Made available in DSpace on 2017-07-10T14:17:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao -16.pdf: 1891470 bytes, checksum: 1b28975beba2d1e4f43d3a0f9f79a9aa (MD5) Previous issue date: 2014-02-11 / Bombyx mori is an insect of the order Lepidoptera that is only found only in germplasm banks; it is used in scientific research and for commercial purposes. In the latter case, the silk cocoon, which is produced at the end of the 5th larval instar, is used in the production of various yarns and fabrics. This branch of Brazilian agribusiness, known as sericulture, is well developed in the state of Paraná, where it is a form of small-scale family farming. Several factors impact negatively on Brazilian sericulture, such as diseases during rearing, and B. mori is susceptible to a virus from the Baculoviridae family, namely, Bombyx mori multiple nucleopolyhedrovirus (BmMNPV), genus Alphabaculovirus (AlphaBV), which infects the larvae and jeopardises commercial production of the cocoon, causing losses to farmers and industry. Studies have proved that BmMNPV is polyorganotropic and there are several target organs, such as the tracheal system; however, details of its cytopathology are not known. The tracheal system is responsible for the aeration of the tissues of the insect. Thus, the present study aimed to describe the cytopathology of the tracheas of hybrid larvae of B. Mori, infected experimentally with BmMNPV, and isolated geographically in the state of Paraná. Fifth instar hybrid larvae were divided into two groups; one control, and the other inoculated. After ingestion, and on different days post-inoculation (dpi), from the 2nd to the 9th dpi, the larvae were anesthetized and dissected. Segments of organs such as the integument, muscle and silk gland, containing branches of the trachea, were collected and fixed in Karnovsky modified for transmission electron microscopy. On the 2st dpi, fresh hemolymph analysis was conducted in order to determine the susceptibility of the hemocytes. The results revealed that the hemocytes were infected from the 2nd dpi and the epithelial cells of the trachea were infected from the 4th dpi. The cytopathology of the tracheal cells showed hypertrophic nucleus, containing the viroplasm, the site of the synthesis of the nucleocapsids. Subsequently, the formation and development of the polyhedra occured, accentuating the nuclear hypertrophy and culminating in cell lysis. Virions were also observed, immersed in the basal lamina of the trachea, which appeared to be disorganized. Thus, the cytopathology of the trachea was consistent with the infection caused by AlphaBV, and the data that was obtained provides a better understanding of the infectious cycle of BmMNPV in the body of the insect. The time of infection, later for the hemocytes, and the presence of virions in the basal lamina of the trachea, indicated that this system is a secondary target for infection, and also that the hemolymph is an important dispersant of viral infection / Bombyx mori é um inseto da ordem Lepidoptera encontrado somente em bancos de germoplasma, sendo utilizado em pesquisas científicas e para fins comerciais. Neste caso, seu casulo de seda, construído ao final do 5º instar larval, é usado na produção de diversos fios e tecidos. Este ramo da agroindústria brasileira, conhecido como sericicultura, se apresenta bem desenvolvido no Estado do Paraná, estando incluído no programa de agricultura familiar. Vários são os fatores que exercem influência na sericicultura nacional, como as doenças, e B. mori é susceptível a um vírus da família Baculoviridae, o Bombyx mori multiple nucleopolyhedrovirus (BmMNPV), gênero Alphabaculovirus (AlphaBV). Ao infectar as lagartas o vírus compromete a produção comercial do casulo, causando prejuízos aos produtores rurais e a indústria. Estudos comprovam que o BmMNPV é poliorganotrófico e vários são os órgãos-alvos, como o sistema traqueal; entretanto, detalhes de sua citopatologia não são conhecidos. O sistema traqueal é responsável pela aeração dos tecidos do inseto e o presente estudo objetivou descrever a citopatologia das traqueias de lagartas híbridas de B. mori infectadas experimentalmente pelo BmMNPV, isolado geográfico do Paraná. Para tanto, lagartas híbridas de 5º instar foram divididas em dois grupos, controle e inoculado. Neste, o inóculo viral foi fornecido na alimentação e em diferentes dias pós-inoculação (dpi), do 2º ao 9º dpi, as lagartas foram anestesiadas e dissecadas; segmentos do tegumento, músculo e glândula da seda, contendo ramos da traqueia, foram coletados e fixados em Karnovsky modificado para a microscopia eletrônica de transmissão. No 2º dpi foi efetuada análise a fresco da hemolinfa, para averiguar a susceptibilidade dos hemócitos. Os resultados revelaram que os hemócitos se apresentaram infectados a partir do 2º dpi e as células epiteliais da traqueia a partir do 4° dpi. A citopatologia das células traqueais revelou núcleo hipertrófico, contendo o viroplasma, que é o local de síntese dos nucleocapsídeos. Posteriormente, houve a formação e o desenvolvimento dos poliedros, acentuando-se a hipertrofia nuclear e culminando com a citólise. Vírions também foram visualizados na lâmina basal da traqueia, que se apresentou desorganizada. Assim, a citopatologia da traqueia condiz com a infecção causada por AlphaBV, e as informações obtidas permitem um melhor entendimento do ciclo infeccioso do BmMNPV no corpo do inseto. O tempo de infecção, posterior ao dos hemócitos, e a presença de vírions na lâmina basal da traqueia, indicam que este sistema é alvo secundário e, ainda, que a hemolinfa se apresenta como um importante dispersor da infecção viral.

