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Nous avons étudié le transcriptome de neuf échantillons d'ARN extraits de cultures primaires de cellules non tumorales de l’épithélium de surface de l’ovaire (NOSE) provenant de quatre donneuses non porteuses de mutation, deux mutées sur BRCA1 et trois sur BRCA2, ainsi que de quatre échantillons d’ARN extraits de cultures primaires de cellules tumorales de l’ovaire (TOV) provenant de trois donneuses porteuses de mutation sur BRCA1 et une sur BRCA2. Nous avons identifié, pour la première fois, les signatures moléculaires associées à la présence d’une mutation de BRCA1 et BRCA2 dans les cellules NOSEs ainsi que la signature associée à la transformation tumorale des cellules NOSEs en TOVs chez les porteuses de mutation de BRCA1. Nous avons également localisé les domaines chromosomiques comportant des gènes corégulés en association avec la présence d’une mutation de BRCA1 dans les cellules NOSEs. Les allèles sauvage et muté de BRCA2 étaient exprimés dans les cellules TOVs provenant des porteuses de la mutation 8765delAG sur BRCA2. Nous avons observé que le niveau d’expression des transcrits de BRCA2 était plus élevé dans les cellules provenant des tumeurs ovariennes les plus agressives chez les femmes porteuses de la mutation 8765delAG sur BRCA2, les transcrits correspondants à l’allèle muté contribuant avec un pourcentage élevé du niveau d’expression total du gène. Le phénotype tumoral observé chez les Canadiennes Françaises porteuses de cette mutation pourrait résulter d’un effet de dosage de l’allèle muté. / We analyzed the transcriptome of nine primary cultures of non-tumor ovarian surface epithelium cells (NOSE) from four non-carriers, two BRCA1 and three BRCA2 carriers, and four primary cultures of tumor ovarian cells (TOV) from three BRCA1 and one BRCA2 carriers. We identified the first molecular signatures associated with the presence of BRCA1 and BRCA2 mutations in NOSEs and the first molecular signature associated with the transformation from NOSEs to TOVs in French Canadian women carriers of BRCA1 mutation. Moreover, we localized some co-regulated chromosomal domains associated with the presence of a BRCA1 mutation in NOSE cells. Wild-type and mutated BRCA2 allelic transcripts were expressed in tumor cells from 8765delAG BRCA2 mutation carriers, with the highest level of BRCA2 transcript expression and the highest contribution of the mutated allele in cells originating from the most aggressive ovarian tumors. The observed phenotype in BRCA2-mutated cells as well as the aggressiveness of the tumor could result from a dosage effect of the BRCA2 mutated allele.

Das nur 16,5 kDa große Survivin ist ein bifunktionales Protein, welches eine bedeutende Rolle in zwei wichtigen zellulären Prozessen spielt, der Apoptose und der Mitose. Aufgrund seiner BIR Domäne wird es zu den Inhibitor der Apoptose Proteine (IAP) gezählt. Diese Gruppe an Proteinen interferiert negativ mit der Aktivierung der Caspasen und wirkt somit einer Induktion der Apoptose entgegen. Neben seiner anti-apoptotischen Funktion besitzt das Survivin zudem eine essentielle Rolle bei der Segregation der Chromosomen und während der Zytokinese. In der Mitose bildet Survivin mit Borealin, INCENP und der mitotische Aurora B Kinase den Chromosomalen Passenger Complex (CPC). Das Survivin besitzt zudem eine grosse medizinische Relevanz und gilt