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Germina??o e multiplica??o de Lychnophora pohlii Sch. Bip. (ASTERACEAE)Gonzaga, Allanne Pillar Dias 08 November 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013 / O trabalho teve por objetivo estabelecer uma metodologia de germina??o e propaga??o de Lychnophora pohlii em condi??es de c?mara de germina??o e laborat?rio de cultura de tecidos. Para a germina??o em c?mara de germina??o (BOD), estabeleceu-se dois experimentos, sendo um com imers?es em solu??o de GA3 a 0,5 mg L-1 e outro em solu??o de H2SO4 a 98%, ambos com quatro tratamentos de tempos de imers?o e o grupo controle. Na propaga??o in vitro, iniciou-se com os experimentos de desinfesta??o. No primeiro experimento de desinfesta??o, os aqu?nios, coletados em per?odo chuvoso, foram submetidos a cinco tratamentos de tempos de imers?o em hipoclorito de s?dio a 5%. No segundo, os aqu?nios, coletados em per?odo seco, foram submetidos a cinco tratamentos de tempos de imers?o em hipoclorito de s?dio a 5% e cinco tratamentos a 2,5%. No terceiro experimento, em um primeiro lote de sementes, testou-se dois tempos em solu??o de hipoclorito de s?dio a 5% em duas diferentes condi??es de imers?o; no segundo lote, testou-se dois tempos de imers?o em solu??o de hipoclorito de s?dio a 5% em aqu?nios previamente tratados com solu??o fungicida; no terceiro e ?ltimo lote, testou-se quatro tempos de imers?o em H2SO4, totalizando dez tratamentos. Para a germina??o in vitro, os aqu?nios, divididos em dois lotes, foram tratados com dois tempos de imers?o em H2SO4 a 98% e inoculados em meio de cultura acrescido de tr?s concentra??es de GA3 e o controle, totalizando oito tratamentos. Na fase de multiplica??o, foram realizados dois subcultivos utilizando as pl?ntulas obtidas a partir do experimento de germina??o in vitro, mantendo-se o hist?rico de tratamentos do referido experimento. Na germina??o em BOD, foi poss?vel notar que maiores taxas de germina??o foram alcan?adas com o uso de GA3 em imers?es mais longas. Tamb?m pode-se observar que o uso de GA3 mostrou-se mais eficiente que H2SO4 e que, este, independente do tempo de imers?o, influencia positivamente na germina??o da esp?cie. Os testes de desinfesta??o revelaram que os aqu?nios coletados em per?odo seco apresentaram melhores taxas de desinfesta??o. O uso de H2SO4 na descontamina??o dos aqu?nios foi mais eficiente que o uso de hipoclorito de s?dio, mesmo em concentra??o e tempo de imers?o mais elevado e combinado com solu??o fungicida. Na germina??o in vitro, verificou-se que a imers?o H2SO4 por dez minutos apresentou resultados positivos ? germina??o, n?o sendo necess?rio o uso de GA3. Al?m disso, a multiplica??o dos explantes foi positivamente influenciada pelos res?duos de tratamentos pr?-germinativos, alcan?ando melhores resultados com o tratamento de imers?o em H2SO4 por dez minutos, sem a adi??o de GA3 ao meio. De modo geral, o H2SO4proporcionou resultados favor?veis em todos os experimentos, sendo considerado um importante fator para o sucesso na propaga??o de L. pohlii. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncia Florestal, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2013. / ABSTRACT
The study aimed to establish a methodology for germination and propagation of Lychnophora pohlii conditions in a growth chamber and a tissue culture laboratory. To germinate in a germination chamber ( BOD ) , settled two experiments , one with immersion in a solution of GA3 at 0.5 mg L- 1 and another at H2SO4 solution at 98 % , both with four treatments of times immersion and the control group . In vitro propagation began with the experiments of disinfestations. In the first experiment disinfestation, the seeds collected in the rainy season, underwent five treatments of immersion time in sodium hypochlorite 5 %. Then, the seeds collected in dry season, underwent five treatments of immersion time in sodium hypochlorite 5 % and 2.5% five treatments. In the third experiment, in a first lot of seeds were tested twice in a solution of sodium hypochlorite at 5% in two different immersion conditions, the second batch was tested two days of immersion in sodium