100 bytes, checksum: 44016cb83ccb52d2853fbd5e43a37790 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-06T13:34:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nagata_wb_me_araca.pdf: 726100 bytes, checksum: 44016cb83ccb52d2853fbd5e43a37790 (MD5) Previous issue date: 2017-01-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente estudo foi investigar, por métodos estatísticos, a ocorrência de reações cruzadas entre Leishmania spp. e Ehrlichia spp. com o uso de técnicas sorológicas e moleculares. Um total de 100 amostras sanguíneas de cães foram colhidas e processadas por meio do ELISA (Ensaio Imunoenzimático Indireto) e PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). A análise estatística consistiu nos testes de McNemar e Coeficiente de concordância Kappa. As estatísticas foram consideradas significativas quando p<0,05. A sensibilidade e especificidade dos testes foram determinadas pela curva ROC (Receiver Operator Characteristic), considerando o PCR como teste padrão ouro. A partir das análises pode-se verificar que 48,0% dos animais foram reativos na ELISA e 58,0% foram positivos na PCR, no caso da Leishmania spp. Para Ehrlichia spp., a ocorrência de anticorpos pelo ELISA foi de 54,0% e, pela PCR, 48,0% dos cães foram positivos. Nota-se, também, que 37,0% dos animais foram positivos para os dois patógenos por meio do teste molecular, e quatro cães foram reativos no teste ELISA para ambas as doenças e tiveram resultado negativo apenas no teste molecular de Ehrlichia spp. Estes resultados, na sorologia, podem sugerir possíveis casos de reatividade cruzada entre a Leishmania spp. e Ehrlichia spp.. Entretanto, é mais provável que estes resultados estejam relacionados com a coinfecção desses agentes. Por meio dos resultados obtidos, há mais evidências de coinfecção por estes dois agentes patogênicos no cão, do que reatividade cruzada entre eles. / The aim of this study is to investigate, by statistical methods, the occurrence of cross-reactivity between Leishmania spp. and Ehrlichia spp. using serological and molecular techniques. A total of 100 blood samples from dogs were collected and processed by ELISA (indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) and PCR (polymerase chain reaction). Statistical analysis consists of McNemar tests and agreement coefficient Kappa. The statistics were considered significant when p <0.05. The sensitivity and specificity of the tests were determined by ROC curve (Receiver Operator Characteristic), considering the PCR as gold standard. From the analysis it can be seen that 48,0% of the animals were reactive in ELISA and 58,0% were positive in PCR in the case of Leishmania spp. For Ehrlichia spp., the occurrence of antibodies by ELISA was 54,0% and, by PCR, 48,0% of the dogs were positive. It can be noted also that 37,0% of the animals were positive for both parasites through molecular test and four dogs were reactive in the ELISA test for both diseases and were negative only in molecular test for Ehrlichia spp. These results in serology can suggest possible cases of cross-reactivity between Leishmania spp. and Ehrlichia spp.. However, it is more likely that these results are related to coinfection of these agents. Through the results obtained, there are more evidences of coinfection by these two pathogens in dogs than cross-reactivity between them. / FAPESP: 2014/26413-2

Orientador: Maria Therezinha Serrão Peraçoli / Banca: Iracema M. P. Calderon / Banca: Franciso E. Martinez / Banca: Marcia Guimarães Silva / Banca: Roseane Mattar / Resumo: A pré-eclâmpsia é uma síndrome específica da gestação humana, caracterizada por hipertensão arterial e proteinúria após a 20ª. semana de gestação. É aceito que esta patologia tem origem na placenta. O fator de crescimento placentário (PlGF) tem importante papel no desenvolvimento vascular durante a invasão trofoblástica e, citocinas de perfil Th2 podem estar envolvidas na manutenção da gestação durante a interação materno-fetal.O presente trabalho avaliou a concentração de citocinas e de fatores pró e anti-angiogênicos em homogenato de placenta, obtido de gestantes normais e com pré-eclâmpsia, correlacionando esses parâmetros com a gravidade da doença e com a idade gestacional.Foram estudadas 70 gestantes, sendo 