als Tumor-assoziertes Antigen, da es zu den Top vier Transkripten zählt, die in einer Vielzahl unterschiedlicher Tumorentitäten überexprimiert werden, aber nicht in Normalgewebe. Diese Überexpression geht einher mit einer erhöhten Resistenz der Tumore gegenüber Chemo- und Strahlentherapie und macht Survivin zu einem idealen molekularen Ziel einer Krebstherapie mittels RNA Interferenz oder spezifischer pharmakologischer Inhibitoren. In einer Vielzahl an Studien, in denen das Survivin-Protein mittels RNAi, dominant negativer Proteine oder „knock out“ des Survivin Genes (BIRC5) aus geschalten wurde, konnte eine Aktivierung des Tumorsuppressorproteins p53, einem wichtigen Mediator der Zellzyklusregulation, beobachtet werden. Bis heute ist es weitgehend unklar, wie eine Aktivierung von p53 nach einem Survivin Verlust erfolgen kann. Zudem stellte sich die Frage, ob eine therapeutische Intervention, welche die Ausschaltung des Survivin-Proteins zum Ziel hat, neben Tumorzellen auch normales Gewebe schädigen kann. Da Tumorzellen sich von normalen Zellen insbesondere dadurch unterscheiden, dass sie Defekte in p53-Signalwegen bzw. eine inaktivierende p53-Mutation oder Gendeletion besitzen, wurde die Auswirkung einer Survivin-Depletion auf p53-positive Tumorzellen und auf isogene Tumorzellen mit ausgeschalteten p53 untersucht. Zu diesem Zweck wurde p53 mittels RNAi in U87-MG und MCF-7 Zellen ausgeschalten und stabile p53-defiziente Zellen generiert. Insgesamt standen für die Untersuchungen mit HCT116, MCF-7 und U87-MG drei Zelllinien unterschiedlichen Ursprungs sowie ihre isogenetischen, aber p53-defizienten Derivate zur Verfügung. Survivin wurde in diesen Zellen durch einen retroviralen Vektor, der für eine shRNA (small hairpin RNA) gegen Survivin codiert, ausgeschalten. Der Verlust an Survivin führte dabei in Wildtyp- als auch in den p53-defizienten Zellen zu Polyploidie, einer gestörten Zytokinese und multipolaren Spindeln. Zusätzlich konnte eine Induktion an p53/p21waf/cip sowie eine erhöhte, p53- und Caspase 3-unabhängige Apoptose festgestelt werden. Es konnte gezeigt werden, dass die Expression an p21waf/cip in Wildtyp-Zellen sowie seines potentiellen Targets Cyclin D1 mit der Zunahme an Polyploidie nach Survivin RNAi korreliert. Allerdings führt die Expression des Cdk Inhbibitors p21waf/cip nur zu einem transienten Arrest der Zellen, da polyploide, Survivin-depletierte Zellen BrdU inkorporierten und dadurch proliferierten. Zudem wird zum ersten Mal eine ATM/ATR abhängige „DNA Damage Response“ (DDR) in Survivin-depletierten p53-defzienten und Wildtyp Zellen beschrieben, die zu einer Phosphorylierung und Stabilisierung von p53 führt. Sky-Analysen bestätigten numerische als auch schwere chromosomale Aberrationen wie Translokationen und dizentrische Chromosomen in Survivin-depletierten polyploiden Zellen. Die Inhibierung der Aurora B Kinase, einem weiteren Bestandteil des CPC, mittels eines chemischen Inhibitors zeigt analog das Auftreten von DNA Schäden, eine p53/p21waf/cip Aktivierung sowie eine Zunahme an Polyploidie, wie sie für Survivin beschrieben wurde. Diese Erkenntnisse zeigen deutlich auf, dass die DNA Schäden und der p53/p21waf/cip-abhängige G1 Arrest nach dem „knock down“ von Survivin aufgrund einer gestörten Mitose hervorgerufen wurde, während eine IAP-Funktion des Survivins unter den gewählten experimentellen Bedingungen nicht festzustellen war.

