Orientador : Antonio Fernando Pestana de Castro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T13:42:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricci_LucilaCostallat_M.pdf: 2722787 bytes, checksum: c585e33db089b8eb3bc8c6a18857706c (MD5) Previous issue date: 1980 / Resumo: Para posteriores estudos das propriedades e efeitos biológicos da enterotoxina ST de Escherichia coli, contribuindo desta forma para elucidação do mecanismo de ação da mesma, este trabalho teve como objetivo, purifica-la ou semi-purifica-la a partir de sobrenadantes de cultura em meio de CAYE. Assim sendo, com um único preparado bruto de sobrenadante de cultura obtido a partir de uma amostra de origem humana, foram estudadas as características físico-químicas da molécula de ST. A partir desta análise desenvolvemos uma seqüência de purificação da mesma, tendo sido obtido os segintes resultados e conclusões: 1) Os métodos clássicos de precipitação por sulfato de amônio; TCA e acetona, não foram eficientes para a separação da toxina, podendo entretanto, serem utilizados para eliminação de contaminantes. 2) Ultrafiltração em membranas que permitam a separação de moléculas com peso molecular de até 10.000, não tiveram utilidade na purificação da enterotoxina ST, uma vez que a mesma e a maioria dos constituintes do meio de CAYE, apresentaram peso molecular inferior a este limite. 3) Filtração em resinas de Sephadex G-15 e G-25, parecem adequadas para a purificação da enterotoxina ST, desde que resolvidos problemas da interação de substâncias do meio de CAYE e da própria toxina com a matriz do gel... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Antonio Fernando Pestana de Castro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-16T22:05:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricci_LucilaCostallat_D.pdf: 10174303 bytes, checksum: ecb6e9b94df041a1820a718f3691aec2 (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: Nas reações sorológicas de imuno-hemólise passiva (IHP), imuno-hemólise radial (IHR) e hemaglutinação indireta (IH), usadas na detecção das enterotoxinas LTs de Escherichia coli, de origem humana e suína e toxina colérica, estas se absorvem naturalmente as hemácias de carneiro, sem a necessidade de qualquer agente ligante. Esta ligação só poderia ser explicada, pela presença de receptores específicos para estas essas enterotoxinas nessas células, que até o momento, não haviam sido identificados e caracterizados. Como o propósito de esclarecermos a natureza desses receptores, nos propusemos, no presente trabalho, a estudar os seguintes itens: a) Verificar a sensibilização de eritrócitos de galinha cobaia, boi e do homem, pelas enterotoxinas LTs, de origem humana e suína e TC, a fim de obtermos subsídios para podermos comparar eventuais diferenças nos receptores para estas toxinas em hemácias, além de uma provável adaptação das técnicas sorológicas de IHP, IHR e HI, à essas células. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Doutorado / Imunologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Fernando Antonio de Ávila / Resumo: Escherichia coli patogênica aviária (APEC) é o principal agente da colibacilose, responsável por perdas econômicas em todo o mundo. Na literatura não há um consenso sobre o que define exatamente um patótipo APEC e não se sabe o papel das galinhas de angola na transmissão de APEC para humanos e outros animais. O presente estudo teve como objetivo investigar a presença de APEC em amostras de fezes e orofaringe de galinhas de angola saudáveis e de vida livre, bem como pesquisar fatores de virulência e caracterizá-las filogeneticamente e de acordo com o sorotipo e perfil de resistência a antimicrobianos. Os isolados obtidos apresentaram alta frequência de genes associados à virulência (VAGs) sendo a maioria pertencente ao grupo filogenético B1 e os pertencentes aos grupos B2 e F estiveram associados a um maior número de VAGs. Além disso, grande parte dos isolados foram considerados de alta patogenicidade e apresentaram um perfil de multi resistência a antimicrobianos, incluindo a presença de genes β-lactamases de espectro estendido. Os sorogrupos O2, O51e H4 foram os mais encontrados, sendo o sorotipo O51: H14 o de maior prevalência. As análises PFGE e MLST revelaram uma elevada heterogeneidade entre os isolados associados a 16 Sequence types (ST). Os resultados demonstraram que as galinhas de angola saudáveis e de vida livre podem se constituir como fontes de infecção de ExPEC para outros animais que têm contato próximo com essas aves, incluindo seres humanos. / Abstract: Avian Pathogenic Escherichia coli (APEC) is the main agent of colibacillosis, responsible for economic losses worldwide. In the literature there is no consensus on what exactly defines this pathotype and the role of guinea fowls in transmitting APEC to humans and other animals is unknown. The present study aimed to investigate the presence of APEC in feces and oropharynx samples from healthy and free-living guinea fowls, as well as to investigate virulence factors and characterize phylogenetically them and according to the serotype and antimicrobial resistance profile . The obtained isolates showed high frequency virulence associated genes (VAGs) being the majority belonging to the phylogenetic group B1 and those belonging to groups B2 and F were associated to a greater number of VAGs. In addition, most of the isolates were considered to be highly pathogenic and had a multi-resistant antimicrobial profile, including the presence of extended-spectrum βlactamases. Serogroups O2, O51 and H4 were the most frequently found, with serotype O51:H14 being the most prevalent. The PFGE and MLST analyzes revealed a high heterogeneity among isolates associated with 16 Sequence types (ST). The results showed that healthy and free-living guinea fowls may be sources of ExPEC infection for other animals that have close contact with these birds, including humans. / Doutor

