A thesis submitted to the faculty of medicine, University of the Witwatersrand, Johannesburg for the degree of Doctor of Philosophy (Medicine). Johannesburg 1991. / This thesis describes corneal ulceration in the black South African and how the pattern of the disease differs from that seen in white South Africans. Initial comparative surveys of one year each were conducted at St John Eye Hospital and the Johannesburg Hospital. These surveys showed that the main problem area in the black patient was central bacterial corneal ulcers while in the white, central viral ulcers accounted for most of the cases seen. Marginal catarrhal ulceration. in the black was commonly seen but it showed a better response to treatment and a better visual outcome. There was generally a marked male predominance in blacks and this was mainly related to predisposing factors. TIle commonest predisposing factors. in the black. patient were episodes of corneal trauma, climatic droplet keratopathy, corneal scarring, malnutrition and alcohol abuse. Pretreatment with antibiotics was found in nearly half of the patients and this was significantly associated with the absence of significant isolates in 40% of central ulcers. Single Gram-posltlve bacterlal isolates were round in 30% of-central ulcers and single Gram-negative isolates in 15%, While fungal isolates were recovered in 5.5% of central ulcers. Streptococcus pneumoniae was by far the commonest orgllnism. accounting for 42% of SIgnificant bacterial. isolates. This organism and Pseudomonas aeruginos were associated with some of the major complications (deseemetocoeles and perforations). Using fixed treatment regiments the results of treatment in mild and moderate bacterial and fungal keratitis were good, as well as most types of marginal ulcers. Vision was shown to improve significantly in the moderate bacterial infections but not in the severe and complicated bacterial cases, A numerical ranking system for the statistical analysis of visual. acuity is described and the method was found to produce consistent results. In a controlled clinical trial using topical steroids plus antibiotics versus antibiotics alone, no difference in visual outcome could be shown. Complications in the two groups were similar, however, and the steroid did not appear to retard the rate of heating. Recommendations for the incorporation of topical steroid Into a treatment regimen are made. Principles for the management of suppurative keratitis in a developing population are outlined in the conclusions. / AC2017

Purpose: To describe the microbiology results of corneal scrapings and morphology results of corneal ulcers over a one year period at the St John Eye Hospital with the following objectives: (i) to describe the positive culture results (ii) to describe the commonest causative organisms (iii) to describe resistance patterns to antibiotics (iv) to correlate the positive culture results with the clinical characteristics of the ulcer. Methods: A retrospective cross sectional review of patient medical records and microbiology reports of patients who presented with corneal ulcers at the St John Eye Hospital between October 2007 and October 2008. One hundred and fifty one (151) corneal scrapings submitted to the National Health Laboratory Services (NHLS) for microbiology, culture and sensitivity testing were analyzed. The following information was extracted from the microbiology reports and patient medical records: patient demographics, microbial isolations, antibiotic sensitivity and resistance, and corneal ulcer morphology (central versus peripheral). Results: Of the 151 patients who had corneal scrapings, 63(42%) were female and 88(58%) were male. The median age was 39.6(range 1-95; SD 19.3). An organism was identified in 78(52%) of the samples. Of the 93 pathogens isolated, 78(83.9%) were gram positive, 10(10.8%) were gram negative, and 5(5.4%) were fungi. Mixed isolates were found in 15 of the 151 corneal scrapings. The most common gram positive isolates were Staphylococcus aureus 23(29.5%), coagulase negative Staphylococcus 18(23.1%), and Streptococcus pneumoniae 16(20.5%). The two most commonly isolated gram negative organisms were Pseudomonas aeruginosa 3(30%) and Haemophilus influenza 3(30%). A total of 5 fungi were isolated from the 151 corneal scrapings with Fusarium 3(60%) being the most common fungus isolated. Antibiotic resistance patterns were as follows: Gram positive isolates (73) consistently showed 100% sensitivity to vancomycin. A small number of gram positive organisms showed in vitro resistance to the second generation fluoroquinolone ciprofloxacin. This was, however only a small number of gram positive isolates and therefore the P value (P<0.001) remained significant. Overall the gram positives isolates showed a 95.3% sensitivity to ciprofloxacin. Both second and fourth generation fluoroquinolones, ciprofloxacin and moxifloxacin respectively, showed equivalent (100%) in vitro activity against the gram negative isolates. All gram negative isolates showed 100% laboratory susceptibility to the aminoglycosides, gentamicin and amikacin. Inpatient medical records were available for 56 of the 151 corneal ulcer scrapings. Of the 56 inpatient records reviewed 42(75%) were central ulcers. Streptococcus pneumoniae 10(23.8%) was the most common organism isolated in central corneal ulcers, while staphylococcus aureus 4(28.6%) was the most common organism isolated in peripheral corneal ulcers. Conclusion: Compared with previous reports from the St John Eye Hospital, the spectrum of causative organisms has remained unchanged over the past 25 years. The organisms commonly responsible for microbial keratitis at the hospital are significantly susceptibility to the antibiotics currently being used as therapy.

Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Banca: Flávia de Rezende Eugênio / Banca: Natalie Bertelis Merlini / Resumo: A ceratite ulcerativa é uma condição comum e importante e ocorre quando o epitélio e uma quantidade variável de estroma são perdidos. Atualmente, tem-se estudado o emprego de membrana de polímeros sintéticos, para reparação tectônica, em substituição aos tecidos biológicos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o tratamento, por ceratoplastia lamelar com o uso da membrana de Poli(butileno adipato-co-tereftalato) (PBAT) / Amido Termoplástico (TPS), de úlceras de córnea de seis cães da rotina clínica. Foram avaliados os aspectos clínicos quanto a: blefarospasmo, hiperemia conjuntival, secreção ocular, vascularização corneal, e sinais de extrusão da membrana aos terceiro, sétimo, décimo quinto e trigésimo dias de posoperatório (M3, M7, M15, M30). Com os valores obtidos, foi realizada análise descritiva dos resultados, com cálculo de porcentagem e mediana dos dados e escores adotados. Quanto ao blefarospasmo, este foi leve até M3, tornando-se ausente em M30. A secreção ocular esteve sob forma leve até o M7 e se tornou ausente até o M30. Com relação à hiperemia conjuntival, observou-se que foi intensa no M0 e regrediu temporalmente até M15. A vascularização corneal teve importância clínica a partir de M7, tornando-se intensa no M15 e moderada no M30. Após remoção da membrana, observou-se cicatrização corneal e manutenção da estrutura do bulbo do olho. Com base nos resultados obtidos e nas condições aqui estabelecidas, é possível concluir que a membrana de PBAT/TPS consti... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: - Ulcerative keratitis or corneal ulcer is a common and important condition and occurs when the epithelium and a variable amount of stroma are lost. Nowadays, the use of synthetic polymer membranes has been studied for tectonic repair, replacing biological tissues. The aim of this study was to evaluate the treatment of corneal ulcers of six dogs from clinical routine by interlamellar keratoplasty with Poly(butylene adipate-co-terephthalate) (PBAT) / Thermoplastic Starch (TPS) membranes. The clinical aspects regarding blepharospasm, conjunctival hyperemia, ocular secretion, corneal vascularization, and membrane extrusion signals at third, seventh, fifteenth and thirtieth postoperative days (M3, M7, M15, M30) were evaluated. With the obtained data a descriptive analysis of the results was performed, with calculation of percentage and median of the data and adopted scores. As for blepharospasm, it was mild to M3, becoming absent in M30. The ocular secretion, was in light form until the M7, and became absent until the M30. Conjunctival hyperemia was observed to be intense in M0 and regressed temporarily to M15. The corneal vascularization had clinical importance from M7, becoming intense in M15 and moderate in M30. After removal of the membrane, corneal healing was observed, and the structure of the eye bulb was maintained. Based on the results obtained and the conditions established herein, it is possible to conclude that the PBAT / TPS membrane is a viable alternative to lamellar keratoplasty / Mestre

Orientador: José Paulo Cabral de Vasconcellos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T03:03:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bittencourt_MauraKrahembuhlWanderley_D.pdf: 4949840 bytes, checksum: 022f99304656d76ae232d1c85d47077b (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Objetivo: Descrever a ação da toxina botulínica do tipo A quando aplicada no músculo elevador da pálpebra superior, investigar a sua segurança e eficácia na produção de ptose protetora em cães. Métodos: Neste estudo do tipo longitudinal, série de casos com intervenção, um total de 10 cães foram submetidos à quimiodenervação do músculo elevador da pálpebra superior, através da aplicação por via transcutânea de 15 unidades de toxina botulínica do tipo A. Alterações sistêmicas, mobilidade ocular, função visual, pressão intraocular, produção lacrimal, o aparecimento, grau e duração da ptose foram avaliados diariamente durante os sete primeiros dias e posteriormente nos dias 14, 21 e 28 após a aplicação. Resultados: O início do efeito clínico foi observado entre 2 e 3 dias após a aplicação da toxina, o tempo necessário para desenvolver a máxima ptose variou entre 4 e 7 dias (média de 5 dias), a duração média do efeito da toxina foi de 21 dias. O percentual médio de redução máxima do tamanho da fenda palpebral foi 42,9 % (DP ± 35,7%). Não houve diferença estatisticamente significativa na pressão intraocular antes e depois da aplicação da toxina (P = 0,974 ), bem como na avaliação da produção lacrimal (P = 0,276). Não houve alteração na mobilidade ocular e nenhum outro efeito adverso foi observado em associação com a administração do medicamento em estudo. Conclusão: A aplicação da toxina botulínica do tipo A no músculo elevador da pálpebra