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Dois importantes fatores inter-relacionados estão envolvidos na patogênese da doença periodontal: ativação do sistema imune e produção de peroxidases. Os objetivos deste estudo foram comparar os níveis da atividade do sistema peroxidase presentes no fluido gengival (MPO/FG) e saliva da parótida (POS) em pacientes portadores de periodontite crônica em relação a pacientes periodontalmente saudáveis e avaliar o efeito do tratamento periodontal não cirúrgico nestes indivíduos nestes parâmetros enzimáticos. MATERIAL E MÉTODO: Foram coletados dados dos parâmetros clínicos periodontais e amostras de FG e saliva da glândula parótida de 17 pacientes clinicamente saudáveis (GC) e de 17 pacientes portadores de periodontite crônica generalizada (GP) antes e depois do tratamento periodontal pareados em idade e sexo. As atividades de MPO/FG e POS Parótida foram avaliadas por espectofotometria. RESULTADOS: O GP apresentou valores maiores nos parâmetros clínicos periodontais em relação ao GC, sendo que os mesmos foram reduzidos após tratamento periodontal. Além disso, o GP apresentou valores mais elevados de atividade de MPO no FG (p=0,04) do que o GC. Após tratamento periodontal os níveis de MPO/FG (p<0,001) e POS parótida (p=0,013) foram reduzidos significativamente. No GP houve correlação negativa e significativa entre POS da parótida e MPO no FG (r=-0,59, p=0,02). CONCLUSÕES: Na doença periodontal, as atividades de MPO no FG são maiores quando comparados ao grupo controle, e tanto de MPO/FG e POS parótida são reduzidas após tratamento periodontal. / Two important and interrelated factors are involved in the pathophysiology of periodontal diseases: the activation of immune system and the production of peroxidases. The objectives of this study were to examine the peroxidase activities present in Gingival Crevicular Fluid (MPO/GCF) and in Parotid Saliva (POS) in patients with generalized chronic periodontitis with healthy controls and to compare the effects of periodontal therapy on enzyme activities. MATERIAL AND METHOD: Periodontal clinical measurements, parotid saliva and GCF samples were obtained of 17 age-matched healthy controls (PC) and 17 patients with chronic periodontal disease (PD) before treatment and after periodontal treatment. The MPO/GCF and POS parotid activities were determined spectrophotometrically. RESULTS: In PD group, clinical parameters, MPO/GCF (p=0,04) activities presented higher values than controls. After periodontal treatment levels of MPO/GCF (p<0.001) and POS parotid (p=0,013) were significantly reduced. In PD there was significant negative correlation between POS and MPO in the parotid FG (r =-0,59, p=0,02). CONCLUSIONS: In periodontal disease MPO/GCF presented higher levels than controls and MPO/GCF and POS parotid are reduced after treatment.

Dois importantes fatores inter-relacionados estão envolvidos na patogênese da doença periodontal: ativação do sistema imune e produção de peroxidases. Os objetivos deste estudo foram comparar os níveis da atividade do sistema peroxidase presentes no fluido gengival (MPO/FG) e saliva da parótida (POS) em pacientes portadores de periodontite crônica em relação a pacientes periodontalmente saudáveis e avaliar o efeito do tratamento periodontal não cirúrgico nestes indivíduos nestes parâmetros enzimáticos. MATERIAL E MÉTODO: Foram coletados dados dos parâmetros clínicos periodontais e amostras de FG e saliva da glândula parótida de 17 pacientes clinicamente saudáveis (GC) e de 17 pacientes portadores de periodontite crônica generalizada (GP) antes e depois do tratamento periodontal pareados em idade e sexo. As atividades de MPO/FG e POS Parótida foram avaliadas por espectofotometria. RESULTADOS: O GP apresentou valores maiores nos parâmetros clínicos periodontais em relação ao GC, sendo que os mesmos foram reduzidos após tratamento periodontal. Além disso, o GP apresentou valores mais elevados de atividade de MPO no FG (p=0,04) do que o GC. Após tratamento periodontal os níveis de MPO/FG (p<0,001) e POS parótida (p=0,013) foram reduzidos significativamente. No GP houve correlação negativa e significativa entre POS da parótida e MPO no FG (r=-0,59, p=0,02). CONCLUSÕES: Na doença periodontal, as atividades de MPO no FG são maiores quando comparados ao grupo controle, e tanto de MPO/FG e POS parótida são reduzidas após tratamento periodontal. / Two important and interrelated factors are involved in the pathophysiology of periodontal diseases: the activation of immune system and the production of peroxidases. The objectives of this study were to examine the peroxidase activities present in Gingival Crevicular Fluid (MPO/GCF) and in Parotid Saliva (POS) in patients with generalized chronic periodontitis with healthy controls and to compare the effects of periodontal therapy on enzyme activities. MATERIAL AND METHOD: Periodontal clinical measurements, parotid saliva and GCF samples were obtained of 17 age-matched healthy controls (PC) and 17 patients with chronic periodontal disease (PD) before treatment and after periodontal treatment. The MPO/GCF and POS parotid activities were determined spectrophotometrically. RESULTS: In PD group, clinical parameters, MPO/GCF (p=0,04) activities presented higher values than controls. After periodontal treatment levels of MPO/GCF (p<0.001) and POS parotid (p=0,013) were significantly reduced. In PD there was significant negative correlation between POS and MPO in the parotid FG (r =-0,59, p=0,02). CONCLUSIONS: In periodontal disease MPO/GCF presented higher levels than controls and MPO/GCF and POS parotid are reduced after treatment.