hypochlorite achenes 5 % in previously treated with fungicide solution, on the third and last batch was tested four times of immersion in H2SO4, totaling ten treatments. For in vitro germination, the seeds were divided into two batches, were treated with two immersions time in H2SO4 and 98% inoculated in plus three concentrations of GA3 and control culture, a total of eight treatments. In the multiplication phase, two subcultures were performed using seedlings obtained from the germination experiment in vitro, in order to maintain historical treatments of this experiment. In BOD germination, it was possible to notice that higher germination rates were achieved with the use of GA3 on longer immersions. It can also be seen that the use of GA3 was more efficient than H2SO4 and this regardless of immersion time positively influences on the germination of species. Disinfestations tests revealed that the seeds collected in dry season had higher rates of disinfection. The use of H2SO4 in decontaminating achenes was more efficient than the use of sodium hypochlorite, even at higher concentration and immersion time and combined with fungicide solution. In vitro germination, it was found that immersion H2SO4 for ten minutes showed positive results of germination, the use of GA3 is not necessary. In addition, the multiplication of the explants was positively influenced by the waste of the pre -germination treatment, achieving better results with the immersion in H2SO4 for ten minutes without the addition of GA3 to the medium. In general, the H2SO4 produced favorable results in all experiments and it is considered an important success factor in the spread of L. pohlii.
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Estabelecimento de cultivo in vitro e estudo proteômico de calos caulinares e foliares de Artocarpus incisa L. / In vitro culture establishment and proteomics study of shoot and leaf calluses from Artocarpus incisa L.Rodrigues, Fernanda Nascimento January 2016 (has links)
RODRIGUES, Fernanda Nascimento. Estabelecimento de cultivo in vitro e estudo proteômico de calos caulinares e foliares de Artocarpus incisa L. 2016. 70 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-03T20:49:55Z
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Previous issue date: 2016 / The species Artocarpus incisa, belonging to the Moraceae family, is a tree-sized plant with multiple applications in folk medicine. As a woody species, several difficulties are reported to its spread, such as the delay in its development and low germination rate. In vitro culture of plant tissue, in particular callus culture, can serve as a tool to overcome these difficulties and to facilitate obtaining the compounds of interest. This work was meant to provide the best conditions of callus formation as well as perform histological analysis and proteomic study of A. incisa calluses. For induction of callus, explants were used arising from leaf and shoot, which have been added to the nutritional formulation Woody Plant Medium (WPM), and applied in treatments containing PVP, activated charcoal, and different growth regulators (2,4-D, BAP, NAA and KIN). The results showed that the cultivation of shoot and leaf explants in medium with 0.1% activated charcoal, supplemented with 4.5 uM of 2,4-D and 4.4 uM BAP treatment was the best callus induction with an 88% percentage production. Quantification of proteins by Protein UV from NanoVue detected 15.97 ug protein / uL shoot extract; 20.07 ug protein / uL leaf extract; 0.75 ug protein / uL of shoot callus extract; and 16.85 ug protein / uL of leaf callus extract. The original tissues showed higher protein concentration than those in produced calluses, which can be explained by the differentiation of tissue. Histological analysis indicated that the cells of calluses were homogeneous and viable, with thin cell wall, and large amount of polysaccharide granules. The proteomic study by mass spectrometry led to the identification of peptides that have relation to previously reported plant proteins. We were able to detect proteins related to the defense (KM+, chitinase, catalase), metabolism (fructose-bisphosphate