Spelling suggestions: "subject:"3kinase C"" "subject:"6kinase C""
1 |
Avaliação do potencial antioxidante do licopeno e a influência da via de sinalização de PKC na produção de eros em células de hepatocarcinoma SK-HEP- 1.Silva, Talita Prato da January 2015 (has links)
Programa de Pós-Graduação em Saúde e Nutrição. Escola de Nutrição, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-05-20T21:01:57Z
No. of bitstreams: 2
license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5)
DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoPotencialAntioxidanteLicopeno.pdf: 1200572 bytes, checksum: e394f89e5e877613399c2cb53ae6440a (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-05-22T14:57:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2
license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5)
DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoPotencialAntioxidanteLicopeno.pdf: 1200572 bytes, checksum: e394f89e5e877613399c2cb53ae6440a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-22T14:57:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2
license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5)
DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoPotencialAntioxidanteLicopeno.pdf: 1200572 bytes, checksum: e394f89e5e877613399c2cb53ae6440a (MD5)
Previous issue date: 2015 / Carcinogênese é um processo multipassos que pode ser induzido e/ou modulado por
agentes químicos ou físicos, incluindo aqueles que induzem espécies reativas de
oxigênio (EROs). Estas espécies são geradas a partir de uma grande variedade de
processos como a respiração mitocondrial e a NADPH oxidase. A produção excessiva
de EROs pode oxidar biomoléculas e facilitar processos relacionados com a
carcinogênese. Em baixas doses, estas moléculas podem agir como importantes
mediadores do crescimento celular, adesão, diferenciação e apoptose. As EROs
podem, por exemplo, modular a via da PKC. PKC é uma família de serina-treonina
cinases que regulam uma variedade de funções celulares. A ativação aberrante da PKC
está relacionada a doenças como o câncer e o diabetes. A PKC pode ser ativada por
EROs e a produção de EROs pode requerer a ativação da PKC porque essas cinases
tem um papel na ativação da NADPH oxidase. Dessa forma, a ativação da PKC e da
NADPH oxidase podem elevar os níveis de EROs, causando danos celulares. Estas
reações potencialmente deletérias podem ser controladas por um sistema de
antioxidantes enzimáticos (superóxido dismutase - SOD e catalase - CAT) e não
enzimáticos (flavonóides e carotenóides). O licopeno é um carotenóide de coloração
vermelha que está presente em vários vegetais e frutas. Trata-se de um dos
antioxidantes mais potentes e tem demonstrado desempenhar um importante papel na
prevenção de vários tipos de câncer, incluindo o hepatocarcinoma. Sendo assim, este
estudo objetivou investigar o potencial antioxidante do licopeno e avaliar o efeito deste
carotenóide na via da PKC, em células SK-Hep-1, uma linhagem de hepatocarcinoma
altamente invasiva. O potencial antioxidante do licopeno foi examinado através da
quantificação celular de EROs e das atividades das enzimas SOD e CAT. O efeito do
licopeno na via da PKC foi examinado pela quantificação celular de EROs após
estimulação com PMA e ionomicina. O papel da NADPH oxidase foi avaliado através da
sua inibição com DPI, um inibidor desta enzima. Nossos resultados mostram que o DPI
inibiu a produção de EROs, demonstrando a importância da enzima NADPH oxidase na
geração de EROs na linhagem celular estudada. O licopeno diminuiu a produção basal de EROs e aumentou a atividade da SOD. Além disso, o licopeno inibiu a produção de
EROs induzida por ionomicina e PMA. Estes resultados analisados em conjunto
sugerem que um dos mecanismos antioxidantes do licopeno seja através da modulação
da proteína cinase C. Entretanto, mais estudos são necessários para confirmar esta
hipótese. _____________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Carcinogenesis is a multistep process which can be induced and/ or modulated by
chemical and physical agents, including those that induce reactive oxygen species
(ROS).These species are generated by a wide variety of processes like mitochondrial
respiration and NADPH oxidase. The excessive generation of ROS might oxidize cellular