A doença periodontal tem sido frequentemente associada ao parto pretermo. A plausibilidade biológica para tal associação baseia-se na hipótese de uma inflamação sistêmica de baixa intensidade de origem periodontal. Entretanto, os estudos de intervenção que investigaram o efeito da terapia periodontal durante a gestação não observaram reduções significativas na incidência de prematuridade. Como diversas citocinas têm sido associadas tanto a doença periodontal quanto ao parto pretermo, cogita-se que elas desempenhem um papel importante na associação observada. Até o presente momento, pouco se sabe a respeito da correlação entre os níveis de citocinas no soro e no fluído crevicular gengival (FCG), assim como do efeito da terapia periodontal sobre esses marcadores de inflamação em gestantes. O objetivo desta tese foi avaliar a relação entre níveis sistêmicos e periodontais de biomarcadores inflamatórios relacionados com a resposta imune periodontal e também com os mecanismos de parto. Também investigou-se o efeito da terapia periodontal sobre os níveis dessas citocinas durante a gestação e 30 dias após o parto. Esta tese é composta por dois estudos que utilizaram uma sub-amostra de mulheres que haviam sido recrutadas para um ensaio clínico randomizado maior que investigou o efeito da terapia periodontal sobre a incidência de prematuridade. Mulheres entre 18-35 anos e com até 20 semanas de gestação foram aleatoriamente alocadas para receber tratamento periodontal não cirúrgico completo até a 24a semana de gestação (grupo teste) ou apenas uma consulta de uma remoção de cálculo supragingival (grupo controle). Dados clínicos e amostras de sangue e FCG foram coletadas no início do estudo, entre 26-28 semanas de gestação e 30 dias após o parto. Quatro sítios periodontais por paciente foram aleatoriamente selecionados para coleta de FCG entre aqueles com maior profundidade de sondagem. Os níveis de IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL- 12p70 e FNT-α foram analisados por citometria de fluxo. No estudo 1, investigou-se a correlação e concordância entre os níveis periodontais e sistêmicos dessas citocinas em 100 pacientes, utilizando dados coletados até a 20a semana de gestação. As pacientes apresentaram extensa inflamação e limitada destruição periodontal. A correlação entre os níveis de citocinas no soro e no FCG foi baixa e não significativa, com exceção da IL-12p70 que mostrou uma correlação moderada, porém significativa, entre as duas fontes (r=0.32, p=0.001). Os níveis de citocinas observados no FCG explicaram menos de 10% dos respectivos níveis observados no soro, com exceção da IL-12p70 em que eles foram responsáveis por 23% dos níveis séricos (p=0.0001, r2=0.23). A profundidade de sondagem e o sangramento a sondagem estiveram significativamente associados com os níveis de IL-1β, IL-6 e IL-8 no FCG, mas tiveram efeitos limitados sobre os níveis sistêmicos de todas as citocinas. No estudo 2, comparou-se o efeito da terapia periodontal durante a gestação (n=30) com uma consulta única de remoção de cálculo supragingival (n=30) sobre os níveis periodontais e sistêmicos dessas citocinas durante a gestação e 30 dias após o parto. Após o tratamento, uma redução drástica da inflamação periodontal foi observada no grupo teste, com o percentual de sangramento a sondagem reduzindo de 49.62% para 11.66% dos sítios (p<0.001). A terapia também reduziu significativamente os níveis de IL-1β e IL-8 (p<0.001) no FCG. Entretanto, nenhum efeito significativo do tratamento foi observado em relação aos níveis sistêmicos dessas citocinas. Após o parto, os níveis periodontais de IL-1β no grupo teste permaneceram significativamente menores que no grupo controle, enquanto que nenhuma diferença foi observada em relação aos níveis sistêmicos das outras citocinas avaliadas. Pode-se concluir que os níveis de citocinas no soro e FCG não estão significativamente associados em mulheres com extensa inflamação mas limitada destruição periodontal. Embora a terapia periodontal durante a gestação reduza significativamente o nível de citocinas no FCG, ela parece não ter um impacto considerável sobre os níveis sistêmicos desses biomarcadores. / Periodontal disease has been frequently associated with preterm birth. The biological plausibility for this association relies on the hypothesis of a low-grade systemic inflammation originated from periodontal disease. However, clinical studies that investigated the effect of periodontal therapy during pregnancy did not observe significant reductions in the incidence of prematurity. Several cytokines have been associated with both periodontal disease and preterm birth, and might play a key role in the observed association. To date, little is known about the correlation between serum and gingival crevicular fluid (GCF) cytokine levels, as well as the effect of periodontal therapy on these inflammatory markers in pregnant women. The aim of this thesis was to investigate the relationship between periodontal and systemic levels of inflammatory biomarkers related to periodontal immune response and also with the mechanisms of delivery. We also investigated the effect of periodontal therapy on serum and GCF cytokine levels during pregnancy and 30 days postpartum. This thesis consists of two studies that used a sub-sample of women who had been previously enrolled in a larger randomized controlled trial investigating the effect of periodontal therapy on the incidence of preterm birth. Women aged between 18-35 years and up to 20 weeks of gestation were randomly assigned to receive comprehensive nonsurgical periodontal treatment before the 24th gestational week (test group) or a single appointment of supragingival calculus removal (control group). Clinical data, blood and GCF samples were collected at baseline, between 26-28 weeks of gestation and 30 days postpartum. Four periodontal sites per patient