30 normotensas e 40 portadoras de pré-eclâmpsia. As gestantes com pré-eclâmpsia foram classificadas de acordo com o aparecimento das manifestações clínicas em pré-eclâmpsia precoce (< 34 semanas de gestação, n=13) e pré-eclâmpsia tardia (≥ 34 semanas de gestação, n=27). Um fragmento de placenta foi obtido imediatamente após o parto, homogeneizado em solução salina tamponada com fosfatos e submetido à centrifugação. O sobrenadante obtido foi empregado para determinação de fator de necrose tumoral-alfa (TNF-a), fator estimulador de colônias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF), interleucina-10 (IL-10), fator de crescimento e transformação beta (TGF-b1), fator de crescimento placentário (PlGF) e Endostatina por ensaio imunoenzimático (ELISA). Outro fragmento placentário foi obtido para análise histopatológica. As diferenças entre os grupos de gestantes normais e com préeclâmpsia foram avaliadas por teste t de Student, com nível de significância de 5%.Os níveis de TNF-a, Endostatina e GM-CSF detectados na placenta de gestantes com pré-eclâmpsia foram significativamente maiores em relação às gestantes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Preeclampsia is a human pregnancy-specific syndrome characterized by the onset of hypertension and proteinuria after the 20th gestational week. It is widely accepted that this disorder is placental in origin. Placental growth factor (PlGF) plays an important role in the vascular development during trophoblast invasion and cytokines with Th2 profile may be involved in gestation maintenance and promoting a balance in maternal- fetal interaction. This study investigated the concentration of cytokines, angiogenic and anti-angiogenic factors in placental homogenate obtained from normotensive and preeclamptic pregnant women, and correlated these parameters with disease severity and gestational age.The subjects were 70 pregnant women of whom 30 were normotensive pregnant, and 40 were pregnant women with preeclampsia. The preeclamptic pregnant women were classified according to the onset of clinical manifestations in early-onset (< 34 weeks of gestation, n=13) and late-onset (≥ 34 weeks of gestation, n=27) preeclampsia. A tissue fragment of the placenta was obtained immediately after delivery, homogenized with phosphate-buffered saline solution and centrifuged. Separated supernatant was employed for determination of tumor necrosis factor alpha (TNF-a), granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) Interleukin-10 (IL-10), transforming growth factor beta (TGF-b1), placental growth factor (PlGF), and Endostatin, by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Another placental tissue segment was prepared for histopathological analysis. Differences between groups were evaluated by Student t unpaired test with significance set at p < 0.05.The levels of TNF-a, Endostatin and GM-CSF detected in placenta of preeclamptic women were significantly increased when compared with the normotensive pregnant women. On the other hand, the concentration of IL-10, TGF-b1 and PlGF have shown... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Antonio Carlos Paulillo / Banca: Ricardo Luiz Morode Sousa / Resumo: Existem diversos trabalhos publicados sobre métodos de diagnóstico da Doença de Newcastle (DN) em aves comerciais da espécie Gallus gallus. Entretanto, é escassa a literatura sobre o desenvolvimento de técnicas para o diagnóstico laboratorial da infecção pelo vírus da Doença de Newcastle (VDN) em espécies de aves não-galiformes. O presente trabalho foi delineado com o objetivo de desenvolver e aplicar a técnica de bloqueio de fase líquida de ELISA com a concanavalina A (BFL-Con A-ELISA) para a detecção e quantificação de anticorpos contra o VDN em soros de pombos de vida livre e da técnica de Semi-nested-RTPCR para detecção do vírus da DN (VDN) em suabes cloacais das mesmas aves. Na comparação entre o BFL-Con A-ELISA e o HI para a detecção de anticorpos em 107 amostras de soros de pombos, foram obtidos uma correlação significativa com o teste de HI (r = 0,875), bem como valores elevados de sensibilidade (100%), especificidade (95,8%), acurácia (96,3%) e concordância (κ = 0,83). Os resultados obtidos na técnica de semi-nested-RT-PCR mostraram