Submitted by Luiza de Carvalho Bertozo null (luiza_bertozo@yahoo.com.br) on 2017-03-10T15:12:20Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO LUIZA DE CARVALHO BERTOZO.pdf: 2801595 bytes, checksum: 5005c69ba30f3937ca6c34753eaf84ae (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-03-16T18:26:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 bertozo_lc_me_bauru.pdf: 2801595 bytes, checksum: 5005c69ba30f3937ca6c34753eaf84ae (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-16T18:26:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bertozo_lc_me_bauru.pdf: 2801595 bytes, checksum: 5005c69ba30f3937ca6c34753eaf84ae (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A enzima mieloperoxidase (MPO), proveniente dos neutrófilos e monócitos, é capaz de catalisar a oxidação de íons Cl- e Br- a partir da redução do peróxido de hidrogênio. Os oxidantes formados, ácido hipocloroso (HOCl) e ácido hipobromoso (HOBr) são intensamente reativos e atuam como agentes bactericidas, podendo estar envolvidos em processos deletérios que caracterizam doenças de cunho inflamatório. A determinação da atividade halogenante específica da MPO não é trivial, pois devido ao alto potencial redox da forma ativa composto I (1,16 V), além de Cl- e Br-, ela é capaz de catalisar a oxidação de vários compostos orgânicos pelo mecanismo peroxidásico. Assim, são poucas as metodologias utilizadas até o momento que medem exclusivamente a atividade halogenante. Neste trabalho desenvolvemos uma metodologia para a determinação da atividade halogenante da MPO utilizando a sonda fluorescente dansilglicina (DG), a qual se mostrou insensível a ação peroxidásica da enzima, mas susceptível ao ataque eletrofílico dos ácidos HOCl e HOBr. Os estudos de cinética rápida mostram que a velocidade de reação entre a DG e o HOCl aumenta com a adição de Br-. Foi possível verificar a queda linear na intensidade de fluorescência da DG quando concentrações crescentes de HOCl foram adicionadas ao meio reacional juntamente com uma concentração fixa de Br-. Os mesmos resultados foram obtidos utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e, quando acoplado ao espectrômetro de massas, foi possível identificar o produto da reação, o composto bromossubstituído da DG. Os estudos utilizando a enzima MPO comprovaram a especificidade da metodologia, visto que a queda de fluorescência na ausência de Cl- e Br- foi mínima. A peroxidase de eosinófilos tambem é capaz de catalisar a oxidação de haletos, produzindo principalmente o HOBr. Desta maneira, ao aplicar a metodologia da DG na determinação da atividade halogenante da EPO, a produção de HOCl/HOBr tambem pode ser analisada. Posteriormente, ao utilizar a metodologia da DG, em estudos com inibidores, foi possível distinguir o mecanismo de um inibidor reversível do mecanismo de um inibidor irreversível, em estudos realizados para a MPO e para a EPO. Concluímos que o método baseado na queda de fluorescência da DG possui grande potencial como técnica para detecção direta e específica da atividade halogenante das enzimas MPO e EPO. / The enzyme myeloperoxidase (MPO) is able to catalyze the oxidation of chloride (Cl-) and bromide (Br-) ions from the reduction of hydrogen peroxide. The formed oxidizing agents, hypochlorous acid (HOCl) and hypobromous acid (HOBr) are highly reactive and involved in deleterious inflammatory processes that characterizes many diseases. The determination of the specific halogenating activity of MPO is not trivial, because due to high redox potential of the active form of compound I (MPO-I, 1.16 V), MPO is also capable to catalyze the oxidation of various organic compounds by the peroxidase mechanism. Thus, there are few methods used to date to measure only the halogenating activity. In this work, we developed a methodology for determining the halogenating activity of MPO using the fluorescent probe dansylglycine (DG), which proved insensitive to peroxidase action, but susceptible to electrophilic attack of HOCl and HOBr. The fast kinetics studies show that the reaction rate between DG and HOCl increases with the addition of Br-. It was possible to verify a linear decrease in fluorescence intensity of DG when increasing concentrations of HOCl were added to the reaction medium together with a fixed concentration of Br-. The same results were obtained using high performance lquid chromatography (HPLC) and, when coupled to mass spectrometry, it was possible to identify the product of the reaction, the compound bromo-dansylglycine. The abstraction of Cl- and Br- from the buffer blocked totally the fluorescence decay of dansylglycine. Eosinophil peroxidase is also capable of catalyzing the oxidation of halides, mainly producing HOBr. Thus, when applying the DG methodology in the determination of the halogenating activity of EPO, the production of HOCl / HOBr was also verified. By applying the DG methodology in studies with MPO and EPO inhibitors, it was possible to distinguish the mechanism of a reversible inhibitor from an irreversible one. In conclusion, this method based on the DG fluorescence bleaching has a great potential as a direct and selective analytical technique and for detection of MPO and EPO halogenating activity. / FAPESP: 2015/08267-1