Inúmeros fatores estão relacionados ao desenvolvimento do câncer, no caso das neoplasias de boca, o tecido epitelial esta constantemente em contato com diversos carcinógenos. O objetivo deste estudo é avaliar as alterações citopatológicas de três sítios anatômicos da mucosa bucal normal com maior risco para o desenvolvimento do câncer de boca e expostas aos agentes carcinógenos presentes no fumo e no álcool. Foram considerados 3 sítios anatômicos de maior prevalência de câncer bucal. A amostra foi constituída de 68 indivíduos, sendo 21 do grupo controle, 28 do grupo fumo e 19 do grupo fumo/álcool. A avaliação qualitativa através da classificação de Papanicolaou, bem como o Sistema de Bethesda, 2001 Modificado não apresentaram sensibilidade suficiente para detectar alterações incipientes na mucosa bucal, nos sítios anatômicos estudados expostos ao fumo, ao álcool, ou ambos. Na avaliação do padrão de maturação celular, apesar da constatação de alteração na borda da língua de fumantes e no lábio inferior e assoalho de boca de indivíduos que fumam e consomem bebidas alcoólicas diariamente, a variação do padrão de maturação celular foi aleatória não sendo os resultados conclusivos para a detecção de alterações incipientes nos sítios anatômicos estudados da mucosa bucal normal de indivíduos expostos ao álcool e ao fumo. A técnica de micronúcleos foi capaz de detectar uma tendência no aumento de micronúcleos nos indivíduos expostos ao fumo e/ou álcool na mucosa bucal de todos os sítios anatômicos.

Proposição: Avaliar a associação entre as condições de saúde bucal, fatores comportamentais e sociodemográficos e o padrão citopatológico da mucosa bucal de homens adultos. Correlacionando o padrão citopatológico quantitativo e qualitativo com as variáveis bucais e sociodemográficas. Materiais e Métodos: A partir de dois esfregaços, um da borda da língua e outro do assoalho bucal de 117 homens com mais de 25 anos, foram quantificadas cem células de cada. As células foram coradas pelo método Papanicolaou modificado e classificadas em: Escamas, células superficiais com núcleo, células intermediárias e células parabasais. Variáveis sociodemográficas e comportamentais foram coletadas a partir de um questionário estruturado. Índice CPO-D e uso de próteses foram registradas a partir de um exame clínico intra-oral.As análises foram conduzidas utilizando o pacote estatístico Stata versão 10. O indivíduo foi considerado a unidade analítica. O nível de significância foi estabelecido em 5%. Resultados: No total das células na borda da língua, 75% eram intermediárias, 20% superficiais com núcleo e 5% escamas, sendo que células parabasais foram raramente observadas. Não foram observadas diferenças significativas para todas as variáveis em estudo em todos os tipos celulares, com exceção da ingestão de bebidas alcoólicas.Observou-se percentual significativamente maior de escamas e células superficiais com núcleo nos indivíduos que ingeriam de álcool comparados aos que não ingerem. Para as células intermediárias, o percentual foi significativamente menor nos indivíduos que bebem comparados aos que não bebem. Um padrão semelhante de distribuição celular foi observado no assoalho de boca. O consumo de álcool foi o único fator comportamental que influenciou significativamente no padrão citológico da mucosa bucal dos indivíduos analisados nos modelos multivariados. Conclusões: Foi encontrada associação entre um dos fatores comportamentais (o álcool) e o padrão citopatológico da mucosa bucal de homens adultos. As demais variáveis estudadas não apresentaram associação significativa com o padrão de descamação da mucosa bucal normal com a técnica utilizada. / Proposition: To evaluate the association between oral health status, socio- demographic and behavioral factors and standard cytology of the oral mucosa of adult men. Correlating the standard cytopathology quantitative and qualitative with oral and sociodemographic variables. Materials and Methods: From two smears, one edge of the tongue and other oral floor of 117 men over 25 years old, were quantified hundred cells each. Cells were stained with modified Papanicolaou method and classified into: Scales, superficial cells with nuclei, intermediate and parabasal cells. Sociodemographic and behavioral variables were collected from a structured questionnaire. DMFT index and use of prostheses were recorded from a clinical intra - oral.As analyzes were conducted using Stata version 10. The individual was considered the analytical unit. The level of significance was set at 5 %. Results: In total cells at the edge of the tongue 75% were intermediate, 20% core surface scales and 5%, and parabasal cells were rarely observed. No significant differences were observed for all study variables in all cell types, with the exception of beverage intake alcoólicas.Observou is significantly greater percentage of scales and superficial cells in the core subjects ingestores alcohol compared to those who do not drink. For intermediate cells, the percentage was significantly lower in individuals who drink compared to those who do not drink. A similar pattern of cell distribution was observed in the floor of mouth. Alcohol consumption was the only factor that significantly influenced the behavioral cytology of the oral mucosa of individuals analyzed in the multivariate models. Conclusions: An association between a behavioral factor (alcohol) and standard cytology of the oral mucosa of adult men. The other variables were not significantly associated with the default scaling of normal oral mucosa with the technique used.