superior em cães foi eficaz e segura para promover a ptose protetora com uma cobertura temporária da córnea / Abstract: Purpose: Describe the action of botulinum toxin type A when applied into levator palpebral superioris muscle, verifying its safety and efficacy to promote protective ptosis in dogs. Methods: In this prospective interventional study, a total of 10 dogs underwent transcutaneous anterior chemodenervation of levator palpebral superioris with 15 units of botulinum toxin type A. The systemic changes, ocular mobility, visual function, intraocular pressure (IOP), tear production and the onset, degree and duration of ptosis were evaluated on a daily basis during the first seven days and on days 14, 21 and 28 after application. Results: The onset of the clinical effect was observed between 2 and 3 days after application of the toxin, the time taken for maximum ptosis develop varied from 4 to 7 days (mean 5 days), average duration of the toxin effect was 21 days. The mean percentage reduction in palpebral fissure height was 42.8% (SD ± 35.7%). There was not a statistically significant difference in IOP before and after the BoNT/A application (P = 0.974), or lacrimal production evaluation (P = 0.276). There was no change in ocular mobility and no other adverse effect was observed in association with the administration of the study drug. Conclusion: The application of botulinum toxin type A into levator palpebral superioris muscle in dogs was effective and safe to promote protective ptosis with a temporary covering of the cornea / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutora em Ciências Médicas

OBJETIVOS: Determinar a correlação entre a completa regeneração da membrana basal epitelial (MBE) e o desaparecimento de miofibroblastos do estroma anterior e consequente restauração da transparência corneana após diferentes mecanismos de trauma em coelhos. MÉTODOS: Foram utilizados 32 coelhos que tiveram um de seus olhos incluídos em um dos três grupos de estudo: (1) -9 dioptrias (D) ceratectomia fotorrefrativa (PRK), (2) Incisões corneanas verticais de espessura parcial (350 um), ou (3) Ceratite bacteriana, enquanto os olhos contralaterais compuseram o grupo controle. Os animais foram examinados, sacrificados, e tiveram suas córneas analisadas em diferentes momentos afim de investigar com detalhes o processo de cicatrização corneano usando técnicas de imunohistoquímica (IHQ) e microscopia de transmissão eletrônica (MTE). RESULTADOS: No grupo \"-9D PRK\", as córneas apresentavam opacidade corneana densa e nenhuma evidência de regeneração da MBE 1 mês após a cirurgia. Dois meses após a cirurgia, no entanto, pequenas áreas de córnea transparente começaram a surgir em meio à opacidade difusa, correspondendo a pequenas ilhas de MBE completamente regenerada. Após 4 meses da cirurgia a MBE estava completamente regenerada e a transparência corneana havia sido reestabelecida na região ablada pelo laser. No grupo \"incisões corneanas\", o par de densas opacidades corneanas lineares observadas após 1 mês do procedimento tornou-se progressivamente mais tênue ao longo dos próximos 2 meses. A ultraestrutura da MBE estava completamente regenerada e não houve formação de miofibroblastos no local das incisões 1 mês após o procedimento, inclusive ao redor dos plugs epiteliais que se estendiam até o estroma. No grupo \"ceratite bacteriana\", as córneas que haviam sido infectadas apresentaram opacidade densa, vascularização, miofibroblastos em toda a sua espessura, e nenhuma evidência de regeneração da MBE 1 mês após a infecção. Observou-se ao longo dos próximos 3 meses substancial redução da opacidade, evidências ultraestruturais de regeneração da MBE, e desaparecimento de miofibroblastos das porções mais anteriores do estroma, persistindo apenas nas regiões do estroma mais posterior nas quais o endotélio e a membrana de Descemet encontravam-se lesadas. CONCLUSÃO: No modelo animal apresentado, a resolução espontânea da opacidade corneana tardia mediada por miofibroblastos após a ablação com excimer laser ou ceratites infeciosas graves é desencadeada pela completa regeneração da estrutura e função da MBE. As incisões corneanas de espessura parcial em coelhos, no entanto, cicatrizam sem geração de miofibroblastos devido à completa regeneração da MBE após 1 mês do procedimento. Determinou-se, portanto, a correlação entre a reparação da membrana basal epitelial e a consequente redução da opacidade e restauração da transparência corneana / PURPOSE: To determine the correlation between epithelial basement membrane (EBM) regeneration and the disappearance of myofibroblasts from anterior stroma and consequent restoration of corneal transparency after different types of injury in rabbits. METHODS: Thirty-two rabbits had one of their eyes included in one of the 3 study groups: (1) -9 diopters (D) photorefractive keratectomy (PRK), (2) Two vertical partial-thickness (350 um) corneal incisions, or (3) Bacterial