biomolecules and facilitate carcinogenesis-related processes. In lower doses, these
molecules can act as important mediators of cell growth, adhesion, differentiation and
apoptosis. ROS can, for example, modulate the PKC pathway. PKC is a family of
serine/threonine kinases that regulates a variety of cell functions. Aberrant PKC
activation is related to diseases such as cancer and diabetes. PKC can be activated by
ROS and ROS production can require PKC activation because these kinases have a
role in NADPH oxidase activation. On this way, the PKC and NADPH oxidase activation
might elevate intracellular levels of ROS causing damage. These potentially deleterious
reactions can be controlled by a system of enzymatic (SOD and CAT) and nonenzymatic
antioxidants (flavonoids and carotenoids). Lycopene is a red colored carotenoid present
in many vegetables and fruits. It‟s one of the most potent antioxidants and has been
shown to play an important role in preventing from various types of cancer, including
hepatoma. This study aimed to investigate the antioxidant potential of lycopene and
evaluate the effect of this carotenoid on PKC pathway, in SK-Hep-1 cells, a highly
invasive hepatoma cell line. The antioxidant potential of lycopene was examined by
quantification of cellular ROS and of SOD and CAT activities. The effect of lycopene on
PKC pathway was examined by quantification of cellular ROS after stimulation with
phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and ionomycin. The role of NADPH oxidase was
examined by its inhibition with DPI, an NADPH oxidase inhibitor. Our results show that
DPI inhibited ROS production, demonstrating the importance of NADPH oxidase in ROS
generation in SK-Hep-1cell. Lycopene decreased basal ROS production and increased
SOD activity. Furthermore, lycopene inhibit ROS by ionomycin and PMA-induced. Taken
together, these results suggest lycopene antioxidant mechanisms are through modulation of protein kinase C. However, more studies are needed to confirm this
hypothesis.
|
2 |
Regulação da actividade dos receptores muscarínicos neuronais pela adenosina na placa motora de rato: papel das cinases A e C e dos canais Cav1 (tipo L)Oliveira, Laura Joana Fevereiro January 2006 (has links)
No description available.
|
3 |
Implementação do ensaio fenotípico das leveduras e sua aplicação na pesquisa de moduladores selectivos para isoformas individuais da PKC de mamíferoSaraiva, Lucília Helena Ataíde January 2003 (has links)
No description available.
|
4 |
Papel da O-glicosilação com N-acetil-glucosamina (O-GlcNAc) no influxo e recaptação de cálcio pelo retículo sarcoplasmático em aorta de ratos: análise funcional / Effects of augmented O-GlcNAcylation on calcium influx and calcium uptake by the sarcoplasmic reticulum in the rat aorta: functional analysis.Zanotto, Camila Ziliotto 28 March 2013 (has links)
A O-glicosilação com N-acetil-glucosamina (O-GlcNAc) é uma modificação pós-translacional altamente dinâmica que modula diversas vias de sinalização. O processo de O-GlcNAc é controlado por duas enzimas: a enzima OGT é responsável por catalisar a adição de N-acetil-glucosamina no grupo hidroxila dos resíduos de serina e treonina, enquanto a OGA catalisa a remoção de O-GlcNAc das proteínas modificadas. Proteínas com importante papel na função vascular são alvo de O-GlcNAc e o aumento da expressão de proteínas modificadas por O-GlcNAc promove aumento da reatividade vascular para estímulos contráteis. Um dos mecanismos de extrema importância no controle do tônus vascular está ligado à regulação da concentração de cálcio (Ca2+) intracelular, onde destacamos a participação do sistema STIM1/Orai1. As moléculas de interação estromal (STIM) atuam como sensores dos estoques intracelulares de Ca2+ e as proteínas Orai representam as subunidades que formam os canais de Ca2+ ativados pela liberação de Ca2+ (CRAC). Neste estudo investigamos a hipótese de que o aumento dos níveis vasculares de proteínas glicosiladas aumenta a resposta contrátil em aorta de ratos, por mecanismos relacionados ao controle da concentração intracelular de Ca2+.Em nossos experimentos, utilizamos aortas torácicas de ratos incubadas com PugNAc (inibidor seletivo da OGA, ), por 24h. Utilizando