aldolase, glutamate carboxypeptidase) and cell signaling (calmodulin) in calluses, regardless of the origin of these. The work pioneered the proteomic study of A. incisa calluses, and is an initial step in understanding the biochemistry and physiology of the species under study. / A espécie Artocarpus incisa, pertencente à família Moraceae, é uma planta de porte arbóreo com várias aplicações na medicina popular. Por ser uma espécie lenhosa, várias dificuldades são relatadas para sua propagação, como a demora no seu desenvolvimento e a baixa taxa de germinação. A cultura in vitro de tecidos vegetais, em particular a cultura de calos, pode servir como uma ferramenta para contornar essas dificuldades e facilitar a obtenção dos compostos de interesse. O presente trabalho teve como intuito estabelecer as melhores condições de calogênese, bem como realizar a análise histológica e o estudo proteômico de calos de A. incisa. Para a indução dos calos, utilizou-se explantes advindos de folha e de caule, os quais foram adicionados à formulação nutritiva Woody Plant Medium (WPM), e aplicados em tratamentos contendo PVP, carvão ativado, e diferentes reguladores de crescimento (2,4-D, BAP, ANA e CIN). Os resultados mostraram que o cultivo de explantes foliares e caulinares em meio com carvão ativado 0,1%, suplementado com 4,5 µM de 2,4-D e 4,4 µM de BAP foi o melhor tratamento de indução de calos, com um percentual de produção de 88%. A quantificação de proteínas através do Protein UV do NanoVue detectou 15,97 µg de proteína/µL de extrato de caule; 20,07 µg de proteína/µL de extrato de folha; 0,75 µg de proteína/µL de extrato de calos caulinares; e 16,85 µg de proteína/µL de extrato de calos foliares. Os tecidos originais apresentaram maior concentração de proteínas do que os calos produzidos, o que pode ser explicado pela diferenciação do tecido. A análise histológica indicou que as células de calos se mostraram homogêneas e viáveis, com parede celular fina, e com grande quantidade de polissacarídeos em grânulos. O estudo proteômico, através de espectrometria de massas, levou à identificação de peptídeos que apresentam relação com proteínas vegetais já relatadas. Detectou-se proteínas relacionadas com a defesa (KM+, quitinase, catalase), metabolismo (frutose-bifosfato aldolase, glutamato-carboxipeptidase) e sinalização celular (calmodulina) nos calos, independente da origem destes. O trabalho foi pioneiro no estudo proteômico de calos de A. incisa, e é um passo inicial na compreensão da bioquímica e fisiologia da espécie em estudo.
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Protocolo de micropropagação da Conobea scoparioides Benth.-Plantaginaceae / Protocol of micropropagation of the Conobea scoparioides Benth.-PlantaginaceaeCosta, Marly Pedroso da January 2016 (has links)
COSTA, Marly Pedroso da. Protocolo de micropropagação da Conobea scoparioides Benth.-Plantaginaceae. 2016. 68 f. Tese (Doutorado em Fitotecnia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-09T19:02:37Z
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Previous issue date: 2016 / The Conobea scoparioides Benth., popularly known as pataqueira, is a semi-aquatic herbaceous plant with aromatic and medicinal properties. It belongs to the Plantaginaceae family and it was originated in the Amazon. In the State of Pará it is very used for treating beriberi and in the formulation of an eau de cologne of great economic interest, therefore causing its indiscriminate exploitation. Currently, there is no efficient propagation system to meet the market demands. The aim of this work was to develop an in vitro micropropagation protocol for pataqueira. Within this purpose, three steps were conducted: 1- shoot multiplication; 2- the effect of subcultivation in the plantling formation; and 3- the effect of substrates in the acclimatization and seedling formation. The explant source for the in vitro culturing was obtained from micropropagated and field-grown plants. In vitro cultivation occurred in growth rooms with a 25+3 0C temperature and 16 hour photoperiod, while the acclimatization was conducted under a screen of 70% shade, with an average