Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4877_1.pdf: 111207 bytes, checksum: 712e40230bf12fe0fb480366b5f38078 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Transformações neoplásicas apresentam modificações na composição e distribuição de oligossacarídeos da superfície celular de glicoproteínas e glicolipídeos, a partir desta característica, lectinas vêm sendo utilizadas como sondas no auxílio de diagnósticos histopatológicos de tecidos de mama, útero e cérebro, entre outros. Quimiluminescência é uma a técnica que possui baixos limites de detecção e amplas faixas dinâmicas. O éster de acridina vem sendo utilizado em sistemas quimiluminescentes para imunodiagnóstico conjugado a anticorpos. Neste trabalho, o éster de acridina foi conjugado à Concanavalina A (Con A) e empregado como marcador histoquímico quimiluminescente. Foram utilizados tecidos mamários humanos normais e diagnosticados como carcinoma ductal infiltrante (CDI). Na metodologia utilizada a emissão de fótons, durante a hidrólise do éster de acridina conjugado à Con A, que foi quantificada, expressada em unidade relativas de luz (URL) e correlacionada com a marcação do tecido, normal ou transformado. Os resultados encontrados demonstraram uma proporcionalidade de URL com a intensidade de marcação dos tecidos estudados. Os valores de URL para o tecido mamário normal (2,565x103 ± 0,247x103) foram inferiores aos obtidos para o CDI (1.283,920x103 ± 220,621x103). A eficiência da conjugação da lectina ao éster de acridina, a marcação diferenciada do tecido normal e CDI, e a quantificação dos resultados obtidos contribuem para diminuir a subjetividade no diagnóstico histopatológico de rotina e possibilitam o emprego do éster de acridina como marcador de lectinas para uso em histoquímica

Virtually all extracellular proteins in humans are glycoproteins and likewise are many biopharmaceuticals. The glycosylation is directly correlated to biological function and stability of these proteins. The ability to isolate glycoproteins is thus of great importance in many applications. The most common isolation method for glycoproteins is affinity chromatography using lectins, a ubiquitous and versatile group of carbohydrate-binding proteins. The lectin Concanavalin A (ConA) has long been used for this purpose but suffers from undesired leakage into the eluate, causing an inquiry of alternative chromatography ligands or optimization of the ConA resin.In this study, a total of 20 different lectins, including ConA, were evaluated and compared in terms of suitability as ligands in affinity chromatography for glycoprotein isolation. The lectins’ binding to glycoproteins were studied, mainly through microtiter plate binding assays using a monoclonal IgG1 antibody and Conalbumin (Ovotransferrin). Further, sugar-specificities and potential eluting sugars for the lectins were examined through inhibition with eight different carbohydrates. Additionally, the glycoprotein binding and leakage of ConA columns were examined, and a potential leakagereducing treatment of ConA resin evaluated.ConA was found to be superior in binding to the investigated glycoproteins but exhibited a limited binding when immobilized to an agarose resin. This discrepancy is likely a consequence of structurally hidden glycans on the used glycoproteins and requirements of long residence time when used in a chromatographic setting. Binding competition with several sugars were investigated with a similar microtiter plate binding assay. This method displayed potential to predict the behaviour of sugars and their suitability as eluting agents in a chromatography column. The best eluting sugar for ConA was showed to be methylmannoside, ideally in combination with methylglucoside. Lastly, evaluation of ConA columns with a crosslinking glutaraldehyde-treatment showed that the ConA ligand leakage may be significantly reduced, although further studies and optimizations are needed.This study thus presents a repertoire of lectins and their differences in terms of glycoprotein-binding and sugar-specificity, as well as evaluations of ConA columns’ efficiency and potential leakage-prevention.