A colibacilose é a denominação comum a diferentes lesões locais ou sistêmicas causadas pela bactéria E.coli com propriedades patogênicas . Essas lesões são conhecidas como a principal causa infecciosa de condenação de carcaças. No Brasil, entre 2001 e 2005, essa condenação gerou um prejuízo estimado em US 58 milhões à avicultura . Deste total, 19 milhões podem ser creditados à presença de lesões cutâneas de celulite e 39 milhões a lesões sistêmicas. A E.coli é o principal habitante do trato gastrintestinal de mamíferos e de aves. Nos aviários, é possível encontrar 106 UFC/grama de fezes, tornando praticamente impossível a eliminação deste agente no ambiente. A dificuldade que envolve a E.coli está na classificação desta como patogênica, haja vista que a diferenciação entre cepas virulentas e avirulentas continua sendo um problema após o diagnóstico bacteriológico. A biologia molecular vem auxiliando no maior entendimento dos mecanismos de patogenicidade das E. coli e cada vez mais, é demonstrada a grande importância da interação dos diversos fatores de virulência na determinação da patogenicidade. Este trabalho tem como objetivo gerar novos elementos para o maior entendimento da patogenicidade da E.coli, traçando uma nova metodologia de classificação, através de um índice no qual, além do número de animais mortos, também se consideraram o tempo de morte e a capacidade da cepa causar lesão compatível à colibacilose em pintos de 1 dia. Observou-se diferença significativa entre amostras oriundas de celulite e quadro respiratório em relação a amostras oriundas de cama no método proposto, além do fato de também existir a mesma relação entre o tipo e a quantidade de lesões formadas, conforme a origem do isolado. Obteve-se, ainda, um banco de dados gerado a partir desse primeiro experimento, que permitiu o uso de Redes Neurais Artificiais na construção de modelos que simulavam esse mesmo teste de patogenicidade, sem o uso de animais, adotando como informações de entrada alguns dos principais fatores de virulência associados a amostras patogênicas, origem das amostras e o índice de patogenicidade obtidos. Os resultados quanto às predições corretas foram em torno de 80,00%, permitindo concluir que as redes podem ser uma alternativa para substituir testes de patogenicidade in vivo na classificação de amostras de E.coli de origem aviária. / The colibacillosis is the common denomination for different local or systemic lesions caused by E. coli bacteria with pathogenic properties. These lesions are known as the leading infectious cause of condemnation of carcasses. In Brazil, between 2001 and 2005, that disease led to a loss estimated at 58 million for poultry. Of this total, 19 million can be credited to the presence of cutaneous lesions of cellulitis and 39 million to other organs. E. coli is the main habitant of the gastrointestinal tract of mammals and birds. In the aviaries, you can find 106 CFU / gram of feces, making it virtually impossible to eliminate this agent in the environment. The difficulty surrounding the E. coli in this classification as pathogenic, given that the differentiation between virulent and avirulent strains remains a problem after the bacteriological diagnosis. Molecular biology has helped in better understanding the mechanisms of pathogenicity of E. coli and, increasingly, it demonstrated the great importance of the interaction of different virulence factors in determining the pathogenicity. This work aims to generate new elements for better understanding the pathogenicity of E. coli, marking a new classification methodology, through an index in which, besides the number of dead animals are often considered the time of death and the capacity of strains cause lesions compatible with colibacillosis in chicks of 1 day old. There was significant difference between samples from cellulitis and respiratory symptoms compared to samples from litter in the proposed method, besides the fact that there is also the same relationship between the type and number of lesions formed depending on the origin of the isolate. We obtained also a database generated from this first experiment, which allowed the use of Artificial Neural Networks in the construction of models that simulated the same pathogenicity test, without the use of animals, taking as input information some main virulence factors associated with pathogenic samples, origin of samples and pathogenicity index obtained. The results regarding the predictions have been around 80.00%. These results show that neural networks can be an alternative to replace pathogenicity tests in vivo in the classification of samples of E. coli of avian origin.