O presente trabalho é resultado da colaboração de pesquisadores do Centro de Engenharia Nuclear (CEN) e de pesquisadores do Centro de Biotecnologia (CB), ambos pertencentes ao IPEN, para o desenvolvimento de uma metodologia que visa auxiliar os profissionais citogeneticistas fornecendo uma ferramenta que automatize parte da rotina necessária para a avaliação qualitativa e quantitativa de danos biológicos em termos de aberração cromossômica. A técnica citogenética, sobre a qual esta ferramenta é desenvolvida, é a técnica de aberrações cromossômicas. Nela, são realizadas preparações citológicas de linfócitos de sangue periférico para que metáfases sejam analisadas e fotografadas ao microscópio e, com base na morfologia dos cromossomos, anomalias sejam investigadas. Quando esta tarefa é realizada manualmente, os cromossomos são analisados visualmente um a um pelo profissional citogeneticista, logo, trata-se de um processo minucioso em virtude da variação geral na aparência do cromossomo, do seu tamanho pequeno e do grande número de cromossomos por célula. Para um diagnóstico confiável, é necessário que várias células sejam analisadas, tornando-se uma tarefa repetitiva e demorada. Neste contexto, foi proposto o uso dos mapas auto-organizáveis para o reconhecimento automático de padrões morfológicos referentes às imagens de cromossomos humanos. Para isso, foi desenvolvido um método de extração de características por meio do qual é possível classificar os cromossomos em: dicêntricos, anéis, acrocêntricos, submetacêntricos e metacêntricos, com acerto de 93,4 % em relação ao diagnóstico dado por um profissional citogeneticista. / This work is a joint collaboration between Nuclear Energy Research Institute (IPEN), Nuclear Engineering Center and Biotechnology Center to develop a methodology aiming to assist cytogenetic professionals by providing a tool to automate part of the required routine to perform qualitative and quantitative evaluation of biological damage in terms of chromosomal aberration. The cytogenetic technique upon which this tool was developed, is the chromosome aberrations technique, in which cytological preparations of peripheral blood lymphocyte metaphases are performed to be analyzed and photographed under a microscope in order to investigating chromosomal aberration. Performed manually, the chromosomes are analyzed visually one by one by a cytogenetic professional, so it is a painstaking process due to the great deal of variation in the appearance of each chromosome, their small sizes and not to mention the high density of chromosomes per cell. In order to obtain a reliable diagnosis it is necessary that many cells be analyzed, which makes this a repetitive and time consuming process. In this context, the use of self-organizing maps for the automatic recognition of patterns relating to morphological pictures of human chromosomes has been proposed. For this, we developed a feature extraction method by which is possible to classify chromosomes in: dicentrics, ring-shaped, acrocentric, submetacentric and metacentric with 93.4% accuracy compared to diagnostic given by a professional cytogeneticist.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:05:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IngridVA_TESE_Parcial.pdf: 1546645 bytes, checksum: 082397e35198d8c6624ddff83583508c (MD5) Previous issue date: 2013-03-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / without practical results so far. Protocols used in biotechnological cultured aquatic organisms aimed at increasing growth rates and disease resistance, have been studied and perfected. Among the available techniques, the application of chromosomal manipulation, although still nascent, is presented as a tool aimed at mitigating ecological and economical issues in shrimp farming. The polyploidization artificial method already employed in fish and shellfish, has been widely researched for use in farmed shrimp. Some limitations of this method of expansion in shrimp refer to a better knowledge of cytogenetic aspects, the level of sexual dimorphism and performance in growing conditions. To contribute on some of these issues, the present study aimed to characterize cytogenetic species Litopenaeus vannamei (Decapoda) and Artemia franciscana (Anostraca), analyze the effectiveness of methods for detection of ploidy, through the use of flow cytometry in processes of induction polyploidy cold thermal shock at different stages of development of newly fertilized eggs. Additionally, aimed also the qualitative and quantitative comparison of larval development between diploid and polyploid organisms, besides the identification of sexual dimorphism in L. vannamei, through geometric morphometrics. The results provide information relevant to the improvement and widespread use of biotechnological methods applied toward national productivity in shrimp farming / A melhoria gen?tica de planteis reprodutores, baseada no melhoramento cl?ssico tem sido tentada, mas sem resultados pr?ticos, at? o momento. Protocolos biotecnol?gicos utilizados em organismos aqu?ticos cultivados que visam aumentar as taxas de crescimento e resist?ncia a doen?as, v?m sendo estudados e aperfei?oados. Entre as t?cnicas dispon?veis, a aplica??o de manipula??o cromoss?mica, embora ainda incipiente, se apresenta como