que nove das 101 amostras analisadas foram positivas para o VDN. Na análise comparativa dos resultados da técnica do semi-nested-RT-PCR com os obtidos nas técnicas sorológicas, foram observados índices de especificidade relativa de 93,9% e 96,8% em relação aos métodos de HI e BFL-Con A-ELISA, respectivamente; além de uma máxima sensibilidade relativa (100%), comparativamente a esses testes. Esses dados demonstram que tanto o BFL-Con A-ELISA como o semi-nested-RT-PCR desenvolvidos no presente estudo foram eficientes no diagnóstico da DN, ou detectando anticorpos anti-VDN, ou esse agente viral, respectivamente, e ambas as técnicas apresentaram um grande potencial para serem usadas com vantagens no diagnóstico da infecção pelo VDN em pombos e em outras espécies de aves não-galiformes. / Abstract: A number of studies were done on diagnostic methods of Newcastle disease in commercial poultry (Gallus gallus, species). However the literature is scarce on the development of techniques for the diagnosis of Newcastle disease (ND) infection in non-galiforme and free-living birds. The present study aims to develop and apply a liquid-phase blocking ELISA with Concanavalin A (BFL-Con AELISA) for the detection and quantification of antibodies against ND virus (NDV) in sera of free-living pigeons and a semi-nested-RT-PCR technique for detection of NDV in cloacal swabs collected from these birds. The results of BFL-Con A-ELISA and HI were compared for the detection of antibodies in serum samples from 107 pigeons, and a significant correlation with the HI test was obtained (r = 0.875) as well as high values of relative sensitivity (100 %), specificity (95.8%), accuracy (96.3%) and agreement (k = 0.83). The results of semi-nested-RT-PCR showed that nine of the 101 samples were positive for the presence of NDV. By comparing the seminested- RT-PCR with serological tests, high relative specificity values of 93.9% and 96.8% were obtained with regard to HI and BLF-Con A-ELISA tests, respectively, as well as a maximum relative sensitivity (100%) was observed regarding these serological tests. These data demonstrate that the BFL-Con A-ELISA and seminested- RT-PCR developed in this study were effective in the diagnosis of NDV infection, detecting either specific antibodies, or this virus, respectively, and have a great potential to be used advantageously in the diagnostic of NDV infection in pigeons and other species of non-galliforme birds. / Mestre

Resumo: Os objetivos deste estudo foram detectar a presença e a expressão dos genes supressores p53 e c-Myc em tumores palpebrais, pelas técnicas de PCR, RTPCR, PCR-ELISA E RT-PCR-ELISA que até o então não foram descritas nestes tumores e nesta espécie. Foram utilizadas 10 amostras de tumores que foram fixados em formol e incluídos em parafina. O material foi obtido junto aos arquivos do Serviço de Patologia Veterinária, sendo nove amostras de tumores localizados nas pálpebras e terceira pálpebra e uma de tumor mamário para controle. Todos os tumores tiveram o seu diagnóstico firmado empregando-se a coloração de H.E e imunoistoquímica para citoqueratina AE1/AE3 e vimentina (V9), marcadores de tecido epitelial e mesenquimal, respectivamente. Os resultados indicaram que os tumores palpebrais e da terceira pálpebra aqui estudados verificou-se a presença do gene supressor p53 em 8 amostras (88,8%, n=8), e entre as amostras positivas (n=8), ele esteve expresso em 75 % delas. O gene supressor c-Myc esteve presente em 5 amostras (55,5%) e com expressão em 100% delas (n=5). Foi possível concluir que os tumores palpebrais e da terceira pálpebra de cães expressam o p-53 e c-Myc identificados pelas técnicas de PCR e RT-PCR, no entanto, as técnicas de PCR ELISA e RT-PCR ELISA foram mais importantes para avaliação da presença e expressão do oncogenes estudados, pois permitiram identificar produtos amplificados que não foram visualizados em gel de agarose. / Abstract: The aims of this study were to detect the presence and the expression of p53 and c-Myc suppressor genes in eyelid tumors of dogs, by the PCR, RT-PCR, PCR-ELISA and RT-PCR-ELISA techniques, which until then they were not described in these tumors and in this specie. Ten samples of tumors were fixed in formalin and included in paraffin. The