keratitis, whereas the opposite eyes served as unwounded control group. The animals were examined, sacrificed, and had their corneas analysed in different time points in order to investigate the corneal wound healing process using immunohistochemistry and transmission electron microscopy. RESULTS: In the \"-9D PRK\" group, corneas at 1 month after surgery had dense corneal opacity and no evidence of regenerated EBM. However, by 2 months after surgery small areas of stromal clearing began to appear within the confluent opacity, and these corresponded to small islands of normally regenerated EBM. By 4 months after surgery, the EBM was fully regenerated and the corneal transparency was completely restored in the ablated zone. In the \"corneal incisions\" group, the two dense, linear corneal opacities observed at 1 month after the procedure progressively faded during the next 2 months. The EBM ultrastructure was fully regenerated and there were no myofibroblasts at the site of the incisions by 1 month after the procedure, including around the epithelial plugs that extended into the stroma. In the \"bacterial keratitis\" group, all the corneas that have been infected presented dense stromal scarring, vascularization, myofibroblasts in the full stromal thickness and no evidence of EBM regeneration by 1 month after the infection. There was a definite decrease in opacity during the next 3 months, besides ultrastructural evidence of EBM regeneration and disappearance of myofibroblasts in the most anterior part of the stroma, which persisted only in the most posterior stroma where the endothelium and Descemet\'s membrane were damaged. CONCLUSION: In the rabbit model, spontaneous resolution of myofibroblast-mediated corneal opacity (fibrosis) after high correction PRK or infectious keratitis is triggered by regeneration of normal EBM structure and function. Conversely, incisional wounds heal in rabbit corneas without the development of myofibroblasts because the EBM regenerates normally by 1 month after the injury. Therefore, it has been determined the correlation between the EBM regeneration and the restoration of corneal transparency after different types of corneal injury

OBJETIVOS: Determinar a correlação entre a completa regeneração da membrana basal epitelial (MBE) e o desaparecimento de miofibroblastos do estroma anterior e consequente restauração da transparência corneana após diferentes mecanismos de trauma em coelhos. MÉTODOS: Foram utilizados 32 coelhos que tiveram um de seus olhos incluídos em um dos três grupos de estudo: (1) -9 dioptrias (D) ceratectomia fotorrefrativa (PRK), (2) Incisões corneanas verticais de espessura parcial (350 um), ou (3) Ceratite bacteriana, enquanto os olhos contralaterais compuseram o grupo controle. Os animais foram examinados, sacrificados, e tiveram suas córneas analisadas em diferentes momentos afim de investigar com detalhes o processo de cicatrização corneano usando técnicas de imunohistoquímica (IHQ) e microscopia de transmissão eletrônica (MTE). RESULTADOS: No grupo \"-9D PRK\", as córneas apresentavam opacidade corneana densa e nenhuma evidência de regeneração da MBE 1 mês após a cirurgia. Dois meses após a cirurgia, no entanto, pequenas áreas de córnea transparente começaram a surgir em meio à opacidade difusa, correspondendo a pequenas ilhas de MBE completamente regenerada. Após 4 meses da cirurgia a MBE estava completamente regenerada e a transparência corneana havia sido reestabelecida na região ablada pelo laser. No grupo \"incisões corneanas\", o par de densas opacidades corneanas lineares observadas após 1 mês do procedimento tornou-se progressivamente mais tênue ao longo dos próximos 2 meses. A ultraestrutura da MBE estava completamente regenerada e não houve formação de miofibroblastos no local das incisões 1 mês após o procedimento, inclusive ao redor dos plugs epiteliais que se estendiam até o estroma. No grupo \"ceratite bacteriana\", as córneas que haviam sido infectadas apresentaram opacidade densa, vascularização, miofibroblastos em toda a sua espessura, e nenhuma evidência de regeneração da MBE 1 mês após a infecção. Observou-se ao longo dos próximos 3 meses substancial redução da opacidade, evidências ultraestruturais de regeneração da MBE, e desaparecimento de miofibroblastos das porções mais anteriores do estroma, persistindo apenas nas regiões do estroma mais posterior nas quais o endotélio e a membrana de Descemet encontravam-se lesadas. CONCLUSÃO: No modelo animal apresentado, a resolução espontânea da opacidade corneana tardia mediada por miofibroblastos após a ablação com excimer laser ou ceratites infeciosas graves é desencadeada pela completa regeneração da estrutura e função da MBE. As incisões corneanas de espessura parcial em coelhos, no entanto, cicatrizam sem geração de miofibroblastos devido à completa regeneração da MBE após 1 mês do procedimento. Determinou-se, portanto, a correlação entre a reparação da membrana basal