Thesis--Copenhagen.

Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin--Madison, 1959. / Typescript. Vita. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references (leaves 78-83).

Orientador : Arnaldo Yoshiteru Kuaye / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T09:59:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_JulianeDoeringGasparin_M.pdf: 594843 bytes, checksum: 414a63903dead405c39fe99e23c36e88 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: o queijo Minas Frescal é um produto obtido a partir da coagulação enzimática do leite pasteurizado. Diferentes procedimentos de fabricação têm sido adotados pelas indústrias de laticínios: o tradicional com adição de cultura lática (CL), a acidificação direta (AO) e a ultrafiltração (UF). Estes queijos apresentam pH e teor de umidade (>55 %) elevados, características que favorecem o desenvolvimento de bactérias patogênicas. A contaminação microbiana de queijos, aliada à grande oferta e ao consumo deste produto, representa um sério risco para a saúde pública. Este trabalho avaliou a influência de diferentes procedimentos de fabricação na qualidade microbiológica de queijos tipo Minas Frescal comercializados no varejo de Campinas. Foram analisadas 31 amostras de queijo Minas Frescal, de cada tipo de processamento, para determinação de: coliformes termotolerantes (45°C), estafilococos coagulase positiva, Salmonella e Usteria monocytogenes; conforme a Resolução - RDC nO12 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária - ANVISA, de 2 de janeiro de 2001. As amostras também foram submetidas às determinações físico-químicas de pH, acidez titulável, atividade de água e umidade. O resultado das análises microbiológicas demonstraram que o número de amostras acima do Limite Máximo Estabelecido pela Legislação - LMEL para coliformes termotolerantes (45°C) foi de 64,5 % para o processamento AO, 29 % para o CL e 9,7 % para o UF. Quanto ao estafilococos coagulase positiva, as amostras CL apresentaram maior percentagem de resultados acima do LMEL (12,9 %) em relação às amostras AD (9,7 %). Foi detectada Usteria spp em 7 amostras AO (22,6 %) e em 4 amostras CL (12,9 %), sendo L. monocytogenes identificada em 3 amostras (42,9 %) do processamento AD positivas para Usteria spp. Não foi isolada SalmoneJ/a em nenhuma das amostras analisadas e as amostras UF não apresentaram estafilococos coagulase positiva e Usteria spp. O maior número de amostras em desacordo com a legislação (71 %) evidenciou a suscetibilidade do processamento AO em relação à contaminação por patágenos. A deficiência na qualidade microbiológica dos queijos Minas Frescal mostrou-se independente do porte da indústria produtora / Abstract: The Minas Frescal cheese is a product obtained trom the enzymatic coagulation of the pasteurized milk. Oifferent processes have been used by dairy industry: the traditional with addition of latic culture (CL), direct acidifrcation (AO) and ultrafiltration (UF). This cheese presents high pH and moisture content (>55 %), characteristics that allow the growth of pathogenic bacteria. The microbial contamination of cheeses, togheter with the great offer and the consumption of these cheeses, represent a serious risk for the public health. This work evaluated the influence of different cheese making processes on the microbial quality of Minas Frescal cheeses comercialized at Campinas market. Thirty one samples of cheese from each process were analyzed for the determination of Fecal coliforms (45°C), Coagulase-positive staphylococci, Salmonella and Usteria monocytogenes; according to the Resolution - ROC - nO12 trom Agência Nacional de Vigilância Sanitária - ANVISA, January 2nd, 2001. The samples were also submitted to physical-chemical determinations of pH, titratable acidity, water activity and moisture content. The microbial results showed that the number of samples above the legal pattern - LMEL - for Fecal coliforms (45°C) was 64,5% for the AO processing, 29% for CL and 9,7% for UF. For the Coagulase-positive staphylococci, the CL samples presented larger percentage of positive results (12,9%) compared to the AO samples (9,7%). Usteria spp was detected in 7 AO samples (22,6 %) and 4 CL samples (12,9 %). L monocytogenes was found in 3 (42,9%) of the positive AO samples for Usteria spp Salmonella was not isolated in the analyzed samples. UF samples did not presented coagulase-positive staphylococci or Usteria spp The larger number of AO samples in disagreement with the legislation (71 %) showed the susceptibility of this process to the contamination by pathogens. The poor microbiological qualitity verifred for the Minas Frescal cheese was indepent of the size of the industry / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

The problem in this investigation consisted of, first, the isolation from human sources and identification of thirteen cultures of typical micrococci to be used as test organisms; second, the acquisition of blood plasma from thirty different human beings; and third, the determination of the possibility of individual variation in sensitivity of blood plasma to the micrococci used as test organisms as revealed by the coagulase test.

