A neurocisticercose é a forma mais severa relacionada ao complexo teníase-cisticercose, causada pela Taenia solium. Diversas medidas de controle já foram propostas, ressaltando a profilaxia via hospedeiro intermediário com o desenvolvimento de vacinas contra a cisticercose suína, que podem ser previamente avaliadas em um modelo experimental intraperitoneal com cisticercos de Taenia crassiceps, em camundongos Balb/c, constituindo a cisticercose murina. No presente trabalho foram avaliados: a resposta imune humoral pela pesquisa de anticorpos IgG anti-T. crassiceps por teste ELISA e Imunoblot, relação IgG1/IgG2a e, análise dos índices de avidez; a resposta imune celular, de acordo com os resultados de proliferação celular, dosagem de citocinas e teste de hipersensibilidade tardia (HTT) e; o índice de proteção (IP) induzido por antígeno bruto (LV-total) e purificado (18/14) de T. crassiceps, com ou sem o auxílio de adjuvantes, sob protocolos de imunização ativa por via subcutânea e oral. Paralelamente à análise de imunização ativa, houve avaliação do protocolo de imunização passiva com anticorpos monoclonais (AcMo) anti-T. crassiceps. Foram analisados 19 grupos experimentais divididos em três protocolos de imunização ativa por via subcutânea. No protocolo I foram avaliados três grupos experimentais imunizados com 10&#181;g de 18/14, uma dose, e auxílio dos adjuvantes PSS/DDA, Al(OH)3 ou sem o auxílio destes. Os grupos apresentaram IP entre 24,9% e 51,8%. No protocolo II foram analisados nove grupos imunizados com 5, 10 ou 20&#181;g de 18/14 e diferentes esquemas de adjuvantes: DODAB (IP entre 90,3% e 100,0%), PSS/DDA (IP entre 63,6% e 70,1%) ou Al(OH)3 (IP entre 60,7% e 100,0%). Comparando as concentrações antigênicas, os grupos apresentaram maiores IP quando imunizados com 5 ou 10&#181;g de 18/14. No protocolo III foram analisados sete grupos imunizados com 20, 40 e/ou 60&#181;g de 18/14, com duas ou três doses, em diferentes esquemas de adjuvantes: PSS/DDA e Al(OH)3 ou sem adjuvantes, com IP entre 63,5% e 100,0%. A avaliação da resposta imune humoral dos grupos imunizados por via subcutânea demonstraram a presença de anticorpos IgG por teste ELISA em todos os grupos imunizados, sem correlação dos índices de reatividade (IR) com os IP. Por imunoblot, foram reconhecidas, pelo menos, as proteínas de 14 e 18 kDa após 15 (T15), 30 (T30) e/ou 60 (T60) dias contados a partir da 1ª dose de imunização. Os grupos imunizados por via subcutânea que apresentaram IP> 90,0% tiveram relação IgG1/IgG2a >1,0 no T30 e <1,0 no T60. Quanto à avaliação da resposta imune celular, 10 dos 12 grupos avaliados por ensaios de proliferação de células obtidas de linfonodos induzidas por 18/14 apresentaram índices de estimulação (IE) positivos, enquanto que o antígeno L-Vtotal demonstrou-se imunossupressor nestes experimentos. A análise de dois grupos imunizados de forma ativa, por via subcutânea, com IP=100%, mostrou o predomínio de citocinas com polarização Th1 (IFN-&#947;) no T60 e Th2 (IL-4) no T120. Não houve correlação dos IP com os resultados obtidos com HTT, porém, os resultados foram variáveis de acordo com o perfil antigênico e o adjuvante utilizado pela via subcutânea. Sequencialmente foram analisados seis grupos imunizados de forma ativa, por via oral, com 10, 20 ou 30&#181;g de LV-total, uma ou duas doses, com o auxílio de Al(OH)3 que apresentaram IP entre 48,3% e 100,0%, sem diferença significativa entre os grupos, exceto com o grupo imunizado com duas doses de 30&#181;g, o qual apresentou 100,0% de IP. No T15 e T30 os IR obtidos em teste ELISA para pesquisa de anticorpos IgG anti-T. crassiceps foram entre 0,9 e 2,4, enquanto que no T60 entre 2,6 e 5,1. Por Imunoblot, foram reconhecidas as proteínas de 14, 18, 30 e >40kDa no T60. A relação IgG1/IgG2a foi <1,0 no T30 e no T60, enquanto que HTT foi apresentado <40,0% no T30 e T60. Adicionalmente aos ensaios de imunização ativa, seis grupos de camundongos Balb/c imunizados de forma passiva com anticorpos monoclonais anti-T. crassiceps apresentaram IP até 93,0%. De acordo com os resultados obtidos, antígenos bruto e purificado de T. crassiceps foram considerados promissores para imunização murina, principalmente o 18/14 quando utilizado com DODAB ou hidróxido de alumínio pela via subcutânea. Os mecanismos protetores não foram totalmente elucidados, porém, demonstram polarização para resposta Th1 e proteção parcial dependente de IgG, demonstrada pelos ensaios de imunização