temperature of 30+2°C. In the first step, viable shoots were obtained in the Murashige & Skoog (MS) culture medium through apical and nodal stem segments in the absence and in the presence of 1 mg.L-1 of 6-Benzilaminopurina (BAP). The percentage of rooting and the number of roots was superior in the liquid 1/1 MS medium supplemented with 0.5 mg.L-1 of Indol butyric acid (AIB). The pataqueira is micropropagated through the MS culture medium, being optimized in the presence of growth regulators BAP and IBA, using the apical and/or nodal segments. In the next step, the fourth subculture presented higher means for all variables with the exception of height of the highest shoot and presented a mean rate of shoot/explant of 24, while the fifth subculture induced the highest senescence percentage and the smallest percentage of shoots and roots, but presented high means in the number of shoots with height ≥ 1 < 2 cm, number of shoots ≥ 2 < 3. The first to fourth subcultures are viable in a span of thirty days to the formation of pataqueira seedlings in vitro. Regarding the third step, the survival of seedlings in all substrates was 100%. The mixture of soil, sawdust and bovine manure presented the highest mean values for most of the evaluated variables, while the substrate consisting of only soil promoted the least increase in the plants. The tested substrates are adequate for acclimatization. Highlighted the soil+sawdust+matured bovine manure substrate as most suitable within the studied mixtures for the formation of viable seedlings. / A Conobea scoparioides Benth., popularmente conhecida como pataqueira, é uma planta herbácea semi-aquática com propriedades aromáticas e medicinais, pertencente a família Plantaginaceae, sendo seu local de origem a Amazônia. No estado do Pará é muito utilizada no tratamento de beribéri e na formulação de uma água de cheiro de grande interesse econômico, causando assim uma exploração indiscriminada. Atualmente, não há um sistema de propagação eficiente para atender o mercado. Objetivou-se com esse trabalho desenvolver um protocolo de micropropagação in vitro para a pataqueira. Nesse sentido, três etapas foram realizadas: 1- Multiplicação de brotos, 2- Efeito do subcultivo na formação de plântulas e 3- Efeito de substratos na aclimatização e formação de mudas. A fonte de explante para cultivo in vitro foi obtida a partir de plântulas micropropagadas e do campo. Os cultivos in vitro ocorreram em sala de crescimento com temperatura de 25+3 0C e fotoperíodo de 16, enquanto a aclimatização se deu em telado com sombrite a 70% e temperatura média de 30+2°C. Na primeira etapa, obtiveram-se brotos viáveis no meio de cultura de Murashige e Skoog (MS) através de segmentos caulinares apicais e nodais na ausência e na presença de 1 mg.L-1 de 6-Benzilaminopurina (BAP). A percentagem de enraizamento e número de raízes foram? superiores no meio de cultivo MS 1/1 líquido, suplementado com 0,5 mg.L-1 de Ácido indol butírico (AIB). A pataqueira se micropropagada através do meio de cultura MS, sendo otimizada na presença dos reguladores de crescimento, BAP e AIB, utilizando os segmentos apicais e/ ou nodais. Na etapa seguinte, o quarto subcultivo mostrou maiores médias em todas as variáveis com exceção da altura do maior broto e apresentou taxa média de brotos/explante de 24, enquanto que a quinta repicagem induziu maior percentagem de senescência, menor percentagem de brotos e raízes e altas médias para número de brotos com altura ≥ 1 < 2 cm e ≥ 2 < 3 cm. Os subcultivos, do primeiro ao quarto em intervalos até trinta dias são viáveis para formação de plântulas de pataqueira in vitro. Em relação à terceira fase, em todos os substratos a sobrevivência das mudas foi de 100%. A mistura de terra preta+pó de serragem+esterco bovino apresentou os maiores valores médios na maioria das variáveis avaliadas, enquanto que o substrato constituído somente por terra foi o que promoveu o menor crescimento nas plantas. Os substratatos testados são adequados para a aclimatização. Em destaque, o substrato terra preta+pó de serragem+esterco bovino curtido como mais indicado dentro dos estudados para formação de mudas viáveis.