material was obtained from the archives of the Department of Veterinary Pathology, being nine samples of epithelial tumors located in the eyelids and the third eyelid, and a breast tumor which was used as a positive control of the reactions. All the samples had reached their diagnosis employing up the HE technique, and the immunohistochemistry for cytokeratin AE1/AE3 and vimentin (V9). The results showed that the eyelid and the third eyelid tumors, here studied, (88.8%, n=8) of them demonstrated the presence of the p53 gene and between the positive samples (n=8), the expression was around 75%. The c-Myc gene was present in 55.5% (n=5) of the samples, with 100% of expression (n=5). Thus, it was possible to conclude that the eyelid and the third eyelid tumors of dogs express the p53 and c-Myc genes, identified by the techniques of PCR and RT-PCR, however, the PCR ELISA and RT-PCR ELISA techniques were of extreme importance for assessing the presence and expression of these studied genes, and they allowed to identify amplified products that were not visible on the electrophoresis on the agarose gel. / Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Coorientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Débora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Cláudia Valéria Seullner Brandão / Mestre

Orientador: Wilma Aparecida Starke Buzetti / Banca: Edson Guilherme Vieira / Banca: Willian Marinho Dourado Coelho / Resumo: A leishmaniose visceral (LV), doença causada pelo protozoário Leishmania infantum e transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, é considerada um problema de saúde pública no Brasil. O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo epidemiológico sobre a ocorrência da LV em cães e gatos e de flebotomíneos em dois abrigos de animais, durante o período de um ano, no município de Ilha Solteira, SP. Amostras de material biológico foram coletadas de 192 cães e de 197 gatos, para realização de exames sorológicos por meio do ensaio imunoenzimático indireto (ELISA), da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para ambas espécies animais e da reação intradérmica de Montenegro para cães. Dos cães examinados, 17,2% (33/192) estavam sorologicamente positivos para LV pelo método ELISA, 19,8% (38/192) pela RIFI e 45,4% (15/33) pela reação intradérmica. Para cães, a concordância entre as técnicas sorológicas foi classificada de razoável a boa, mas quando comparadas à reação de Montenegro foi considerada ruim. No inquérito felino das 197 amostras, a soroprevalência foi de 32,4% (64/197) e 31,9% (63/197) no ELISA e RIFI, respectivamente. Embora a maioria dos cães e dos gatos entregue nos abrigos já estivesse infectada, seis cães e cinco gatos infectaram-se no interior desses abrigos, após algum tempo de permanência nesses recintos. Um total de 131 flebotomíneos foram capturados por meio das armadilhas luminosas, colocadas no interior dos dois abrigos durante o período de dois anos. Os fatores de riscos associados à LV foram determinados estatisticamente pela análise univariada, com valor significativo (p ≤ 0,05), onde o porte pequeno dos cães, o uso de coleira de deltametrina e o diagnóstico precoce foram variáveis determinantes que influenciaram a positividade dos animais, ou seja, as duas últimas variáveis determinaram significativamente na diminuição de casos positivos da doença nos... / Abstract: Visceral leishmaniasis (VL), a disease caused by Leishmania infantum and transmitted by the sand fly Lutzomyia longipalpis, is considered a public health problem in Brazil. The study aimed to carry out an epidemiological study on the occurrence of VL in dogs and cats, and sand flies during the period of one year in two animal shelters from Ilha Solteira, SP. A total of 197 and 192 biological material samples were collected, respectively from cats and dogs for serological survey by an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and an indirect fluorescent antibody test (IFAT) for both species of animals, and the intradermal reaction of Montenegro (only for dogs). During the study with dogs, 17,2% (33/192) were serologically positive for LV by ELISA, 19,8% (38/192) by IFAT and 45,4% (15/33) by the intradermal method. The correlation analysis between the