passiva. / Neurocysticercosis is the most severe form of infection related to the complex taeniasis-cysticercosis, caused by Taenia solium. Several control measures have been proposed, emphasizing the prophylaxis via intermediate host through the development of vaccines against porcine cysticercosis, which may be previously evaluated in an intraperitoneal experimental model using cysticercus of Taenia crassiceps, in Balb/c mice, constituting the murine cysticercosis. In this study were evaluated: the humoral immune response by search of anti-T. crassiceps IgG antibody by ELISA and Immunoblot assays, IgG1/IgG2a ratio and, analysis of avidity indices; the cellular immune response by proliferation assay, cytokine maeasurements and delayed hypersensitivity assay (DHA) and; protection index (PI) induced by crude antigen (total-VF) and purified (18/14) of T. crassiceps, with or without adjuvants, through active immunization protocols by subcutaneous and oral administration. In parallel to the active immunization was performed the evaluation of passive immunization protocol with anti-T. crassiceps monoclonal antibodies (AcMo). Were analyzed 19 experimental groups, divided into three active immunization protocols by subcutaneous via. In I Protocol were evaluated three experimental groups which were immunized with 10&#181;g of 18/14 antigen, one dose, with or without PSS/DDA, Al(OH)3 adjuvants. These groups showed PI between 24,9% and 51,8%. In II Protocol were evaluated nine experimental groups which were immunized with 5, 10 or 20&#181;g of 18/14 antigen, using different schemes of adjuvants: DODAB (PI between 90,3% and 100,0%), PSS/DDA (PI between 63,6% and 70,1%) or Al(OH)3 (PI between 60,7% and 100,0%). Comparing the concentrations antigenic, groups had higher IP when immunized with 5 or 10&#181;g of 18/14 antigen. In III Protocol were evaluated seven groups immunized with 20, 40 and/or 60&#181;g of 18/14 antigen, with two or three doses, using also different schemes of adjuvants: PSS/DDA and Al(OH)3 adjuvants or without them, showing PI between 63,5% and 100,0%. The evaluation of humoral immune response of all subcutaneous immunizated groups demonstrated the presence of IgG antibodies by ELISA in all immunized groups, without correlation between reactivity indices (RI) and PI. By immunoblot, were recognized at least the 14 and 18 kDa proteins after 15 (T15), 30 (T30) and/or 60 (T60) days from the first dose immunization. The groups immunized subcutaneously that showed PI > 90,0% had IgG1/IgG2a ratio >1,0 in T30 and <1,0 at T60. About the cellular immune response evaluation, 10 among 12 groups evaluated by proliferation assays using lymphonodes stimulated with 18/14 antigen showed indices of stimulation (IS) positive, while the VF-total antigen was shown immunosuppressive in these experiments. The analysis of two groups actively immunized subcutaneously with PI equal to 100%, showed predominance of cytokines tending to Th1 (IFN-&#947;) in T60 time and Th2 (IL-4) in T120 time. There was no correlation between PI indices and the results obtained from the DHA, however, the results varied according to the antigenic profile and the adjuvant subcutaneously used. Sequentially were analyzed six groups actively immunized by oral via, with 10, 20 or 30&#181;g of LV-total, one or two doses, supported by Al(OH)3 adjuvant which showed PI between 48,3% and 100,0%, with no significant difference between the groups, except the group immunized with two doses of 30&#181;g, which had PI of 100,0%. In T15 and T30 times the reactivity indices obtained by ELISA test for the detection of IgG anti-T. crassiceps antibodies were between 0,9 and 2,4, while in T60 time they were between 2,6 and 5,1. By Immunoblot, were recognized the 14, 18, 30 and > 40kDa proteins in T60 time. The IgG1/IgG2a ratio was <1,0 in T30 and T60 time, while DHA was presented <40,0% in T30 and T60. In addition to the active immunization assays, groups of six Balb/c mice were passively immunized with anti-T. crassiceps monoclonal antibodies and they showed PI up to 93,0%. According to the obtained results, crude and purified antigens of T. crassiceps were considered promising for murine immunization, especially when 18/14 antigen was used together with DODAB or aluminum hydroxide subcutaneously. The protective mechanisms have not been fully elucidated, however, showed trend towards Th1 response and dependent partial protection of IgG, as demonstrated by passive immunization assays.