epitelial e a consequente redução da opacidade e restauração da transparência corneana / PURPOSE: To determine the correlation between epithelial basement membrane (EBM) regeneration and the disappearance of myofibroblasts from anterior stroma and consequent restoration of corneal transparency after different types of injury in rabbits. METHODS: Thirty-two rabbits had one of their eyes included in one of the 3 study groups: (1) -9 diopters (D) photorefractive keratectomy (PRK), (2) Two vertical partial-thickness (350 um) corneal incisions, or (3) Bacterial keratitis, whereas the opposite eyes served as unwounded control group. The animals were examined, sacrificed, and had their corneas analysed in different time points in order to investigate the corneal wound healing process using immunohistochemistry and transmission electron microscopy. RESULTS: In the \"-9D PRK\" group, corneas at 1 month after surgery had dense corneal opacity and no evidence of regenerated EBM. However, by 2 months after surgery small areas of stromal clearing began to appear within the confluent opacity, and these corresponded to small islands of normally regenerated EBM. By 4 months after surgery, the EBM was fully regenerated and the corneal transparency was completely restored in the ablated zone. In the \"corneal incisions\" group, the two dense, linear corneal opacities observed at 1 month after the procedure progressively faded during the next 2 months. The EBM ultrastructure was fully regenerated and there were no myofibroblasts at the site of the incisions by 1 month after the procedure, including around the epithelial plugs that extended into the stroma. In the \"bacterial keratitis\" group, all the corneas that have been infected presented dense stromal scarring, vascularization, myofibroblasts in the full stromal thickness and no evidence of EBM regeneration by 1 month after the infection. There was a definite decrease in opacity during the next 3 months, besides ultrastructural evidence of EBM regeneration and disappearance of myofibroblasts in the most anterior part of the stroma, which persisted only in the most posterior stroma where the endothelium and Descemet\'s membrane were damaged. CONCLUSION: In the rabbit model, spontaneous resolution of myofibroblast-mediated corneal opacity (fibrosis) after high correction PRK or infectious keratitis is triggered by regeneration of normal EBM structure and function. Conversely, incisional wounds heal in rabbit corneas without the development of myofibroblasts because the EBM regenerates normally by 1 month after the injury. Therefore, it has been determined the correlation between the EBM regeneration and the restoration of corneal transparency after different types of corneal injury

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The bone marrow (BM)adult stem cell, mainly the mononuclear cell (MC) fraction, calls great interest in tissue regeneration researches in veterinary medicine, among those, works with experimental corneal ulcers. It is believed that the limbus represents the main stem cell source to replace damaged corneal cells, however, the number of animals showing limbal deficiency with subsequent conjunctivalization increases every day. This condition can be developed for several reasons, where the alkali burn is the most common. Aiming to conduct a study about transplanted BM MC presence confirmation, the homing process and to histopathologically compare the treated and sham groups, an experimental alkali corneal ulcer model, associated with the autologous MC transplant was used. Sixteen male or female, stray dogs, weithing around 10kg were submitted to experimental corneal ulcer, where the sodium hydroxide soaked filter discs alkali burn model was used. After the lesions, the animal were then submitted to subonjunctival autologous BM MC transplantation. The mononuclear fraction was isolated by density gradient centrifugation at 678G for 30 minutes and marked with nanocrystals to engrafment and homing follow-up. The pos-operatory evaluation was made with imunofluorescence exams in the sixth day after the transplant and for histopathology after 15 days of the same procedure where it could be noticed that the MC fixed in the damaged area, there was no homing phenomenom and despite they reduce the local inflamation, the MC did not help the corneal epithelium cicatrization process in this short term evaluation. Thus BM MC transplant studies in corneal wounds are indicated. / As células-tronco adulta da medula óssea (MO), em particular a fração de células mononucleares (CM), despertam grande interesse nas pesquisas que visam regeneração tecidual na medicina veterinária, dentre elas, estudos com úlceras de córnea experimentais. Atualmente, acredita-se que o limbo representa a fonte de células-tronco para a reposição de células corneanas lesadas, no entanto, o número de animais que apresentam deficiência límbica com conjuntivalização subseqüente aumenta