Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The species Verbena litoralis Kunth is popularly known as wort or father-caetano gervãozinho field, and southern Brazil is used as detoxifying, antipyretic and diarrhea. The aim of this study was to vegetative propagation through cuttings and micropropagation of V. litoralis, evaluate the physiological parameter settings as chlorophyll fluorescence, photosynthetic pigments and identify the phytochemical compounds present in the extracts of plants obtained in vitro after acclimatization of the same. The experiment was conducted using micropropagation complete MS plus 0.1 ml L-1 fungicide (carbendazim®), 30 g L-1 sucrose, 6.0 g L-1 agar and four combinations of 6-benzylaminopurine (BAP) and naphthaleneacetic acid (NAA): 0, 1.0, 2.0, 4.0 and 0, 0.1, 0.2, 0.4 mg L-1, respectively, and presence or absence of coal enabled (1 mg L-1). The plants obtained in vitro were transferred to disposable cups and kept in a growth chamber throughout the experiment with a temperature of 25 ± 2 º C and 16 hours photoperiod. The phytochemical analysis of the extract of the aerial parts and roots of V. litoralis, obtained by maceration hydroethanol was performed by HPLC and detected percentages of near 4.76% rutin, quercetin 9.18% and 0.031% coumarin. In micropropagation, the absence of BAP and NAA led to a percentage of 21% of grown plants. The acclimatization showed homogeneous development since all were subjected to the same substrate type and temperature. / A espécie Verbena litoralis Kunth é conhecida popularmente como erva-de-paicaetano ou gervãozinho do campo, e no sul do Brasil é utilizada como desintoxicante, antifebril e em diarréias. O objetivo do presente trabalho foi estudar a propagação vegetativa, através da micropropagação e estaquia de V. litoralis, avaliar os parâmentros fisiológicos como fluorescência da clorofila a, pigmentos fotossintéticos e identificar os compostos fitoquímicos presentes no extrato das plantas obtidas in vitro após a aclimatização das mesmas. O experimento de micropropagação foi realizado utilizando MS completo, acrescido de 0,1 ml L-1 de fungicida (Carbendazim®), 30 g L-1 de sacarose, 6,0 g L-1 de ágar e quatro combinações de 6-Benzilaminopurina (BAP) e ácido naftalenoacético (ANA): 0; 1,0; 2,0; 4,0 e 0; 0,1; 0,2; 0,4 mg L-1, respectivamente, e presença ou ausência de carvão ativado (1 mg L-1). As plantas obtidas in vitro foram transferidas para copos descartáveis e mantidas em sala de crescimento durante todo o experimento com temperatura de 25º ± 2ºC e fotoperíodo de 16 horas. A análise fitoquímica no extrato das partes aéreas e raízes de V. litoralis, obtido por maceração hidroetanólica, foi realizada por CLAE e detectou porcentagens de rutina próximos de 4,76%, quercetina 9,18% e cumarina 0,031%. Na micropropagação, a ausência de BAP e ANA, proporcionou uma porcentagem de 21% de plantas formadas. As plantas aclimatizadas apresentaram desenvolvimento homogêneo já que todas foram submetidas ao mesmo tipo de substrato e temperatura.