serological techniques was ranged from reasonable to good for dogs, but was bad when compared to the Montenegro reaction. The feline seroprevalence was 32,4% (64/197) and 31,9% (63/197) for ELISA and IFAT, respectively. Although the most of dogs and cats in shelters were infected, six dogs and five cats infected inside the shelters. A total of 131 sand flies were captured by the light traps in both shelters, during two years. The risk factors, statistically determined by univariate analysis (p ≤ 0.05), demonstrated that the small size of the dogs, the use of deltamethrin collar and the precocious diagnosis, significantly influenced the animals positivity for VL. It was concluded that these animal shelters were vulnerable to this parasitic infection because of the presence of sand flies and positive animals for LV / Mestre

Orientador: Luiz Henrique de Araujo Machado / Resumo: A dermatite atópica (DA) é uma doença crônica, inflamatória e pruriginosa da pele resultante da perda de barreira epidérmica, sensibilização e produção exacerbada de anticorpos IgE, direcionados, principalmente, contra alérgenos ambientais, mormente aos ácaros da poeira doméstica. Estudos com alérgenos dos ácaros da poeira doméstica são necessários para aprimoramento de testes sorológicos e intradérmicos e para confeccionar imunoterapia alérgeno específica com alta eficácia. O objetivo deste estudo foi avaliar a soroprevalência aos alérgenos Der f 2, Zen 1 e corpo do ácaro Dermatophagoides farinae em cães com DA do estado de São Paulo, Brasil. Foi utilizado o soro de 85 cães, os quais foram submetidos ao teste sorológico ELISA (Enzyme Linked Imunosorbent Assay) indireto para detecção de IgE alérgeno-específica para os alérgenos estudados. A soropositividade foi observada em 96% dos animais para Der f 2, 91% para Zen 1 e 96% para o corpo do ácaro. Devido à esta alta prevalência encontrada, sugerimos que Der f 2 e Zen 1 podem ser considerados alérgenos maiores para cães no estado de São Paulo. / Abstract: Atopic dermatitis (AD) is a chronic, inflammatory and pruritic disease of the skin resulting from the loss of epidermal barrier, sensitization and exacerbated production of IgE antibodies, mainly directed against environmental allergens, especially to house dust mite. Studies with house dust mite allergens are required, aiming at the improvement of both serological and intradermal tests, in order to make specific allergen immunotherapy with high efficacy. The objective of this study was to evaluate the seroprevalence of Der f 2, Zen 1 and body of the Dermatophagoides farinae allergens in dogs with AD from the State of São Paulo, Brazil. Serum of 85 dogs were used, which were submitted to indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of allergen-specific IgE for the allergens studied. Serum of 85 dogs were used, which were using the indirect ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) for the detection of allergen-specific IgE. Seropositivity was observed in 96% of the animals for Der f 2, 91% for Zen 1 and 96% for body of the mite. Due to this high prevalence, we suggest that Der f 2 and Zen 1 can be considered as major allergens dogs in the state of São Paulo. / Mestre

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-27T12:04:45Z No. of bitstreams: 1 marcelle-bral-de-mello.pdf: 1087389 bytes, checksum: 74eb4d07ffe50812d0cea3fd71cdf47a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-27T12:04:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marcelle-bral-de-mello.pdf: 1087389 bytes, checksum: 74eb4d07ffe50812d0cea3fd71cdf47a (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Bio-Manguinhos produz, desde a década de 80, Kits para diagnóstico, inclusive para o diagnóstico da doença de Chagas. O kit EIE-Recombinante-Chagas, que utiliza na sua composição as proteínas recombinantes CRA e FRAdo T. cruzi, foi registrado como produto junto à ANVISA no ano de 1999. No período de renovação do registro, o Kit passou por uma avaliação prévia no INCQS, onde não foi possível alcançar condição satisfatória quanto aos níveis de sensibilidade. O presente trabalho teve por objetivo retomar a padronização deste Kitno âmbito do desenvolvimento tecnológico. Para tanto foi estabelecido a padronização de três modelos de