were randomly selected for GCF collection among those with deepest probing depth. IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70 and TNF-α levels were analyzed using a cytometric bead array. In the study one, we investigated the correlation and agreement between periodontal and systemic levels of these cytokines in 100 patients, using data collected until 20 weeks of gestation. Patients presented widespread periodontal inflammation but limited destruction. The correlation between serum and GCF cytokine levels was low and not significant, except for IL-12p70, which showed a moderate but significant correlation between the two sources (r = 0.32, p = 0.001). The GCF cytokine levels observed explained less than 10% of the respective serum levels observed, except for IL-12p70, which was responsible for 23% of serum levels (p = 0.0001, r2 = 0.23). Probing depth and bleeding on probing were significantly associated with IL-1β, IL-6 and IL-8 GCF levels, but had limited effects on systemic levels of all cytokines. In the study two, we compared the effect of periodontal therapy during pregnancy (n=30) or a single appointment for supragingival calculus removal (n=30) on periodontal and systemic levels of these cytokines during pregnancy and 30 days postpartum. After treatment, a remarkable reduction of periodontal inflammation was observed in the test group, with bleeding on probing reducing from 49.62% to 11.66% of the sites (p<0.001). Periodontal therapy also significantly reduced IL-1β and IL-8 GCF levels (p<0.001). However, no significant differences due to therapy were observed regarding systemic levels of these cytokines. After delivery, IL-1β GCF levels in the test group remained significantly lower than in the control group, whereas no difference was observed for systemic levels of any other cytokine evaluated. It can be concluded that serum and GCF cytokine levels are not significantly associated in women with widespread periodontal inflammation but limited destruction. Although periodontal therapy during pregnancy significantly reduces GCF cytokine levels, it seems to have a negligible impact on systemic levels of these biomarkers.

O objetivo do presente estudo foi comparar a expressão de IL-1&#946;, IL-4, IL-8, interferon-&#947;, atividade de elastase e a composição do perfil microbiano subgengival antes e depois do tratamento periodontal não cirúrgico em pacientes com doença peridontal crônica generalizada (PC) e agressiva generalizada (PA). Vinte pacientes com PC e quatorze com PA foram avaliados. Dados clínicos, fluido gengival e biofilme subgengival foram analisados na visita inicial (VI) e 3 meses (3M) após o tratamento periodontal não cirúrgico. Amostras de fluido gengival (FG) foram coletadas com tiras de papel e os níveis de: IL-1&#946;, IL-4, IL-8 e INF-&#947; foram medidos, utilizando um tipo de imunoensaio multiplexado (Luminex). Atividade da elastase foi avaliada por um ensaio enzimático. Amostras de placa subgengival foram analisadas através do checkerboard DNA-DNA hybridization. Na avaliação de 3 meses após terapia periodontal foi encontrado melhora significativa para todos os parâmetros clínicos em ambos os grupos. Foram encontradas reduções significativas na atividade de elastase nos sítios rasos e profundos dos pacientes do grupo PA e nos sítios profundos do grupo PC, também foi achado um aumento significativo de INF-&#947; nos sítios rasos do grupo PA. Os dados microbiológicos, mostraram reduções significativas para os níveis dos membros do complexo vermelho (P. gingivalis, T. forsythia, T.denticola), e para as espécies E.nodatum e P.micra no grupo PC. No grupo PA, ocorreram reduções significativas no níveis de P. gingivalis, T. forsythia, Fusobacterium nucleatum ss polymorphum e Fusobacterium periodonticum. Quando as respostas clínica e imunológica 3M após terapia foram comparadas entre os grupos, apenas diferenças sutis foram observadas. Nenhuma diferença microbiológica foi encontrada entre os grupos após a terapia. Em conclusão, os achados suportam nossa hipótese de que as periodontites cronica e agressiva respondem de forma semelhante ao tratamento periodontal nao cirúrgico. / Our aim was to compare the expression of IL1&#946;, IL-4, IL-8, INF-&#947;, elastase activity and the composition of the subgingival microbiota profile before and after non-surgical periodontal treatment in patients with untreated generalized chronic (GCP) and aggressive periodontitis (GAgP). Twenty patients with GCP and 14 with GAgP were evaluated. Clinical data, GCF and plaque were analyzed at baseline and 3 months after non-surgical periodontal treatment. IL-1&#946;, IL-4, IL-8 and INF&#947; were analyzed in a luminex assay. Elastase activity was assessed by an enzymatic assay. Subgingival plaque samples were analyzed using checkerboard DNA-DNA hybridization. Three months after periodontal therapy significant improvement for all clinical parameters in both groups were found. We have found significant reductions in the elastase activity in shallow and deep sites from GAgP and in deep sites from GCP group. A significant increase in INF-&#947; in the shallow sites from GAgP group were also found. Microbiological data showed significant reductions in the levels of members of the red complex (P. gingivalis, T. forsythia, T. denticola), and for the species E.nodatum and P.micra on GCP group. In the GAgP group, there were significant reductions in levels of P. gingivalis, T. forsythia, Fusobacterium nucleatum and Fusobacterium polymorphum ss periodonticum. When the clinical and immunological responses after therapy were compared between groups, only slight differences were found. No microbiological difference was found between groups after therapy. In conclusion, the findings support our hypothesis that the chronic and aggressive periodontitis respond equally well to non-surgical periodontal treatment.