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-29Bitstream added on 2014-06-13T18:29:59Z : No. of bitstreams: 1 martins_ab_me_arafcf.pdf: 992180 bytes, checksum: 3281d39ebadb109f527844b299d91644 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Níveis séricos elevados de mieloperoxidase (MPO) estão associados com disfunção endotelial e risco aumentado de acidente cárdio-vascular. Há muito tempo se sabe que o hábito do tabagismo é um fator de risco para doenças cardiovasculares.Uma vez que o infarto do miocárdio está associado também com leucocitose neutrofílica, e fumantes apresentam neutrofilia, nós hipotetizamos que o nível sérico de MPO em fumantes também poderia estar elevado. O estudo incluiu quarenta adultos voluntários e saudáveis. O grupo controle foi composto por vinte indivíduos não tabagistas e o grupo de estudo por vinte indivíduos tabagistas. Hemograma, Interleucina 8 (CXIL8) sérica e MPO sérica foram determinados. Encontramos contagens de neutrófilos e monócitos aumentados (p<0,05) e o nível sérico de interleucina-8 (CXIL8) foi cerca de quatro vezes maior em fumantes quando comparados a não fumantes (p<0,05). O nível sérico de MPO foi também significativamente superior (p<0,05) nos indivíduos fumantes. Este último resultado se correlaciona perfeitamente com a neutrofilia e o aumento da CXIL8 (potente quimioatrator e ativador de neutrófilos), que caracterizam indivíduos fumantes. Propõe-se que esta alta concentração sérica de MPO possa estar diretamente envolvida com a alta prevalência de doenças coronarianas arteriais entre tabagistas / Elevated myeloperoxidase (MPO) serum levels are associated with endothelial dysfunction and cigarrete smoking is a risk factor for cardiovascular diseases. Since myocardial infarctation is associated with leucocytosis and smokers present increased levels of neutrophils, here we hypothesized that levels of serum MPO in smokers subjects could be also elevated. The study included forty adult healthy volunteers. The control group consisted of twenty non-smokers and the study group was twenty smoker subjects. The hemogram, interleukin-8 (CXIL8) and MPO serum levels were mensured. We found that neutrophil and monocytes counts are increased (p<0,05) and the serum level of interleukin-8 (CXIL8) was about 4-fold higher in smokers compared to non-smokers (p<0,05).The level of MPO was also higher among the group of tabagists (p<0,05). This result correlated perfectly with the increased in neutrophil counts and CXIL-8 serum level (a potent neutrophil chemo-attractant and activator), which characterize smoking subjects. We propose that the high level of serum MPO could be directly involved in the higher prevalence of coronary artery diseases among smokers

Submitted by Leonardo Freitas (leonardo.hfreitas@ufpe.br) on 2015-04-15T13:00:55Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao JOAO CARLOS ARAUJO.pdf: 1580589 bytes, checksum: b81edfd0cfb63e60f78e5131557ff7aa (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T13:00:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao JOAO CARLOS ARAUJO.pdf: 1580589 bytes, checksum: b81edfd0cfb63e60f78e5131557ff7aa (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / O Diabetes Melitos tipo 2 é uma doença de grande prevalência e alta mortalidade em todo o mundo. A persistência da hiperglicemia no curso da doença está envolvida com padrões clássicos de nefropatia, retinopatia e neuropatia. Tais complicações associadas a maior susceptibilidade dos diabéticos em desenvolverem infecções, agravam mais ainda a qualidade de vida destes pacientes. Nesse contexto, as infecções fúngicas são relevantes, associadas à grande disseminação e difícil tratamento, sendo as onicomicoses as mais frequentes em pacientes diabéticos. Em nosso trabalho a frequência das onicomicoses foi determinada em 66 pacientes com Diabetes Mellitus tipo 2, atendidos no Centro de Referência para Diabetes Ermírio de Morais, na cidade do Recife, durante o período de junho a novembro de 2013. Todos os 66 pacientes com Diabetes tipo 2 apresentaram algum sinal clínico para onicomicoses. Destes 24 (36,3%) revelaram confirmação para etiologia fúngica, destacando-se Candida krusei (45,8%) como uma das espécies mais frequentes. Taxas de glicemia e hemoglobina glicosilada estiveram elevadas em 37,5% dos pacientes com micoses. A frequência dos genótipos e alelos do polimorfismo G463A do gene MPO foi para G/G(36%), G/A(43%) e A/A(27%). Não foi detectada associação ao se relacionar à micose, diabetes e o polimorfismo (G463A).

