Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:03:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013Bitstream added on 2014-09-24T20:28:10Z : No. of bitstreams: 1 317907.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / O sistema venoso periférico é capaz de captar e metabolizar 5-HT e, sendo o pênis um órgão vascular, percebe-se que pouco se sabe sobre a existência e funcionalidade do sistema serotoninérgico nos tecidos penianos. O objetivo do presente trabalho foi investigar o papel do sistema serotoninérgico na função erétil de ratos, utilizando drogas que alteram a homeostase de 5-HT. Nos testes bioquímicos de captação e metabolismo de 5-HT, a exposição da veia dorsal peniana (VDP) e do corpo cavernoso (CC) à 5-HT exógena causou aumento nos níveis de 5- HIAA, sem alterar os níveis de 5-HT, sugerindo que ocorreu captação seguida de rápido metabolismo de 5-HT. Em presença de pargilina, um inibidor da monoamina oxidase (MAO), houve diminuição dos níveis de 5-HIAA, associada a um aumento dos níveis de 5-HT, indicando que a MAO está presente e funcional nestes tecidos. A fluoxetina (inibidor seletivo do transportador de 5-HT), por sua vez, não inibiu a captação de 5-HT nestes tecidos. Resultados semelhantes foram observados para inibidores não seletivos dos transportadores de noradrenalina (NET), dopamina (DAT) e de serotonina (SERT). Por outro lado, na presença de decynium-22, um inibidor não seletivo dos transportadores de cátions orgânicos (OCTs), houve uma diminuição da captação de 5-HT. Nas medidas de reatividade vascular em VDP, a 5-HT causou contração dependente de sua concentração e na presença de pargilina a curva concentração efeito induzida por 5-HT na foi inalterada, ao passo que a fluoxetina aumentou a resposta contrátil máxima, enquanto que a ketanserina, antagonista de receptor 5-HT2A/C, diminuiu a potência da 5-HT para contrair esse vaso. Nas medidas de ereção peniana em animais não anestesiados induzida por apomorfina, o tratamento com 5-HT e com ketanserina, não modificou a resposta erétil, enquanto que nos ratos tratados com pargilina e fluoxetina, houve diminuição e aumento, respectivamente, no número de ereções induzida por apomorfina. Além disso, fluoxetina induziu ereções na ausência de apomorfina. Desse modo, podemos sugerir que a fluoxetina pode ser potencialmente importante na resposta erétil de ratos e este efeito pode estar relacionado a um aumento na veno- oclusão (pelo aumento da resposta contrátil à 5-HT na VDP), mas não pela inibição da recaptação de 5-HT no tecido do pênis estudado.<br> / Abstract : The peripheral venous system is able to take up and metabolize 5-HT. Considering the penis as a vascular tissue, little is known about the existence and function of the serotonergic system in penile tissues. The objective of the present study was to investigate the role of the serotonergic system in the erectile function of rats using drugs that alter 5-HT homeostasis. In the biochemical experiments, exposure of the dorsal penile vein (DPV) and corpus cavernosum (CC) to exogenous 5-HT causes an increase in 5-HIAA levels but not in the 5-HT levels, suggesting uptake followed by fast metabolism of 5-HT. In the presence of pargyline an inhibitor of the monoamine oxidase (MAO) decreased levels of 5-HIAA were observed, associated with increased levels of 5-HT indicating that MAO is present and functional in these tissues. The selective inhibitor of the 5-HT transporter fluoxetine had no effect on 5-HT uptake in both tissues. Similar results were observed for the inhibitors of the transporters for norepinephrine (NET), dopamine (DAT) and 5-HT (SERT). On the other hand, the presence of decynium-22, a non-selective inhibitor of the organic cation transporters (OCTs) decreased 5-HT uptake. In the vascular reactivity measurements in DPV, 5-HT caused a concentration-dependent contraction. The concentration effect curve to 5- HT in the presence of pargyline was unchanged, whereas fluoxetine increased maximal contractile response induced by 5-HT and ketanserin, a 5-HT2A/c, receptor antagonist, decreased the potency of 5-HT to induce contraction of this vein. The number of erection induced by apomorphine in unanesthetized rats was not affected by previous treatment with 5-HT and ketanserin. Treatment with pargyline and fluoxetine decreased and increased, respectively, the number of erections induced by apomorphine. Moreover, fluoxetine induced erections even in the absence of apomorphine. Our results suggest that fluoxetine can potentially be significant in erectile response of rats and this effect may be related to an increase in venous occlusion (due to the increased contractile response to 5-HT in the DPV), but not by inhibiting the 5-HT reuptake in penile tissue studied.