O diagnóstico sorológico da cisticercose vem se destacando como uma fonte alternativa seguramente eficaz ao estudo da doença. Com a proposta de acessibilidade, devido primordialmente a relação custo, os testes ELISA são promissores à pesquisa sorológica de campo. O problema iminente está na utilização de extratos antigênicos capazes de gerar ao teste, parâmetros compatíveis para a pesquisa de anticorpos na população de baixa prevalência. Nesse contexto, o presente trabalho objetivou a avaliação de um teste ELISA com alto valor preditivo positivo (VPP) para a pesquisa de anticorpos anti-cisticercos de Taenia solium em inquéritos sorológicos na população geral. Os antígenos ensaiados foram proteína 18/14 kDa de líquido vesicular de T. crassiceps (18/14-Tcra), liquido vesicular de T. crassiceps (LV-Tcra) e total de cisticercos de T. solium (T-Tso), respectivamente estes constituíram os testes ELISA-18/14, ELISA-Tcra e ELISA-Tso. Foram ensaiadas 610 amostras de soro de indivíduos supostamente saudáveis e 20 amostras de soro de indivíduos com neurocisticercose confirmados por critérios clínicos e laboratoriais. Após os ensaios, o teste ELISA-18/14 apresentou sensibilidade e especificidade de 100% e mesmo em diferentes prováveis prevalências (0,1; 0,5; 1,0 e 5,0%) o VPP e o valor preditivo negativo (VPN) foram fixados também em 100%. A repetitividade das leituras do teste expressa em coeficiente de variação apresentou-se entre 16 e 18%. O teste ELISA-Tcra não demonstrou o mesmo desempenho, a especificidade foi calculada em 96,3% e o VPP variou entre 2,6 a 59,3% para prevalências de 0,1 a 5,0%; quanto à sensibilidade e VPN houve similaridade entre os resultados. O ELISATso apresentou resultados ainda menos expressivos, a especificidade foi calculada em 95,7% e o VPP variou entre 2,3 a 55% para as prevalências de 0,1 a 5,0%; essa redução na especificidade se dá pelo aumento do número de resultados falso-positivos no teste em conseqüência da expressão de proteínas de alto peso molecular. Através dos parâmetros avaliados fica notório o desempenho promissor do teste ELISA-18/14 na pesquisa de anticorpos anti-cisticercos de Taenia solium em inquéritos sorológicos da população geral. / The serum diagnosis of cyticercosis has been highlighted as an efficient alternative source in the study of the disease. With an accessability proposal , due to the expense, the ELISA´s tests are promising to the serum´s field research. This problem makes necessary the use of antigens extracts able to give the test, trusted and compatible parameters to the research of antibodies in the population of low prevalence. In this context, this current work stablished the evaluation of the ELISA´s test with a high predictive value positive(PPV) to the anti-cysticerci of Taenia solium antibodies research in a serum inquiry of the general population. The antigens tested were the 18/14 kDa protein of the vesicular liquid of T. crassiceps (18/14-Tcra), the vesicular liquid of T. crassiceps (LV-Tcra) and the total of T.solium (T-Tso). That constituted in the ELISA 18/14, ELISATcra and ELISA-Tso test respectively. There were 610 sample of serum were tested of healthy people and 20 samples of serum with confirmed neurocysticercosis by clinical and laboratorial criterias. After these tests, the ELISA´s test showed sensibility and specificity in 100% of the cases, even in different prevalences (0,1; 0,5; 1,0 and 5,0%) the VPP and the predictive value negative (VPN) were also fixed in 100%. The repetition of the test expressed in variation coefficient occurred between 16 and 18% of the cases. The ELISATcra didn´t show the same development, the specificity were calculation in 96,3% and the VPP wanted between 2,6 and 59,3% to the prevalences of 0,1 to 5,0%; there were similarities of the results of sensibility and VPP. The ELISA-Tso showed less important results the specificity was calculated in 95,7% and the VPP between 2,3 and 55,0% to the prevalences of 0,1 to 5,0%, this reduction of specificity is due to the increase of the number of false-positive results in the test because of the expression of proteins of high molecular weight. Through these parameters it´s clear the promising development of the ELISA-18/14 test, as been arbitrary in the studies of serology inquiry in the general population.