Inúmeros fatores estão relacionados ao desenvolvimento do câncer, no caso das neoplasias de boca, o tecido epitelial esta constantemente em contato com diversos carcinógenos. O objetivo deste estudo é avaliar as alterações citopatológicas de três sítios anatômicos da mucosa bucal normal com maior risco para o desenvolvimento do câncer de boca e expostas aos agentes carcinógenos presentes no fumo e no álcool. Foram considerados 3 sítios anatômicos de maior prevalência de câncer bucal. A amostra foi constituída de 68 indivíduos, sendo 21 do grupo controle, 28 do grupo fumo e 19 do grupo fumo/álcool. A avaliação qualitativa através da classificação de Papanicolaou, bem como o Sistema de Bethesda, 2001 Modificado não apresentaram sensibilidade suficiente para detectar alterações incipientes na mucosa bucal, nos sítios anatômicos estudados expostos ao fumo, ao álcool, ou ambos. Na avaliação do padrão de maturação celular, apesar da constatação de alteração na borda da língua de fumantes e no lábio inferior e assoalho de boca de indivíduos que fumam e consomem bebidas alcoólicas diariamente, a variação do padrão de maturação celular foi aleatória não sendo os resultados conclusivos para a detecção de alterações incipientes nos sítios anatômicos estudados da mucosa bucal normal de indivíduos expostos ao álcool e ao fumo. A técnica de micronúcleos foi capaz de detectar uma tendência no aumento de micronúcleos nos indivíduos expostos ao fumo e/ou álcool na mucosa bucal de todos os sítios anatômicos.

Inúmeros fatores estão relacionados ao desenvolvimento do câncer, no caso das neoplasias de boca, o tecido epitelial esta constantemente em contato com diversos carcinógenos. O objetivo deste estudo é avaliar as alterações citopatológicas de três sítios anatômicos da mucosa bucal normal com maior risco para o desenvolvimento do câncer de boca e expostas aos agentes carcinógenos presentes no fumo e no álcool. Foram considerados 3 sítios anatômicos de maior prevalência de câncer bucal. A amostra foi constituída de 68 indivíduos, sendo 21 do grupo controle, 28 do grupo fumo e 19 do grupo fumo/álcool. A avaliação qualitativa através da classificação de Papanicolaou, bem como o Sistema de Bethesda, 2001 Modificado não apresentaram sensibilidade suficiente para detectar alterações incipientes na mucosa bucal, nos sítios anatômicos estudados expostos ao fumo, ao álcool, ou ambos. Na avaliação do padrão de maturação celular, apesar da constatação de alteração na borda da língua de fumantes e no lábio inferior e assoalho de boca de indivíduos que fumam e consomem bebidas alcoólicas diariamente, a variação do padrão de maturação celular foi aleatória não sendo os resultados conclusivos para a detecção de alterações incipientes nos sítios anatômicos estudados da mucosa bucal normal de indivíduos expostos ao álcool e ao fumo. A técnica de micronúcleos foi capaz de detectar uma tendência no aumento de micronúcleos nos indivíduos expostos ao fumo e/ou álcool na mucosa bucal de todos os sítios anatômicos.