O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto do tratamento periodontal não cirúrgico sobre a atividade de elastase e o volume de fluido gengival nos pacientes portadores de periodontite crônica e agressiva generalizadas. Foram avaliados 18 pacientes com periodontite crônica (idade média 48,6 DP 7,5 anos), e 11 com periodontite agressiva (idade média 27,9 DP 6,54 anos). Foram utilizados os parâmetros clínicos de avaliação de profundidade de bolsa à sondagem (PB) (mm), nível de inserção (NI) (mm) e sangramento à sondagem (SS). As medidas clínicas e as amostras de fluido gengival foram colhidas a partir dos cinco sítios mais profundos (P) e de cinco sítios rasos com gengivite (G) de cada paciente, antes e 90 dias após o término do tratamento. As etapas clínicas obedeceram ao seguinte cronograma: seleção e exame periodontal; coleta de fluido gengival; tratamento periodontal; reavaliação, compreendendo o exame periodontal e coleta de fluido gengival. O tratamento levou, em média, 4 sessões de 40 minutos cada por paciente, com intervalo de 1 semana entre elas. As consultas para reavaliação foram feitas 90 dias após o término do tratamento. O teste de Wilcoxon foi utilizado para comparar os dados antes e depois do tratamento e o teste não pareado de Mann-Whitney U-test foi utilizado para comparar os grupos de periodontite crônica e agressiva. A amostra analisada antes e após o tratamento não apresentou diferenças significativas entre o grupo com periodontite crônica e agressiva, que responderam de forma similar a todos os indicadores avaliados, exceto para a profundidade de bolsa à sondagem nos sítios rasos com gengivite (p = 0,039) e para o sangramento à sondagem (p = 0,021) nos sítios profundos, ambos mais reduzidos na periodontite crônica após o tratamento. A elastase apresentou, após o tratamento, redução significativa nos sítios profundos, para a periodontite crônica (p = 0,012) e agressiva (p = 0,02). Em relação ao volume de fluido gengival, houve significativa redução após o tratamento nos pacientes com periodontite crônica e agressiva, tanto nos sítios rasos (p = 0,03 e p = 0,03) como nos profundos (p &#706; 0,001 e p = 0,003), respectivamente. Concluindo, os grupos com periodontite crônica e agressiva generalizadas comportaram- se de maneira semelhante frente à terapia mecânica não cirúrgica. Ainda, a terapia periodontal mecânica não cirúrgica mostrou redução significativa do volume de fluido gengival em todos os sítios analisados, e da atividade neutrofílica, nos sítios profundos, associada a reduções significativas em todos os indicadores clínicos analisados após o tratamento. / The aim of this study was to investigate the impact of non-surgical mechanical treatment on elastase activity and gingival crevicular fluids (GCF) volume of patients with untreated generalized chronic and aggressive periodontitis. Eighteen patients with generalized chronic periodontitis (mean age 48,6 SD 7,5 years old) and eleven with generalized aggressive periodontitis (mean age 27,9 SD 6,54 years old) were evaluated. The clinical parameters adopted were pocket probing depth (PPD) (mm); attachment level (AL) (mm) and bleeding on probing (PB). Clinical measures and GCF were collected from the 5 deepest sites (P) and from 5 shallow sites with gingivitis (G) from each patient of each group, before and 90 days after non- surgical periodontal treatment. There were adopted the following clinical steps: patients selection and periodontal exam; GCFs collection; periodontal treatment; re- evaluations, comprising periodontal exams and GCFs collection. The periodontal treatment lasted about about 4 sections with 40 minutes each, 1 section per week. Re-evaluations were performed 90 days after completion of the treatment. Wilcoxons statistic test compared the data before and after treatment and Mann-Whitneys non parametric U-test was used to compared chronic and aggressive periodontitis groups. There were no significant differences for all clinical parameters analysed before and after treatment,except for pocket probing depth on shallow sites (p = 0,039) and for bleeding on probing (p = 0,021) on deep sites, both in lower levels in chronic periodontitis after treatment. The elastases activity showed, after treatment, a significant reduction on deep sites for chronic (p = 0,012) and aggressive (p = 0,02) periodontitis. In concern to GCFs volume, there was significant reduction on both chronic and aggressive periodontitis, in shallow (p = 0,03 e p = 0,03) and in deep pockets (p &#706; 0,001 e p = 0,003), respectively, after treatment. In conclusion, both groups responded simmilarly to the mechanical non- surgical treatment. Moreover, non- surgical periodontal treatment showed significant reductions on GCFs volume on all analysed sites and reduction on neutrophilics activity, on deep sites followed by the significant reduction on clinical indicators after treatment.