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:02:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:35Z : No. of bitstreams: 1 000850071.pdf: 296366 bytes, checksum: 0092ffef0401dbd24a71d0e9e58e1398 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A cisticercose bovina é a principal causa de condenação de carcaças nas indústrias frigoríficas do Brasil, provocando grandes perdas econômicas na cadeia produtiva da carne. Até o momento, não há no Brasil uma vacina comercial ou a perspectiva de um anti-helmíntico mais eficaz para o controle desta parasitose. Este problema é agravado pelo sistema de produção da carne no Brasil e pelas características epidemiológicas desta zoonose, onde o homem assume importante papel na transmissão desta para o animal, dificultando seu controle. Embasado na perspectiva de obter melhor controle sobre esta enfermidade, o presente estudo objetivou avaliar a movimentação de bovinos e o mapa de ocorrência da cisticercose bovina no estado do Mato Grosso do Sul, através de dados das guias de Trânsito Animal, associados aos dados de abate e condenação de carcaças por cisticercose bovina do estado. O uso destas novas abordagens possibilitou visualizar a distribuição da doença, identificar áreas de maior ocorrência e sugerir medidas pontuais de controle, minimizando as perdas econômicas que esta provoca em sua cadeia de produção / Bovine cysticercosis is the main cause of carcass condemnation in the Brazilian beef cattle industry and it is responsible for large economic losses in the meat production chain. Up to now, there is no commercial vaccine in Brazil or a more effective anthelmintic to control this disease. This problem is impaired by the Brazilian beef cattle production system as well as by the epidemiological characteristics of this zoonosis, where the man plays an important role for its transmission to cattle. Based on the perspective of better controlling this disease. the present study aimed to construct a cattle movement network and a map of bovine cysticercosis ocurrecnce in the Mato Grosso do Sul state, based on data of the Animal Movement Permits and of bovine cysticercosis carcass condemnation. This approaches allowed us to analyze the diseases' distribution, to identify areas of high occurrence and to suggest punctual control measures minimizing the economic losses this disease causes in its production chain / CNPq: 485406/2011-0

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-05Bitstream added on 2015-05-14T16:59:06Z : No. of bitstreams: 1 000826915_20151206.pdf: 375653 bytes, checksum: adf2f78838ae81a4890f0a8019e9a279 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-12-07T09:44:40Z: 000826915_20151206.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-07T09:45:18Z : No. of bitstreams: 1 000826915.pdf: 1970838 bytes, checksum: 21816dd741b5f8f0d7c95dc3e252725a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Rede Nanobiotec / A cisticercose bovina é uma zoonose cosmopolita e presente nos rebanhos bovinos de corte no Brasil, que ocorre em países em desenvolvimento, onde a infraestrutura sanitária inadequada e as más práticas na criação de gado permitem a contaminação de pastagem e água com fezes humanas contendo ovos do parasita. Os prejuízos financeiros decorrem da condenação ou tratamento (salga ou da congelação) das carcaças infectadas, dependendo da intensidade da infecção. O diagnóstico da cisticercose bovina é realizado durante o abate, pela inspeção das carcaças e realização de cortes em locais de predileção do parasita como a língua, masseter, coração e diafragma. Assim, a fim de promover o diagnóstico ante-mortem e permitir o tratamento adequado de animais infectados, muitos estudos foram realizados utilizando-se técnicas de detecção de anticorpos ou antígenos em amostras de soro bovino. O teste ELISA baseado em anticorpos monoclonais (MAbs) para a detecção de antígeno circulante (Ag-ELISA) tem sido estudado, mas apresenta baixa sensibilidade em animais com infecção leve, e permite a sua realização apenas em laboratórios bem equipados. O uso de biossensores em medicina tem crescido nos últimos anos, permitindo a detecção e quantificação de metabólitos, bem como o uso de diversos biopolímeros como matriz de imobilização como quitosana e fibroína da seda. Imunossensores são biossensores cuja resposta bioquímica relaciona-se à interação antígeno-anticorpo, que podem ser utilizados para detectar anticorpos ou antígenos, tendo sido utilizados no diagnóstico de enfermidades. Nesta pesquisa, desenvolveu-se o primeiro imunossensor para o diagnóstico da cisticercose bovina, com filmes produzidos camada por camada (LbL) contendo um MAb dirigido contra antígeno bruto de metacestódeos de T. saginata (TAEB) e fibroína de seda (SF), imobilizados, que mostrou-se promissor ... / Bovine cysticercosis is a cosmopolitan zoonosis and very widespread in the Brazilian beef cattle. Cysticercosis usually occurs in developing countries, where poor sanitation and bad raising cattle practices allows the contamination of the pasture and water with human feces containing eggs. The financial losses are due to condemnation or treatment (salting or freezing) of infected carcasses, depending on the intensity of infection. Diagnosis of bovine cysticercosis is routinely done during slaughter by meat inspection of carcasses and incisions in predicted sites of muscles such as tongue, masseter, heart and diaphragm. Thus, in order to promote the ante-mortem diagnosis and allow appropriate treatment of infected animals, many studies have been performed using techniques to detect antibodies or antigens in bovine serum. ELISA using monoclonal antibodies (MAbs) for the detection of circulating antigen (Ag-ELISA) has been studied, but presents low sensitivity in animals with low parasite burden, and allows its realization only in well-equipped laboratories. The use of biosensors in medicine has grown in recent years, allowing detection and quantification of numerous metabolites, such as immobilization matrix having the most diverse biopolymers such as chitosan and silk fibroin. Immunosensors are biosensors which biochemical response is related to antigen-antibody interaction and can be used to detect antibodies or antigens, and has been tested for diseases diagnosis. In this research, we developed the first immunosensor for bovine cysticercosis diagnosis, produced with layer-by-layer (LbL) films containing a monoclonal antibody against crude Taenia saginata metacestode antigens (TAEB) and silk fibroin (SF) immobilized. Immunosensor showed to be a promising tool for further application in the ante-mortem bovine cysticercosis diagnosis

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-12Bitstream added on 2014-11-10T11:57:45Z : No. of bitstreams: 1 000790988.pdf: 3864323 bytes, checksum: 0d9d5a2b5347d82bb1f6537f75882016 (MD5) / Objetivou-se determinar os fatores epidemiológicos envolvidos com a ocorrência da cisticercose em propriedades fornecedoras de bovinos para um abatedouro-frigorífico exportador do Estado de São Paulo, Brasil, verificar o cumprimento quanto à adoção das Boas Práticas Agropecuárias (BPA) pelas propriedades aptas a exportação de carne bovina à União Europeia e realizar a estimativa de perda econômica aos pecuaristas devido às penalizações impostas pela indústria. Para isso, foram utilizados dados do Sistema de Inspeção Federal (SIF) de ocorrência da enfermidade, de acordo com origem da propriedade fornecedora durante o ano de 2012, avaliados estatisticamente pelos métodos do qui-quadrado ou teste exato de Fisher. Também foram elaborados mapas epidemiológicos da ocorrência da enfermidade em 106 propriedades através do Software Google Earth®. Ainda, através de um estudo do tipo caso-controle com aplicação de questionários em 48 propriedades, foram determinados os fatores de risco através da odds-ratio e seus limites, testados estatisticamente pelo teste exato de Fisher a 5% de significância. Determinou-se frequência de cisticercose em 2,26% entre o total de 190.903 bovinos abatidos, dos quais 34,54% dos cisticercos se apresentavam vivos. Foi estimada uma perda econômica de 709.533,00 reais aos pecuaristas. Observou-se diferença estatisticamente significativa entre os animais oriundos dos Estados de São Paulo (2,92%), Minas Gerais (1,81%), Goiás (0,71%) e Mato Grosso do Sul (1,11%). Pode-se determinar que os animais eram oriundos de 164 municípios e 556 propriedades, dos quais 81,71% (134/164) e 58,45% (325/556) respectivamente, registraram a enfermidade, demonstrando a ampla dispersão dessa zoonose. As propriedades habilitadas à exportação para a União Europeia apresentaram menor ocorrência com diferença estatística comparativamente àquelas não habilitadas ... / This study aimed to determine the epidemiological factors involved with the cysticercosis occurrence in cattle farms suppliers to an exporter slaughterhouse, located in São Paulo State, Brazil, check the enforcement of Good Agricultural Practices (GAP) adoption by the farms authorized to export for European Union and estimate the economic losses by the farmers due industries penalization. Was utilized data of the disease occurrence, from Federal Inspection Service (SIF) by the origin of the supplier farm during 2012, tested statistically by Chi Square Method or Fisher’s exact test. Was elaborated epidemiological maps of the disease occurrence in 106 farms by the Software Google Earth®. Also, by a case-control study with questionnaires interviews in 48 farms, was determined the epidemiological factors by the odds-ratio and corresponding limits, tested statistically by Fisher’s exact test at 5% significance. Was determined the cysticercosis frequency of 2.26% among the 190.903 bovines slaughtered in the period, which 34.54% were live. The economical lost estimated was 709.533,00 reals to the farmers at the study period. Significant statistical difference was observed among the animals from São Paulo (2.92%), Minas Gerais (1.81%), Goiás (0.71%) e Mato Grosso do Sul (1.11%) States. Could be determined that the animals were from 164 county and 556 farms, which 81.71% (134/64) and 58.45% (325/556) respectively, registered the disease, demonstrating the cysticercosis wide dispersion. The European Union apt farms evidenced fewer occurrence with statistical difference comparatively to those inapt to this market, demonstrating that prophylactic measures are better implanted. Through epidemiological maps was observed a farm with high occurrence concentration next the Represa de Promissão (Rio Tietê), Represa de Água Vermelha (Rio Grande) e Represa de Itumbiara (Rio Paranaíba), regions known ...