a cada dia. Essa condição pode ser desenvolvida por diversas afecções, em que a queimadura por base é a mais comum. Visando realizar um estudo sobre a confirmação da presença das CM da MO transplantadas, da ocorrência de quimiotaxia (homing) das mesmas e comparar histopatologicamente os grupos tratados e controles, utilizou-se um modelo experimental de úlcera de córnea associado ao autotransplante de CM. Dezesseis cães machos ou fêmeas, sem raça definida, com peso ao redor de 10kg foram submetidos à ulceração experimental de córnea, em que o modelo de queimadura ocular por álcali com papel filtro embebido em hidróxido de sódio foi utilizado. Após a realização das lesões, os animais foram submetidos ao transplante subconjuntival de CM da MO, previamente isoladas. A fração mononuclear foi separada por centrifugação da MO com gradiente de densidade a 678G por 30 minutos e marcada com nanocristais para posterior acompanhamento dos processos de pega e quimiotaxia. A avaliação pós-operatória foi realizada por exames de imunofluorescência no sexto dia após o transplante e por histopatologia passados 15 dias do mesmo procedimento, quando pode se notar que as CM fixaram-se na região lesionada, não sofreram quimiotaxia e, apesar de diminuírem a inflamação do local, não auxiliaram no processo de cicatrização do epitélio corneano em curto prazo. Assim, sugere-se estudos adicionais no transplante de CM da MO na cicatrização da córnea .

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 803317 bytes, checksum: fc5cc2e40df938c5be793a101a6e3195 (MD5) Previous issue date: 2007-02-15 / União de Ensino Superior de Viçosa - UNIVIÇOSA / The amniotic membrane has been widely used in the repair of corneal ulcers showing good results as it exhibits anti-adhesive effect and bacteriostatics properties, it protects the wound, reduces pain, participates in the epithelization and is not immunogenic. This membrane can be used on corneal ulcers as a graft or a patch depending on its position. A superficial keratectomy was made on all of the 28 animals included in this study. On the resulted corneal ulcer of the 14 animals of the treated group an amniotic membrane was used as patch sutured with its epithelial surface over the experimentally made ulcer. The control group did not receive the patch. The animals were submitted to clinical evaluations 24 hours after the proceedings, at a two-day interval during the first week and at a four-day interval from the second week until 180 days after surgeries. The histological and morphometric analysis were undertaken at 1, 2, 7, 15, 30, 60 e 180 days after surgery. The amniotic membrane s effect as a patch and its incorporation to the cornea were evaluated. The time needed for the corneal repair of the treated group was compared to the control and the time needed for the cornea s complete transparence was observed. Glycerin at 99% was evaluated as a preservation medium and the binocular magnifying glass was evaluated during surgeries. The corneal opacity was always present both in the treated and the control group during 180 days. The membrane retained the inflammatory cells on its surface and provided an improvement on the repair process at the beginning, but at some point it delayed this process and its conclusion. The membrane and the trauma caused by the suture needle leaded to discomfort, conjunctival congestion, ocular secretion and stimulated neovascularization and corneal fibrosis. There was no incorporation of the membrane to the cornea. The glycerin at 99% acted efficiently as a preservation medium when analyzing contamination, but its anti-angiogenesis characteristics were lost. The binocular magnifying glass was efficient during these works proceedings. / A membrana amniótica tem sido amplamente utilizada na reparação de úlceras de córnea, demonstrando resultados satisfatórios por possuir efeito antiadesivo, propriedades bacteriostáticas, promover a proteção da lesão, reduzir a dor, auxiliar na epitelização e não possuir imunogenicidade. Esta membrana pode ser utilizada em lesões da córnea como enxerto ou como bandagem dependendo do seu posicionamento. Neste estudo, foi realizada a ceratectomia superficial em 28 coelhos. No grupo tratado, composto por 14 animas, utilizou-se a membrana amniótica canina como bandagem, suturada com sua face epitelial aplicada sobre o leito da úlcera experimental. O grupo controle não recebeu tratamento. A avaliação clínica foi realizada a partir de 24 horas após a realização dos procedimentos, em intervalos de 2 dias na primeira semana e de 4 dias da segunda semana até os 180 dias de pósoperatório. A avaliação histológica e morfométrica foram realizadas aos 1, 2, 7, 15, 30, 60 e 180 dias após a cirurgia. Observaram-se os efeitos da membrana amniótica como bandagem e sua incorporação à córnea. Comparou-se o tempo de reparação da córnea entre os grupos e verificou-se o período para que a córnea apresentasse transparência completa. Avaliaram-se