protocolo experimental que permite avaliar contrações induzidas pelo influxo de Ca2+ e liberação de Ca2+ intracelular, demonstramos que a incubação com PugNAc aumentou a resposta contrátil à PE bem como a contração durante o período de influxo de Ca2+, induzida pela reintrodução de solução fisiológica contendo Ca2+ (1,56 mM). O bloqueio dos canais CRAC com 2-APB (100 ) e gadolíneo (Gd3+, 100 ) diminuiu significativamente as contrações induzidas pelo influxo de Ca2+ em aortas incubadas com PugNAc. Além disso, estas aortas apresentaram aumento da expressão protéica de STIM1, o que resultaria em maior influxo de Ca2+. A contração induzida por cafeína (20 mM) e serotonina (10 ), a qual reflete a capacidade funcional do retículo sarcoplasmático (RS) em captar Ca2+, foi maior em aortas incubadas com PugNAc. O papel da Ca2+-ATPase (SERCA) foi avaliado com a utilização de tapsigargina, bloqueador da SERCA. O efeito da tapsigargina foi semelhante em artérias incubadas com PugNAc e veículo, apesar do aumento de expressão proteica da SERCA em aortas incubadas com PugNAc. Como a proteína cinase C (PKC) é ativada por aumentos de Ca2+ intracelular, determinamos se a atividade de proteínas alvo da PKC estavam aumentadas. A incubação com PugNAc aumentou a expressão das formas fosforiladas da CPI-17, MYPT-1 e MLC. Em conjunto, estes resultados sugerem que a ativação de STIM1/Orai1, aumento da liberação de Ca2+ intracelular e ativação da via de sinalização da PKC podem representar mecanismos que modulam as alterações vasculares em resposta ao aumento de proteínas glicosiladas por O-GlcNAc. / Glycosylation with O-linked -N-acetyl-glucosamine (O-GlcNAc) is a highly dynamic post-translational modification. The process of O-GlcNAc is controlled by two enzymes: the OGT enzyme catalyses the addition of N-acetyl-glucosamine to the hydroxyl group of serine and threonine residues of a target protein, while OGA catalyzes the cleavage of O-GlcNAc from post-translationally-modified proteins. Proteins with an important role in vascular function are targets of O-GlcNAc and increased levels of proteins modified by O-GlcNAc increase vascular reactivity to contractile stimuli. The regulation of intracellular calcium (Ca2+) concentration, including the activation of STIM1/Orai1, is key in the control of vascular tone. The stromal interaction molecules (STIM) act as sensors of intracellular Ca2+ stores whereas the Orai proteins represent subunits of the Ca2+ release-activated Ca2+ channels (CRAC). We hypothesized that increased levels of vascular O-GlcNAc proteins augment vascular contractile responses by altering mechanisms that regulate the intracellular Ca2+. Rat thoracic aortas were incubated with PugNAc (OGA selective inhibitor, ) for 24h. Using an experimental protocol that evaluates contractions induced by Ca2+ influx and release, we demonstrated that incubation with PugNAc increases contractile responses to phenylephrine (PE) as well as the contraction induced by Ca2+ influx, after depletion of intracellular Ca2+ stores. The CRAC channel blockers, 2-APB (100 ) and gadolinium (Gd3+, 100 ), significantly reduced the contractions induced by Ca2+ influx in aortas incubated with PugNAc. Furthermore, these aortas showed increased STIM1 protein expression, which could result in increased influx of Ca2+ and, in turn, increase vascular contraction. The contraction induced by the release of intracellular Ca2+ stores, stimulated by caffeine (20 mM) and serotonin (10 ), was increased in aortas incubated with PugNAc. The Ca2+-ATPase (SERCA) inhibitor thapsigargin produced similar effects in arteries incubated with PugNAc or vehicle, despite the increased SERCA protein expression in aortas incubated with PugNAc. Since PKC is activated by increases in intracellular Ca2+ and arteries incubated with PugNAc show activation of PKC, we determined whether the activity of proteins that are targets of PKC was increased in PugNAc-treated aortas. Incubation with PugNAc increased the expression of phosphorylated forms of CPI-17, MYPT-1 and MLC. Together, these results suggest that activation of STIM1/Orai1, increased release of intracellular Ca2+ and PKC activation may represent mechanisms that modulate vascular responses upon increased O-GlcNAc proteins.