Com o objetivo de estudar os possíveis efeitos da administração sistêmica de glutamina ou da associação de hidrocortisona, dimetilsulfóxido, ácido ascórbico e pentoxifilina nas lesões de isquemia e reperfusão no cólon maior, foram utilizados dezoito equinos. Sob anestesia geral e controle da oximetria de pulso e pressão arterial, os equinos foram submetidos a laparotomia e em um segmento do cólon maior foi induzida isquemia venosa total. Após uma hora de isquemia, seis equinos do Grupo G receberam glutamina (25mg/Kg IV), seis equinos do Grupo A receberam uma associação de hidrocortisona (4mg/Kg IV), dimetilsulfóxido (20mg/Kg IV), ácido ascórbico (50mg/Kg IV), e pentoxifilina (10mg/Kg IV) e os seis equinos do Grupo C receberam apenas solução de Ringer com lactato e constituíram o Grupo controle. Após duas horas de isquemia o fluxo sanguíneo local foi restabelecido. Decorridas duas horas de reperfusão foi realizada a laparorrafia e permitiu-se a recuperação anestésica. Seis horas após o início da reperfusão os equinos do Grupo G receberam novamente 25mg/Kg de glutamina, enquanto os equinos dos Grupos A e C receberam apenas solução de Ringer com lactato. Doze horas após o início da reperfusão os equinos foram eutanasiados. Foram colhidas amostras de cólon antes da indução da isquemia, após duas horas de isquemia e após duas e doze horas de reperfusão, que foram submetidas a avaliação histomorfológica, ultra-estrutural e determinação da atividade de mieloperoxidase. Os resultados para todas as variáveis estudadas foram semelhantes entre os grupos, permitindo concluir que os tratamentos, nas condições em que foram empregados neste estudo, não foram eficazes em atenuar as alterações decorrentes de isquemia e reperfusão no cólon maior de equinos. / This study was designed to evaluate the effects of intravenous administration of glutamine or the association of hydrocortisone, dimethyl sulphoxide, ascorbic acid and pentoxifylline on ischemia reperfusion lesions of the large colon. A segment of the large colon was isolated in 18 horses under inhalant general anesthesia and total venous ischemia was induced. One hour after the onset of ischemia, glutamine (25mg/Kg IV) was administered to six horses (G group), an association of hydrocortisone (4mg/Kg IV), dimethyl sulphoxide (20mg/Kg IV), ascorbic acid (50mg/Kg IV) and pentoxifylline (10mg/Kg IV) was administered to six horses, and the others received only isotonic fluids and remained as the control group (C). After 2 hours of ischemia and 2 hours of reperfusion the abdomen was closed and the horses were allowed to recover from anesthesia. After 6 hours of reperfusion, horses of group G received another dose of glutamine (25mg/Kg IV) whereas groups A and C received only isotonic fluids. Horses were euthanatized 12 hours after reperfusion. Biopsies were taken from the large colon before and after 2 hours of ischemia and after 2 and 12 hours of reperfusion. Alterations were evaluated under light and scanning electronic microscopy and scored. Additionally, mieloperoxidase (MPO) activity was measured. Results showed that scores for mucosal lesion, edema, hemorrhage, neutrophil infiltration and MPO activity during IR were similar between groups G, A and C. It was concluded that treatments were not effective in attenuating effects of ischemia and reperfusion in the equine large colon.