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-08T18:22:35Z No. of bitstreams: 2 TESE Geórgia de Sousa Ferreira Soares.pdf: 2287209 bytes, checksum: 9762ebb4675d95dd929fcb3db11523e7 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T18:22:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Geórgia de Sousa Ferreira Soares.pdf: 2287209 bytes, checksum: 9762ebb4675d95dd929fcb3db11523e7 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Capes; CNPq / A lectina Concanavalina A (ConA), obtida das sementes de Canavalia ensiformis, é uma proteína que se liga especificamente à manose e glicose (e estruturas mais complexas, como receptores celulares, que contenham resíduos expostos desses carboidratos). Essa lectina possui várias atividades biológicas, incluindo a modulação de propriedades imunológicas e electrofisiológicos do cérebro. No presente estudo, foi caracterizada a ação da ConA sobre o fenômeno dependente da excitabilidade cerebral conhecido como Depressão Alastrante Cortical (DAC); estudou-se também a imunomarcação da microglia com um anticorpo policlonal contra a proteína Iba1 (Ionized calcium binding adaptor molecule 1). Ratos Wistar machos (n = 89) foram amamentados em condições favoráveis ou desfavoráveis de lactação, representadas respectivamente por ninhadas com 6-7 filhotes (grupo N6) ou 12-14 filhotes (grupos N12). Do 5º ao 24º dia pós-natal, foram tratados por via intraperitoneal com 1 mg/kg ou 10 mg/kg de ConA (grupos L1 e L10, respectivamente), ou com solução salina NaCl 0,9% (grupo Sal), ou sem nenhum tratamento (grupo Ingênuo). Aos 90-120 dias de idade, a DAC foi quimicamente induzida no córtex frontal e registrada em dois pontos da região parietal durante 4 h, e seus parâmetros de velocidade de propagação, amplitude e duração das ondas foram mensurados. Após o registro da DAC, os cérebros foram perfundidos e fixados, seguidos de secções cerebrais para reação com anticorpos anti-Iba1 para quantificação da imunomarcação da microglia. Os grupos N12 apresentaram maior velocidade de propagação da DAC que os grupos N6. Em ambas as condições de lactação, o tratamento sistêmico com a ConA resultou em diminuição significativa, dose-dependente, da velocidade de propagação da DAC (p < 0,05), em comparação aos grupos controle (Salina e Ingênuo). A amplitude e duração do componente negativo da variação lenta de voltagem da DAC permaneceram inalterados. Em um grupo adicional de ratos adultos, a aplicação tópica de ConA à superfície cortical também reduziu reversivelmente a velocidade de propagação da DAC. A imunorreatividade da microglia, avaliada no córtex e hipocampo, foi menor nos grupos tratados com ConA, em comparação com os respectivos controles. O hemisfério cerebral no qual a DAC foi repetidamente induzida apresentou maior imunorreatividade em comparação com o hemisfério oposto, principalmente no córtex. Podemos concluir que a atenuação na propagação da DAC e a diminuição da imunorreatividade na microglia em ratos adultos em decorrência da aplicação da lectina ConA (1 mg/kg e 10 mg/kg) durante o período de lactação (fase de grande plasticidade e neurogênese), indicam que essa lectina pode influenciar o desenvolvimento cerebral com ação protetora duradoura no cérebro de ratos. Essa ação não foi dificultada pela condição desfavorável de lactação. Desse modo, a lectina ConA apresentou-se como uma proteína com potencial ação protetora no cérebro, a julgar pelos efeitos sobre a DAC e sobre a reação microglial.

House mouse hybrid zone is a complex of subspecies Mus musculus musculus, Mus musculus domesticus and their hybrids. This hybrid zone is considered as a tension zone, maintained by balance between dispersion of individuals towards the zone center and negative selection against the hybrids. Decreased anti-parasite resistance could be one of selective factors which maintain the hybrid zone. In this thesis, I use hematological methods and skin-swelling test to compare variability in mouse health state within the house mouse hybrid zone. The skin-swelling test is a method measuring pro-inflammatory immune responsiveness. Since the commonly adopted method to perform this test does not allow clear interpretation of the test results, in this thesis I also aim to optimise the test protoco . I found that utilization of concanavalin A (ConA) is more suitable in mice than application of the commonly used phytohemaglutinin (PHA). Assessment of health state of mice by both hematological methods and skin-swelling test consistently indicates increased ability of anti-parasitic resistance in the subspecies M. m. musculus compared to subspecies M. m. domesticus. Hematological examination further shows better health state of hybrid individuals compared to parental subspecies. Our results support hybrid resistance hypothesis....