Introdução: O Alcoolismo e o Diabetes são doenças bastante prevalentes em todos os continentes e seriam fatores de risco relacionados com a Disfunção Erétil. Dentre os muitos mecanismos relacionados com a ereção temos a Endotelina e seus receptores, causando intensa e sustentada contração da musculatura lisa dos corpos cavernosos penianos (CC). Acredita-se que poderia haver regulação das vias dos receptores de endotelina pelos microRNAs, que são RNAs não codificantes, regulam a expressão gênica e poderiam sofrer alteração pelos efeitos do álcool e / ou diabetes. Objetivos: Avaliar, experimentalmente com utilização de ratos, se há alteração nas vias dos receptores da endotelina devido ao efeito crônico do alcoolismo, do diabetes ou de sua associação e se existiria correlação com os microRNAs miR-155 e miR-199. Materiais e Métodos: Utilizaram-se 48 Ratos Wistar machos divididos em 4 grupos: Controle (GC), Alcoolizado (GA), Diabético (GD) e Diabético+Alcoolizado (GD+A). Foi utilizado PCR em tempo real e imunoistoquímica para estudar a expressão gênica e proteica dos receptores da endotelina ETA e ETB em corpos cavernosos e PCR em tempo real para avaliar a expressão gênica dos miR-155 e miR-199 no sangue e CC. Resultados: Análise imunohistoquímica encontrou baixa expressão dos receptores de endotelina no GC e elevada nos grupos experimentais, sendo que os receptores ETA estavam distribuídos de forma difusa e em maior concentração, enquanto os receptores de ETB localizavam-se na periferia dos CC. Análise por PCR em tempo real dos CC verificou: aumento não significativo de ETA no GD e de ETB no GD+A; hipoexpressão significativa do miR-199 no GD+A e hipoexpressão não significativa do miR-199 e miR-155 nos demais grupos experimentais em relação ao GC. Análise no sangue: hipoexpressão significativa do miR-155 no GA+D e não significativa nos demais grupos em relação ao GC, hipoexpressão significativa do miR-199 no GD e GD+A e não significativa no GA, todos em relação ao GC. Conclusões: Foi encontrado aumento dos receptores de endotelina como efeito do álcool, do diabetes e de sua associação, também identificou-se diminuição, principalmente, da expressão gênica do miR-199 nos corpos cavernosos dos grupos experimentais o que sugere a hipótese de que o aumento da endotelina poderia ser determinado pela diminuição da ação supressora do miR-199 que se encontra hipoexpresso em decorrência dos efeitos deletérios do álcool e diabetes. A descoberta de alterações em microRNAs associada ao desenvolvimento continuado da genômica pode propiciar novos diagnósticos e marcadores para inúmeras doenças, além de ajudar a identificar possíveis terapêuticas alvo moleculares. / Introduction: Alcoholism and Diabetes are very prevalent diseases in all the continents and are considered risk factors related to erectile dysfunction. Endothelin and its receptor are some of the mechanism related to erection, causing intense and sustained contracture of the penile corpus cavernosum (CC) smooth muscle. It\'s thought that micro-RNAs could regulate endothelin receptors pathways. Micro-RNAs are not coding RNAs that regulate gene expression and could be affected by alcohol and/or diabetes. Objectives: To experimentally evaluate, using rats, alterations in receptors pathways due to chronic effects of alcoholism, diabetes, alone or in association, and to correlate this alterations with miR-155 and miR-199 microRNAs. Materials and Methods: 48 male Wistar rats were used. They were divided in four groups: Control group (GC), Alcoholic group (GA), Diabetic group (GD) and Diabetic+Alcoholic group (GD+A). We used real time PCR and immunohistochemical study to evaluate gene and protein expression of endothelin ETA and ETB in corpus cavernosum tissue and real time PCR to evaluate gene expression of miR-155 and miR-199 in blood and CC. Results: Immunohistochemical analysis showed low expression of endothelin receptors in GC and high expression in experimental groups; ETA receptors were distributed in diffuse pattern and higher concentration although ETB receptors had a peripheral pattern in CC. Real time PCR analysis in CC showed: not significant ETA increase in DG and ETB increase in GD+A; significant miR-199 hypoexpression in GD+A and not significant miR-199 and miR-155 hypoexpression in other experimental groups compared to GC. Blood analysis showed significant miR-155 hypoexpression in GD+A and not significant in other experimental groups compared to CG, significant miR-199 hypoexpression in GD and GD+A and not significant in GA, compared to GC. Conclusions: We found endothelin receptors increase as an effect of alcohol abuse, diabetes and its association; we also found decrease, mainly in gene expression, of miR-199 in corpus cavernosum tissue of experimental groups, what suggests the hypothesis that endothelin increase could be determined by a decrease of suppress action of miR-199, that is hypo expressed because of deleterious effect of alcohol and diabetes. Finding microRNAs changes, associated to continuous development in genomics, could propitiates new diagnostic tools and markers to innumerous diseases and even help to identify possible new molecular target therapies.