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Estiolamento in vitro de Cattleya labiata e Phalaenopsis sp. / In vitro etiolation of Cattleya labiata and Phalaenopsis sp.Rodrigues, Antonio Anderson de Jesus January 2014 (has links)
RODRIGUES, A. A. J. Estiolamento in vitro de Cattleya labiata e Phalaenopsis sp. 2014. 72 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-26T20:25:42Z
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Previous issue date: 2014 / Orchids are ornamental plants that stand out mainly in floriculture due to the beauty, the exoticism, the diversity of colors, the sizes and shapes of their flowers. Cattleya labiata and species of the genus Phalaenopsis feature a wide range of color choices that make their flowers much valued and demanded for marketing. Cattleya labiata is native of the Brazilian Northeast and produces purplish and slightly fragrant flowers; and Phalaenopsis sp. produces white flowers for long lasting durability. Tissue culture is widely used in massive multiplication of genres. The in vitro etiolation allows to produce large numbers of plants, reducing the risk of somaclonal variation. For this reason, this study aimed to evaluate the influence of different cultivation environments and concentrations of BAP (6-benzylaminopurine) and NAA (naphthalene acetic acid) in vitro etiolation of the orchids Cattleya labiata and Phalaenopsis sp. Seedlings grown from seeds germinated in vitro with approximately + 1.0 cm in length were inoculated into test tubes containing 15.0 mL of MS medium supplemented with different concentrations of BAP (0.0, 2.0 and 4,0 mg L-1), NAA (0.0, 1.0 and 2.0 mg L-1) and culture environments (dark growth and room with artificial light) in a factorial 2 x 3 x 3 (2 environments x 3 doses of BAP x 3 doses of NAA). At the end of 150 days, the following evaluations were performed: a) number of etiolated shoots; b) number of nodes per etiolated shoot; c) length of the main sprout (cm); d) number of roots, and e) total dry mass (g). The number of etiolated shoots and nodes (per etiolated shoot) on seedlings of C. labiata and nodes per etiolated shoot in Phalaenopsis sp. were higher in the environment in the absence of light independent of the phytoregulator used, however the number of shoots of Phalaenopsis sp. the luminous environment was the most favorable. The species C. labiata showed a higher number of nodes with the use of 2.0 mg L-1 of NAA, in the absence of BAP, and Phalaenopsis sp. provided the highest number of nodes with the use of 2.0 mg L-1 of NAA. In seedlings of C. labiata and Phalaenopsis sp. the height of the main budding was higher in the environment in the absence of light, in contrast, the number of roots and total dry weight of seedlings were higher in luminous environment, and for C. labiata these results were independent regulator growth used. / As orquídeas são plantas ornamentais que se destacam principalmente na floricultura devido à beleza, ao exotismo, à diversidade de cores, aos tamanhos e aos formatos de suas flores. A espécie Cattleya labiata e as do gênero Phalaenopsis apresentam uma grande oferta de opções de cores que tornam suas flores muito valorizadas e demandadas para comercialização. Cattleya labiata é nativa do Nordeste brasileiro e suas floress são levemente arroxeadas e perfumadas; enquanto que Phalaenopsis sp. produz flores brancas de longa durabilidade. A cultura de tecidos tem sido largamente empregada na multiplicação massiva desses dois gêneros. O estiolamento in vitro permite produzir grande número de plantas, reduzindo os riscos da ocorrência de variação somaclonal. Em razão disso, este trabalho teve como objetivo avaliar a influência de diferentes ambientes de cultivo e de concentrações de BAP (6-benzilaminopurina) e ANA (ácido naftaleno acético) no estiolamento in vitro das orquídeas Cattleya labiata e Phalaenopsis sp. Plântulas oriundas de sementes germinadas in vitro com aproximadamente + 1,0 cm de comprimento foram inoculadas em tubos de ensaio contendo 15,0 mL de meio de cultura MS, acrescido de diferentes concentrações de BAP (0,0; 2,0 e 4,0 mg L-1), ANA (0,0; 1,0 e 2,0 mg L-1) e ambientes de cultivo (sala de crescimento no escuro e com 16 horas de luz artificial), em esquema fatorial 2 x 3 x 3 (2 ambientes x 3 doses de BAP x 3 doses de ANA). Ao final de 150 dias, foram realizadas as seguintes avaliações: a) número de brotos estiolados; b) número de nós por broto estiolado; c) comprimento da brotação principal (cm); d) número de raízes e, e) massa seca total (g). O número de brotos estiolados e de nós (por broto estiolado) em plântulas de C. labiata e de nós por broto estiolado em Phalaenopsis sp. foram superiores no ambiente em ausência de luz independente do fitorregulador utilizado, entretanto para o número de brotações de Phalaenopsis sp. o ambiente luminoso foi o mais favorável. A espécie C. labiata apresentou maior número de nós com a utilização de 2,0 mg L-1 de ANA na ausência de BAP, e a orquídea Phalaenopsis sp. proporcionou maior número de nós com o emprego de 2,0 mg L-1 de ANA. Em plântulas de C. labiata e Phalaenopsis sp. a altura da brotação principal foi superior em ambiente na ausência de luz e, em contraste, o número de raízes e a massa seca total das plântulas foram superiores em ambiente na presença de luz, sendo que para C. labiata esses resultados foram independentes do regulador de crescimento utilizado.