A colibacilose é a denominação comum a diferentes lesões locais ou sistêmicas causadas pela bactéria E.coli com propriedades patogênicas . Essas lesões são conhecidas como a principal causa infecciosa de condenação de carcaças. No Brasil, entre 2001 e 2005, essa condenação gerou um prejuízo estimado em US 58 milhões à avicultura . Deste total, 19 milhões podem ser creditados à presença de lesões cutâneas de celulite e 39 milhões a lesões sistêmicas. A E.coli é o principal habitante do trato gastrintestinal de mamíferos e de aves. Nos aviários, é possível encontrar 106 UFC/grama de fezes, tornando praticamente impossível a eliminação deste agente no ambiente. A dificuldade que envolve a E.coli está na classificação desta como patogênica, haja vista que a diferenciação entre cepas virulentas e avirulentas continua sendo um problema após o diagnóstico bacteriológico. A biologia molecular vem auxiliando no maior entendimento dos mecanismos de patogenicidade das E. coli e cada vez mais, é demonstrada a grande importância da interação dos diversos fatores de virulência na determinação da patogenicidade. Este trabalho tem como objetivo gerar novos elementos para o maior entendimento da patogenicidade da E.coli, traçando uma nova metodologia de classificação, através de um índice no qual, além do número de animais mortos, também se consideraram o tempo de morte e a capacidade da cepa causar lesão compatível à colibacilose em pintos de 1 dia. Observou-se diferença significativa entre amostras oriundas de celulite e quadro respiratório em relação a amostras oriundas de cama no método proposto, além do fato de também existir a mesma relação entre o tipo e a quantidade de lesões formadas, conforme a origem do isolado. Obteve-se, ainda, um banco de dados gerado a partir desse primeiro experimento, que permitiu o uso de Redes Neurais Artificiais na construção de modelos que simulavam esse mesmo teste de patogenicidade, sem o uso de animais, adotando como informações de entrada alguns dos principais fatores de virulência associados a amostras patogênicas, origem das amostras e o índice de patogenicidade obtidos. Os resultados quanto às predições corretas foram em torno de 80,00%, permitindo concluir que as redes podem ser uma alternativa para substituir testes de patogenicidade in vivo na classificação de amostras de E.coli de origem aviária. / The colibacillosis is the common denomination for different local or systemic lesions caused by E. coli bacteria with pathogenic properties. These lesions are known as the leading infectious cause of condemnation of carcasses. In Brazil, between 2001 and 2005, that disease led to a loss estimated at 58 million for poultry. Of this total, 19 million can be credited to the presence of cutaneous lesions of cellulitis and 39 million to other organs. E. coli is the main habitant of the gastrointestinal tract of mammals and birds. In the aviaries, you can find 106 CFU / gram of feces, making it virtually impossible to eliminate this agent in the environment. The difficulty surrounding the E. coli in this classification as pathogenic, given that the differentiation between virulent and avirulent strains remains a problem after the bacteriological diagnosis. Molecular biology has helped in better understanding the mechanisms of pathogenicity of E. coli and, increasingly, it demonstrated the great importance of the interaction of different virulence factors in determining the pathogenicity. This work aims to generate new elements for better understanding the pathogenicity of E. coli, marking a new classification methodology, through an index in which, besides the number of dead animals are often considered the time of death and the capacity of strains cause lesions compatible with colibacillosis in chicks of 1 day old. There was significant difference between samples from cellulitis and respiratory symptoms compared to samples from litter in the proposed method, besides the fact that there is also the same relationship between the type and number of lesions formed depending on the origin of the isolate. We obtained also a database generated from this first experiment, which allowed the use of Artificial Neural Networks in the construction of models that simulated the same pathogenicity test, without the use of animals, taking as input information some main virulence factors associated with pathogenic samples, origin of samples and pathogenicity index obtained. The results regarding the predictions have been around 80.00%. These results show that neural networks can be an alternative to replace pathogenicity tests in vivo in the classification of samples of E. coli of avian origin.