ferramenta voltada a mitigar quest?es ecol?gicas e econ?micas na carcinicultura. A poliploidiza??o artificial, m?todo j? empregado em peixes e moluscos, vem sendo largamente pesquisado para o uso em camar?es cultivados. Algumas limita??es da expans?o deste m?todo em camar?es se referem a um melhor conhecimento de aspectos citogen?ticos, do n?vel de dimorfismo sexual e performance em condi??es de cultivo. Visando contribuir sobre algumas destas quest?es, realizou-se ? caracteriza??o citogen?tica das esp?cies Litopenaeus vannamei (Decapoda) e Artemia franciscana (Anostraca), foi analisada tamb?m a efic?cia do uso da citometria de fluxo como m?todo de detec??o da ploidia em processos de indu??o artificial por choque t?rmico ? frio, em diferentes fases do desenvolvimento de ovos rec?m-fertilizados de Litopenaeus vannamei. Adicionalmente, visou-se, ainda, a compara??o qualitativa e quantitativa do desenvolvimento larval entre organismos diploides e poliploides, al?m da identifica??o do dimorfismo sexual em L. vannamei, por meio da morfometria geom?trica. Os resultados obtidos propiciam informa??es que contribuem para o aprimoramento e difus?o do uso aplicado de m?todos biotecnol?gicos voltados ao incremento da produtividade na carcinicultura nacional / 2020-01-01

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-20Bitstream added on 2014-06-13T20:23:16Z : No. of bitstreams: 1 maschio_lr_dr_sjrp.pdf: 1208225 bytes, checksum: 581a26de1a4603e41d2d07020f15f18d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / Devido às crescentes expansões demográficas e industriais observadas nas últimas décadas, o meio ambiente tem recebido uma carga significativamente crescente de efluentes domésticos, industriais e agrícolas, causando impactos severos nos ecossistemas e um potencial comprometimento à saúde humana. Dentre os efluentes domésticos, podemos citar uma gama de poluentes, tais como químicos de diversas categorias, além de contaminações por agentes biológicos diversos. Já os efluentes industriais contêm poluentes orgânicos e/ou inorgânicos, dependendo da atividade industrial. Baseando-se nestes dados, este trabalho teve como objetivo investigar, por meio de ensaios biológicos com dois organismos-teste, a possível presença de contaminantes com potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico, que são despejados ao longo do rio Preto, inclusive na Represa Municipal de São José do Rio Preto. O material biológico utilizado neste estudo constituiu-se de sementes de Allium cepa (cebola) e peixes da espécie Oreochromis niloticus (Tilápia). Coletas de águas foram realizadas, sazonalmente, nos meses de agosto de 2006 e 2007 (estação seca) e março de 2007 e 2008 (estação chuvosa), em seis pontos distintos: Ponto 1 (P1), 8 km antes do represamento; Ponto 2 (P2), 1 km antes do represamento; Ponto 3 (P3), local de despejo do esgoto; Ponto 4 (P4), margem oposta do despejo do esgoto; Ponto 5 (P5), saída do represamento; Ponto 6 (P6), 1 km após o represamento. Análises químicas foram realizadas para todas as coletas realizadas. Para a realização do estudo, 100 sementes de Allium cepa foram submetidas à germinação, em placa de Petri, em amostras de águas coletadas nos seis diferentes pontos do rio Preto, em água ultra pura (controle negativo) e em uma substância reconhecidamente aneugênica (Trifluralina - controle positivo), sempre à temperatura ambiente... / Due to increasing population and industrial expansion observed in recent decades, the environment has received a significant increased burden of domestic industrial and agricultural sewerage, which can cause severe impacts on ecosystems, and a potential damage to human health as well. A wide range of harmful pollutants can be found in domestic effluent, such as chemicals from various categories, in addition to contamination by various biological agents. On the other hand, industrial effluents contain organic and / or inorganic pollutants, depending on industrial activity. Based on these data, this study aimed to investigate, by means of biological tests with two test-organism, the possible presence of contaminants with cytotoxic, genotoxic and mutagenic potential, which are dumped along the Preto river, an important river that flows in the region of Sao Jose do Rio Preto/SP. The biological material used in this study consisted of seeds of Allium cepa (onion) and one specie of fish (Tilapia: Oreochromis niloticus). Water samples were taken seasonally in August 2006 and 2007 (dry season) and March 2007, and 2008 (rainy season), in six distinct sites: Site 1 (S1), 8 km before the damming, Site 2 (S2), 1 km before the damming, Site 3 (S3), place of sewerage discharge; Site 4 (S4), opposite margin of sewage discharge, Site 5 (S5), end of the damming; Site 6 (S6) 1 km after damming. Chemical analyses were performed for all collected samples. For the study, 100 seeds of A. cepa were submitted to germination in Petri dishes with samples water from six different sites of the Preto river, Ultra pure water (negative control), and with an aneugenic substance (Trifluralin - positive control). For most of collection points and periods studied, root meristems cells of A. cepa, exposed to water samples collected along the Preto river, showed no significant differences... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:33:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PabloAM.pdf: 4013213 bytes, checksum: 97a52b7c01ae798889ede43cc9641282 (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Given the great diversity of fishes, the Order Tetraodontiformes stands to show genetic and morphological characteristics enough singular. The fishes of this order have a compact DNA which favors molecular studies, as well as comparisons with more basal species. Model of genome evolution, there are still many gaps in knowledge about their chromosomal patterns and how evolutionary rearrangements influence the marked variation in DNA content of this order. In view of this, we present cytogenetic analyzes of the species Acanthostracion quadricornis (Ostraciidae), A. polygonius (Ostraciidae) Melichthys niger (Balistidae) Cantherhines macrocerus (Monacanthidae) and C. pullus (Monacanthidae), Lagocephalus laevigatus, Colomesus psittacus and Canthigaster figueiredoi (Tetraodontidae), to contribute with cytogenetic data for this group. The analysis was performed by C-banding, Ag-RONs, coloring with base-specific fluorochromes DAPI-CMA3, restriction enzymes AluI, EcoRI, TaqI, PstI and HinfI and in situ hybridization with probes for ribosomal DNA 18S and 5S. The heterochromatic ultrastructure of A. quadricornis and A. polygonius revealed a outstanding heterochromatin content, which may indicate that the accumulation or loss of extensive heterochromatin content could be responsible for large variations in genomic content displayed in different Tetraodontiformes families. The species Cantherhines macrocerus, C. pullus (Monacanthidae) and Melichthys niger (Balistidae) shows a huge karyotypic similarity both numerically and structural. L. laevigatus showed similar cytogenetic features (2n = 44 and single RONs) to the species of the genus Takifugu, which reinforces the idea of their phylogenetic relationships. C. psittacus presented the highest diploid number described for the family (2n = 56) and large amount of HC, features that related with its sister family Diodontidae. Cytogenetic analysis in C. figueiredoi revealed heterochromatic polymorphisms, RONs multiple and Bs chromosomes. These events are rare in marine fishes, and are possibly associated with the strong restructuring and genomic reduction that this family has been suffered. These features, plus the morphological and molecular data suggests that these species share the same ancestral branch, with a possible monophyletic origin. In this study, new contributions to the knowledge of evolutionary patterns facing by Tetraodontiformes are provided and discussed under cytotaxonomyc, genomic and evolutionary perspectives. / Frente ? grande diversidade de peixes, a Ordem Tetraodontiformes se destaca por exibir caracter?sticas gen?ticas e morfol?gicas bastantes singulares. Os peixes desta Ordem apresentam um DNA compacto o que favorece estudos moleculares, assim como compara??es com esp?cies mais basais. Modelo de evolu??o gen?mica, ainda existem v?rias lacunas de conhecimento sobre seus padr?es cromoss?micos e como os rearranjos evolutivos influenciaram na marcante varia??o no conte?do de DNA desta Ordem. Diante disto o presente estudo apresenta an?lises citogen?ticas das esp?cies, Acanthostracion quadricornis (Ostraciidae), A. polygonius (Ostraciidae), Melichthys niger (Balistidae), Cantherhines macrocerus (Monacanthidae), C. pullus (Monacanthidae), Lagocephalus laevigatus, Colomesus psittacus e Canthigaster figueiredoi (Tetraodontidae) visando contribuir com mais dados citogen?ticos para o grupo. As an?lises foram realizadas atrav?s do bandamento C, Ag-RONs, colora??o com fluorocromos base-espec?ficos DAPICMA3, enzimas de restri??o AluI, EcoRI, TaqI, PstI e HinfI e pela hibrida??o in situ com sondas de DNA ribossomal 18S e 5S. A ultra-estrutura heterocromat?nica de A. quadricornis e A. polygonius, revelaram um marcante conte?do heterocrom?tico, situa??o que pode indicar que o ac?mulo ou perda de extenso conte?do de heterocromatinas poderiam ser respons?veis pelas extensas varia??es no conte?do gen?mico exibidas nas diferentes fam?lias dos Tetraodontiformes. As esp?cies Cantherhines macrocerus, C. pullus (Monacanthidae) e Melichthys niger (Balistidae) apresentam uma grande similaridade cariot?pica, tanto num?rica, como estruturalmente. Lagocephaluslaevigatus mostrou caracter?sticas citogeneticas similares (2n=44 e RONs simples) as esp?cies do g?nero Takifugu, o que refor?a a id?ia de seu relacionamento filogen?tico, e Colomesus psittacus apresentou o maior n?mero dipl?ide descrito para a fam?lia (2n=56) e grande quantidade de HC, caracter?sticas que o relacionariam com a fam?lia irm? Diodontidae. An?lises citogen?ticas em C. figueiredoi revelaram polimorfismos heterocrom?ticos, RONs m?ltiplas e cromossomos Bs, sendo estes eventos raros para peixes marinhos, estando possivelmente associados ? marcante reestrutura??o e redu??o gen?mica que esta fam?lia sofreu. Estas caracter?sticas, somadas aos dados morfol?gicos e moleculares sugerem que estas esp?cies compartilham de um mesmo ramo ancestral, com poss?vel origem monofil?tica. Neste trabalho novas contribui??es ao conhecimento dos padr?es evolutivos enfrentados pelos Tetraodontiformes s?o fornecidas e discutidas sob perspectivas citotax?nomicas, gen?micas e evolutivas.