ainda a eficácia da glicerina a 99% como meio de preservação das membranas e da lupa binocular como instrumento de magnificação do campo operatório nos procedimentos cirúrgicos. A opacidade corneana esteve presente em todos os animais, tanto no grupo tratado como no grupo controle, durante os 180 dias. A membrana atuou contendo as células inflamatórias em sua superfície e promoveu um avanço no início do processo de reparação, porém a partir de determinado momento retardou a sua conclusão; e juntamente com o trauma causado pela agulha de sutura causou desconforto, congestão conjuntival, secreção ocular e estimulou a neovascularização e a fibrose na córnea. Não houve incorporação da membrana à córnea. A glicerina a 99% atuou satisfatoriamente como meio de preservação da membrana no que diz respeito à contaminação, mas suas características antiangiogênicas foram perdidas. A lupa binocular mostrou ser eficiente na realização dos procedimentos cirúrgicos envolvidos neste trabalho.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2556452 bytes, checksum: d5563353a41b374f1b598abd2f574cf3 (MD5) Previous issue date: 2012-09-04 / Corneal conditions are among the main causes of blindness in both humans and animals. Many surgical techniques are described to recover the cornea s physical structure and refractive state; among them is the use of different types of biomaterials. Due to the cornea s transparency, viscoelasticity and lack of vessels, biomaterials to be applied on them must undergo a careful selection. Bacterial cellulose (BC) and polycaprolactone (PCL) are two well known biomaterials, studied extensively in separate. The purpose of the present study was to produce and characterize membranes made of BC and PCL to be tested as corneal tissue substitutes in rabbit s cornea. Membranes of BC were produced through static culture of the bacteria Gluconacetobacter xylinus. Membranes were then washed, dried and swelled in acetone for 48 hours, followed by immersion in 25ml of 3% PCL solution for 72 hours. Next, membranes of the BC/PCL composite underwent several washes in acetone and were then dried to be characterized by scanning electron microscopy (SEM), X-ray diffraction, thermal and mechanical trials and luminous transmittance. In vivo study was conducted with the BC/PCL composite and with pure BC to evaluate their interactions with corneal tissue. At first, membranes were cut in 8mm diameter to be then applied in corneal tisse. Thirty six female rabbits were separated in three groups of 12 animals each. An ulcer of 5mm in diameter and 0.2mm in depth was created on the right cornea of all rabbits. From the base of the ulcer, the stroma was separated creating an interlamellar pocket, and each group of 12 animals received 8mm diameter BC/PCL composite membrane and the other group received BC membranes on the same size, both adjusted in the pocket. The last group did not receive any membrane, used as the control. Animals were followed for 45 days, where clinical evaluations for signs of pain and inflammation were conducted. Three animals of each group were euthanized on days 3, 7, 21 and 45 after surgery to collect samples for histology (HE and Picrosirius) and SEM. BC/PCL presented 84% of light transmission while pure BC presented 45%. Lower tension resistance and Young s module was observed on the composite compared to pure BC, while the composite presented greater elongation at rupture what demonstrates a greater viscoelasticity of this material. Eyes that received membranes presented moderate inflammation until 30 days after surgery, decreasing progressively until 45 days. Histology revealed the presence of lymphohistiocytic inflammatory infiltrate at 21 and 45 days in implanted groups, at a moderate intensity, as well as giant cells, suggesting chronic inflammatory and foreign body reactions. Fibroplasia was observed around the membranes, a positive sign of biocompatibility. Epithelization was complete only in control group, what shows that membranes surfaces did not allow epithelium growth and maintenance. Picrosirius staining showed a greater proportion of type III collagen at the end of 45 days in both implanted groups, suggesting that the repair process around the membranes was incomplete. SEM showed extracellular matrix and cells adhered to implant surfaces, suggesting integration at 45 days. Both membranes made of BC/PCL composite and BC alone stimulated chronic inflammatory and foreign body reactions and did not allow complete epithelization on their surfaces. Based on these conclusions, we believe that implants made of BC/PCL and BC using the here presented process are not indicated as a substitute for corneal tissue in rabbits. / As afecções corneais representam uma das principais causas de cegueira tanto em humanos como em animais. São descritas várias técnicas cirúrgicas para recuperar a estrutura física e o estado refrativo da córnea, dentre essas, encontra-se a aplicação de