For this work, the decision was made to contrast two serological tests, that of the tube agglutination technique and the fluorescent antibody technique for correlation with the coagulase and other characteristics of Staphylococcus strains. This has been a preliminary survey in the hope that as further knowledge is obtained about the staphylococci, grouping of the organisms will become more routine and relatively less complex.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:19Z : No. of bitstreams: 1 Publico-154.pdf: 1362092 bytes, checksum: b56e51cd61b6e0026e1f047e7ce95328 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Staphylococcus coagulase negativo (SCoN) são importantes agentes etiológicos responsáveis por infecções relacionadas à assistência à saúde (IrAS) em infecções da corrente sanguínea. Em estudo retrospectivo foram avaliados SCoN isolados de pacientes com IrAS da corrente sanguínea em dois hospitais gerais da cidade de São Paulo no período de agosto de 2005 à agosto de 2007.Os isolados foram caracterizados a nível de espécies e testes de suscetibilidade aos antimicrobianos pelo Vitek® system e Vitek® 2. A presença do gene mecA e o tipo de SCCmec foram determinados por PCR multiplex. Staphylococcus epidermidis foi a espécie predominante seguido de S. hominis, S. haemolyticus, S. simulans, S. warneri, S. capitis e S. auricularis. Observou-se 88,2% de resistência à oxacilina nos isolados com 100% de concordância entre os discos de oxacilina e cefoxitina confirmados pelo gene mecA. Todos isolados foram suscetíveis à vancomicina e quatro isolados apresentaram resistência intermediária à teicoplanina pelo Etest®. Um S. epidermidis mostrou-se resistente à linezolida. O tipo de SCCmec predominante foi o tipo III seguido pelos tipos IV, I, II e V. Em 26,9% dos isolados mecA positivo não foram caracterizados nenhum tipo de SCCmec pelo protocolo utilizado. / Coagulase negative staphylococci (CoNS) are important etiologic agents responsible for healthcare related infection (HCRI) in bloodstream infections. In a retrospective study we evaluate CoNS isolated from patients with HCRI in bloodstream infections admitted to two general hospitals at São Paulo city, from August 2005 to August 2007. The isolates were characterized at species level and antimicrobial susceptibility tested by the Vitek® system and ViteK® 2. Oxacillin resistance was evaluated by oxacillin and cefoxitin discs. The presence of mecA gene and the SCCmec type were determined by multiplex PCR. Staphylococcus epidermidis was the predominant specie followed by S. hominis, S. haemolyticus, S. simulans, S. warneri, S. capitis and S. auricularis. Oxacillin resistance was observed in 88.2% of the isolates with 100% concordance between oxacilin and cefoxitin discs confirmed by mecA gene. All isolates were susceptible to vancomycin and four isolates revealed intermediate resistance to teicoplanin by Etest®. One S. epidermidis showed resistance to linezolide. The predominant SCC type was the type III followed by the types IV, I, II and V. In 26.9% positive mecA isolates we did not characterize the SCCmec type by the molecular protocol utilized. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:43:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000040.pdf: 2800717 bytes, checksum: 62b509b43338c4099ae9ade9def5261b (MD5) Previous issue date: 2008 / O leite e o queijo têm um importante papel nutricional para o homem e quando consumidos sem o devido cuidado higiênico-sanitário, podem causar doenças devido à presença de microrganismos patogênicos, com destaque para Staphylococcus aureus. O envolvimento desta bactéria na epidemiologia das doenças veiculadas por alimentos decorre de sua alta prevalência e do risco de produção de enterotoxinas termoestáveis responsáveis pela intoxicação alimentar. S. aureus também produz outras toxinas de interesse humano como a toxina-1 da síndrome do choque tóxico, responsável pela síndrome do choque tóxico em humanos e as toxinas esfoliativas, causadoras da síndrome da pele escaldada. Alguns grupos vêm aplicando análises moleculares do gene da coagulase para subdividir os S. aureus baseando-se no polimorfismo deste gene. A resistência bacteriana a antibióticos é um sério problema para a Saúde Pública, pois bactérias resistentes podem ser transmitidas ao homem através de alimentos contaminados. Este trabalho teve como objetivos isolar S. aureus obtidos de leite e queijo de coalho da região Agreste de Pernambuco; caracterizar o perfil de sensibilidade antimicrobiana; pesquisar