Submitted by JULIANA DA SILVA MENEZES AZOLA null (julianatutora23@yahoo.com.br) on 2017-01-05T18:20:16Z No. of bitstreams: 1 Tese_Juliana_da_Silva_Menezes_Azola.pdf: 1283526 bytes, checksum: 3710665b62f6ef126cbd8e2ca68a8629 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-01-10T17:16:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 azola_jsm_dr_jabo.pdf: 1283526 bytes, checksum: 3710665b62f6ef126cbd8e2ca68a8629 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-10T17:16:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 azola_jsm_dr_jabo.pdf: 1283526 bytes, checksum: 3710665b62f6ef126cbd8e2ca68a8629 (MD5) Previous issue date: 2016-12-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A diarreia neonatal é uma das mais recorrentes enfermidades que acometem bezerros, acarretando prejuízos à pecuária leiteira. Nestes casos, um dos micro-organismos mais prevalentes é Escherichia coli, relacionada à contaminação fecal e a surtos alimentares. Para o tratamento, a crescente resistência bacteriana a antimicrobianos leva à busca por novas alternativas farmacológicas. O presente trabalho teve como objetivo geral testar a susceptibilidade de isolados de E. coli oriundos de bezerros neonatos diarreicos e sem diarreia a extratos vegetais. Os animais pertenceram a fazendas destinadas à produção leiteira no Estado de Minas Gerais, Brasil. As amostras foram submetidas ao isolamento microbiológico, à sorologia, à identificação genética por PCR e a testes antimicrobianos. Em relação aos antissoros polivalentes, houve isolados positivos a sorogrupos de importância clínica em humanos, como O26 e O111. Foram isoladas 36 estirpes oriundas de animais acometidos, positivas para pelo menos um gene testado, sendo eles stx1, stx2, eae, bfp e Sta. Relacionadas ao isolamento de animais sem diarreia, 9 estirpes foram carreadoras dos genes stx1, stx2 ou ambos, caracterizando os bovinos como reservatórios do patótipo STEC. O gene LT-II não foi encontrado. Quanto aos testes de susceptibilidade, encontrou-se isolados resistentes a diferentes classes de antimicrobianos. Entre os extratos testados, houve sensibilidade frente à planta Salvia officinalis L. (sálvia). Assim, esta vertente de estudo coloca-se como alternativa ao combate a patógenos bacterianos, válida para futuros testes quanto à descoberta de novos componentes químicos que possuam atividade antimicrobiana. / Neonatal diarrhea is one of the most recurrent illnesses that affect calves, resulting in losses to dairy farming. In these cases, one of the most prevalent microorganisms is Escherichia coli that is related to fecal contamination and food outbreaks. For the treatment, the increase bacterial resistance to antimicrobials leads to the search for new pharmacological alternatives. The main aim of this study was to test the susceptibility of E. coli isolated from neonatal calves with diarrhea and healthy to plant extracts. The animals were found in farms which are dairy-producing in the State of Minas Gerais, Brazil. The samples were subject to microbiological isolation, serology, PCR genetic identification and antimicrobial testing. In relation to polyvalent antiserum, there were positive isolates of clinical importance of serogroups in humans, such as O26 and O111. Thirty six strains were isolated from affected animals and they were positive to at least one gene tested, such as stx1, stx2, eae, bfp and Sta. Related to the healthy animals, 9 strains were carriers of the genes stx1, stx2 or both, characterizing the cattles as reservoirs of pathotype STEC. The gene LT-II was not found. In relation to susceptibility tests, resistant isolates to different classes of antimicrobials were found. Among the extracts that were tested, there was sensitivity to the Salvia officinalis L. plant (sálvia). Thus, this aspect of study can be alternative to combat the bacterial pathogens, valid for future tests as to the discovery of new chemical compounds with antimicrobial activity. / FAPESP: 14/06313-3