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Durante o tratamento ortodôntico, a resposta inicial dos tecidos periodontais ao estímulo mecânico envolve várias alterações estruturais e bioquímicas que permitem a movimentação do dente. As metaloproteinases da matriz (MMPs) parecem desempenhar um papel importante na manutenção da integridade funcional da matriz extracelular periodontal. O objetivo do presente estudo foi avaliar, em diferentes intervalos de tempo, os níveis de metaloproteinases da matriz -1, -2, -3, -7, -8, -12 e -13 no fluido gengival (FG) de caninos superiores submetidos ao movimento de distalização e testar a hipótese de possíveis alterações nos níveis destas MMPs com o emprego de forças ortodônticas. Amostras de FG foram obtidas de dezesseis pacientes ortodônticos saudáveis (nove do sexo masculino e sete do sexo feminino, com idades entre 13 e 27 anos, média de idade 17,7 anos) que possuíam indicação de exodontias dos primeiros pré-molares superiores e tiveram os caninos distalizados como parte da terapia ortodôntica. Um dos caninos superiores foi distalizado ortodonticamente, sendo considerado dente teste. O canino contralateral não foi submetido a nenhuma força, no entanto foi incluído na aparatologia ortodôntica e utilizado como controle. A coleta de FG foi realizada nos sítios mesial (tensão) e distal (pressão) dos dentes testes e controles 7 dias antes da montagem da aparatologia ortodôntica, imediatamennte após a aplicação da força ortodôntica, e após 1 h, 24 h, e 7, 14 e 21 dias, respectivamente denominados -7d, 0h, 1h, 24h, 7d, 14d e 21d. A arcada superior de cada paciente foi dividida em um lado teste e um lado controle. Os resultados mostraram que foram encontradas diferenças significativas no volume do FG apenas nos intervalos de tempo entre -7d e 0h nos lados controle-pressão (CP), teste-tensão (TT) e teste-pressão (TP). Em TP foi observado ainda aumento do volume entre os tempos 0h e 14d. Foi possível detectar no FG as MMPs estudadas nos lados controle/teste e lados pressão/tensão, em todos os intervalos de tempo. As flutuações dos níveis das MMPs apresentaram poucas alterações significativas nos diferentes intervalos de tempo, nos lados controle/teste e lados pressão/ tensão. As diferenças intergrupos (TT, TP, CT e CP) em cada tempo não mostraram resultados significativos assim como as comparações entre os lados pressão e tensão para cada tempo individualmente. Os níveis de expressão da MMP-8 foram muito superiores aos das outras MMPs avaliadas, porém sem diferenças signficativas entre os lados teste e controle. / During orthodontic treatment, the initial response of periodontal tissues to mechanical stress involves several structural and biochemical changes that allow the tooth movement. The matrix metalloproteinases (MMPs) seem to play an important role in maintaining the functional integrity of periodontal extracellular matrix. The aim of this study was to evaluate, in different periods, the levels of matrix metalloproteinases -1, -2, -3, -7, -8, -12 and -13 in gingival crevicular fluid (GCF) of the superior caninessubmitted to distalization movement and test the hypothesis of possible changes in these MMPs levels with the use of orthodontic forces. GCF samples were obtained from sixteen healthy orthodontic patients (nine males and seven females with ages ranging between 13 and 27 years, mean age 17.7 years) who had indication of first superior bicuspids extraction with cuspids distalization as part of orthodontic treatment. One maxillary canine was subjected to a distalizing force, and considered as the test tooth. The contralateral canine, which was not subjected to any force but was included in an orthodontic appliance, was used as a control. GCF sampling was performed at both mesial (tension) and distal (pressure) sites of the controls and tests teeth 7 days before applying the orthodontic appliance, immediately before applying the orthodontic force, and after 1 h, 24 h, and 7, 14 and 21 days, respectively called -7d, 0h, 1h, 24h, 7d, 14d and 21 d. The results showed significant differences in the GCF volume only in time intervals of 0h-7d on control-pressure (CP), test-tension (TT) and test-pressure (TP) sides. In TP side was observed an increase in volume between the time 0h and 14d. It was possible to detect in GCF all MMPs studied on control/test sides and pressure/tension sides at all periods. Fluctuations in levels of MMPs showed few significant changes in different periods on the sides control/test and pressure/tension. The differences between the groups (TT, TP, CT and CP) in each time showed no significant results as well as the comparisons between pressure and tension sides for each period individually. The expression levels of MMP-8 were much higher than those of other MMPs evaluated, but with no significant differences between sides test and control.