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-04. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:09Z : No. of bitstreams: 1 000870647.pdf: 1368263 bytes, checksum: dbbed6b733deb8dc0c8f5c1073fd25c8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Taenia saginata representa uma ameaça à segurança alimentar e à saúde pública devido à infecção pela ingestão de carne mal cozida e contaminada. Esta zoonose está amplamente distribuída, afetando humanos, os hospedeiros definitivos, e bovinos, hospedeiros intermediários. Além disto, a cisticercose bovina é responsável por perdas econômicas significativas devido à condenação de carcaças infectadas. A estratégia fundamental para o controle do complexo teníase-cisticercose consiste em interromper o ciclo evolutivo do parasita, evitando assim a infecção nos animais e no homem. Assim, a principal medida praticada no Brasil tem sido a inspeção de carcaças durante o abate, a qual é também a forma mais comum de diagnóstico. A insuficiente informação molecular de T. saginata tem dificultado o avanço das pesquisas para o aprimoramento de testes diagnósticos, o desenvolvimento de vacinas e a identificação de novas drogas para tratamento. Com o intuito de adquirir informação sobre o estágio de desenvolvimento metacestóide do parasita, foi utilizada a tecnologia de RNAseq para a montagem do transcriptoma de metacestóide de T. saginata. Estes dados serão úteis para estudos futuros envolvendo triagem para diagnóstico e marcadores imunoprofiláticos para a cisticercose bovina / Taenia saginata represents a threat to food security and public health in consequence of human infection by ingestion of contaminated undercooked meat. This zoonosis is worldwide distributed, affecting human, definitive host, and bovine, intermediate host. Besides, bovine cysticercosis is responsible for significant economic losses due to the condemnation of infected carcasses. The main strategy to control taeniasis-cysticercosis complex consists of interrupting the parasite's biological cycle, thus preventing human and animal infection. Therefore, in Brasil the main control measure has been the carcass inspection during the slaughter, which is also the most common diagnostic practice. Insufficient T. saginata molecular information makes difficult consistent advances to the improvement of diagnostic tests, vaccine development and the identification of new drugs for treatment. In order to gain insights about the parasite's metacestode developmental stage, RNAseq technology was used to assemble the whole transcriptome of a T. saginata metacestode. These data will also be useful for the next generation screening studies of diagnostic and immunoprophylatic markers for bovine cysticercosis

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-02Bitstream added on 2014-06-13T18:39:10Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_jcv_me_botfmvz.pdf: 876846 bytes, checksum: 0964099d5611eb445b184c0c142d8ec3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A cisticercose é uma das principais causas de perdas econômicas na pecuária de corte brasileira devido às condenações da carne para o controle do complexo teníase-cisticercose. O tratamento quimioterápico pode ser utilizado para o controle da infecção nos animais, mas sua eficácia deve ser monitorada por testes de diagnóstico que detectem parasitas vivos ou seus produtos. Na presente pesquisa, anticorpos monoclonais contra antígenos totais (TAEB) e de fluido vesicular (TAEF) de metacestóides de Taenia saginata foram produzidos através de fusão celular, utilizando-se células de baço de camundongos BALB/c imunizados. Cinco fusões TAEB e quatro TAEF foram realizadas e os sobrenadantes de cultura foram triados por teste ELISA indireto. Dez e nove híbridos pertencentes aos protocolos TAEB e TAEF, respectivamente, foram selecionados e clonados. As linhagens celulares clonadas foram mantidas em meio de cultura para a obtenção dos anticorpos monoclonais, resultando em 18 clones IgG1 e 32 IgM reativos para TAEB e 9 IgG1 e 9 IgM para TAEF. Dentre esses clones, 5 do protocolo TAEB e 5 TAEF foram selecionados para produção de líquido ascítico, através da injeção dos clones em camundongos BALB/c. A avaliação da identificação antigênica dos anticorpos produzidos aos antígenos homólogos foi realizada por meio de western blotting, resultando em reatividade com frações protéicas de baixo peso molecular (< 18kDa), 43, 55, 66 e 100kDa. A imunofluorescência indireta demonstrou que os anticorpos monoclonais avaliados reconhecem antígenos presentes tanto do escólex quanto da membrana vesicular de metacestóides de bovinos naturalmente infectados. Os anticorpos monoclonais produzidos poderão ser utilizados para detecção de antígenos circulantes na avaliação da eficácia do tratamento de bovinos infectados, evitando assim perdas econômicas e danos à saúde pública. / Cysticercosis is a major cause of economic losses in the Brazilian bovine chain production due to meat condemnation for the taeniasis-cysticercosis complex control. Chemotherapy can be used to control infection in cattle but treatment efficacy should be monitored by diagnostic tests that can detect live parasites or their products. Monoclonal antibodies against Taenia saginata metacestode crude (TAEB) and cyst fluid (TAEF) antigens were produced by cell fusion procedures using spleen cells from immunized BALB / c mice. Five TAEB and four TAEF fusions were performed and the culture supernatants from these cell cultures were screened by indirect ELISA assay. Ten TAEB and nine TAEF hybrids were selected and cloned. Cloned cell lines were grown in culture medium to collect the monoclonal antibodies, resulting in 18 IgG1 and 32 IgM clones reactive to TAEB and 9 IgG1 and 9 IgM clones reactive to TAEF. Five TAEB and five TAEB clones were selected for ascitic fluid production by injection in BALB/c mice and further harvesting. Western blotting was performed to test the antigenic identification by the antibodies produced resulting in reactivity to protein fractions of low molecular weight (<18kDa) and to 43, 55, 66 and 100kDa. The indirect immunofluorescence test showed that monoclonal antibodies recognize antigens from both the scolex and the bladder wall of metadestodes from naturally infected bovine. The monoclonal antibodies obtained can be useful for detection of circulant antigens in treatment efficacy evaluation preventing economic losses and public health injury.