|
5 |
Papel da O-glicosilação com N-acetil-glucosamina (O-GlcNAc) no influxo e recaptação de cálcio pelo retículo sarcoplasmático em aorta de ratos: análise funcional / Effects of augmented O-GlcNAcylation on calcium influx and calcium uptake by the sarcoplasmic reticulum in the rat aorta: functional analysis.Camila Ziliotto Zanotto 28 March 2013 (has links)
A O-glicosilação com N-acetil-glucosamina (O-GlcNAc) é uma modificação pós-translacional altamente dinâmica que modula diversas vias de sinalização. O processo de O-GlcNAc é controlado por duas enzimas: a enzima OGT é responsável por catalisar a adição de N-acetil-glucosamina no grupo hidroxila dos resíduos de serina e treonina, enquanto a OGA catalisa a remoção de O-GlcNAc das proteínas modificadas. Proteínas com importante papel na função vascular são alvo de O-GlcNAc e o aumento da expressão de proteínas modificadas por O-GlcNAc promove aumento da reatividade vascular para estímulos contráteis. Um dos mecanismos de extrema importância no controle do tônus vascular está ligado à regulação da concentração de cálcio (Ca2+) intracelular, onde destacamos a participação do sistema STIM1/Orai1. As moléculas de interação estromal (STIM) atuam como sensores dos estoques intracelulares de Ca2+ e as proteínas Orai representam as subunidades que formam os canais de Ca2+ ativados pela liberação de Ca2+ (CRAC). Neste estudo investigamos a hipótese de que o aumento dos níveis vasculares de proteínas glicosiladas aumenta a resposta contrátil em aorta de ratos, por mecanismos relacionados ao controle da concentração intracelular de Ca2+.Em nossos experimentos, utilizamos aortas torácicas de ratos incubadas com PugNAc (inibidor seletivo da OGA, ), por 24h. Utilizando protocolo experimental que permite avaliar contrações induzidas pelo influxo de Ca2+ e liberação de Ca2+ intracelular, demonstramos que a incubação com PugNAc aumentou a resposta contrátil à PE bem como a contração durante o período de influxo de Ca2+, induzida pela reintrodução de solução fisiológica contendo Ca2+ (1,56 mM). O bloqueio dos canais CRAC com 2-APB (100 ) e gadolíneo (Gd3+, 100 ) diminuiu significativamente as contrações induzidas pelo influxo de Ca2+ em aortas incubadas com PugNAc. Além disso, estas aortas apresentaram aumento da expressão protéica de STIM1, o que resultaria em maior influxo de Ca2+. A contração induzida por cafeína (20 mM) e serotonina (10 ), a qual reflete a capacidade funcional do retículo sarcoplasmático (RS) em captar Ca2+, foi maior em aortas incubadas com PugNAc. O papel da Ca2+-ATPase (SERCA) foi avaliado com a utilização de tapsigargina, bloqueador da SERCA. O efeito da tapsigargina foi semelhante em artérias incubadas com PugNAc e veículo, apesar do aumento de expressão proteica da SERCA em aortas incubadas com PugNAc. Como a proteína cinase C (PKC) é ativada por aumentos de Ca2+ intracelular, determinamos se a atividade de proteínas alvo da PKC estavam aumentadas. A incubação com PugNAc aumentou a expressão das formas fosforiladas da CPI-17, MYPT-1 e MLC. Em conjunto, estes resultados sugerem que a ativação de STIM1/Orai1, aumento da liberação de Ca2+ intracelular e ativação da via de sinalização da PKC podem representar mecanismos que modulam as alterações vasculares em resposta ao aumento de proteínas glicosiladas por O-GlcNAc. / Glycosylation with O-linked -N-acetyl-glucosamine (O-GlcNAc) is a highly dynamic post-translational modification. The process of O-GlcNAc is controlled by two enzymes: the OGT enzyme catalyses the addition of N-acetyl-glucosamine to the hydroxyl group of serine and threonine residues of a target protein, while OGA catalyzes the cleavage of O-GlcNAc from post-translationally-modified proteins. Proteins with an