Em trabalho anterior verificamos que neutrófilos oxidam o hormônio melatonina a N1-acetil-N2-formil-5-metoxiquinuramina (AFMK), numa reação catalisada por mieloperoxidase e dependente de ânion superóxido. Neste trabalho acompanhamos a cinética de formação de AFMK e de seu produto de deformilação N1-acetil-5-metoxiquinuramina (AMK) quando neutrófilos foram ativados por diferentes estímulos. No sentido de obtermos informações sobre a relevância biológica destas reações, avaliamos o efeito de melatonina, AFMK e AMK sobre a formação de HOCl, sobre a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF-&#945 e IL-8) e sobre a apoptose de neutrófilos. Uma forte inibição da liberação de HOCl foi observada em concentrações de melatonina igual ou superior a 0,05 mM. Embora menos efetivo, AMK também inibiu a formação de HOCl, enquanto AFMK não teve efeito. Adicionalmente mostramos que todos estes compostos inibiram a produção de TNF-&#945; e IL-8 por neutrófilos ativados e que AFMK foi o mais potente deles. Por exemplo, enquanto 1µM de AFMK inibiu eficientemente a liberação de TNF-&#945;, efeito similar foi obtido com melatonina apenas a partir de 1mM. O mesmo padrão de resposta foi observado na morte celular. AFMK e AMK (1mM), mas não melatonina, inibiram significativamente (aproximadamente 25%) a morte celular de neutrófilos. Nossos dados sugerem que neutrófilos são um alvo importante para AFMK e que a rota de metabolização da melatonina pode ser útil no controle da intensidade do processo inflamatório através do consumo de ERO, controle da liberação de citocinas e da sobrevida dos neutrófilos. Este conjunto de dados associados com o fato de que células mononucleares ativadas sintetizam melatonina e que o foco inflamatório é uma fonte de espécies reativas de oxigênio (ERO), levou-nos a verificar se a oxidação de melatonina ocorreria in vivo em situações inflamatórias. Para isso, analisamos amostras de liquor de pacientes com meningite viral. AFMK foi detectado em 16 das 20 amostras de liquor de pacientes com meningite viral e em nenhuma das 8 amostras controle. Das 16 amostras nas quais AFMK foi detectado, ele pôde ser quantificado em 6 (concentrações variando de 50 a 500 nM). Adicionalmente analisamos a correlação entre a presença de AFMK com alguns parâmetros inflamatórios como: celularidade, concentração de proteínas totais, TNF-&#945;, IL-8 e IL-1&#946;. Verificamos que todos estes parâmetros diminuíram nas amostras de liquor onde a concentração de AFMK era maior. Em conjunto, nossos resultados mostram que pelo menos parte dos efeitos antiinflamatórios descritos para melatonina pode ser originado da ação de seus produtos de oxidação. Nossos resultados contribuem significativamente para a compreensão do papel biológico da melatonina e seus produtos de oxidação na imunomodulação durante a inflamação. / In a previous study we described that activated neutrophils are able to oxidize the pineal hormone melatonin to N1-acetyl-N2-formyl-5-methoxykynuramine (AFMK) in a reaction dependent on myeloperoxidase and superoxide anion. Here we followed the formation of AFMK and its deformylated product N1-acetil-5-metoxiquinuramina (AMK) when neutrophils were activated by different stimuli. The biological significance of this reaction has been one of our research interests, therefore we study the effect of melatonin, AFMK and AMK on the HOCl formation, on the release of pro-inflammatory cytokines (TNF&#945;- and IL-8) and on the apoptosis process. Melatonin caused an almost complete inhibition of HOCl formation at concentrations up to 0.05 mM. Although less effective, AMK also inhibited HOCl formation, while AFMK had no effect. Additionally all the compounds assayed efficiently inhibited the production of TNF-&#945; and IL-8 by activated neutrophils. Moreover, the inhibitory activity of AFMK was stronger than that of melatonin and could be observed already at 1µM. A significant inhibition of neutrophil death (approximately 25 %) was triggered by AFMK and AMK (1 mM) but not by melatonin. Our data suggest that neutrophils are an important target for AFMK and that the route of melatonin metabolism may be useful in controlling the intensity of the inflammatory process by the consumption of reactive oxygen species, control of cytokine production and neutrophils life span. These findings, associated with the efficient synthesis of melatonin by activated-mononuclear cells and the presence of reactive oxygen species in the inflammatory focus, led us to verify if inflammation triggers the oxidation of melatonin in vivo. In this way we analyzed the cerebrospinal fluid (CSF) of patients with meningitis. AFMK was detected in 16 CSF from 20 samples of patients with viral meningitis and in none of 8 control samples. From the 16 samples in which AFMK was detected, it was quantified in 6 (at the concentration range of 50 500 nM). We also analyzed the correlation between the presences of AFMK with some inflammatory parameters like: cellularity and concentration of total proteins, TNF-&#945;, IL-8 and IL-1&#946;. We verify that all these parameters were decreased in samples in which AFMK was in higher concentrations. Our results show that, at least part of the antiinflammatory effects described for melatonin is indeed caused by its oxidation product. These findings add a new insight in the comprehension of the biological role of melatonin and its oxidation products in immunomodulation and during inflammation.

