Orientador: Alba Regina Monteiro Souza Brito / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T07:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Miranda_MairaCola_D.pdf: 3726435 bytes, checksum: d25578678b3a9ed617824c5816dc825a (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O gênero Indigofera compreende 700 espécies herbáceas e arbustivas, figurando entre os seis maiores gêneros de Leguminosae. Em São Paulo foram descritas 9 espécies do gênero sendo que duas delas, Indigofera truxillensis Kunt e Indigofera suffruticosa Mill, são popularmente conhecidas como índigo, ocorrendo predominantemente em ambientes de Cerrado do Estado de São Paulo. A I. truxillensis é menos estudada do ponto de vista fitoquímico e farmacológico, sendo que a I. suffruticosa, possui atividade antiinflamatória, analgésica e digestiva indicadas por comunidades indígenas da América Central. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar a atividade antiulcerogênica, das frações ricas em flavonóides, das espécies Indigofera truxillensis e Indigofera suffruticosa investigando os possíveis mecanismos de ação envolvidos com essa atividade. As frações aquosa (fAq) e acetato de etila (fAc) foram preparadas à partir do extrato metanólico (EMeOH) de ambas as espécies. O EMeOH das espécies foi utilizado para o ensaio de toxicidade aguda em camundongos. As frações fAq e fAc da I. truxillensis foram utilizadas nas doses de 50, 100 e 200 'mg.kg POT ¿1¿; já as frações fAq e fAc da I. suffruticosa, com um rendimento menor, foram utilizadas nas doses de 25, 50 e 100 'mg.kg POT ¿1¿, respectivamente. Ambas foram administradas pela via oral, em ratos. Para testar as frações das Indigoferas os modelos experimentais utilizados foram: úlcera gástrica induzida agudamente por etanol; estudo da atividade antisecretora através da ligadura do piloro; avaliação de mecanismos protetores da mucosa gástrica como a produção de muco, prostaglandina E2 (PGE2), envolvimento do óxido nítrico (ON) e compostos sulfidrilas (SH) na gastroproteção; avaliação da atividade antioxidante através do modelo de úlcera gástrica induzida por isquemia e reperfusão e atividade de algumas das principais enzimas envolvidas no processo como, superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx) e glutationa redutase (GR); e avaliar a atividade na cicatrização de úlcera gástrica através do modelo de úlcera gástrica induzida por ácido acético (subcrônico) com posterior análise histológica para produção de muco e ensaios de imunohistoquímica para Heat Shock Protein (HSP 70) e Proliferação celular (PCNA). Os extratos das espécies estudadas demonstraram ausência de toxicidade (in vivo). A fAq e fAc da I. truxillensis e fAc da I. suffruticosa reduziram significativamente as lesões gástricas; a fAq da I. suffruticosa não apresentou atividade antiulcerogênica. Não ocorreu alteração no pH do suco gástrico, indicando que as frações das espécies estudadas não promovem atividade antisecretora. Nos mecanismos envolvendo proteção, a fAq da I. truxillensis protege a mucosa gástrica através do aumento de muco; envolvimento de ON e SH; aumento da atividade das enzimas SOD e GR; e expressão de HSP 70 e PCNA auxiliando no processo de cicatrização. Já a fAc da mesma espécie protege a mucosa gástrica através do aumento de muco e envolvimento de SH; aumento da atividade das enzimas SOD, GPx e GR; redução significativa na área da lesão na úlcera subcrônica. Nos mecanismos envolvendo proteção, a fAc da I. suffruticosa protege a mucosa gástrica através do aumento de muco; envolvimento de SH; aumento da atividade das enzimas GR; redução significativa na área da lesão na úlcera subcrônica e expressão de HSP 70 e PCNA auxiliando no processo de cicatrização. Uma triagem fitoquímica preliminar indicou a presença de flavonóides e alcalóides como um dos componentes majoritários na I. truxillensis e na I. suffruticosa. Através da análise dos resultados podemos concluir que a atividade gastroprotetora das espécies estudadas pode ser atribuída à presença de substâncias como os flavonóides, conhecidas por apresentarem atividade antiulcerogênica, antiinflamatória e antioxidante / Abstract: The genus Indigofera, which includes 700 herbaceous and bush species, is one of the six largest Leguminosae genres. In São Paulo State, Brazil, nine species of this genre were already described. Indigofera truxillensis Kunt and Indigofera suffruticosa Mill, commonly known as ¿índigo¿, are found predominately at São Paulo State¿s savannah. There are just a few studies on I. truxillensis pharmacology and