A colibacilose é a denominação comum a diferentes lesões locais ou sistêmicas causadas pela bactéria E.coli com propriedades patogênicas . Essas lesões são conhecidas como a principal causa infecciosa de condenação de carcaças. No Brasil, entre 2001 e 2005, essa condenação gerou um prejuízo estimado em US 58 milhões à avicultura . Deste total, 19 milhões podem ser creditados à presença de lesões cutâneas de celulite e 39 milhões a lesões sistêmicas. A E.coli é o principal habitante do trato gastrintestinal de mamíferos e de aves. Nos aviários, é possível encontrar 106 UFC/grama de fezes, tornando praticamente impossível a eliminação deste agente no ambiente. A dificuldade que envolve a E.coli está na classificação desta como patogênica, haja vista que a diferenciação entre cepas virulentas e avirulentas continua sendo um problema após o diagnóstico bacteriológico. A biologia molecular vem auxiliando no maior entendimento dos mecanismos de patogenicidade das E. coli e cada vez mais, é demonstrada a grande importância da interação dos diversos fatores de virulência na determinação da patogenicidade. Este trabalho tem como objetivo gerar novos elementos para o maior entendimento da patogenicidade da E.coli, traçando uma nova metodologia de classificação, através de um índice no qual, além do número de animais mortos, também se consideraram o tempo de morte e a capacidade da cepa causar lesão compatível à colibacilose em pintos de 1 dia. Observou-se diferença significativa entre amostras oriundas de celulite e quadro respiratório em relação a amostras oriundas de cama no método proposto, além do fato de também existir a mesma relação entre o tipo e a quantidade de lesões formadas, conforme a origem do isolado. Obteve-se, ainda, um banco de dados gerado a partir desse primeiro experimento, que permitiu o uso de Redes Neurais Artificiais na construção de modelos que simulavam esse mesmo teste de patogenicidade, sem o uso de animais, adotando como informações de entrada alguns dos principais fatores de virulência associados a amostras patogênicas, origem das amostras e o índice de patogenicidade obtidos. Os resultados quanto às predições corretas foram em torno de 80,00%, permitindo concluir que as redes podem ser uma alternativa para substituir testes de patogenicidade in vivo na classificação de amostras de E.coli de origem aviária. / The colibacillosis is the common denomination for different local or systemic lesions caused by E. coli bacteria with pathogenic properties. These lesions are known as the leading infectious cause of condemnation of carcasses. In Brazil, between 2001 and 2005, that disease led to a loss estimated at 58 million for poultry. Of this total, 19 million can be credited to the presence of cutaneous lesions of cellulitis and 39 million to other organs. E. coli is the main habitant of the gastrointestinal tract of mammals and birds. In the aviaries, you can find 106 CFU / gram of feces, making it virtually impossible to eliminate this agent in the environment. The difficulty surrounding the E. coli in this classification as pathogenic, given that the differentiation between virulent and avirulent strains remains a problem after the bacteriological diagnosis. Molecular biology has helped in better understanding the mechanisms of pathogenicity of E. coli and, increasingly, it demonstrated the great importance of the interaction of different virulence factors in determining the pathogenicity. This work aims to generate new elements for better understanding the pathogenicity of E. coli, marking a new classification methodology, through an index in which, besides the number of dead animals are often considered the time of death and the capacity of strains cause lesions compatible with colibacillosis in chicks of 1 day old. There was significant difference between samples from cellulitis and respiratory symptoms compared to samples from litter in the proposed method, besides the fact that there is also the same relationship between the type and number of lesions formed depending on the origin of the isolate. We obtained also a database generated from this first experiment, which allowed the use of Artificial Neural Networks in the construction of models that simulated the same pathogenicity test, without the use of animals, taking as input information some main virulence factors associated with pathogenic samples, origin of samples and pathogenicity index obtained. The results regarding the predictions have been around 80.00%. These results show that neural networks can be an alternative to replace pathogenicity tests in vivo in the classification of samples of E. coli of avian origin.