Com o objetivo de estudar os possíveis efeitos da administração sistêmica de glutamina ou da associação de hidrocortisona, dimetilsulfóxido, ácido ascórbico e pentoxifilina nas lesões de isquemia e reperfusão no cólon maior, foram utilizados dezoito equinos. Sob anestesia geral e controle da oximetria de pulso e pressão arterial, os equinos foram submetidos a laparotomia e em um segmento do cólon maior foi induzida isquemia venosa total. Após uma hora de isquemia, seis equinos do Grupo G receberam glutamina (25mg/Kg IV), seis equinos do Grupo A receberam uma associação de hidrocortisona (4mg/Kg IV), dimetilsulfóxido (20mg/Kg IV), ácido ascórbico (50mg/Kg IV), e pentoxifilina (10mg/Kg IV) e os seis equinos do Grupo C receberam apenas solução de Ringer com lactato e constituíram o Grupo controle. Após duas horas de isquemia o fluxo sanguíneo local foi restabelecido. Decorridas duas horas de reperfusão foi realizada a laparorrafia e permitiu-se a recuperação anestésica. Seis horas após o início da reperfusão os equinos do Grupo G receberam novamente 25mg/Kg de glutamina, enquanto os equinos dos Grupos A e C receberam apenas solução de Ringer com lactato. Doze horas após o início da reperfusão os equinos foram eutanasiados. Foram colhidas amostras de cólon antes da indução da isquemia, após duas horas de isquemia e após duas e doze horas de reperfusão, que foram submetidas a avaliação histomorfológica, ultra-estrutural e determinação da atividade de mieloperoxidase. Os resultados para todas as variáveis estudadas foram semelhantes entre os grupos, permitindo concluir que os tratamentos, nas condições em que foram empregados neste estudo, não foram eficazes em atenuar as alterações decorrentes de isquemia e reperfusão no cólon maior de equinos. / This study was designed to evaluate the effects of intravenous administration of glutamine or the association of hydrocortisone, dimethyl sulphoxide, ascorbic acid and pentoxifylline on ischemia reperfusion lesions of the large colon. A segment of the large colon was isolated in 18 horses under inhalant general anesthesia and total venous ischemia was induced. One hour after the onset of ischemia, glutamine (25mg/Kg IV) was administered to six horses (G group), an association of hydrocortisone (4mg/Kg IV), dimethyl sulphoxide (20mg/Kg IV), ascorbic acid (50mg/Kg IV) and pentoxifylline (10mg/Kg IV) was administered to six horses, and the others received only isotonic fluids and remained as the control group (C). After 2 hours of ischemia and 2 hours of reperfusion the abdomen was closed and the horses were allowed to recover from anesthesia. After 6 hours of reperfusion, horses of group G received another dose of glutamine (25mg/Kg IV) whereas groups A and C received only isotonic fluids. Horses were euthanatized 12 hours after reperfusion. Biopsies were taken from the large colon before and after 2 hours of ischemia and after 2 and 12 hours of reperfusion. Alterations were evaluated under light and scanning electronic microscopy and scored. Additionally, mieloperoxidase (MPO) activity was measured. Results showed that scores for mucosal lesion, edema, hemorrhage, neutrophil infiltration and MPO activity during IR were similar between groups G, A and C. It was concluded that treatments were not effective in attenuating effects of ischemia and reperfusion in the equine large colon.