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:33:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_cristian_kaefer.pdf: 618934 bytes, checksum: 3a187e51605cfbd7fbc2329acd8b0568 (MD5) Previous issue date: 2012-02-16 / The outer membrane of mammalian sperm is covered by the glycocalyx, a layer rich in carbohydrates which is crucial for the functions and interactions of male gametes with the extracellular environment. Several factors affect the motility and functional integrity of sperm, being the damage caused by excessive production of reactive oxygen species (ROS), an important factor. Lectins are proteins that bind specifically to carbohydrate residues. These proteins are useful tools for investigating the distribution and changes of membrane glycoconjugates. Studies have investigated the oxidative stress in sperm cells, however, to date, no studies have been conducted to evaluate the effect of plant lectins on oxidative stress in spermatozoa. The present study aimed to investigate the pattern of binding and the effects of lectins ConA, extracted from Canavalia ensiformis, ConBol, extracted from C. boliviana, and ConBr, extracted from C. brasiliensis, on motility, viability, lipid peroxidation, and ROS generation in bovine sperm. The three lectins bound to sperm, but with some differences. It was observed that the lectin ConA did not bind to the equatorial segment located between the acrosomal cap and post-acrosomal region. In 18% of sperm cells labeled with ConBol there was not binding in the acrosome region and 45% of ConBr labeled cells showed a fragmented binding to the sperm head. Sperm incubation with Canavalia lectins produced a decrease in motility. ConA and ConBr demonstrated a strong effect to decline motility soon after incubation (13.3 ± 3.3% in both lectins vs. 60 ± 5.7%) (P<0.05). The lowest motility values found was at the 15 µg/ml concentration after 2h incubation for ConBr (1.6 ±1.7%). The cell viability and lipid peroxidation were not affected by any lectin tested (P>0.05). However, ConA, ConBol and ConBr lectins showed similar behavior causing a increase of ROS production over time compared with control (P<0.05). In conclusion, this study demonstrates that sperm incubation with ConA, ConBol and ConBr lectins induce a decrease in motility and an increase generation of ROS that can led to a spermatozoon dysfunction. / A membrana externa dos espermatozoides de mamíferos é coberta pelo glicocálice, uma camada rica em carboidratos que é crucial para as funções e interações dos gametas masculinos com o ambiente extracelular. Vários fatores afetam a motilidade e a integridade funcional dos espermatozoides, sendo o dano causado pela produção excessiva de espécies reativas de oxigênio (ROS) um importante fator. Lectinas são proteínas que se ligam de forma especifica a resíduos de carboidratos. Essas proteínas são ferramentas úteis para a investigação da distribuição e alteração de glicoconjugados de membrana. Estudos investigaram o estresse oxidativo em células espermáticas, porém, até o momento, não foram realizados trabalhos para avaliar o efeito de lectinas vegetais no estresse oxidativo em espermatozoides. O presente estudo teve por objetivo investigar o padrão de ligação e os efeitos das lectinas ConA, extraída de Canavalia ensiformis, ConBol, extraída de C. boliviana, e ConBr, extraída de C. brasiliensis, na motilidade, viabilidade, peroxidação lipídica, e geração de ROS em espermatozoides bovinos. Foi observado que as três lectinas se ligaram aos espermatozóides, mas com algumas diferenças. A lectina ConA não se ligou ao segmento equatorial, localizado entre a capa acrossomal e a região pós-acrossomal. Em 18% dos espermatozoides marcados com ConBol não houve ligação da lectina na região do acrossoma. Já em 45% das células marcadas com ConBr houve uma ligação de aspecto fragmentado a cabeça do espermatozoide. A incubação com as lectinas do gênero Canavalia produziu um decréscimo na motilidade. ConA e ConBr demonstraram um grande efeito na diminuição da motilidade espermática logo após a incubação (13.3 ± 3.3% em ambas as lectinas vs. 60 ± 5.7%) (P<0.05). A motilidade mais baixa ocorreu com a concentração de 15 µg/ml de ConBr após 2h de incubação (1.6 ±1.7%). A viabilidade celular e a peroxidação lipídica não foram afetadas por nenhuma das lectinas testadas (P>0.05). No entanto, as lectinas ConA, ConBol e ConBr apresentaram comportamento similar causando um aumento na produção de ROS ao longo do tempo comparado com o controle (P<0.05). Em conclusão, este estudo demonstra que as lectinas ConA, ConBol e ConBr ligam-se aos carboidratos de membrana de espermatozoides bovinos e induzem uma diminuição da motilidade e aumento na geração de ROS, que pode levar a perda da função celular.