Orientador: Luiz Francisco Prata / Banca: Ana Maria Centola Vidal Martins / Banca: Iucif Abrão Nascif Júnior / Resumo: Objetivou-se determinar os fatores epidemiológicos envolvidos com a ocorrência da cisticercose em propriedades fornecedoras de bovinos para um abatedouro-frigorífico exportador do Estado de São Paulo, Brasil, verificar o cumprimento quanto à adoção das Boas Práticas Agropecuárias (BPA) pelas propriedades aptas a exportação de carne bovina à União Europeia e realizar a estimativa de perda econômica aos pecuaristas devido às penalizações impostas pela indústria. Para isso, foram utilizados dados do Sistema de Inspeção Federal (SIF) de ocorrência da enfermidade, de acordo com origem da propriedade fornecedora durante o ano de 2012, avaliados estatisticamente pelos métodos do qui-quadrado ou teste exato de Fisher. Também foram elaborados mapas epidemiológicos da ocorrência da enfermidade em 106 propriedades através do Software Google Earth®. Ainda, através de um estudo do tipo caso-controle com aplicação de questionários em 48 propriedades, foram determinados os fatores de risco através da odds-ratio e seus limites, testados estatisticamente pelo teste exato de Fisher a 5% de significância. Determinou-se frequência de cisticercose em 2,26% entre o total de 190.903 bovinos abatidos, dos quais 34,54% dos cisticercos se apresentavam vivos. Foi estimada uma perda econômica de 709.533,00 reais aos pecuaristas. Observou-se diferença estatisticamente significativa entre os animais oriundos dos Estados de São Paulo (2,92%), Minas Gerais (1,81%), Goiás (0,71%) e Mato Grosso do Sul (1,11%). Pode-se determinar que os animais eram oriundos de 164 municípios e 556 propriedades, dos quais 81,71% (134/164) e 58,45% (325/556) respectivamente, registraram a enfermidade, demonstrando a ampla dispersão dessa zoonose. As propriedades habilitadas à exportação para a União Europeia apresentaram menor ocorrência com diferença estatística comparativamente àquelas não habilitadas ... / Abstract: This study aimed to determine the epidemiological factors involved with the cysticercosis occurrence in cattle farms suppliers to an exporter slaughterhouse, located in São Paulo State, Brazil, check the enforcement of Good Agricultural Practices (GAP) adoption by the farms authorized to export for European Union and estimate the economic losses by the farmers due industries penalization. Was utilized data of the disease occurrence, from Federal Inspection Service (SIF) by the origin of the supplier farm during 2012, tested statistically by Chi Square Method or Fisher's exact test. Was elaborated epidemiological maps of the disease occurrence in 106 farms by the Software Google Earth®. Also, by a case-control study with questionnaires interviews in 48 farms, was determined the epidemiological factors by the odds-ratio and corresponding limits, tested statistically by Fisher's exact test at 5% significance. Was determined the cysticercosis frequency of 2.26% among the 190.903 bovines slaughtered in the period, which 34.54% were live. The economical lost estimated was 709.533,00 reals to the farmers at the study period. Significant statistical difference was observed among the animals from São Paulo (2.92%), Minas Gerais (1.81%), Goiás (0.71%) e Mato Grosso do Sul (1.11%) States. Could be determined that the animals were from 164 county and 556 farms, which 81.71% (134/64) and 58.45% (325/556) respectively, registered the disease, demonstrating the cysticercosis wide dispersion. The European Union apt farms evidenced fewer occurrence with statistical difference comparatively to those inapt to this market, demonstrating that prophylactic measures are better implanted. Through epidemiological maps was observed a farm with high occurrence concentration next the Represa de Promissão (Rio Tietê), Represa de Água Vermelha (Rio Grande) e Represa de Itumbiara (Rio Paranaíba), regions known ... / Mestre

Resumo: A cisticercose bovina é a principal causa de condenação de carcaças nas indústrias frigoríficas do Brasil, provocando grandes perdas econômicas na cadeia produtiva da carne. Até o momento, não há no Brasil uma vacina comercial ou a perspectiva de um anti-helmíntico mais eficaz para o controle desta parasitose. Este problema é agravado pelo sistema de produção da carne no Brasil e pelas características epidemiológicas desta zoonose, onde o homem assume importante papel na transmissão desta para o animal, dificultando seu controle. Embasado na perspectiva de obter melhor controle sobre esta enfermidade, o presente estudo objetivou avaliar a movimentação de bovinos e o mapa de ocorrência da cisticercose bovina no estado do Mato Grosso do Sul, através de dados das guias de Trânsito Animal, associados aos dados de abate e condenação de carcaças por cisticercose bovina do estado. O uso destas novas abordagens possibilitou visualizar a distribuição da doença, identificar áreas de maior ocorrência e sugerir medidas pontuais de controle, minimizando as perdas econômicas que esta provoca em sua cadeia de produção / Abstract: Bovine cysticercosis is the main cause of