Background: The role of cytokines in the pathogenesis of periodontal disease and the effect of smoking on these mediators has been reported. However, findings have been variable and simultaneous measurement of multiple cytokines has been limited. This study utilized a quantitative multiplex assay to measure a comprehensive panel of Th1, Th2, and pro-inflammatory cytokines and chemokines (including several novel cytokines) in gingival crevicular fluid (GCF) in chronic periodontitis subjects. The impact of cigarette smoking on these GCF mediators was also assessed. Methods: Forty subjects (age 40-75 years) with generalized severe chronic periodontitis (20 smokers and 20 non-smokers) and 12 periodontally healthy controls participated in the study. GCF was collected from four sites in the diseased groups: 2 diseased sites [(probing depth (PD) and clinical attachment level (CAL) ≥5mm with bleeding on probing (BOP)] and 2 healthy sites (PD and CAL ≤3mm, no BOP); 2 healthy sites were sampled in the healthy controls. The volumes of the GCF samples were measured and the GCF mediators assessed in duplicate utilizing a multiplex immunoassay (Luminex). Intragroup, intergroup and pooled comparisons were performed using non-parametric tests including the Mann-Whitney and the Wilcoxon matched-pairs signed-rank test. Results: GCF in diseased sites (vs. controls) contained significantly (p<0.05) higher amounts of IL-2, IFN-γ, IL-3, IL-4 (Th1/Th2 cytokines); IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-12 (p40) (pro-inflammatory cytokines); IL-8, MIP-1, RANTES (chemokines); and IL-15 (regulator of T-cells and NK cells). IP-10 was the only mediator exhibiting lower levels (p<0.0005) in diseased sites compared to controls. Smoking had an inhibitory effect (p<0.05) on pro-inflammatory cytokines (IL-1α, IL-6, IL-12 (p40)); chemokines (IL-8, IP-10, MCP-1, MIP-1, RANTES) and regulators of T-cells and NK cells (IL-7, IL-15) in comparison to sites within non-smokers. Interestingly, smokers had elevated GCF levels (p<0.05) of IL-1α, IL-1β and IL-3 relative to sites in healthy controls. Conclusions: Similar to previous reports, periodontitis subjects had significantly elevated cytokines and chemokines compared to healthy controls. Smokers exhibited a decrease in several pro-inflammatory cytokines, chemokines and regulators of T-cells and NK-cells as compared to nonsmokers however; little influence was observed on Th1/Th2 cytokines. Interestingly, smokers exhibited decreased amounts of GCF IL-7, IL-12(p40), IL-15, IP-10, MCP-1, MIP-1 and RANTES, which calls for future investigation. The multiplex comprehensive assay used in this study to assess cytokines in a single GCF sample is a significant advancement. This technology can be used to compare serum and GCF cytokine profiles in periodontitis and correlate systemic and localized immune responses. This should provide insight into the impact of smoking, as well as other host modifiers, on important systemic and periodontal interactions.

Traumatic dental injuries (TDI) often happens in early childhood, the examination method is clinical and radiographic. Another methodology that has been used to aid in TDI diagnosis is molecular biology. A fluid that has been studied in molecular biology is gingival crevicular fluid (GCF), which is an appropriate fluid to evaluate the relation between periodontal tissues and pulp, and its compounds will depend on either the health or inflammation level of tissues. Therefore, this study aimed to characterize the proteins/peptides in GCF of primary tooth with different sequelae of TDI to clarify the proteins/peptides functions in order to contribute in the diagnosis of pulp and periodontal conditions. The sample was composed for 8 children with TDI, ranging 4 to 6 years. GCF samples were collected in 4 points of the gingival sulcus of both the 12 traumatized teeth and the 8 primary first molar, divided into 5 groups: Molar group (deciduous first molar), No alteration, Pulp Canal Obliteration (PCO), Repair-Related Resorption (RRR) and Pulp Necrosis (PN). GCF proteins were subjected to liquid chromatography electrospray ionization mass spectrometry for identification and characterization. 436 single proteins/peptides were found in this study. 43 (9.86%) were in No alteration group, 92 (21.10%) in PCO group, 23 (5.28%) in RRR group, 16 (3.67%) in PN group, and finaly, 114 (26.15%) in molar group. All groups revealed the following peptides/proteins functions: immune response, cell degradation and recycling, repair and maintenance, enzymatic process, cell binding, cell signaling, cell differentiation, cell migration, structural components and antioxidant activity. Proteins functions related to the specific groups: molar group played role in homeostasis process. No alteration group, I6L9F6_HUMAN, NEB2_HUMAN, Q5T0H8_HUMAN, H0YJG4_HUMAN are related to nervous tissue, and, TET1_HUMAN to odontoblast differentiation. RRR group, CALX_HUMAN, B8ZZF0_HUMAN are related to senescence, and KMT2D_HUMAN mutation is associated to skeletal deformation. PCO group, CATA_HUMAN is response to hypoxia, fibroblast transformation, and osteoblast differentiation; MTA70_HUMAN is related to stem cell differentiation; ITPR2_HUMAN releases calcium ion into cytosol. Fistula group: Q8TAS6_HUMAN development of neuronal tissue; E9PDR3_HUMAN neurotransmitter release, cell division and death; B4DT36_HUMAN play a role in conducting axon; C9JN07_HUMAN mitotic process; RSF1_HUMAN DNA repair; Q19KS2_HUMAN immune defense. Concluding, TDI of primary tooth profile undergoing different sequelae type was characterized. The proteins of molar group exhibited complete homeostasis. In no alteration group, the proteins play a role in maintaining the nervous tissue. The proteins of PCO group were