Introdução: O Alcoolismo e o Diabetes são doenças bastante prevalentes em todos os continentes e seriam fatores de risco relacionados com a Disfunção Erétil. Dentre os muitos mecanismos relacionados com a ereção temos a Endotelina e seus receptores, causando intensa e sustentada contração da musculatura lisa dos corpos cavernosos penianos (CC). Acredita-se que poderia haver regulação das vias dos receptores de endotelina pelos microRNAs, que são RNAs não codificantes, regulam a expressão gênica e poderiam sofrer alteração pelos efeitos do álcool e / ou diabetes. Objetivos: Avaliar, experimentalmente com utilização de ratos, se há alteração nas vias dos receptores da endotelina devido ao efeito crônico do alcoolismo, do diabetes ou de sua associação e se existiria correlação com os microRNAs miR-155 e miR-199. Materiais e Métodos: Utilizaram-se 48 Ratos Wistar machos divididos em 4 grupos: Controle (GC), Alcoolizado (GA), Diabético (GD) e Diabético+Alcoolizado (GD+A). Foi utilizado PCR em tempo real e imunoistoquímica para estudar a expressão gênica e proteica dos receptores da endotelina ETA e ETB em corpos cavernosos e PCR em tempo real para avaliar a expressão gênica dos miR-155 e miR-199 no sangue e CC. Resultados: Análise imunohistoquímica encontrou baixa expressão dos receptores de endotelina no GC e elevada nos grupos experimentais, sendo que os receptores ETA estavam distribuídos de forma difusa e em maior concentração, enquanto os receptores de ETB localizavam-se na periferia dos CC. Análise por PCR em tempo real dos CC verificou: aumento não significativo de ETA no GD e de ETB no GD+A; hipoexpressão significativa do miR-199 no GD+A e hipoexpressão não significativa do miR-199 e miR-155 nos demais grupos experimentais em relação ao GC. Análise no sangue: hipoexpressão significativa do miR-155 no GA+D e não significativa nos demais grupos em relação ao GC, hipoexpressão significativa do miR-199 no GD e GD+A e não significativa no GA, todos em relação ao GC. Conclusões: Foi encontrado aumento dos receptores de endotelina como efeito do álcool, do diabetes e de sua associação, também identificou-se diminuição, principalmente, da expressão gênica do miR-199 nos corpos cavernosos dos grupos experimentais o que sugere a hipótese de que o aumento da endotelina poderia ser determinado pela diminuição da ação supressora do miR-199 que se encontra hipoexpresso em decorrência dos efeitos deletérios do álcool e diabetes. A descoberta de alterações em microRNAs associada ao desenvolvimento continuado da genômica pode propiciar novos diagnósticos e marcadores para inúmeras doenças, além de ajudar a identificar possíveis terapêuticas alvo moleculares. / Introduction: Alcoholism and Diabetes are very prevalent diseases in all the continents and are considered risk factors related to erectile dysfunction. Endothelin and its receptor are some of the mechanism related to erection, causing intense and sustained contracture of the penile corpus cavernosum (CC) smooth muscle. It\'s thought that micro-RNAs could regulate endothelin receptors pathways. Micro-RNAs are not coding RNAs that regulate gene expression and could be affected by alcohol and/or diabetes. Objectives: To experimentally evaluate, using rats, alterations in receptors pathways due to chronic effects of alcoholism, diabetes, alone or in association, and to correlate this alterations with miR-155 and miR-199 microRNAs. Materials and Methods: 48 male Wistar rats were used. They were divided in four groups: Control group (GC), Alcoholic group (GA), Diabetic group (GD) and Diabetic+Alcoholic group (GD+A). We used real time PCR and immunohistochemical study to evaluate gene and protein expression of endothelin ETA and ETB in corpus cavernosum tissue and real time PCR to evaluate gene expression of miR-155 and miR-199 in blood and CC. Results: Immunohistochemical analysis showed low expression of endothelin receptors in GC and high expression in experimental groups; ETA receptors were distributed in diffuse pattern and higher concentration although ETB receptors had a peripheral pattern in CC. Real time PCR analysis in CC showed: not significant ETA increase in DG and ETB increase in GD+A; significant miR-199 hypoexpression in GD+A and not significant miR-199 and miR-155 hypoexpression in other experimental groups compared to GC. Blood analysis showed significant miR-155 hypoexpression in GD+A and not significant in other experimental groups compared to CG, significant miR-199 hypoexpression in GD and GD+A and not significant in GA, compared to GC. Conclusions: We found endothelin receptors increase as an effect of alcohol abuse, diabetes and its association; we also found decrease, mainly in gene expression, of miR-199 in corpus cavernosum tissue of experimental groups, what suggests the hypothesis that endothelin increase could be determined by a decrease of suppress action of miR-199, that is hypo expressed because of deleterious effect of alcohol and diabetes. Finding microRNAs changes, associated to continuous development in genomics, could propitiates new diagnostic tools and markers to innumerous diseases and even help to identify possible new molecular target therapies.