important role in vascular function are targets of O-GlcNAc and increased levels of proteins modified by O-GlcNAc increase vascular reactivity to contractile stimuli. The regulation of intracellular calcium (Ca2+) concentration, including the activation of STIM1/Orai1, is key in the control of vascular tone. The stromal interaction molecules (STIM) act as sensors of intracellular Ca2+ stores whereas the Orai proteins represent subunits of the Ca2+ release-activated Ca2+ channels (CRAC). We hypothesized that increased levels of vascular O-GlcNAc proteins augment vascular contractile responses by altering mechanisms that regulate the intracellular Ca2+. Rat thoracic aortas were incubated with PugNAc (OGA selective inhibitor, ) for 24h. Using an experimental protocol that evaluates contractions induced by Ca2+ influx and release, we demonstrated that incubation with PugNAc increases contractile responses to phenylephrine (PE) as well as the contraction induced by Ca2+ influx, after depletion of intracellular Ca2+ stores. The CRAC channel blockers, 2-APB (100 ) and gadolinium (Gd3+, 100 ), significantly reduced the contractions induced by Ca2+ influx in aortas incubated with PugNAc. Furthermore, these aortas showed increased STIM1 protein expression, which could result in increased influx of Ca2+ and, in turn, increase vascular contraction. The contraction induced by the release of intracellular Ca2+ stores, stimulated by caffeine (20 mM) and serotonin (10 ), was increased in aortas incubated with PugNAc. The Ca2+-ATPase (SERCA) inhibitor thapsigargin produced similar effects in arteries incubated with PugNAc or vehicle, despite the increased SERCA protein expression in aortas incubated with PugNAc. Since PKC is activated by increases in intracellular Ca2+ and arteries incubated with PugNAc show activation of PKC, we determined whether the activity of proteins that are targets of PKC was increased in PugNAc-treated aortas. Incubation with PugNAc increased the expression of phosphorylated forms of CPI-17, MYPT-1 and MLC. Together, these results suggest that activation of STIM1/Orai1, increased release of intracellular Ca2+ and PKC activation may represent mechanisms that modulate vascular responses upon increased O-GlcNAc proteins.
|
6 |
A MELHORA DA RECONSOLIDAÇÃO DA MEMÓRIA INDUZIDA POR ESPERMIDINA ENVOLVE A PROTEÍNA CINASE DEPENDENTE DE CÁLCIO / SPERMIDINE-INDUCED IMPROVEMENT OF RECONSOLIDATION OF MEMORY INVOLVES CALCIUM-DEPENDENT PROTEIN KINASEGirardi, Bruna Amanda 21 July 2015 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The reactivation of a memory results in its destabilization, requiring a process of
memory reconsolidation to maintain it. Spermidine is an endogenous aliphatic amine
with polycationic structure that modulates N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor
activity and improves memory. Recent evidence suggests that systemic
administration of spermidine improves the reconsolidation of fear memory. Here we
determined whether the calcium-dependent protein kinase (PKC) signaling pathway
is involved in the improvement of fear memory reconsolidation induced by
intrahippocampal (ih) administration of spermidine in rats. Male Wistar rats were
trained in a fear conditioning apparatus using a 0.4 mA footshock as unconditioned
stimulus. Twenty-four hours after training, animals were re-exposed to the apparatus
in the absence of shock (reactivation session). Immediately after the reactivation
session, spermidine (2-200 ρmol/site); the PKC inhibitor, 3-[1-
(dimethylaminopropyl)indol-3-yl]-4-(indol-3-yl) maleimide hydrochloride (GF 109203X,
0.3 - 30 ρg/site); the antagonist of the polyamine-binding site at the NMDA receptor,