Proposição: Avaliar a associação entre as condições de saúde bucal, fatores comportamentais e sociodemográficos e o padrão citopatológico da mucosa bucal de homens adultos. Correlacionando o padrão citopatológico quantitativo e qualitativo com as variáveis bucais e sociodemográficas. Materiais e Métodos: A partir de dois esfregaços, um da borda da língua e outro do assoalho bucal de 117 homens com mais de 25 anos, foram quantificadas cem células de cada. As células foram coradas pelo método Papanicolaou modificado e classificadas em: Escamas, células superficiais com núcleo, células intermediárias e células parabasais. Variáveis sociodemográficas e comportamentais foram coletadas a partir de um questionário estruturado. Índice CPO-D e uso de próteses foram registradas a partir de um exame clínico intra-oral.As análises foram conduzidas utilizando o pacote estatístico Stata versão 10. O indivíduo foi considerado a unidade analítica. O nível de significância foi estabelecido em 5%. Resultados: No total das células na borda da língua, 75% eram intermediárias, 20% superficiais com núcleo e 5% escamas, sendo que células parabasais foram raramente observadas. Não foram observadas diferenças significativas para todas as variáveis em estudo em todos os tipos celulares, com exceção da ingestão de bebidas alcoólicas.Observou-se percentual significativamente maior de escamas e células superficiais com núcleo nos indivíduos que ingeriam de álcool comparados aos que não ingerem. Para as células intermediárias, o percentual foi significativamente menor nos indivíduos que bebem comparados aos que não bebem. Um padrão semelhante de distribuição celular foi observado no assoalho de boca. O consumo de álcool foi o único fator comportamental que influenciou significativamente no padrão citológico da mucosa bucal dos indivíduos analisados nos modelos multivariados. Conclusões: Foi encontrada associação entre um dos fatores comportamentais (o álcool) e o padrão citopatológico da mucosa bucal de homens adultos. As demais variáveis estudadas não apresentaram associação significativa com o padrão de descamação da mucosa bucal normal com a técnica utilizada. / Proposition: To evaluate the association between oral health status, socio- demographic and behavioral factors and standard cytology of the oral mucosa of adult men. Correlating the standard cytopathology quantitative and qualitative with oral and sociodemographic variables. Materials and Methods: From two smears, one edge of the tongue and other oral floor of 117 men over 25 years old, were quantified hundred cells each. Cells were stained with modified Papanicolaou method and classified into: Scales, superficial cells with nuclei, intermediate and parabasal cells. Sociodemographic and behavioral variables were collected from a structured questionnaire. DMFT index and use of prostheses were recorded from a clinical intra - oral.As analyzes were conducted using Stata version 10. The individual was considered the analytical unit. The level of significance was set at 5 %. Results: In total cells at the edge of the tongue 75% were intermediate, 20% core surface scales and 5%, and parabasal cells were rarely observed. No significant differences were observed for all study variables in all cell types, with the exception of beverage intake alcoólicas.Observou is significantly greater percentage of scales and superficial cells in the core subjects ingestores alcohol compared to those who do not drink. For intermediate cells, the percentage was significantly lower in individuals who drink compared to those who do not drink. A similar pattern of cell distribution was observed in the floor of mouth. Alcohol consumption was the only factor that significantly influenced the behavioral cytology of the oral mucosa of individuals analyzed in the multivariate models. Conclusions: An association between a behavioral factor (alcohol) and standard cytology of the oral mucosa of adult men. The other variables were not significantly associated with the default scaling of normal oral mucosa with the technique used.