protótipos, utilizando variações das construções disponíveis das proteínas recombinantes CRA e FRA, na forma de apresentação como antígeno e como conjugado. Posteriormente, foi avaliado o desempenho de cada protótipo, em três diferentes fases. Na primeira fase, o melhor desempenho foi apresentado pelo protótipo 3, cujos níveis de sensibilidade e especificidade foram respectivamente de 99% e 99,5% (IC 95%). Na segunda fase o nível de sensibilidade do protótipo 3 foi de 95.8% e o de especificidade 100%, mantendo a melhor condição de desempenho em relação aos demais. Na última fase, somente o protótipo 3 foi avaliado em função da indisponibilidade de volume das amostras selecionadas e os níveis de sensibilidade e especificidade encontrados de 100%.O desempenho do protótipo 2 foi insatisfatório nas duas primeiras fases de avaliação.Tendo em vista o bom desempenho alcançado pelo protótipo 3, propomos a continuação deste modelo na elaboração futura de lotes-piloto, de estudos multicêntricos e de validação, em ações conjuntas com o controle e a garantia da qualidade para a elaboração de documentação visando pedido de registro desse produto junto aos órgãos regulatórios. / Bio-Manguinhos produces, since the 80’s, a variety of kits for diagnosis, including the kit for Chagas’ disease diagnostic. The EIE-Recombinant-Chagas’ kit, which has in its constitution the recombinant proteins CRA and FRA from T. cruzi, was registered at ANVISA as a product in 1999. During the renewal of the registration period, the kit was submitted to a previous registration analysis by The National Institute for Quality Control in Health (INCQS), when it did not show satisfactory sensitivity levels. The present work aimed to remake the kit standardization process under the scope of the technological development. In order to do it, we established the standardization of three prototype models, each one using variations of available constructions from CRA and FRA recombinant proteins in the form of presentation as antigen and as conjugate. Afterwards, we evaluated the performanceof each prototype, in three different stages. In the first one, prototype 3 showed the best performance with 99% sensitivity and 99.5% specificity levels (CI 95%). In the second stage, prototype 3 levels sensitivity and specificity were 95.8% and 100% respectively, keeping the best performance condition as compared to the other two prototypes. In the last stage, only prototype 3 was assessed due to the lack of sample volumes. The reported sensitivity and specificity levels forsuch prototype were equal to 100%. The performance of prototype 2 was unsatisfactory in the first two assessment stages. Taking into account the performance achieved by prototype 3, we propose the continuation of this model for future development of pilot lots, multicenter and validation studies, in joint actions with quality assurance and quality control for the arrangement of the documents requested by the National Regulatory Agency for the registration of the product.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-12-04T11:37:37Z No. of bitstreams: 1 fernanda-martins.pdf: 786034 bytes, checksum: e059b45f6a12387864511efbf2ecfdbe (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-04T11:37:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fernanda-martins.pdf: 786034 bytes, checksum: e059b45f6a12387864511efbf2ecfdbe (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A combinação de vacinas é uma estratégia de grande relevância para o Programa Nacional de Imunizações. Através dela, é possível aumentar a proteção a múltiplas doenças em uma única vacina, bem como diminuir as constantes visitas ao posto de saúde. Contudo, uma das desvantagens em relação a esse tipo de estratégia é a possibilidade de ocorrer interferência antigênica entre os seus componentes,o que pode resultar na diminuição da resposta imunológica. Devido a este fato, foi realizada uma combinação com vacinas já presentes no calendário brasileiro de imunizações (DTP-Hib) a vacinas experimentais em desenvolvimento em Bio-Manguinhos (meningocócica B e meningocócica C conjugada), com a finalidade de apresentar uma nova perspectivade produto a esta unidade bem como estabelecer a correlação antigênica entre esses componentes, comparando