arcaine (0.2 - 200 ρmol/site) or the PKC activator, phorbol 12-myristate 13-acetate
(PMA, 0.02 - 2 nmol/site) were injected intra-hipocampally (i.h.). Testing was carried
out in the same apparatus, twenty-four hours after reactivation. Freezing scores at
testing were considered a measure of memory. While the post-reactivation
administration of spermidine (20 and 200 ρmol/site) improved, GF 109203X (1, 10
and 30 ρg/site) impaired memory reconsolidation. GF 109203X (0.3 ρg/site)
prevented spermidine (200 ρmol/site)-induced improvement of memory
reconsolidation. The post-reactivation administration of arcaine (200 pmol/site)
impaired and PMA (2 nmol/site) improved memory reconsolidation. PMA (0.2
nmol/site) prevented arcaine (200 ρmol/site)-induced impairment of memory
reconsolidation. The protein synthesis inhibitor anisomycin (2 μg/site) prevented
spermidine (200 ρmol/site)-induced improvement of memory reconsolidation. These
drugs had no effect on memory if they were administered in the absence of
reactivation. These results suggest that the enhancement of memory reconsolidation
induced by the administration of spermidine involves PKC activation. / A reativação de uma memória resulta na sua desestabilização, que exigem um
processo de reconsolidação de memória para mantê-la. A espermidina é uma amina
alifática endógena com estrutura policatiônica que modula a atividade do receptor Nmetil-
D-aspartato (NMDA) e melhora a memória. Evidências recentes sugerem que a
administração sistêmica de espermidina melhora a reconsolidação da memória de
medo. No entanto não se sabe se a administração intra hipocampal de espermidina
melhora a reconsolidação da memória e nem se a proteína cinase dependente de
cálcio (PKC) e síntese proteica estão envolvidas neste efeito. Portanto, no presente
estudo verificou-se o envolvimento da PKC e da síntese proteica na melhora da
reconsolidação da memória do medo induzida pela administração intrahipocampal
(ih) de espermidina em ratos. Ratos Wistar machos foram treinados na tarefa de
medo condicionado contextual utilizando-se choque de 0,4 mA como estímulo
incondicionado. Vinte e quatro horas após o treino, os animais foram re-expostos ao
aparelho na ausência de choque (sessão reativação). Imediatamente após a sessão
de reativação foram administradas, por via ih, espermidina (2-200 ρmol/sítio); o
inibidor da PKC, 3- [1- (dimetilaminopropil) indol-3-il] -4- (indol-3-il) maleimida (GF
109203X, 0,3-30 ρg/sítio); o antagonista do sítio de ligação das poliaminas no
receptor de NMDA, arcaína (0,2-200 ρmol/sítio) ou o ativador de PKC, 12-miristato
13-acetato de forbol (PMA, 0,02-2 nmol/sítio). Os testes foram realizados no mesmo
aparelho, 24 horas após a sessão de reativação. O tempo de imobilidade dos
animais durante o teste foi considerado como medida de memória. Enquanto a
administração de espermidina (20 e 200 ρmol/sítio) melhorou, GF 109203X (1, 10 e
30 ρg/sítio) prejudicou a reconsolidação da memória. O GF 109203X (0,3 ρg/sítio)
preveniu a melhora da reconsolidação da memória induzida por espermidina (200
ρmol/sítio). A administração da arcaína (200 pmol/sítio) prejudicou e PMA (2
nmol/sítio) melhorou a reconsolidação da memória. O PMA (0,2 nmol/sítio) preveniu
o prejuízo na reconsolidação da memória induzido por arcaína (200 ρmol/sítio). O
inibidor de síntese de proteica, anisomicina (2 ug/sítio) preveniu a melhora da
reconsolidação da memória induzida por espermidina (200 ρmol/sítio). Estas drogas
não tiveram nenhum efeito sobre a memória quando foram administrados na
ausência da sessão de reativação. Estes resultados sugerem que a melhora da
reconsolidação da memória induzida pela administração ih de espermidina envolve a
síntese proteica e a ativação de PKC.
|
Page generated in 0.0225 seconds