Orientadores : Tomomasa Yano, Maria Sumiko Arita Matsuura / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T22:59:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amorim_ClaudioRobertoNobrega_D.pdf: 4855224 bytes, checksum: 09ea3f25bce591997cc5ee4f3000559b (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Colibacilose enterotoxigênica ocorre em leitões recém-nascidos e porcos no pósdesmame. Um dos fatores de virulência de E. coli é a presença de antígenos de aderência, muitas vezes estruturas do tipo fimbria, que permite a ligação da bactéria às células do hospedeiro. Em 1986, Yano et ai. descreveram uma nova adesina, chamada de F42. Este trabalho tem por objetivo a caracterização bioquímica desta fimbria a nível molecular e comparar sua estrutura primária com a da fimbria F41, a fim de diferenciá-Ias. Assim, a fimbria F42 foi extraída e purificada através de cromatografia em coluna de gel filtração Sepharose CL 4B, equilibrada com tampão Tris-HCI O,O25M com NaCI O,15M, pH 7,4; apresentando massa molecular aparente de 16 kDa. Foi feita a análise da composição de aminoácidos da proteína, demonstrando a presença de aproximadamente 145 resíduos em uma única cadeia e mostrando diferenças com a fimbria F41. Fez-se, também, sua redução e carboximetilação, digestão com brometo de cianogênio, separação dos peptídeos através de cromatografia em coluna de fase reversa Cs e obtenção de peptídeos menores com a fimbria submetida à ação de tripsina tratada com N-tosil-Lfenilalanilclorometil cetona (TPCK). Os peptídeos resultantes da digestão foram separados através de cromatografia em coluna de fase reversa CIs. Foi feita nova digestão com CNBr e os peptídeos separados e purificados em coluna Superdex Peptide e foi feita a análise da composição de aminoácidos dos peptídeos. Foi feita a extração do DNA plasmidiano e PCR da amostra padrão. Foram feitas, também, digestões com Tripsina e Endoproteinase Asp-N, separação em cromatografia de fase reversa, análise da composição de aminoácidos de alguns peptídeos e sequenciamento de aminoácidos destes peptídeos e da porção Nterminal até o 32° resíduo, com o seguinte resultado: aswtegqpgdiiiggeitspsvkwlwktgegl Tentou-se, ainda, o sequenciamento da porção C-terminal com carboxipeptidase Y / Abstract: Enterotoxigenic colibacillosis occurs in newborn piglets and weaned pigs. One of the factors of virulence of E. coli is the presence of antigens of adherence, often fimbria type structure, that allow the connection of the bacteria to the cells of the host. In 1986, Yano et al. described a new adesin, denominated of F42. This work aims the biochemical characterization of this fimbria at molecular level and to compare their primary structure to the fimbria F41, in order to distinguish them. Thus, the fimbria F42 was extracted and purified through chromatography of gel filtration in Sepharose CL 4B equilibrated with lid Tris-HCI O,O25M with NaCI O,15M, pH 7,4, presented a molecular mass apparent of 16kDa. It was performed the analysis of the amino acids composition of the protein, and was demonstrated the presence of 145 residues e showing differences with F41 fimbria. It was made their reduction, carboximetilation, cianogen bromide digestion, separation of the peptides through of reverse phase chromatography Cs and obtaining of smaller peptides with the fimbria subject to the action of tripsin treated with N-tosil-L-phenylalanilc1orometil ketone (TPCK). The resulting peptides of the digestion were separate through reverse phase chromatography CIs. It was undergone digestion with CNBr and the separate peptides and purified in Superdex Peptide column and it was made the analysis of the composition of amino acids of the peptides. They were made the extraction of the plasmidial DNA and PCR of the sample standard. They were done, also, digestions with Tripsin and Endoproteinase Asp-N, separation in reverse phase chromatography, analysis of the composition of amino acids of some peptides and sequencing of amino acids of these peptides and of the portion N-terminal to the 32nd residue, presenting these results: aswtegqpgdiiiggeitspsvkwlwktgeg. The sequencing of the portion C-terminal was tried with carboxipeptidase Y / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