Em trabalho anterior verificamos que neutrófilos oxidam o hormônio melatonina a N1-acetil-N2-formil-5-metoxiquinuramina (AFMK), numa reação catalisada por mieloperoxidase e dependente de ânion superóxido. Neste trabalho acompanhamos a cinética de formação de AFMK e de seu produto de deformilação N1-acetil-5-metoxiquinuramina (AMK) quando neutrófilos foram ativados por diferentes estímulos. No sentido de obtermos informações sobre a relevância biológica destas reações, avaliamos o efeito de melatonina, AFMK e AMK sobre a formação de HOCl, sobre a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF-&#945 e IL-8) e sobre a apoptose de neutrófilos. Uma forte inibição da liberação de HOCl foi observada em concentrações de melatonina igual ou superior a 0,05 mM. Embora menos efetivo, AMK também inibiu a formação de HOCl, enquanto AFMK não teve efeito. Adicionalmente mostramos que todos estes compostos inibiram a produção de TNF-&#945; e IL-8 por neutrófilos ativados e que AFMK foi o mais potente deles. Por exemplo, enquanto 1µM de AFMK inibiu eficientemente a liberação de TNF-&#945;, efeito similar foi obtido com melatonina apenas a partir de 1mM. O mesmo padrão de resposta foi observado na morte celular. AFMK e AMK (1mM), mas não melatonina, inibiram significativamente (aproximadamente 25%) a morte celular de neutrófilos. Nossos dados sugerem que neutrófilos são um alvo importante para AFMK e que a rota de metabolização da melatonina pode ser útil no controle da intensidade do processo inflamatório através do consumo de ERO, controle da liberação de citocinas e da sobrevida dos neutrófilos. Este conjunto de dados associados com o fato de que células mononucleares ativadas sintetizam melatonina e que o foco inflamatório é uma fonte de espécies reativas de oxigênio (ERO), levou-nos a verificar se a oxidação de melatonina ocorreria in vivo em situações inflamatórias. Para isso, analisamos amostras de liquor de pacientes com meningite viral. AFMK foi detectado em 16 das 20 amostras de liquor de pacientes com meningite viral e em nenhuma das 8 amostras controle. Das 16 amostras nas quais AFMK foi detectado, ele pôde ser quantificado em 6 (concentrações variando de 50 a 500 nM). Adicionalmente analisamos a correlação entre a presença de AFMK com alguns parâmetros inflamatórios como: celularidade, concentração de proteínas totais, TNF-&#945;, IL-8 e IL-1&#946;. Verificamos que todos estes parâmetros diminuíram nas amostras de liquor onde a concentração de AFMK era maior. Em conjunto, nossos resultados mostram que pelo menos parte dos efeitos antiinflamatórios descritos para melatonina pode ser originado da ação de seus produtos de oxidação. Nossos resultados contribuem significativamente para a compreensão do papel biológico da melatonina e seus produtos de oxidação na imunomodulação durante a inflamação. / In a previous study we described that activated neutrophils are able to oxidize the pineal hormone melatonin to N1-acetyl-N2-formyl-5-methoxykynuramine (AFMK) in a reaction dependent on myeloperoxidase and superoxide anion. Here we followed the formation of AFMK and its deformylated product N1-acetil-5-metoxiquinuramina (AMK) when neutrophils were activated by different stimuli. The biological significance of this reaction has been one of our research interests, therefore we study the effect of melatonin, AFMK and AMK on the HOCl formation, on the release of pro-inflammatory cytokines (TNF&#945;- and IL-8) and on the apoptosis process. Melatonin caused an almost complete inhibition of HOCl formation at concentrations up to 0.05 mM. Although less effective, AMK also inhibited HOCl formation, while AFMK had no effect. Additionally all the compounds assayed efficiently inhibited the production of TNF-&#945; and IL-8 by activated neutrophils. Moreover, the inhibitory activity of AFMK was stronger than that of melatonin and could be observed already at 1µM. A significant inhibition of neutrophil death (approximately 25 %) was triggered by AFMK and AMK (1 mM) but not by melatonin. Our data suggest that neutrophils are an important target for AFMK and that the route of melatonin metabolism may be useful in controlling the intensity of the inflammatory process by the consumption of reactive oxygen species, control of cytokine production and neutrophils life span. These findings, associated with the efficient synthesis of melatonin by activated-mononuclear cells and the presence of reactive oxygen species in the inflammatory focus, led us to verify if inflammation triggers the oxidation of melatonin in vivo. In this way we analyzed the cerebrospinal fluid (CSF) of patients with meningitis. AFMK was detected in 16 CSF from 20 samples of patients with viral meningitis and in none of 8 control samples. From the 16 samples in which AFMK was detected, it was quantified in 6 (at the concentration range of 50 500 nM). We also analyzed the correlation between the presences of AFMK with some inflammatory parameters like: cellularity and concentration of total proteins, TNF-&#945;, IL-8 and IL-1&#946;. We verify that all these parameters were decreased in samples in which AFMK was in higher concentrations. Our results show that, at least part of the antiinflammatory effects described for melatonin is indeed caused by its oxidation product. These findings add a new insight in the comprehension of the biological role of melatonin and its oxidation products in immunomodulation and during inflammation.