Orientador: Luiz Carlos Zeferino / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T18:05:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_CarlosAndreSchelerde_M.pdf: 262283 bytes, checksum: b4d28afb55af4cda2a72bdaf7b772251 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Atualmente, o manejo preconizado para a neoplasia intra-epitelial cervical grau 1 (NIC1) é expectante. No entanto, a biópsia colpodirigida com este resultado nem sempre representa a totalidade da lesão presente na avaliação inicial, momento em que será decidida a conduta, pois os métodos propedêuticos utilizados rotineiramente podem deixar de diagnosticar lesões de maior grau. A probabilidade de falhas nesta avaliação pode estar relacionada à idade, tabagismo ou achados colposcópicos. Objetivo: Avaliar fatores associados a possíveis falhas da biópsia colpodirigida em mulheres portadoras de LIE-BG no rastreamento do colo do útero. Sujeitos e Métodos: este estudo envolveu mulheres referenciadas em um ambulatório no Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher da Universidade Estadual de Campinas, de janeiro de 2003 a março de 2006, sendo desenvolvidos dois trabalhos. O primeiro analisou o diagnóstico histológico inicial por grupo etário de mulheres com citologia oncológica de rastreamento mostrando lesão intra-epitelial de baixo grau. O segundo analisou a prevalência de NIC 2 ou lesões mais graves em mulheres submetidas à cone do colo uterino, com diagnóstico histológico prévio de NIC 1 obtido por biópsia dirigida por colposcopia. Resultados: Foram analisadas 825 mulheres no primeiro artigo. Destas, 10% (82) apresentaram resultado histológico do tipo NIC 2 ou de maior gravidade, mas a freqüência deste resultado não variou com o aumento da idade. Outras 256 (31%) não foram submetidas à biópsia por não apresentarem lesão suspeita, sendo que a freqüência destas mulheres tendeu a aumentar com a idade. No segundo artigo, a prevalência de 19% de resultados NIC 2 ou de maior gravidade foi obtida na análise histológica do cone de colo uterino. No entanto, este achado não se associou com idade, hábito de fumar ou tamanho da lesão colposcópica. Conclusão: A maioria das mulheres com LIE-BG não apresentou lesões mais graves do que NIC 1 na avaliação inicial, embora tenha existido uma prevalência relevante de resultados histológicos NIC 2 e NIC 3, considerando-se os dois estudos realizados. Esta prevalência não foi maior nas mulheres com idade mais avançada, podendo a conduta expectante ser adotada neste grupo etário. Também não houve associação entre hábito de fumar, achados colposcópicos e presença de NIC 2 ou NIC 3 em mulheres com biópsia prévia indicando NIC 1. Assim, o principal fato a ser considerado para a adoção da conduta expectante é a garantia de que haverá adesão ao seguimento. Caso contrário, recomenda-se encaminhar imediatamente para avaliação colposcópica / Abstract: Currently, the recommended management for cervical intraepithelial neoplasia grade 1 (CIN 1) is conservative. However, the histological diagnosis defined by colposcopy-guided biopsy could not represent all the lesions that exist at the time of initial evaluation, because the usual diagnostic methods would not detect higher-grade lesions. Age, smoking and colposcopic findings could be related to fails of this initial evaluation. Objectives: to evaluate associated factors to failures on diagnoses defined by colposcopy-guided biopsy in women with lowgrade squamous lesions (LSIL). Subjects and Methods: this study analyzed 825 women evaluated from January 2003 to March 2006 in the State University of Campinas (UNICAMP), Brazil. As result, two papers were made. The first analyzed the histological diagnosis of women with LSIL by age. The second analyzed the prevalence of CIN2 or more severe lesion at the LEEP in women previously diagnosed as CIN 1 by colposcopy-guided biopsy. Results: In the first paper, 10% of the women had CIN 2 or more severe lesion, but this result had not associated with age. In the other paper, a 19% prevalence of CIN 2 was found at the histological analysis of the LEEP. However, this finding did not had associated with age, smoking or colposcopic findings. Conclusion: The majority of the analyzed women with LSIL did not have higher-grade lesion at initial evaluation, yet the prevalence of CIN 2 or CIN 3 was relevant. This prevalence had not increased with age. Either, there was not association between smoking, colposcopic findings and CIN 2 or CIN 3 diagnosis in women with CIN 1 previously diagnosed. So, the most important fact to be considered for adoption of conservative management is to guarantee adhesion for follow-up. If this is not possible, reference to colposcopy is recommended / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

Orientadores: Luiz Carlos Zeferino, Rita Goreti Amaral / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T00:13:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franco_Rosana_M.pdf: 2241829 bytes, checksum: 516a734f85c6603c3f4ce524e73c5f67 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Introdução: O espectro dos fatores que levam à liberação de resultado falso-negativo do exame citopatológico é amplo e superá-los continua sendo um desafio. A avaliação do desempenho dos profissionais responsáveis pelo exame citopatológico deve ser monitorada como forma de garantir a qualidade dos exames liberados. Objetivos: Analisar se, no escrutínio de rotina, fatores relacionados com a adequabilidade da amostra, padrão celular e critérios citomorfológicos estão associados a resultados falso-negativos dos exames citopatológicos e analisar o desempenho dos citotécnicos no escrutínio de rotina