O setor avícola desempenha importante papel na economia brasileira. Com a intensificação da produção de aves surge a necessidade de ferramentas que auxiliem na detecção correta dos microrganismos responsáveis por perdas produtivas. O Tocantins por possuir território disponível e condições climáticas, tais como calor e umidade que aperfeiçoam a produção desta espécie, propicia também a proliferação de patógenos, necessitando de diagnósticos precoces. A Escherichia coli (E. coli) é uma bactéria Gram-negativa encontrada na microbiota normal de animais de produção. No entanto, existem espécies patogênicas que são responsáveis por perdas produtivas na avicultura devido a problemas como as condenações durante o abate. Atualmente, estas cepas estão separadas em categorias de acordo com seus fatores de virulência, responsáveis pelos mecanismos de fisiopatogenia, tanto animal quanto em humano. Os fatores de virulência vão desde a liberação de toxinas, até a presença de genes específicos que estabelecem a patogenia no hospedeiro. A correta identificação de cada categoria desta bactéria por meio da detecção da presença de fatores de virulência com o auxílio da biologia molecular assume papel fundamental para possíveis decisões em profilaxia e aprimoramento do manejo, com intuito de minimizar perdas produtivas. Atualmente, são escassos trabalhos que identifiquem lesões extras intestinais em aves ocasionadas por E. coli diarreinogênicas, assim o objetivo do presente trabalho foi demonstrar a associação de lesões em aves com patotipos de E. coli comumente detectadas em mamíferos. / The poultry sector plays an important role in the Brazilian economy. With the intensification of poultry production comes the need for tools to assist in the correct detection of microrganisms responsible for production losses. Tocantins to own land available and weather conditions such as heat and humidity that enhance the production of this species, also favors the proliferation of pathogens, requiring early diagnosis. Escherichia coli (E. coli) is a Gram-negative bacteria found in the normal microflora of farm animals. However, there are pathogenic species which are responsible for production losses in poultry due to problems such as sentences during slaughter. Currently, these strains are separated into categories according to their virulence factors responsible for the pathogenesis mechanisms, both animal and human. The virulence factors ranging from the release of toxins to the presence of specific genes which provide for the pathogenesis in the host. The correct identification of each category of the bacteria through detecting the presence of virulence factors with the aid of molecular biology plays a critical role in possible decisions prophylaxis and improvement of handling, in order to minimize production losses. Currently, there are few studies that identify intestinal extra injuries caused by poultry E. coli diarrheagenic, so the aim of this study was to demonstrate the association of diseases in poultry with pathotypes of E. coli commonly found in mammals.

Os β- glucanos são polissacarídeos que possuem atividade imunomoduladora. A colibacilose é uma das principais doenças da avicultura, pois causa grandes perdas econômicas. Diante da necessidade de se estabelecer a ação do β-glucano solúvel nas aves, foram realizados dois experimentos. Um para se avaliar os efeitos do β-glucano solúvel, administrado por diferentes vias, na produção de anticorpos séricos IgA e IgG, nos parâmetros zootécnicos e outro na infecção por Escherichia coli (EC). Os experimentos foram realizados ao mesmo tempo, em galpões diferentes, sendo alojados 160 frangos de corte da linhagem Ross (Aviagen®), do primeiro ao 42o dia de idade. β-glucano solúvel foi administrado no primeiro dia, na dose de 215µg/ave, nas seguintes vias de administração: subcutânea (SC), ocular (OC) e oral (VO). O controle negativo foi o mesmo para os dois experimentos. Os tratamentos do Experimento 1 (Vias de Administração) foram: T2(SC), T3(OC) e T4(VO). O experimento onde as aves foram desafiadas por Escherichia coli foi o Experimento 2 (β-glucano e Escherichia coli). As mesmas vias de inoculação foram também estudadas nestes tratamentos, assim: T5 (controle positivo) foi desafiado e não recebeu o β-glucano solúvel, T6(SC+EC), T7(OC+EC) e T8(VO+EC). O desafio foi realizado com E. coli sorotipo O119, por