A Síndrome de Martin-Bell é uma forma hereditária de retardo mental determinada pela perda da expressão do gene FMR1 que está associado com a expansão da repetição dos tri-nucleotídeos citosina-guanina¬-guanina (CGG). Os indivíduos com um alto grau dessa expansão apresentam o silenciamento da expressão desse gene, com conseqüente alteração no desenvolvimento do sistema nervoso do embrião, causando danos neurológicos irreparáveis. A citogenética é uma metodologia clássica que contribui para o diagnóstico da síndrome em casos sem esclarecimentos, porém sua sensibilidade isoladamente em muitos casos é insuficiente para um diagnóstico positivo mesmo diante de características clínicas evidentes. Na busca de uma alternativa para suprir esta necessidade de definir exatamente as alterações encontradas em cada caso propôs-se a otimização de uma PCR de alta fidelidade no diagnóstico diferencial da Síndrome e simultaneamente comparar com os dados da citogenética clássica. Para tanto, foram coletadas amostras de sangue periférico de 102 pacientes e avaliou-se 100 a 150 metáfases para cada indivíduo pela citogenética clássica e para a PCR duplex. Os resultados demonstram pelo teste de Kruskal-Wallis que a PCR com a citogenética não apresentou diferenças significativas (p>0,05). Porém quando avaliadados pelo índice de Kappa sugere-se que os dois critéiros de diagnósticos devem ser utilizados simultaneamente com caracteristicas clínicas do paciente. A PCR mostrou-se rápida e com custo relativamente menor, sendo portanto, aplicável no auxílio ao aconselhamento genético dos indivíduos e suas famílias, bem como para um acompanhamento psico-pedagógico adequado. / The Martin-Bell Syndrome is a heredity mental retard form determined by the loss of FMR1 gene expression which is associated with the tri-nucleotides cytosine-guanine-guanine (CGG) repetition expansion. The individuals showing a high degree of this expansion present the silencing of this gene expression, with a consequent alteration of the embryo nervous system evolution, causing irreparable neurological damage The cytogenetics is a classical methodology that contributes for diagnosing the syndrome in cases without clarification, thus its sensitivity isolated in many cases is insufficient for a positive diagnosis even in front of evident clinical characteristics. On searching for an alternative to fulfill this need to define the found alterations in each case, an optimization of a high fidelity PCR to Syndrome diagnosis and simultaneously to compare with classical cytogenetics. Peripheral blood samples were collected from 102 patients for evaluating 100 to 150 metaphases evaluation by classical cytogenetics for each sample and to duplex PCR. The results showed by the Kruskal-Wallis test that the PCR with the cytogenetics have not presented significant differences (p>0,05). However, when evaluated by the Kappa index it was suggested that the two diagnosis criteria should be used simultaneously with patient s clinical characteristics. The PCR showed itself quick and with a relatively lower cost , and in this way, applicable in helping genetically counseling individuals and their families, as well as sending them to a more adequate psycho-pedagogical treatment.