diferentes tipos de biomateriais. Devido à transparência, à falta de vasos e à viscoelasticidade que a córnea apresenta, os biomateriais para nela serem aplicados devem passar por criteriosa seleção. A celulose bacteriana (CB) e a policaprolactona (PCL) são dois consagrados biomateriais, bastante estudados isoladamente. Foi proposto, neste estudo, a produção e a caracterização de membranas à base de CB e de PCL para serem testadas como substituto tecidual em córneas de coelhos. Membranas de CB foram produzidas por meio do cultivo estático da bactéria Gluconacetobacter xylinus. Após serem lavadas e secas, as membranas foram intumescidas em acetona por 48 horas e então imersas em 25 ml de solução a 3% de PCL diluída em acetona durante 72 horas. Na sequência, as membranas do compósito CB/PCL passaram por repetidas lavagens em acetona, e foram secas para serem caracterizadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV), difração de raio-X, ensaios térmico e mecânico e transmissão óptica. Foi realizado o estudo in vivo com membranas do compósito CB/PCL e da CB pura para avaliar suas interações com o tecido corneal. Inicialmente elas foram cortadas em 8 mm de diâmetro para então serem implantadas nas córneas dos animais. Foram utilizadas 36 coelhas divididas em três grupos de 12 animais. Foi criada uma úlcera de 5 mm de diâmetro e 0,2 mm de profundidade na córnea direita de todos os animais. A partir da base da úlcera o estroma foi separado, criando-se um bolso interlamelar, sendo que um grupo recebeu membranas do compósito CB/PCL e outro grupo recebeu membranas da CB, que foram ajustadas dentro do bolso. O último grupo não recebeu tratamento sendo utilizado como controle. Os animais foram acompanhados por até 45 dias, sendo feitas avaliações clínicas para os sinais de dor e inflamação. Três animais de cada grupo foram eutanasiados aos três, sete, 21 e 45 dias após a cirurgia, para coleta de amostras para análises histológicas (HE e Picrosirius) e MEV. O compósito CB/PCL apresentou 84% de transmissão de luz, enquanto que a CB pura apresentou 65%. Houve redução da resistência à tração e do módulo de Young do compósito CB/PCL em relação à CB pura. Em contrapartida, o compósito apresentou aumento na ruptura ao alongamento, demonstrando incremento na elasticidade do material. Os olhos que receberam implantes apresentaram inflamação moderada até os 30 dias de pós-operatório, reduzindo progressivamente até os 45 dias da cirurgia. A análise histológica demonstrou, aos 21 e aos 45 dias, presença de infiltrado inflamatório linfo-histiocitário em intensidade moderada e células gigantes nos animais implantados, sugerindo resposta inflamatória persistente e do tipo corpo estranho. Também foi observada fibroplasia em torno das membranas, sendo este um sinal positivo de biocompatibilidade. A epitelização foi completa somente no grupo controle, demonstrando que as superfícies das membranas não permitiram o crescimento e manutenção do epitélio. Pela coloração de Picrosirius, evidenciou-se maior proporção do colágeno tipo III ao final dos 45 dias nos grupos com implantes, sugerindo que o processo de reparação em torno das membranas estava incompleto. A MEV demonstrou matriz extracelular e células aderidas às superfícies dos implantes, sinalizando integração no período de 45 dias. As membranas tanto do compósito CB/PCL como da CB incitaram resposta inflamatória crônica e de corpo estranho, e não permitiram a completa epitelização sobre suas superfícies. Baseado nisso, acredita-se que os implantes CB/PCL e CB, da maneira como foram desenvolvidos, não devem ser indicados para substituir o tecido corneal de coelhos.

The aim of this work was to investigate the contribution of matrix metalloproteinases (MMPs) to recurrent corneal melting. Twenty three melted corneas from seven patients were separated into three groups: a) patients with primary Sjögren's syndrome, b) those with rheumatoid arthritis and c) those with other corneal melting underlying pathologies. Eleven cadaverous corneas served as controls. The presence of MMP-1, -2, -3, -7, -8, -9, and -13 was detected using indirect enzyme immunohistochemistry. The active forms of MMP-2 and -9 and MMP- 3 and -7 were examined by gelatin and casein zymography, respectively. The concentrations of active MMP-1 and -3 were measured using activity assays. Increased immunostaining intensity for MMP-1, -2, -3, -7, -8 and -9 was shown in the corneal epithelium and the stroma of almost all melted corneas from all three groups compared to the negative or slightly positive staining of the controls. In the endothelium, immunostaining for MMP-2 and MMP-9 was increased in most specimens of groups II and III and group I, respectively. A markedly higher level of active MMP-2 was detected in six, and active MMP-9 in all, pathologic specimens compared to the controls. In contrast to the completely negative controls, the proenzymes of MMP-3 and -7 were detected in almost all melted...