via saco aéreo torácico direito aos 14 dias de idade, sendo que cada ave recebeu 4x106 UFC. As aves foram pesadas semanalmente para a análise dos parâmetros zootécnicos e toda ração adicionada foi pesada. Aos 28, 35 e 42 dias foi colhido sangue de todas as aves para se determinar por ensaio imunoenzimático indireto (ELISA indireto) as concentrações séricas de IgG e IgA totais. Nas aves infectadas foi determinado o escore de lesão, analisando a intensidade das lesões em sacos aéreos, fígado e coração. No Experimento 1 (Vias de Inoculação) os resultados mostraram concentrações séricas de IgA nas aves do T4(OC) menores que nas aves dos demais tratamentos. Em relação a IgG as aves do T4(VO) apresentaram concentrações maiores que aquelas dos demais tratamentos. No Experimento 2 (β-glucano e Escherichia coli) as aves do T7(OC+EC) tiveram as menores concentrações de IgA e apresentaram a melhor viabilidade dentre as aves dos grupos desafiados. As aves do T6(SC+EC) apresentaram concentrações maiores de IgG aos 35 e 42 dias. Quanto ao escore de lesão houve redução no grau de lesão em todos os grupos que receberam o β- glucano solúvel, exceto no saco aéreo torácico direito. Sugere-se que o uso do β- glucano solúvel possa reduzir as lesões causadas por Escherichia coli. A administração por via ocular levou a melhor viabilidade nas aves desafiadas, apesar de ter menor produção de anticorpos IgA tanto nas aves infectadas como nas aves não desafiadas. Serão necessários mais estudos para se estabelecer melhor as ações imunomoduladoras do β-glucano nas aves. / The β-glucans are polysaccharides that possess immunomodulatory activity. The colibacillosis is a major disease of poultry; it contributes to great economic losses. Faced with the need to establish the action of soluble β-glucan in birds, two experiments were conducted. One to evaluate the effects of soluble β-glucan administered by different routes, in the production of serum IgA and IgG antibodies in zootechnical parameters and other infection in Escherichia coli (EC). The experiments were performed simultaneously in different warehouses, being housed 160 broilers Ross (Aviagen ®) from first to 42nd days of age. β-glucano soluble was administered on the first day, the dose of 215µg/bird on the following routes of administration: subcutaneous (SC), ocular (OC) and oral (PO). The negative control was the same for both experiments. The treatments of the experiment called Experiment 1 (Routes of Administration) were: T2 (SC), T3(OC) and T4(VO). The experiment where birds were challenged by Escherichia coli was termed Experiment 2 (β-glucan e Escherichia coli). The same routes of inoculation were also studied in these treatments, thus: T5 (positive control), was challenged and did not receive soluble β-glucan, T6(SC+EC), T7(OC+EC) and T8(VO+EC). The challenge was performed with E. coli serotype O119, through the right thoracic air sac at 14 days of age, each bird was given 4x106 CFU. The birds were weighed weekly for analysis of zootechnical parameters ration added and the whole was weighed. At 28, 35 and 42 days blood was collected from all birds to determine by Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) serum concentrations of total IgG and IgA. In birds infected was determined the injury score by analyzing the intensity of the lesions in air sacs, liver and heart. In the Experiment 1 (Routes of Inoculation) the results showed serum IgA in birds of T4(OC) smaller than the other treatments in birds. Regarding IgG the birds of T4(VO) had levels greater than those of other treatments. In Experiment 2 (β-glucan and Escherichia coli) birds of T7(OC+EC) had the lowest concentrations of IgA and showed the best viability among groups of birds challenged. Birds of T6(SC+EC) showed higher concentrations of IgG at 35 and 42 days. As for the injury score decreased the degree of injury in all groups receiving β- glucan soluble except in right thoracic air sac. It is suggested that the use of β-glucan soluble can reduce injuries caused by Escherichia coli. The administration by ocular route led to better viability challenged birds, despite having lower production of IgA in both the infected birds as the birds not challenged. Further studies are needed to better establish the immunomodulatory actions of β-glucan in birds.