phytochemistry, whereas I. suffruticosa presents anti-inflammatory, analgesic and digestive proprieties, cited by many Indian communities at Central America. The objective of this work is to evaluate the antiulcerogenic activity of I. suffruticosa and I. truxillensis fractions, which are rich in flavonoids, and also to investigate the possible action mechanisms involved in this activity. The aqueous (fAq) and ethyl acetate (fAc) fractions were obtained from methanol extract (EMeOH) from both species. The EMeOH was used in the acute toxicity study in mice. The I. truxillensis fAq and fAc were used at doses 50, 100 and 200 'mg.kg POT ¿1¿, and the I. suffruticosa fAq and fAc were used at doses 25, 50 and 100 'mg.kg POT ¿1¿. Both of them were administrated p.o., in male Wistar rats. In order to test the fractions, the experimental models used were the following: a) Gastric ulcer induced by ethanol; b) Antisecretory activity study through pylorus ligature; c) Evaluation of the protective mechanisms of gastric mucosal such as mucus production, prostaglandin E2 (PGE2), nitric oxide evolvement, and sulphydryl compounds (SH) in gastroprotection; d) Evaluation of antioxidant activity using gastric ulcer induced by ischemic and reperfusion, and some of the most important enzymes involved in the process, such as superoxide dismutase (SOD), gluthatione peroxidase (GPx) and gluthatione redutase (GR); e) Evaluate the gastric ulcer healing activity using the model of gastric ulcer induced by acid acetic, with subsequent histological analysis to mucus production and immunohistochemistry assay to Heat Shock Protein (HSP 70) and Cell Proliferation (PCNA). The crude extracts of both species demonstrated the absence of in vivo toxicity. The I. truxillensis fAq and fAc and the I. suffruticosa fAc reduced significantly the gastric lesions. The I. suffruticosa fAq did not present any antiulcerogenic activity. The gastric juice pH did not modify, which indicates no antisecretory activity for the fractions. I. truxillensis (fAq) protected the gastric mucosa through the increase of mucus; involvement of nitric oxide and SH; increase in the enzymes SOD and GR activity; expression of HSP 70 and PCNA in healing process. I. truxillensis (fAc) protected the gastric mucosa through the increase of mucus; involvement of SH; increase in the enzymes SOD, GPx and GR activity; significant reduction on subchronic ulcer lesion area. I. suffruticosa (fAc) protected the gastric mucosa through the increase of mucus; involvement of SH; increase in the enzyme GR activity; significant reduction on subchronic ulcer lesion area; expression of HSP 70 and PCNA in healing process. A preliminary phytochemistry selection and chromatographic analyses indicate the presence of flavonoids as majority compounds in I. truxillensis, and flavonoids and alkaloids in I. suffruticosa. From the analysis of the results it can be concluded that the gastroprotective activity of the studied species can be attributed to the presence of flavonoids, well known to present antiulcerogenic, anti-inflammatory and antioxidant activities / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2682296 bytes, checksum: 2cc0edf88a79217347be3a89391a4dc6 (MD5) Previous issue date: 2011-11-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Praxelis clematidea (Griseb.) R. M. King & H. Robinson (Asteraceae) is a native herb to South America. The chloroformic phase from aerial parts of P. clematidea (CHCl3P-Pc) has hydroxylated and methoxylated flavones and it has shown gastroprotective activity. The ethyl acetate phase (AcOEtP-Pc) has hydroxylated flavonoids. So the gastroprotective activity of AcOEtP-Pc, the antiulcer mechanisms of CHCl3P-Pc and AcOEtP-Pc and the effects on duodenal ulcer, inflammation and gastrointestinal motility were investigated. The AcOEtP-Pc (62.5, 125 and 250 mg/kg, p.o.) protected gastric mucosa injuries by ethanol, stress and non steroidal anti-inflammatory in Wistar rats and male Swiss mice. The best dose of AcOEtP-Pc (62.5 mg/kg) did not alter biochemistry parameters of gastric juice by pylorus ligation model. The CHCl3P-Pc (125 mg/kg) and AcOEtP-Pc (62.5 mg/kg) prevented duodenal ulcer induced by hydrochloride cysteamine. The AcOEtP-Pc increased the amount of sticky mucus and depended of sulfhydryl compounds to gastric protection, while did not depend of NO. The CHCl3P-Pc and AcOEtP-Pc maintained the level of PGE2. These phases prevented gastric injuries induced by ischemia-reperfusion by decreasing LPO and activity of MPO, while they failed to maintain the activity