Made available in DSpace on 2017-07-10T18:13:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cassia Fernanda Yano.pdf: 1692770 bytes, checksum: 2f6626f3bb741520d86130373963a00f (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Cytogenetics studies were carried out in two genera of fishes from Pindorama and Lopei streams, Upper Paraná River basin, with cytossistematic and ecologic-evolutionary approaches. In Heptapterus mustelinus, the first cytogenetics characterization in the genus was carried out, verifying 54 chromosomes (26m+18sm+4st+6a), which is a diploid number not observed among the Heptapteridae species till now studied. Differently from the others members of this family, multiple Ag-NORs and centromeric heterochromatin in almost all the chromosome of the complement were observed, being these heterochromatin CMA3+/DAPI- in nine chromosome pairs, beyond that coincident with Ag-NORs. These data show a different way in the karyotypic evolution of H. mustelinus in relation to the others Heptapteridae genus. In the genus Astyanax, an interpopulation comparative analysis was carried out in Astyanax aff. paranae, Astyanax fasciatus and Astyanax altiparanae from Pindorama and Lopei streams, in way to observe the chromosomal differentiation and the evolutionary trends in the three species. It was verified 48 and 50 chromosome in Astyanax aff. paranae and A. fasciatus, respectively, with interpopulation differences in the karyotypic formulae. The diploid number obtained to A. altiparanae was 50 chromosomes, with the same karyotypic formulae in both populations. The three species presented multiple Ag-NORs, with interpopulation differences observed in Astyanax aff. paranae and A. fasciatus. In relation to the heterochromatin distribution pattern, interpopulation differences were verified. The occurrence of Ag-NORs/CMA3+ was observed in the three species, besides DAPI+ bands in A. altiparanae. The results showed that Astyanax aff. paranae and A. fasciatus presented more conspicuous interpopulation differences than A. altiparanae populations, probably due bionomic characteristic that avoid the presence of Astyanax aff. paranae and A. fasciatus to upper segments in the streams, leading to the fixation of chromosomal rearrangements in these populations. However, the absence of interpopulation karyotypic differences in A. altiparanae suggests gene flow between the two populations. By the way, the present study showed that cytogenetics is an important tool in understanding the chromosomal mechanism involved in the evolutionary process in fishes group, and that the association to ecological studies is fundamental to the comprehension of dispersion process of some group of fishes. / Estudos citogenéticos foram realizados em dois gêneros de peixes nos riachos Pindorama e Lopei, pertencentes à bacia do Alto rio Paraná, com diferentes abordagens: citossistemática e ecológico-evolutiva. Em Heptapterus mustelinus foi realizada a primeira caracterização citogenética no gênero, tendo sido verificado 54 cromossomos (26m+18sm+4st+6a), número diplóide não relatado entre os heptapterídeos até o momento estudados. Diferentemente da maioria das espécies da família, foram observadas Ag-RONs múltiplas e heterocromatina presente na região centromérica da maioria dos cromossomos do complemento, sendo estas heterocromatinas CMA3+/DAPI- em nove pares cromossômicos, além daquelas coincidentes com as Ag-RONs. Estes dados revelam um caminho diferente na evolução cariotípica de H. mustelinus em relação aos demais gêneros de Heptapteridae. No gênero Astyanax foi realizada uma análise comparativa entre populações de Astyanax aff. paranae, Astyanax fasciatus e Astyanax altiparanae coletadas nos riachos Pindorama e Lopei, verificando-se as tendências da evolução e diferenciação cromossômica nas três espécies. Nas populações de Astyanax aff. paranae e A. fasciatus foram verificados 48 e 50 cromossomos, respectivamente, mas com diferenças interpopulacionais nas fórmulas cariotípicas em ambas as espécies. O número diplóide para A. altiparanae foi de 50 cromossomos com mesma fórmula cariotípica em ambas as populações. As três espécies apresentaram Ag-RONs múltiplas, com diferenças interpopulacionais observadas em Astyanax aff. paranae e A. fasciatus. Em relação ao padrão de distribuição de heterocromatina, diferenças interpopulacionais foram verificadas. A ocorrência de Ag-RONs/CMA3+ foi observada nas três espécies, além de bandas DAPI+ em A. altiparanae. Os dados demonstraram que Astyanax aff. paranae e A. fasciatus apresentaram diferenças cariotípicas interpopulacionais mais conspícuas do que as populações de A. altiparanae, provavelmente por características bionômicas que restringem Astyanax aff. paranae e A. fasciatus a trechos superiores de riachos, com a fixação de rearranjos cromossômicos nas populações. Entretanto, a ausência de diferenças cariotípicas interpopulacionais em A. altiparanae sugerem fluxo entre as duas populações. De forma geral ficou evidente que a citogenética é uma importante ferramenta para o entendimento dos mecanismos cromossômicos envolvidos no processo evolutivo dentro dos grupos de peixes, e que a associação a estudos de ecologia é fundamental para compreender os processos envolvidos na dispersão de algumas espécies.