involved in cell transformation and differentiation to reach canal root obliteration. The proteins of RRR group revealed a senescence process. In fistula group the proteins play a role to surround the inflammation site. / O trauma dentário (TD) geralmente ocorre na primeira infância, e os exames para tratamento e acompanhamento são majoritariamente clínico e radiográfico. Outro método auxiliar que tem sido usado para diagnóstico é a biologia molecular. Sendo, o fluido gengival crevicular (FGC) um fluido apropriado para avaliar a relação entre os tecidos periodontais e a polpa, e seus compostos dependerão do nível de saúde ou inflamação dos tecidos. Desta forma, este estudo teve como objetivo caracterizar as proteínas e peptídeos do FGC de dentes decíduos com diferentes sequelas relacionadas ao TD, a fim de auxiliar no diagnóstico da polpa e condição da periodontal. A amostra foi composta por crianças com TD, com a faixa etária entre 4 a 6 anos. As amostras de FGC foram coletadas em 4 pontos do sulco gengival dos 12 dentes traumatizados e de 8 primeiros molares decíduos, os quais foram divididos em 5 grupos: molar (primeiro molar decíduo), sem alteração, obliteração do canal pulpar (OCP), reparo relacionado à reabsorção (RRR) e necrose pulpar (NP). As proteínas do FCG foram submetidas espectrometria de massa em tandem de ionização por eletrovaporização, para identificação e caracterização. Oito crianças com 5 anos de idade, em média. 436 proteínas/peptídeos únicos foram encontrados neste estudo. 43 (9,86%) estavam no grupo Sem alteração, 92 (21,10%) no grupo OCP, 23 (5,28%) no grupo RRR, 16 (3,67%) no grupo NP, 114 (26,15%) no grupo molar. Todos os grupos revelaram as seguintes funções peptídeos / proteínas: resposta imune / degradação celular e reciclagem / reparo e manutenção / processo enzimático / ligação celular / sinalização celular / diferenciação celular / migração celular / componentes estruturais / atividade antioxidante. Funções proteicas relacionadas aos grupos: grupo molar desempenhou papel no processo de homeostase. As proteínas do grupo sem alteração: I6L9F6_HUMAN, NEB2_HUMAN, Q5T0H8_HUMAN, H0YJG4_HUMAN estão relacionadas ao tecido nervoso; e, TET1_HUMAN à diferenciação odontoblástica. As proteínas do grupo RRR: CALX_HUMAN, B8ZZF0_HUMAN estão relacionadas à senescência; e a mutação de KMT2D_HUMAN está associada à deformação esquelética. As proteínas do grupo PCO: CATA_HUMAN está associada à resposta de hipóxia, transformação de fibroblastos e diferenciação de osteoblastos; MTA70_HUMAN diferenciação de célulastronco; ITPR2_HUMAN libera íon de cálcio no citosol. As proteínas do grupo da fístula: Q8TAS6_HUMAN está relacionada ao desenvolvimento do tecido neuronal; E9PDR3_HUMAN à liberação de neurotransmissores, divisão e morte celular; B4DT36_HUMAN desempenha um papel na condução do axônio; C9JN07_HUMAN relaciona-se ao processo mitótico; RSF1_HUMAN ao reparo de DNA; Q19KS2_HUMAN à defesa imunológica. Concluindo, o perfil dos dentes decíduos que sofreram trauma e tiveram diferentes tipos de sequelas foi caracterizado por diferentes proteínas. O grupo molar exibiu homeostase. Grupo sem alteração, as proteínas desempenharam um papel na manutenção do tecido nervoso. As proteínas do grupo PCO estavam envolvidas na transformação e diferenciação celular para atingir a obliteração do canal radicular. As proteínas do grupo RRR revelaram um processo de senescência. No grupo de fístula, as proteínas parecem desempenhar um papel para cercar o local da inflamação.

A doença periodontal tem sido frequentemente associada ao parto pretermo. A plausibilidade biológica para tal associação baseia-se na hipótese de uma inflamação sistêmica de baixa intensidade de origem periodontal. Entretanto, os estudos de intervenção que investigaram o efeito da terapia periodontal durante a gestação não observaram reduções significativas na incidência de prematuridade. Como diversas citocinas têm sido associadas tanto a doença periodontal quanto ao parto pretermo, cogita-se que elas desempenhem um papel importante na associação observada. Até o presente momento, pouco se sabe a respeito da correlação entre os níveis de citocinas no soro e no fluído crevicular gengival (FCG), assim como do efeito da terapia periodontal sobre esses marcadores de inflamação em gestantes. O objetivo desta tese foi avaliar a relação entre níveis sistêmicos e periodontais de biomarcadores inflamatórios relacionados com a resposta imune periodontal e também com os mecanismos de parto. Também investigou-se o efeito da terapia periodontal sobre os níveis dessas citocinas durante a gestação e 30 dias após o parto. Esta tese é composta por dois estudos que utilizaram uma sub-amostra de mulheres que haviam sido recrutadas para um ensaio clínico randomizado maior que investigou o efeito da terapia periodontal sobre a incidência de prematuridade. Mulheres entre 18-35 anos e com até 20 semanas de gestação foram aleatoriamente alocadas para receber tratamento periodontal não cirúrgico completo até a 24a semana de gestação (grupo teste) ou apenas uma consulta de uma remoção de cálculo supragingival (grupo controle). Dados clínicos e amostras de sangue e FCG foram coletadas no início do estudo, entre 26-28 semanas de gestação e 30 dias após o parto. Quatro sítios periodontais por paciente foram aleatoriamente selecionados para coleta de FCG entre aqueles com maior profundidade de sondagem. Os níveis de IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL- 12p70 e FNT-α foram analisados por citometria de fluxo. No estudo 1, investigou-se a correlação e concordância entre os níveis periodontais e sistêmicos dessas citocinas em 100 pacientes, utilizando dados coletados até a 20a semana de gestação. As pacientes apresentaram extensa inflamação e limitada