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Cultura de tecidos de Stylosanthes guianensis (Aubl.) Sw. Cv. IRI 1022: estudo morfogenético e histológico / Tissue culture on Stylosanthes guianensis (Aubl.) Sw. CV. IRI 1022: morphogenetic and histological studySilva, Benedita Aparecida da 22 January 1992 (has links)
A espécie Stylosanthes guianensis, importante forrageira para as regiões tropicais do globo, vem se estabelecendo a partir da década de 80 como um sistema modelo em potencial, para a tecnologia da cultura de tecidos na família Leguminosae (MEIJER & SZABADOS, 1990). No presente estudo, avaliou-se o potencial morfogenético in vitro de uma cultivar pertencente a esta espécie, a IRI 1022, em relação aos fatores genótipo e meio de cultura, mais especificamente, a reguladores de crescimento. A indução de calos foi obtida a partir de explantes foliares da cv IRI 1022 colocados em meios basais MS suplementados com combinações dos fitorreguladores NAA e BAP, nas concentrações 0,0; 0,1; 0,4; 1,0 e 2,0 mg/l, sob fotoperíodo de 16 horas luz e temperaturas entre 25 a 28°C. Entre estas combinações foram selecionadas favoravelmente, aquelas capazes de promover fases de calo mais prolongadas e ainda a regeneração de partes aéreas nestes calos durante o período de indução de 30 dias. Calos induzidos nestas condições foram transferidos após 30 dias para meios de regeneração, isto é, meios MS suplementados apenas com BAP, onde a concentração 2,0 mg/l, mostrou-se a mais satisfatória. Brotos regenerados foram alongados em meio MS com as concentrações de sais reduzidas à metade e a um quarto, e concentração de BAP também reduzida ou ausente. A implementação do enraizamento em brotos alongados se deu em meio MS reduzido à metade e a um quarto, e suplementado com 0,2 mg/l de IBA. As maiores taxas de sobrevivência de plantas regeneradas in vitro se deu sob condições elevadas de umidade relativa, luminosidade e temperatura. Plantas SC1 (regenerantes primários) avaliadas preliminarmente, apresentaram variações quanto a alguns aspectos vegetativo e reprodutivo; progênies destas plantas por sua vez, quando submetidas a cultura, demonstraram variabilidade para o caráter regeneração. A indução de calos e a organogênese de partes aéreas nestes, foram igualmente avaliadas a nível estrutural. Os eventos chaves que levam a indução de calos em explantes foliares da cultivar IRI 1022, ocorrem entre o segundo e o terceiro dias de cultura; a desdiferenciação e a proliferação celulares têm início nas regiões de ferimento do expl ante, notadamente a nível da nervura principal, em células do parênquima e da bainha do feixe vascular. No quinto dia de cultura, já é evidente a nível da morfologia externa, o início de formação de calo. Em torno do décimo dia de cultura já se observa a presença de meristemóides. Trinta dias após a inoculação do explante, são evidentes as gemas caulinaes. O processo de regeneração ocorre por organogênese, com os brotos desenvolvendo na superfície dos calos. / Since the 80's decade, Stylosanthes guianensis, an important forage species for world tropical regions, has been established as a potential model system for tissue culture in the Leguminosae family (MEIJER & SZABADOS, 1990). In the present study, S. guianensis cultivar IRI 1022 in vitro morphogenetic potential was evaluated; genotype and culture media, specifically, growth regulators was studied. Cal1i induction was obtained from IRI 1022 leaves explants placed on the MS (MURASHIGE & SKOOG, 1962) basal medium supplemented with combinations of NAA and BAP at. 0.0, 0.1, 0.4, 1.0 and 2.0 mgl-1 concentrations. Cultures were maintained at 25 to 28°C, under 16 hs light regime. Plant growth regulator combinations able to promote extended call us phase and shoot regeneration in a 30 days period were selected. The derived calli were then transferred auxin free MS regeneration media; 2.0 mgl-1 BAP was the more satisfactory concentration for shoot regeneration. Shoots were elongated in half-and-quarter- strength MS medium, free of hormones or supplemented with reduced BAP concentration. Rooting was induced in the same basal medium supplemented with 0,2 mgl-1 IBA. Regenerated plantlets, when transferred to the soil, showed greater survival rates under high humidity, 1ight and temperature conditions. SC1 plants (primary regenerants) showed some variations related with morphological and reproductive aspects; progenies of SC1 plants showed variabi1ity in in vitro regenerative in abi1ity. Histological analyses of calli induction and shoot regeneration processes were performed. Leaf explants derived calli were induced by hystological events that. occur between the second and the third day of culture; dedifferentiation and cellular proliferation begin in regions closed to lesions caused by explant excision, mainly at the central vein, involving both, cel1 of the vascular parenchyma and sheath of the bundle. On the fifth day of culture calli began to be evident at the level of external morphology. After the tenth day of culture meristemoids can be observed. After thirty days of explants inoculation shoot buds are evident. Regeneration process occurs by organogenesis, with shoot development on calli surfaces.