a presença dos genes responsáveis pelas toxinas; investigar a expressão dos genes toxigênicos nos S. aureus e correlacionar a tipagem molecular pelo gene da coagulase com os genes toxigênicos. Os perfis de sensibilidade demonstraram que a maioria dos S. aureus foi sensível a vancomicina, sulfa + trimetoprim e enrofloxacina e alguns isolados demonstraram alto índice de resistência aos demais antibióticos estudados. A análise do gene coa nos 94 isolados de S. aureus permitiu distribuílos em dois coagulotipos: coa1= ~750pb e coa2= ~1000pb sugerindo a disseminação de clones restritos na região Agreste de Pernambuco. Entre os 88 S. aureus positivos pela PCR, foram encontrados os genótipos seg, seh, sei, seg + seh, seg + sei, seg + sej, seh + sei, seg + seh + sei, seg + sei + sej e seg + seh + sei + sej / Estes resultados sugerem a existência de uma variação geográfica na distribuição dos S. aureus portadores dos genes toxigênicos. Destes, 20 isolados foram selecionados para análise pela RT-PCR. Os transcritos obtidos em 12/20 foram seg, seh, sei, seg + seh, seg + sej e seg + sei + sej, coa1 e coa2. Os isolados de S. aureus positivos pela PCR e RT-PCR examinados neste estudo expressaram os genes responsáveis pelas enterotoxinas apresentando potencial para causarem quadros de intoxicação alimentar

Staphylococcus lugdunensis and Staphylococcus schleiferi, two newly described species, have been isolated from numerous types of human infections. We compared the pathogenicity of 30 strains of S. lugdunensis, S. schleiferi, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus warneri, and Staphylococcus hominis, using a mouse model in which a foreign body preadhered with the test strain was implanted subcutaneously, followed by injection of the test strain. All five species of staphylococci produced abscesses. Staphylococcus epidermidis, S. schleiferi, and S. lugdunensis yielded species means of 76-91% abscess formation; 80-100% of the infected foreign bodies and tissues were culture positive. These three species were more virulent than S. warneri or S. hominis, which produced abscesses in 54 and 65% of mice, respectively; only 10-48% of the infected samples were culture positive. Transmission electron microscopy of pure cultures of selected strains showed that all species possessed glycocalyx. All species produced a variety of possible virulence factors, such as α and δ hemolysins, as well as the aggressins lipase and esterase. The production of exoenzymes did not always correlate with virulence as demonstrated by abscess formation in mice.

Linezolida foi o primeiro fármaco da classe das oxazolidinonas a ser aprovado para o uso clínico. Esta nova oxazolidinona inibe a síntese protéica impedindo a formação do complexo de iniciação formado pelo mRNA, tRNA f-Met e a subunidade 50S do ribossomo bacteriano. Embora a resistência à linezolida possa ser mediada pelo produto do gene cfr ou por mutações nas proteínas ribossômicas L3, L4 e L22, o mecanismo de resistência mais comum envolve mutações no domínio V do gene rRNA 23S. Entre março de 2008 a dezembro de 2011, 38 cepas de estafilococos coagulase-negativos (SCNs) resistentes à linezolida (20 S. epidermidis, 14 S. haemolyticus, 3 S. hominis e 1 S. warneri) isoladas de hemoculturas e pontas de cateter de pacientes internados em dois hospitais terciários do Estado de São Paulo foram incluídas neste estudo para a determinação dos mecanismos de resistência e análise da estabilidade do fenótipo resistente. As cepas de SCNs apresentaram altos níveis de resistência à linezolida (CIMs de 16-128 µg/ml) e foram multi-resistentes, permanecendo sensíveis à vancomicina e teicoplanina. A mutação G2576T foi identificada no domínio V do gene rRNA 23S em todas as cepas de SCNs, exceto em uma cepa de S. haemolyticus. O gene cfr e mutações nas proteínas L4 e L22 não foram detectados. Em relação à proteína L3, todas as cepas de S. epidermidis do hospital A, incluindo a cepa controle sensível à linezolida, apresentaram a substituição Leu101Val, sugerindo que essa mutação seja um marcador clonal dessa população sem envolvimento com a resistência à linezolida. A única cepa proveniente do hospital B (S. epidermidis) foi selvagem para essa proteína ribossômica. Somente uma cepa de S. haemoyticus teve uma mutação no gene rplC, resultando na alteração Val154Leu. Em S. hominis, a mutação Phe147Ile foi identificada em uma cepa, enquanto a associação de Gly139Arg e Met156Thr foi observada nas outras duas cepas dessa espécie. A identificação dessas mutações na proteína