metodologias já padronizadas para este fim à metodologia alternativa (ELISA), além de avaliar a pirogenicidade e a interferência entre os componentes vacinais utilizados na combinação. A resposta imunológica aos componentes vacinais foiavaliada em camundongos suíços, NIH e cobaias Short-Hair pelo ELISA (VME, polissacarídeo C, PRRP, Bordetella pertussis) e os testes de soroneutralização in vivo(componentes tetânico e diftérico). Todos os componentes vacinais avaliados pelo ELISA induziram soroconversão nos animais 30 dias após a última imunização. Quando comparadas à vacina combinada completa, somente a resposta imunológica ao polissacarídeo C sofreu interferência de algum componente vacinal. Após novas combinações davacina meningocócica C conjugada às outras vacinas, pode-se concluir que avacinas DTP e Hib interagem positivamente na resposta daquela vacina. Em relação à soroneutralização in vivo, houve uma diminuição da potência dos componentes tetânicoe diftérico quando cobaias Short-Hair foram imunizadas com a vacina DTP-Hib combinada às vacinas meningocócicas B e C conjugada. Em contrapartida, na quantificação de IgG total em camundongos suíços imunizados com as duas combinações (DTP-Hib e DTP-Hib/B/C), não ocorreu diferença significativa entre os dois grupos. O teste de pirogenicidade realizado em coelhos comprovou que, quando combinadas entre si, às vacinas são capazes de aumentar a temperatura destes animais, provavelmente, devido àpresença de Bordetella pertussise VME de Neisseria meningitidisgrupo B. Apesar de não ter sido possível à comparação com ostestes padronizados, o ELISA mostrou-se muito satisfatório na pesquisa da resposta imunológica em camundongos. Embora preliminares, os resultados são muito importantes, pois introduzem novas perspectivas para a realização de outras combinações que atendam as demandas requisitadas pelo Programa Nacional de Imunizações. / The combination of vaccines is a great relevance strategy to the National Immunization Program. It enables increase protection to multiple diseases in a single injection, as well as reduces constant visits to health care. However, a disadvantage of this strategy is antigenic interference among vaccine components, resulting in immune response decreased. Due to this fact, a combination between vaccines of Brazilian immunization calendar (DTP-Hib) and experimental vaccines developed in Bio-Manguinhos (meningococcal B and meningococcal C conjugate) wasperformed, in order to present a new perspective of product to this unit and establish the antigenic correlation of these components, comparing standardized methodologies with alternative methodology (ELISA), besides evaluating pyrogenicity and interference ofcombined vaccine components. The immune response to vaccine components was evaluated in Swiss and NIH mice and Short-Hair guinea pigs by ELISA (OMV, polysaccharide C, PRP, Bordetella pertussis) and in vivoneutralization test (tetanus and diphtheria components). All vaccine components assessed by ELISA induced seroconversion rates 30 days after the last immunization in animals. The complete combined vaccine, interfered in the immune response to polysaccharide C. After new combinations of meningococcal C conjugate vaccine to other vaccines, we concluded that DTP and Hib vaccines induce a positive interaction in immune response to that vaccine. Regarding in vivoneutralization, there was a decrease of tetanus and diphtheria components potency when Short-Hair guinea pigs were immunized with DTP-Hib combined to B and C meningococcal conjugate vaccines. In contrast, when total IgG in Swiss mice immunizedwith the two combinations (DTP-Hib and DTP-Hib/B/C) was quantified, no significant difference was observed. Pirogenicity test in rabbits proved that complete combined vaccine increase the temperature of these animals, probably due to the presence of Bordetella pertussisand Neisseria meningitidisgroup B outer membrane vesicle. Although it was not possible comparision with standardized test, ELISA was a satisfactory test in studing immune response in mice. Although preliminary, the results are important because introduce new perspectives for other combinations could be done to atempt the required demands of National Immunization Program.