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Desempenho do aparato fotossintético em função das citocininas empregadas durante a fase de multiplicação in vitro de Aechmea blanchetiana (Bromeliaceae)ROSA, W. S. 09 November 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-11-09 / A cultura de tecidos pode contribuir para a propagação de diversas espécies vegetais de
importância ecológica ou ameaçadas de extinção, tais como as bromélias. Durante a fase de
multiplicação in vitro, o emprego de citocininas pode ser indispensável para a indução de
brotos laterais em diversas espécies. Contudo, análises sobre as desordens fisiológicas
induzidas pelos fitorreguladores ainda não é bem entendida, principalmente sobre o aparato
fotossintético. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência de citocininas em
função da concentração, na taxa de multiplicação, no desempenho do aparato fotossintético e
na funcionalidade estomática de Aechmea blanchetiana durante a fase de multiplicação in
vitro. Plantas de A. blanchetiana previamente estabelecida in vitro foram inoculadas em meio
MS suplementado com 6-benzilaminopurina (BAP) ou 6-furfurilaminopurina (KIN) nas
concentrações: 0, 5, 10, 15 e 20 μM. Após 60 dias de exposição aos fitorreguladores, foi
analisada a taxa de multiplicação, o desempenho do aparato fotossintético (fluorômetro
portátil Handy PEA) e a caracterização da funcionalidade estomática dos explantes em função
dos tratamentos. Não foi observada formação de brotos na ausência de citocininas exógenas
(controle). O uso de KIN não induziu formação de brotos e nem incremento de massa fresca,
independentemente da concentração utilizada. Foi verificado incremento significativo de
massa fresca e de brotos em plantas cultivadas com BAP, à medida que aumentou a
concentração. O tipo e a concentração de citocininas também influenciaram o aparato
fotossintético das plântulas. A fluorescência transiente da clorofila a apresentou forma típica
das curvas OJIP com pontos J e I bem definidos. Foi observada a redução na produção
quântica (Fv/Fm) em função da concentração, em todos tratamentos com citocininas exógenas,
exceto, para o tratamento com 5μM de BAP. O decréscimo mais acentuado em produção
quântica foi verificado nas plantas tratadas com KIN. Na avaliação anatômica, foi encontrada
uma redução da funcionalidade estomática, em resposta ao aumento da concentração de
citocininas. As citocininas exógenas influenciam a fisiologia do aparato fotossintético e a
anatomia de plântulas de A. blanchetiana durante a multiplicação in vitro. A KIN não é
indicada para a multiplicação desta espécie in vitro. O emprego de BAP em menores
concentrações proporcionou a quebra da dominância apical e a formação de brotos, com
menor grau de distúrbios no aparato fotossintético dos brotos formados.