L3 de cepas de S. haemoyticus e S. hominis resistentes à linezolida reforça o papel desses sítios na aquisição da resistência ao fármaco em Staphylococcus spp. No entanto, a presença de G2576T no rRNA 23S torna difícil determinar exatamente qual o envolvimento das mutações na L3 com os elevados níveis de resistência à linezolida apresentados por essas cepas. Na ausência da pressão seletiva do antimicrobiano, após 130 passagens, a resistência à linezolida mediada pela mutação G2576T permaneceu estável nas cepas de SCNs deste estudo, as quais, de acordo com os perfis de restrição do domínio V gerados por NheI, tinham tanto alelos rRNA 23S selvagens como mutados. O sequenciamento individual do domínio V das diferentes cópias do gene rRNA 23S mostrou G2576T em todas as cópias amplificadas por PCR: 4/4 e 5/5 em S. epidermidis e 3/3 em S. haemolyticus (CIMs de 16-32 µg/ml). A estabilidade da cópia rRNA 23S mutada foi observada mesmo em uma cepa S. epidermidis sensível à linezolida, a qual apresentou uma redução da CIM de 4 para 1 µg/ml mantendo seu único alelo mutado ao longo do processo de reversão ao fenótipo sensível. A similaridade genética foi determinada por PFGE e mostrou uma disseminação clonal das diferentes espécies de SCNs resistentes à linezolida. A análise das cepas de S. epidermidis por MLST mostrou a ocorrência do clone ST-2 (CC2) nos dois hospitais. O aumento da pressão seletiva devido a exposições cada vez mais frequentes à linezolida, provavelmente, favoreceu a seleção e a disseminação de clones endêmicos de SCNs com a mutação G2576T na instituição A desde 2008. De forma diferente, o uso mais restrito do fármaco na instituição B poderia explicar a ocorrência isolada de uma única cepa resistente desde 2005. / Linezolid was the first agent of the oxazolidinone class to be introduced clinically. This oxazolidinone inhibits protein biosynthesis by preventing the formation of the initiation complex that consists of the mRNA, the f-Met tRNA and the 50S subunit of the ribosome. Although linezolid resistance has been mediated by the cfr-encoded product or by ribosomal proteins (L3, L4 and L22), the most common mechanism of resistance involves mutations in the central loop of domain V of the 23S rRNA gene. From March 2008 to December 2011, 38 coagulase-negative staphylococci (CNS) strains (20 S. epidermidis, 14 S. haemolyticus, 3 S. hominis e 1 S. warneri) exhibiting resistance to linezolid were isolated from blood and catheter cultures from patients in two tertiary care hospitals in the State of São Paulo and were included in this study for the ascertainment of the resistance mechanisms to this antimicrobial agent and for the analysis of the stability of this resistance. The strains exhibited high-level resistance to linezolid (MICs 16-128 µg/ml) and all were multidrug resistant, remaining susceptible to vancomycin and teicoplanin. The G2576T mutation in domain V region of 23S rRNA was identified in all isolates, except in a linezolid-resistant S. haemolyticus strain. The cfr gene and mutations in ribosomal proteins L4 and L22 were not detected. Regarding L3 protein analysis, all S. epidermidis strains of hospital A, including the linezolid-susceptible control strain, showed the L3 Leu101Val mutation, suggesting that this alteration is probably not involved in linezolid resistance. The one strain from hospital B (S. epidermidis) was wild-type for this ribosomal protein. Only one S. haemolyticus strain had a mutation in the L3 protein, Val154Leu. Two S. hominis strains showed Gly139Arg/Met156Thr mutations whereas one strain had Phe147Ile in L3 protein. The identification of these mutations in L3 protein of the linezolid-resistant S. haemolyticus and S. hominis strains strengthens the role of these sites in the acquisition of linezolid resistance in Staphylococcus spp. However, the presence of G2576T in the 23S rRNA gene makes difficult to determine exactly the role of L3 mutations in conferring elevated linezolid MIC values showed by these clinical strains. In the absence of antibiotic pressure, after 130 passages, linezolid resistance was stable in the clinical strains of this study, which did not have all copies of the 23S rRNA gene mutated, according to the restriction of the domain V fragment with NheI enzyme. Sequencing of the individual copies of the 23S rRNA gene in the serially passaged strains showed G2576T in all amplified copies by PCR: 4/4 and 5/5 in S. epidermidis and 3/3 in S. haemolyticus strains (MIC of 16-32 µg/ml). The stability of the mutant rRNA copy