carcass condemnation in the Brazilian beef cattle industry and it is responsible for large economic losses in the meat production chain. Up to now, there is no commercial vaccine in Brazil or a more effective anthelmintic to control this disease. This problem is impaired by the Brazilian beef cattle production system as well as by the epidemiological characteristics of this zoonosis, where the man plays an important role for its transmission to cattle. Based on the perspective of better controlling this disease. the present study aimed to construct a cattle movement network and a map of bovine cysticercosis ocurrecnce in the Mato Grosso do Sul state, based on data of the Animal Movement Permits and of bovine cysticercosis carcass condemnation. This approaches allowed us to analyze the diseases' distribution, to identify areas of high occurrence and to suggest punctual control measures minimizing the economic losses this disease causes in its production chain / Orientador: CarisMaroni Nunes / Banca: José Henrique de Hildebrando e Grisi Filho / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Fernando Paiva / Banca: Luzia Helena Queiroz / Doutor

Orientador: Germano Francisco Biondi / Coorientador: Elenice Deffune / Banca: Cáris Maroni Nunes / Banca: Márjorie de Assis Golim / Banca: Marli Leite de Moraes / Banca: Milton Hissashi Yamamura / Resumo: A cisticercose bovina é uma zoonose cosmopolita e presente nos rebanhos bovinos de corte no Brasil, que ocorre em países em desenvolvimento, onde a infraestrutura sanitária inadequada e as más práticas na criação de gado permitem a contaminação de pastagem e água com fezes humanas contendo ovos do parasita. Os prejuízos financeiros decorrem da condenação ou tratamento (salga ou da congelação) das carcaças infectadas, dependendo da intensidade da infecção. O diagnóstico da cisticercose bovina é realizado durante o abate, pela inspeção das carcaças e realização de cortes em locais de predileção do parasita como a língua, masseter, coração e diafragma. Assim, a fim de promover o diagnóstico ante-mortem e permitir o tratamento adequado de animais infectados, muitos estudos foram realizados utilizando-se técnicas de detecção de anticorpos ou antígenos em amostras de soro bovino. O teste ELISA baseado em anticorpos monoclonais (MAbs) para a detecção de antígeno circulante (Ag-ELISA) tem sido estudado, mas apresenta baixa sensibilidade em animais com infecção leve, e permite a sua realização apenas em laboratórios bem equipados. O uso de biossensores em medicina tem crescido nos últimos anos, permitindo a detecção e quantificação de metabólitos, bem como o uso de diversos biopolímeros como matriz de imobilização como quitosana e fibroína da seda. Imunossensores são biossensores cuja resposta bioquímica relaciona-se à interação antígeno-anticorpo, que podem ser utilizados para detectar anticorpos ou antígenos, tendo sido utilizados no diagnóstico de enfermidades. Nesta pesquisa, desenvolveu-se o primeiro imunossensor para o diagnóstico da cisticercose bovina, com filmes produzidos camada por camada (LbL) contendo um MAb dirigido contra antígeno bruto de metacestódeos de T. saginata (TAEB) e fibroína de seda (SF), imobilizados, que mostrou-se promissor ... / Abstract: Bovine cysticercosis is a cosmopolitan zoonosis and very widespread in the Brazilian beef cattle. Cysticercosis usually occurs in developing countries, where poor sanitation and bad raising cattle practices allows the contamination of the pasture and water with human feces containing eggs. The financial losses are due to condemnation or treatment (salting or freezing) of infected carcasses, depending on the intensity of infection. Diagnosis of bovine cysticercosis is routinely done during slaughter by meat inspection of carcasses and incisions in predicted sites of muscles such as tongue, masseter, heart and diaphragm. Thus, in order to promote the ante-mortem diagnosis and allow appropriate treatment of infected animals, many studies have been performed using techniques to detect antibodies or antigens in bovine serum. ELISA using monoclonal antibodies (MAbs) for the detection of circulating antigen (Ag-ELISA) has been studied, but presents low sensitivity in animals with low parasite burden, and allows its realization only in well-equipped laboratories. The use of biosensors in medicine has grown in recent years, allowing detection and quantification of numerous metabolites, such as immobilization matrix having the most diverse biopolymers such as chitosan and silk fibroin. Immunosensors are biosensors which biochemical response is related to antigen-antibody interaction and can be used to detect antibodies or antigens, and has been tested for diseases diagnosis. In this research, we developed the first immunosensor for bovine cysticercosis diagnosis, produced with layer-by-layer (LbL) films containing a monoclonal antibody against crude Taenia saginata metacestode antigens (TAEB) and silk fibroin (SF) immobilized. Immunosensor showed to be a promising tool for further application in the ante-mortem bovine cysticercosis diagnosis / Doutor