As reações iniciais dos materiais capeadores sobre o tecido pulpar não estão bem elucidadas. A metaloproteinase da matriz (MMP) atua no remodelamento da matriz extracelular e a mieloperoxidase (MPO) está associada com infiltração neutrofílica nos tecidos. O objetivo deste estudo foi avaliar polpas de molares de ratos após pulpotomia com agregado trióxido mineral (MTA), BiodentineTM (BDT) e Hidróxido de cálcio (HC) associado à solução salina estéril, nos períodos de 24, 72 horas, 7 e 15 dias correlacionando a atividade da MPO com neutrófilos ativos e atividade de MMP8 (EC3.4.24.34) com remodelação tecidual. Foram utilizados 36 ratos Wistar, distribuídos aleatoriamente nos grupos controle, MTA, BDT e HC e subdividos conforme o tempo de 24, 72 horas, 7 e 15 dias após pulpotomia e um foi utilizado para o controle.. A atividade da MMP8 foi avaliada utilizando a técnica de fluorescência e a atividade de MPO foi determinada utilizando o ensaio de MPO. Houve diminuição gradativa da atividade de MPO e MMP8 para o MTA ao longo dos períodos experimentais (p<0.05), ao contrário do BDT e HC que apresentaram aumento da atividade aos 7 e 15 dias (p<0.05). O MTA demonstrou decréscimo de valores de MPO e MMP8 indicando atividade potencialmente curativa no tecido pulpar. Já BDT e HC apresentaram aumento do potencial irritante dificultando o processo cicatricial. / The initial reactions of capping materials on pulp tissue are not well understood. The matrix metalloproteinases-8 (MMP8) acts on remodeling the extracellular matrix and myeloperoxidase (MPO) is associated to neutrophil infiltration in the tissues. This study aimed to evaluate the pulp tissue of rats’ molars after pulpotomies with mineral trioxide aggregate (MTA), BiodentineTM (BDT) and calcium hydroxide (CH) associated with sterile saline solution, at 24 and 72 hours, 7 and 15 days through correlating MPO activity with active neutrophils and MMP8 (EC3.4.24.34) activity with tissue remodelation. Thirty six Wistar rats were randomly distributed into groups: control, MTA, BDT and CH and subdivided according to the study period of de 24 and 72 hours, 7 and 15 days after pulpotomy and one was used for the control. MMP8 activity was evaluated through fluorescence technique and MPO activity was determined using the MPO assay. A gradual decrease of MPO and MM8 activity occurred in group MTA over the experimental periods (p<.05). Unlikely, groups BDT and CH exhibited an increase in the activity at 7 and 15 days (p<.05). MTA demonstrated a decrease in MPO and MMP8 values indicating a potentially curative activity in pulp tissue. Conversely, BDT and CH showed the increasing of the irritating potential which makes difficult the healing process. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Made available in DSpace on 2017-07-21T14:13:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Liliane Werle Lima.pdf: 3601191 bytes, checksum: 5783e9d4437866bebca28c4080abc069 (MD5) Previous issue date: 2014-11-10 / Pesticides are widely used around the world for pest control and guarantee increased productivity. As is harmful to insects and weeds, are also toxic to humans . Pesticides are related to alterations of the immune system, are neurotoxic, and involved with alterations em endocrine system, besides interfering with metabolism. Exposure to pesticides is monitored by measurement of biomarkers, especially cholinesterase , and through changes in laboratory tests. The most commonly used pesticides are those belonging to the class of organophosphates, whose mechanism of action is irreversible inhibition of cholinesterase. Pesticides being involved in alterations of the immune system, and cardiovascular disease, this study aimed to evaluate the activity of myeloperoxidase (present in phagocytic cells) in individuals chronically exposed to pesticides, in addition to other laboratory markers. This study included 79 volunteers , divided into 3 groups : 1 ) EDP : direct exposure to pesticides ; 2) EIP : indirect exposure to pesticides , and 3) C : control, volunteers not exposed, or low exposure to pesticides. Laboratory tests for glucose, total cholesterol and fractions , triglycerides , AST, ALT, urea, creatinine, myeloperoxidase (MPO) , alpha-1- acid glycoprotein (AGP), high sensitive C-reactive protein (Hs-CRP), total antioxidant capacity, cholinesterase were performed and CBC . There were significant increases in urea in the EDP group. High levels of MPO, AGP and glucose were found for the EDP and EIP groups. The Hs-CRP showed a direct correlation with the values of AGP, but was elevated only for the EIP group. Significant reduction in total antioxidant capacity of serum was found in groups EDP and EIP. The cholinesterase values showed significantly higher activity in the EDP group. With these results we concluded that chronic exposure to pesticides can lead to an adaptive increase in cholinesterase activity resulting in decreased anti-inflammatory action of acetylcholine, with increased levels of myeloperoxidase and other markers of inflammation. / Os praguicidas são largamente