do exame citopatológico, através da revisão rápida dos esfregaços negativos. Métodos: Este estudo foi realizado no Laboratório de Citopatologia do CAISM/Unicamp. Os esfregaços incluídos no estudo eram de mulheres usuárias do Sistema Único de Saúde de Campinas e região, que se submeteram ao exame citopatológico (Papanicolaou) para o rastreamento do câncer do colo uterino. Para responder aos objetivos, o estudo foi desenvolvido com dois desenhos metodológicos. A primeira etapa foi um estudo caso-controle, em que o grupo de casos incluiu 100 esfregaços citopatológicos com um resultado falso-negativo (FN) que foi detectado pela sistemática de controle interno da qualidade com revisão rápida. Para cada resultado FN detectado foram identificados, pelo mesmo citotécnico, dois esfregaços com um diagnóstico verdadeiro positivo (VP) e este grupo foi considerado controle, totalizando uma casuística de 300 esfregaços. As variáveis analisadas foram estabelecidas de acordo com os critérios definidos para a análise da adequabilidade da amostra, padrão celular e citomorfológicos. Os resultados foram avaliados por análise bivariada e regressão logística, com critério de seleção de variáveis stepwise e expressos em Odds Ratio (IC 95%). A segunda etapa foi um estudo corte transversal que incluiu 62.785 esfregaços classificados como negativos no escrutínio de rotina realizado por 24 citotécnicos. Todos esses esfregaços foram submetidos ao controle interno da qualidade do laboratório utilizando o método de revisão rápida. Durante essa revisão, os esfregaços suspeitos foram submetidos a uma revisão detalhada para a confirmação de alguma alteração e posteriormente revisada pelos citopatologistas para a liberação do diagnóstico final. Para análise estatística, os citotécnicos foram agrupados em tercis tendo como base as taxas de resultados falso-negativos e as taxas foram comparadas através dos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney. Resultados: Primeiro estudo: O número de células atípicas, aspecto da cromatina nuclear, distribuição e apresentação de células atípicas no esfregaço apresentaram risco maior para resultados FN com OR de 9,6 (5,3 ¿ 17,5), 4,2 (2,2 ¿ 8,3), 4,4 (2,6 ¿ 7,4) e 3,6 (2,2 ¿ 6,0), respectivamente. Processo inflamatório e presença de sangue no esfregaço mostraram também risco para os resultados FN. Segundo estudo: Foram detectados 269 esfregaços falso-negativos sendo ASC-US e LSIL os diagnósticos mais prevalentes. Para o conjunto de todos os diagnósticos, a maior taxa de resultados falso-negativos atribuída a um citotécnico foi 8,3 vezes maior do que a menor taxa de resultados falso-negativos observada. Os citotécnicos foram agrupados em tercis de acordo com a faixa de resultados falso-negativos, que foram calculadas e analisadas para o conjunto de todos os diagnósticos, ASC-US e LSIL. As comparações entre as três faixas e duas a duas, foram estatisticamente significantes para o conjunto de todos os diagnósticos, ASC-US e LSIL. Conclusões: Primeiro estudo: A maioria dos fatores associados à liberação de um resultado FN é dependente das condições e técnicas de coleta de material, pois, em grande parte, a lesão pode não estar adequadamente representada no esfregaço. Também fatores obscurecedores, como sangue e processo inflamatório, podem prejudicar a análise. Quanto às alterações citomorfológicas, cromatina fina foi a característica que apresentou maior risco para resultados FN. Segundo estudo: As taxas de resultados falso-negativos variaram significativamente entre os citotécnicos e os diagnósticos mais freqüentes dentre os exames com resultados falso-negativos foram ASC-US e LSIL / Abstract: Introduction: The spectrum of factors that lead to false-negative (FN) results in cytopathology testing is broad, and dealing with these factors continues to be a challenge. The evaluation of the performance of technologists responsible for testing should be monitored as a way of guaranteeing the quality of results. Objectives: To analyze whether, under routine scrutiny, factors related to the adequacy of the sample, cell pattern and cytomorphological criteria are associated with false-negative results in cytology testing, and to analyze the performance of the cytotechnologists who routinely perform these tests by carrying out a 100% rapid review of negative smears. Methods: This study was carried out at the Cytopathology Laboratory of CAISM/UNICAMP. The smears included in the study were obtained from women who were clients of the National Health Service in Campinas and the surrounding catchment area, undergoing cytology (Papanicolaou smear) as a screening for cervical cancer. To fulfill the objectives of the study, two different methodologies were designed. First, a case-control study was carried out involving 100 smears with a false-negative (FN) result detected by the 100% rapid review system of internal quality control. For each FN result detected, two smears with a true positive (TP) diagnosis made by the same cytotechnologist were identified, and this set of smears formed the control group, making a total sample size of 300 smears. The variables analyzed were established according to the criteria defined by the analysis of adequacy of the sample, cell pattern and cytomorphology. The results were evaluated using bivariate analysis and logistic regression with stepwise variable selection criteria expressed as odds ratios (OR) (95%). The second stage consisted of a cross-sectional study including 62,785 smears classified as negative during routine scrutiny carried out by 24 cytotechnologists. All smears were submitted to the laboratory¿s internal quality control using the 100% rapid review