was also observed in the linezolid-susceptible S. epidermidis strain (MIC of 4 µg/ml). After the passages in antibiotic-free medium, the linezolid MIC of this strain fell to 1 µg/ml and the G2576T mutation persisted in one 23S rRNA gene copy. The clonal relatedness of the strains was determined by PFGE and revealed a clonal dissemination of different CNS species. Regarding MLST analysis, all S. epidermidis strains belonged to the sequence type ST2 (CC2). Most likely, the increased selective pressure has contributed to the selection of endemic linezolid-resistant CNS clones showing the G2576T mutation that have been disseminated in the institution A since 2008. Differently, the restricted use of linezolid in the institution B could explain the occurrence of a single resistant strain since 2005.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-04Bitstream added on 2014-06-13T20:09:26Z : No. of bitstreams: 1 gattijunior_p_me_jabo.pdf: 375413 bytes, checksum: 84c43699cec0d037bc0f63dba9fc7f0c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste trabalho foi avaliar os riscos para a saúde pública apresentado por tilápias, produzidas em cativeiro, comercializadas em supermercados na região nordeste de São Paulo. Para tal, análises microbiológicas foram realizadas, em 40 amostras de tilápias in natura e em 50 filés de tilápias. No peixe in natura foi analisado a água de enxaguadura da pele e o trato gastrintestinal. Os números mais prováveis de coliformes totais e termotolerantes foram determinados assim como a contagem Staphylococcus coagulase positivo e a presença de Salmonella spp. de acordo com a American Public Health Association (APHA). Os resultados obtidos foram analisados utilizando valores logarítmicos e as médias comparadas pelo teste de Tukey, com nível de 5% de probabilidade. A pele foi o tecido com maior nível de contaminação em relação ao trato gastrintestinal e músculo de tilápia in natura. O número de amostras com presença de coliformes totais e termotolerantes na água de enxaguadura da pele foi, respectivamente, 72,5% e 60%, no trato gastrintestinal 25% e 12,5% e no músculo 17,5% e 5%. A carga bacteriana foi significativamente maior no filé em relação ao músculo. Em duas amostras de filé foram verificados Staphylococcus coagulase positivo, uma acima dos parâmetros microbiológicos estabelecidos pela Resolução RDC nº 12/2001 da ANVISA. Salmonella spp. não foi detectada em nenhuma amostra analisada. As amostras de peixes estavam em boas condições para consumo, com exceção de duas amostras de filé. Os filés apresentaram maior contaminação que o músculo da tilápia in natura. Indicadores de poluição fecal demonstraram que a pele foi o órgão com maior contaminação / The objective of this work was to evaluate the risks to public health of consumption of tilápia fish growed in captivity and commercialised in supermarkets in the Northwest region of São Paulo state. In order to accomplish with the objective the researcher undertook analysis in 40 samples of fresh tilápias and in 50 fillets of the fish. In the fresh fish it was also analysed the washing water of the skin and of the gastrointestinal tract. It were determined, in accordance to the American Public Health Association (APHA), the number of total and thermotolerant fecal coliforms as well as the number of coagulase-positive Staphylococcus and presence of the bacteria Salmonella spp. The results were analyzed using logarithmic values and means compared by Tukey test with 5% of probability. The skin was the tissue with higher levels of contamination comparing with the gastrointestinal tract and muscle of the fresh tilapia. The percentage of samples with total and thermotolerant fecal coliforms in the skin washing water was 72.5% and 60% respectively; 25% and 12.5% in the gastrointestinal tract and 17.5% and 5% in the muscles. Bacterial presence was significantly higher in fillets comparing to muscles. Moreover, it was noticed presence of coagulase-positive Staphylococcus in two samples of fillet; one of them showed levels above of the microbiological parameters established by the RDC resolution no. 12/2001 ANVISA. Additionally, it was not identified presence of Salmonella spp in any of the samples analyzed. Generally, the studied samples were in good condition for human consumption, except for two samples of fillets. Fillets presented higher levels of contamination comparing with muscles of the fresh tilapia. Fecal pollution indicators have proved that the skin was the organ with higher levels of contamination