utilizados em todo o planeta para controle de pragas e garantia de aumento de produtividade. Assim como são nocivos para insetos e ervas daninhas, também são tóxicos para os seres humanos. Os pesticidas estão relacionados com alterações do sistema imunológico, nervoso, endócrino, alem de interferir no metabolismo. A exposição aos praguicidas é monitorada pela dosagem de biomarcadores, especialmente a colinesterase, e através de alterações em exames laboratoriais. Os pesticidas mais usados são aqueles pertencentes à classe dos organofosforados, que tem como mecanismo de ação a inibição irreversível das colinesterases. Estando os pesticidas envolvidos em alterações do sistema imunológico, e com a doença cardiovascular, este estudo teve por objetivo avaliar a atividade da enzima mieloperoxidase (presentes em células fagocíticas) em indivíduos expostos cronicamente a pesticidas, alem de outros marcadores laboratoriais. Este estudo incluiu 79 voluntários, divididos em 3 grupos: 1) EDP: exposição direta aos praguicidas; 2)EIP:exposição indireta aos praguicidas; e 3) C: controle, voluntários com pouca ou nenhuma exposição aos praguicidas. Foram realizados exames laboratoriais para dosagem de glicose, colesterol total e frações, triglicerídeos, TGO, TGP, ureia, creatinina, mieloperoxidase (MPO), alfa-1-glicoproteína ácida (AGP), proteína C reativa ultrassensível (PCR-us), colinesterase, capacidade antioxidante total e hemograma. Ocorreram aumentos significativos na ureia no grupo EDP. Níveis elevados de MPO, AGP e glicose foram encontrados para os grupos EDP e EIP. A PCR-us apresentou correlação direta com os valores de AGP, contudo mostrou-se elevada apenas para o grupo EIP. Significante redução na capacidade antioxidante total do soro foi encontrada nos grupos EDP e EIP. A colinesterase apresentou valores de atividade significativamente maiores no grupo EDP. Com estes resultados concluímos que a exposição crônica aos pesticidas pode levar a um aumento adaptativo da atividade da colinesterase resultando em diminuição da ação anti-inflamatória da acetilcolina, com aumento dos níveis de mieloperoxidase e outros marcadores da inflamação.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-29Bitstream added on 2014-06-13T20:41:01Z : No. of bitstreams: 1 vellosa_jcr_dr_arafcf.pdf: 1454785 bytes, checksum: 6e53ccd18d72b4b09811858784aa22d3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A pesquisa de produtos naturais é uma fonte importante de informações para o desenvolvimento de novos fármacos que tenham ação em diferentes processos oxidativos teciduais. Estudou-se o perfil bioquímico para o mecanismo de ação antioxidante dos flavonóides kaempferol, afzelina, lespedina, pteroginoside, quercetina e isoquercetrina isolados de Pterogyne nitens. Buscou-se avaliar desde os níveis mais simples de atividade até os níveis mais complexos de interação para as atividades observadas. Nenhuma das amostras foi eficiente como scavenger de H2O2, o que se mostrou interessante na comprovação dos resultados de inibição de peroxidases observados. Mostrou-se que a variação nas estruturas dos flavonóides pode levar a diferentes padrões de atividade de acordo com o sistema avaliado, revelando assim especificidade sobre a interação estudada. A quercetina mostrou-se, em geral, o agente mais eficiente, com alteração entre as posições dos demais flavonóides. Observou-se ainda, que os flavonóides apresentam potencial lesivo contra eritrócitos e neutrófilos quando em presença de radicais livres e outras espécies reativas. Na pesquisa da ação de flavonóides e outros produtos naturais em processos oxidativos modelo deve-se buscar possíveis efeitos protetores e agressores aos sistemas biológicos traçando-se um perfil bioquímico de ação que elucide os mecanismos pelos quais tais substâncias agem. / The research on natural products Field is na inportant source of informations to the development of new medicines wich act over tecidual oxidative processes. It was studied the biochemical profile of the antioxidant action from kaempferol, afzelin, lespedin, pterogynoside, quercetin and isoquercetrin isolated from Pterogyne nitens. It was intended to evaluate diferent interaction levels to the studied systems. None of the samples were able to act against hydrogen peroxide, what strengthens the observations on peroxidase inhibition. It was showed that chemical structural variations can lead to different activities patterns according to the studied system, revealing that exist specificity by the evaluated interaction. The flavonoid quercetin usually were the most efficient agent and the others agents had alternated position on different systems. It was observed too that the studied flavonoids were potentially lesive to the erytrocytes and neutrophils when they were put together free radicals and others reactive species. In the flavonoids and others natural products researches on model oxidative processes it must be made sought possible protective and lesive effects to biological systems by drawing the biochemical action profile of these sbstances.