method. During this review, the suspect smears were submitted to a detailed review to confirm any alteration and were later reviewed by cytopathologists before a final diagnosis was issued. For the statistical analysis, the cytotechnologists were grouped into tertiles based on the rates of false-negative results, and the rates were compared using the Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests. Results: First study: The number of atypical cells, the appearance of nuclear chromatin, and the distribution and presentation of atypical cells in the smear represented the greatest risk for FN results with odds ratios (OR) of 9.6, 4.2, 4.4 and 3.6, respectively. Inflammatory processes and the presence of blood in the smear also represented a risk for FN results. Second study: A total of 269 false-negative smears were detected, ASC-US and LSIL being the most prevalent diagnoses. For the set of all the diagnoses together, the highest rate of false-negative results attributed to one single cytotechnologist was 8.3 times greater than the lowest rate of false-negative results observed. The cytotechnologists were grouped into tertiles according to the range of false-negative results, which were calculated and analyzed for the set of all the diagnoses together, ASC-US and LSIL. Comparisons between the three ranges and between sets of two were statistically significant for all the diagnoses together, ASC-US and LSIL. Conclusions: First study: Most of the factors associated with FN results are a consequence of the conditions and the techniques used in sample collection, since, in the majority of cases, the lesion may not be adequately represented in the smear. Other confounding factors such as blood and inflammatory processes may also hinder analysis. With respect to cytomorphological alterations, fine chromatin was the characteristic that represented greatest risk for FN results. Second study: The rates of false-negative results vary significantly from one cytotechnologist to another and the most frequent diagnoses in tests with false-negative results were ASC-US and LSIL / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Tocoginecologia

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Calves born persistently infected (PI) with non-cytopathic bovine viral diarrhea virus (ncpBVDV) frequently develop a fatal gastroenteric illness called mucosal disease (MD). From animals affected by MD, both the original virus (ncpBVDV) and an antigenically identical, yet cytopathic virus (cpBVDV) can be isolated. Cytopathic BVDVs are originated from the ncp counterparts by diverse genetic mechanisms, all leading to the expression of the non-structural polypeptide NS3 as a discrete protein. In contrast, ncpBVDVs express only the large precursor polypeptide, NS2-3, which contains the NS3 sequence within its carboxy-terminal half. The investigation of the mechanism leading to NS3 expression in 41 cpBVDV isolates is reported. An RT-PCR strategy was designed to detect insertions within the NS2-3 gene and/or duplication of the NS3 gene two common mechanisms of expression of NS3. RT-PCR amplification revealed insertions in the NS2-3 gene of three cp isolates, being the inserts similar in size to that present in the cpBVDV NADL strain. Sequencing of one such insert revealed a 296 nucleotide sequence, with a central core of 270 putative aminoacid sequence highly homologous (98%) to the NADL insert, a sequence corresponding to the cellular J-Domain gene. Another cpBVDV isolate contained a duplication of the NS3 gene downstream from the original locus. In contrast, no detectable NS2-3 insertions nor NS3 gene duplications were observed in the genome of 37 cp isolates. These results demonstrate that cleavage of NS2-3 without bulk RNA insertions nor NS3 gene duplications seems to be a frequent mechanism leading to NS3 expression and BVDV cytopathology. / Bezerros nascidos persistentemente infectados (PI) com o biótipo não citopático (ncp) do vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV) freqüentemente desenvolvem uma doença gastroentérica fatal, chamada de Doença das Mucosas (DM). Dos animais afetados pela DM é possível isolar o vírus original não-citopático (BVDVncp) e um vírus antigenicamente idêntico, porém citopático (BVDVcp). Os BVDVcps são gerados a partir do vírus original ncp por diversos mecanismos genéticos, que resultam na expressão da proteína não-estrutural NS3 como uma proteína individual. Em contrapartida, os BVDVncp expressam somente a proteína precursora NS2-3, que contém a seqüência da NS3 no seu terço carboxi-terminal. Este trabalho relata a investigação dos mecanismos genéticos associados com a expressão da NS3 em 41 isolados citopáticos de BVDV. Uma estratégia de RT-PCR foi delineada para detectar inserções no gene da NS2-3 e/ou duplicações no gene da NS3, dois mecanismos freqüentes de expressão da NS3. Amplificação do genoma dos 41 isolados por RT-PCR revelou a presença de inserções no gene da NS2-3 em três isolados, de tamanho similar a inserção presente na cepa de BVDVcp NADL. O seqüenciamento da inserção de um isolado revelou uma seqüência de 296 nucleotídeos, com uma região central de 270 nucleotídeos altamente homóloga (98%) com a inserção da cepa NADL, que corresponde a uma seqüência do gene celular J-Domain. Outro isolado de BVDVcp contém uma duplicação do gene da NS3 na direção 3 da sua posição original. Em 37 isolados cp não foram detectadas inserções na NS2-3 ou duplicações da NS3. Esses resultados demonstram que a clivagem da NS2-3 sem a presença de inserções de RNA ou duplicações do gene da NS3 parecem ser mecanismos frequentes de expressão da proteína NS3 e citopatologia no BVDV.

Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Mast cell tumors (MCT) are neoplastic tumors of mast cells of unknown etiopathogenesis, representing up to 21% of all canine cutaneous cancers. This tumor varies widely in biological presentations and behaviors, ranging from benign to extremely aggressive, leading to metastasis and death. The cytological identification of MCT is a highly recommended method for initial detection of the tumor, it is inexpensive, can be performed with conscious animal and allows to suspect a tumor of high degree according to the cellular features. In addition to the histological grading, which is the gold standard for establishing the prognosis of MCT, additional markers are recommended, among them the AgNOR count, an indicator of cell proliferation. Additionally, some studies focus on the relationship between MCT and vitamin D, since mast cell tumors express vitamin D receptors (VDR). Thus, the aim of this research is to characterize the occurrence of canine MCT diagnosed by cytological examination in the region of Santa Maria/RS, to describe a protocol for determining AgNOR index in cytological samples of MCT and to investigate the relationship between vitamin D levels and AgNOR index in dogs with this tumor, since the AgNOR index is already consolidated as a prognostic marker for mastocytoma and vitamin D has been reported as a target for MCT management. Regarding to the occurrence profile of this tumor, we found results similar to those described in the literature, with some peculiarities referring to breeds and clinicopathological findings, allowing to suspected of MCT and planning more appropriate therapeutic interventions for each case. Referring to the AgNOR index, a protocol adapted from techniques already described was applied to cytological samples. Also has been observed that vitamin D and AgNOR index in dogs with MCT are negatively and moderatelycorrelated (P=0,011), suggesting that vitamin D levels can be measured in dogs with this tumor. In addition, follow-up studies of dogs with MCT and monitoring their outcoming are necessary, so that the vitamin D can be proposed as a prognostic marker and therapeutic agent for this neoplasm. / Mastocitomas são proliferações neoplásicas de mastócitos, de etiopatogênese desconhecida, que representam até 21% de todos os tumores cutâneos caninos. Este tumor possui uma grande variedade de apresentações e comportamentos biológicos, os quais vão desde benignos a extremamente agressivos levando à metástase e morte. A identificação citológica do mastocitoma um método bastante recomendado para detecção inicial do tumor, é de baixo custo, pode ser realizada com o animal consciente e permite suspeitar de um tumor de alto grau conforme as características celulares. Além da graduação histológica, que é o padrão-ouro para estabelecer o prognóstico do mastocitoma, marcadores adicionais são recomendados, como a contagem de AgNOR, um indicador de proliferação celular. Adicionalmente, alguns estudos enfocam a relação entre mastocitoma e vitamina D, uma vez que mastocitomas expressam receptores de vitamina D (VDR). Assim, a finalidade desta pesquisa é caracterizar a ocorrência de mastocitoma canino diagnosticado por exame citológico na região de Santa Maria/RS, descrever um protocolo para determinação de índice AgNOR em amostras citológicas de mastocitoma e investigar a relação entre níveis de vitamina D e índice AgNOR em cães com este tumor, visto que o índice AgNOR já é consolidado como marcador prognóstico para o mastocitoma e a vitamina D vem sendo apontada como alvo de intestigação neste tumor. Em relação ao perfil de ocorrência do mastocitoma canino, neste trabalho encontraram-se resultados semelhantes aos descritos na literatura, com algumas particularidades referentes a raças e achados clínico-patológicos, permitindo o direcionamento para suspeita de mastocitoma e planejamento de intervenções terapêuticas mais adequadas para cada caso. Referente ao índice AgNOR, foi especificado um protocolo adaptado, a partir de técnicas já descritas, aplicável a amostras citológicas. Também pode-se observar que a vitamina D e o índice AgNOR em cães com mastocitoma estão correlacionados de forma negativa e moderada (P=0,011), sugerindo-se que os níveis de vitamina D sejam avaliados nos cães com este tumor. Em adição, estudos de acompanhamento de cães com mastocitoma e monitoramento de seu tempo de sobrevida são necessários para que a dosagem de vitamina D possa ser proposta como marcador prognóstico e agente terapêutico para esta neoplasia