destruição periodontal. A correlação entre os níveis de citocinas no soro e no FCG foi baixa e não significativa, com exceção da IL-12p70 que mostrou uma correlação moderada, porém significativa, entre as duas fontes (r=0.32, p=0.001). Os níveis de citocinas observados no FCG explicaram menos de 10% dos respectivos níveis observados no soro, com exceção da IL-12p70 em que eles foram responsáveis por 23% dos níveis séricos (p=0.0001, r2=0.23). A profundidade de sondagem e o sangramento a sondagem estiveram significativamente associados com os níveis de IL-1β, IL-6 e IL-8 no FCG, mas tiveram efeitos limitados sobre os níveis sistêmicos de todas as citocinas. No estudo 2, comparou-se o efeito da terapia periodontal durante a gestação (n=30) com uma consulta única de remoção de cálculo supragingival (n=30) sobre os níveis periodontais e sistêmicos dessas citocinas durante a gestação e 30 dias após o parto. Após o tratamento, uma redução drástica da inflamação periodontal foi observada no grupo teste, com o percentual de sangramento a sondagem reduzindo de 49.62% para 11.66% dos sítios (p<0.001). A terapia também reduziu significativamente os níveis de IL-1β e IL-8 (p<0.001) no FCG. Entretanto, nenhum efeito significativo do tratamento foi observado em relação aos níveis sistêmicos dessas citocinas. Após o parto, os níveis periodontais de IL-1β no grupo teste permaneceram significativamente menores que no grupo controle, enquanto que nenhuma diferença foi observada em relação aos níveis sistêmicos das outras citocinas avaliadas. Pode-se concluir que os níveis de citocinas no soro e FCG não estão significativamente associados em mulheres com extensa inflamação mas limitada destruição periodontal. Embora a terapia periodontal durante a gestação reduza significativamente o nível de citocinas no FCG, ela parece não ter um impacto considerável sobre os níveis sistêmicos desses biomarcadores. / Periodontal disease has been frequently associated with preterm birth. The biological plausibility for this association relies on the hypothesis of a low-grade systemic inflammation originated from periodontal disease. However, clinical studies that investigated the effect of periodontal therapy during pregnancy did not observe significant reductions in the incidence of prematurity. Several cytokines have been associated with both periodontal disease and preterm birth, and might play a key role in the observed association. To date, little is known about the correlation between serum and gingival crevicular fluid (GCF) cytokine levels, as well as the effect of periodontal therapy on these inflammatory markers in pregnant women. The aim of this thesis was to investigate the relationship between periodontal and systemic levels of inflammatory biomarkers related to periodontal immune response and also with the mechanisms of delivery. We also investigated the effect of periodontal therapy on serum and GCF cytokine levels during pregnancy and 30 days postpartum. This thesis consists of two studies that used a sub-sample of women who had been previously enrolled in a larger randomized controlled trial investigating the effect of periodontal therapy on the incidence of preterm birth. Women aged between 18-35 years and up to 20 weeks of gestation were randomly assigned to receive comprehensive nonsurgical periodontal treatment before the 24th gestational week (test group) or a single appointment of supragingival calculus removal (control group). Clinical data, blood and GCF samples were collected at baseline, between 26-28 weeks of gestation and 30 days postpartum. Four periodontal sites per patient were randomly selected for GCF collection among those with deepest probing depth. IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70 and TNF-α levels were analyzed using a cytometric bead array. In the study one, we investigated the correlation and agreement between periodontal and systemic levels of these cytokines in 100 patients, using data collected until 20 weeks of gestation. Patients presented widespread periodontal inflammation but limited destruction. The correlation between serum and GCF cytokine levels was low and not significant, except for IL-12p70, which showed a moderate but significant correlation between the two sources (r = 0.32, p = 0.001). The GCF cytokine levels observed explained less than 10% of the respective serum levels observed, except for IL-12p70, which was responsible for 23% of serum levels (p = 0.0001, r2 = 0.23). Probing depth and bleeding on probing were significantly associated with IL-1β, IL-6 and IL-8 GCF levels, but had limited effects on systemic levels of all cytokines. In the study two, we compared the effect of periodontal therapy during pregnancy (n=30) or a single appointment for supragingival calculus removal (n=30) on periodontal and systemic levels of these cytokines during pregnancy and 30 days postpartum. After treatment, a remarkable reduction of periodontal inflammation was observed in the test group, with bleeding on probing reducing from 49.62% to 11.66% of the sites (p<0.001). Periodontal therapy also significantly reduced IL-1β and IL-8 GCF levels (p<0.001). However, no significant differences due to therapy were observed regarding systemic levels of these cytokines. After delivery, IL-1β GCF levels in the test group remained significantly lower than in the control group, whereas no difference was observed for systemic levels of any other cytokine evaluated. It can be concluded that serum and GCF cytokine levels are not significantly associated in women with widespread periodontal inflammation but limited destruction. Although periodontal therapy during pregnancy significantly reduces GCF cytokine levels, it seems to have a negligible impact on systemic levels of these biomarkers.