of antioxidant enzymes such as SOD, GPx and GR, and GSH level. The CHCl3P-Pc and AcOEtP-Pc did not prevent the plasma extravasation when it evaluated by acetic acid induced vascular permeability model and paw edema induced by carrageenan, but they decreased the total number of peritoneal leukocytes after peritonitis induced by carrageenan. In this model, the AcOEtP-Pc reduced levels of cytokines TNF-α and IL-1β, while CHCl3P-Pc reduced TNF-α and increased IL-1β. The phases healed the chronic gastric ulcer induced by acetic acid after 15 days of treatment. In this model, there were re-structuring of the mucosa in ulcerated area (HE), increase of mucus secretion (PAS) and vasculature, as well as maintenance of cell proliferation after morphological and immunohistochemistry analysis. They have maintained expression of EGF and COX-2 after performing the technique of Western blot. The CHCl3P-Pc and AcOEtP-Pc did not also alter body weight, consumption of water and food, weight of vital organs, and hematological and biochemical parameters. The AcOEtP-Pc (62.5, 125 and 250 mg/kg) did not alter gastrointestinal motility when it was evaluated by gastric emptying, motility of small intestine and motility of colon by castor oil induced diarrhea, while the CHCl3P-Pc (125, 250 and 500 mg/kg) delayed the gastrointestinal motility. Therefore, the CHCl3P-Pc and AcOEtP-Pc are gastroduodenal protective and healing to develop cytoprotective, antioxidant and anti-inflammatory mechanisms and regulate the gastrointestinal motility. / Praxelis clematidea (Griseb.) R. M. King & H. Robinson (Asteraceae) é uma erva nativa da América do sul. A fase clorofórmica obtida das partes aéreas de P. clematidea (FCHCl3-Pc) possue flavonas metoxiladas e hidroxiladas e foi estudada quanto a atividade gastroprotetora, enquanto a fase acetato de etila (FAcOEt-Pc) contém flavonóides hidroxilados. Com essas considerações, o objetivo deste trabalho foi investigar a atividade gastroprotetora da FAcOEt-Pc, os mecanismos antiulcerogênicos das FCHCl3-Pc e FAcOEt-Pc, bem como seus efeitos na úlcera duodenal, em processos inflamatórios e na motilidade gastrintestinal. A FAcOEt-Pc nas doses 62,5, 125 e 250 mg/kg protegeu a mucosa gástrica da ação dos agentes lesivos etanol, estresse e antiinflamatório não esteroidal quando administrada por via oral em ratos Wistar e camundongos Swiss machos. A FAcOEt-Pc na melhor dose (62,5 mg/kg) não alterou os parâmetros bioquímicos do suco gástrico em modelo de ligadura do piloro. As FCHCl3-Pc (125 mg/kg) e FAcOEt-Pc (62,5 mg/kg) preveniram a úlcera duodenal induzida com cisteamina hidroclorídrica. A FAcOEt-Pc aumentou a quantidade de muco aderido e mostrou depender de compostos sulfidrílicos para a proteção gástrica, ao mesmo tempo que independe de NO. As FCHCl3-Pc e FAcOEt-Pc mantiveram o nível de PGE2. Estas partições preveniram as lesões gástrica induzidas por isquemia-reperfusão, reduzindo a LPO e a atividade de MPO, ao mesmo tempo que não mantiveram a atividade das enzimas antioxidantes SOD, GPx e GR, bem como o nível de GSH. As FCHCl3-Pc e FAcOEt-Pc não evitaram o extravazamento plasmático avaliado pelo modelo de permeabilidade vascular induzida com ácido acético e pelo edema induzido com carragenina, mas diminuíram o número de leucócitos totais no lavado peritoneal após indução de peritonite com carragenina. Neste modelo, a FAcOEt-Pc reduziu os níveis das citocinas TNF-α e IL-1β, enquanto FCHCl3-Pc reduziu TNF-α e aumentou IL-1β. Ambas as partições cicatrizaram a úlcera gástrica crônica induzida com ácido acético após 15 dias de tratamento. Neste modelo, houve re-estruturação da mucosa na área ulcerada (HE), aumento da secreção de muco (PAS) e vascularização, bem como manutenção da proliferação celular após análise morfológica e imunohistoquímica. Foi observado que as partições mantiveram a expressão de EGF e COX-2 após realização da técnica de Western blot. As FCHCl3-Pc e FAcOEt-Pc também não alteraram o peso corporal, o consumo de água e ração, o peso dos órgãos vitais e os parâmetros hematológicos e bioquímicos. A FAcOEt-Pc (62,5, 125 e 250 mg/kg) não alterou a motilidade gastrintestinal quando avaliada pelos modelos de esvaziamento gástrico, motilidade do intestino delgado e do cólon pelo modelo de diarréia induzida com óleo de rícino, enquanto a FCHCl3-Pc (125, 250 e 500 mg/kg) retardou a motilidade gastrintestinal. Portanto, as FCHCl3-Pc e FAcOEt-Pc são protetores e cicatrizantes gastroduodenal por envolver mecanismos de citoproteção, antioxidante, antiinflamatório e regular a motilidade gastrintestinal.