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Caracteriza??o morfol?gica de frutos, sementes e pl?ntulas, germina??o e micropropaga??o de Terminalia fagifolia e Terminalia argentea (Combretaceae)Santos, Marcone Moreira 21 February 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / O trabalho teve por objetivos caracterizar morfologicamente frutos, sementes e pl?ntulas de Terminalia fagifolia e Terminalia argentea, avaliar o percentual de germina??o das sementes em resposta ao armazenamento e tratamentos de supera??o de dorm?ncia, e desenvolver uma metodologia de micropropaga??o a partir de pl?ntulas germinadas in vitro para ambas esp?cies. Para a caracteriza??o morfol?gica, foram amostrados 100 frutos e 100 sementes, dos quais foram avaliadas caracter?sticas como colora??o, textura, comprimento, largura e estruturas morfol?gicas. A umidade foi determinada pelo m?todo de estufa a 103?2?C. A germina??o foi realizada em c?mara de germina??o tipo BOD, utilizando caixas tipo Gerbox (15x15 cm) contendo areia esterilizada e ?gua destilada, sob temperatura de 30?C e fotoper?odo de 16 horas. Foram testados os seguintes tratamentos para supera??o da dorm?ncia: Controle; escarifica??o em esmeril, escarifica??o com ?cido sulf?rico P.A por 5 minutos; imers?o em ?gua fervente por 5 minutos; e embebi??o em ?gua em temperatura ambiente por 24 horas. A umidade e germina??o foram realizados em sementes rec?m colhidas e com 2, 4 e 6 meses de armazenamento em c?mera fria. Para a desinfesta??o foram instalados quatro experimentos in vitro. No primeiro, as sementes de T. fagifolia foram lavadas, escarificadas em ?cido sulf?rico por 5 minutos e posteriormente imersas em solu??o de ?lcool 70% por 30 segundos e, logo ap?s, em solu??o de hipoclorito de s?dio a 5%, sendo adicionado 4 a 5 gotas de Tween 20 para cada 100 ml de solu??o. Foram utilizados os tempos de imers?o de 5, 10, 15, 20 e 25 minutos em hipoclorito de s?dio a 5%, os quais constitu?ram cinco tratamentos. No experimento II, os procedimentos foram semelhantes aos descritos no experimento I, diferindo com rela??o aos tratamentos utilizados. Foram testados os tempos de imers?o de 5, 10, 15, 20 e 25 minutos em solu??o de Digluconato de Clorexidina a 5 mgL-1. Nos experimentos III e IV, para T. argentea, os procedimentos foram semelhantes as experimento I, no entanto, no experimento IV, as sementes tiveram seu tegumento retirado. Ap?s a desisnfesta??o, as sementes foram inoculadas e tubos de ensaio com 10 ml de meio de cultura MS. Na fase de multiplica??o, para cultivo inicial, pl?ntulas de T. argentea obtidas no experimento IV da etapa anterior foram segmentadas e seus segmentos nodais foram inoculadas em Meio de cultivo MS acrescidos de 0,03 mgL-1 de ANA e BAP nas concentra??es de 0,1; 0,15; 0,2; 0,4; e 0,6 mgL-1. Para os subcultivos 1 e 2, gemas axilares oriundas das brota??es do cultivo inicial e subcultivo 1, respectivamente, foram inoculadas em tubos de ensaio contendo 10 ml do meio de cultura b?sico adicionado de 0,15 mg L-? de BAP e 0,03 mg L-? de ANA. Na fase de enraizamento, os explantes do subcultivo 2 com comprimento superior a 2 cm, foram inoculados em tudos contendo 10 ml do meio MS acrescido de 0; 1,0; 2,0 e 4,0 mgL-? de AIB. De modo geral, o tempo de armazenamento e os tratamentos pr?-germinativos n?o influenciaram a germina??o de T. fagifolia. Para T. argentea o armazenamento por 60 dias e a imers?o em ?gua por 24 horas proporcionou maiores percentuais de germina??o. Para a desinfesta??o in vitro o hipoclorito de s?dio e o digluconato de clorexidina n?o foram eficientes para promover a descontamina??o das sementes de T. fagifolia, no entanto, a retirada do tegumento e a imers?o das sementes por 25 minutos em solu??o de hipoclorito de s?dio a 2,5% se mostrou eficiente para promover a desinfesta??o e germina??o in vitro de T. argentea. Na fase de multiplica??o, a adi??o de 0,15 mgL-? de BAP favoreceu o surgimento de brota??es em segmentos nodais de T. argentea, enquanto a adi??o de 4,0 mgL-? de AIB ao meio de cultivo favoreceu o enraizamento para a esp?cie. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncia Florestal, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2014. / ABSTRACT
The study aimed to, morphologically characterize fruits, seeds and seedlings of Terminalia fagifolia and Terminalia argentea and evaluate the physiological quality of seeds and develop a method for micropropagation for both species. For morphological, 100 and 100 fruit seeds, including features such as color, texture , length , width and morphological structures were evaluated were sampled . Moisture was determined by oven method at 103 ? C ? 2 . Germination was carried out in a germination chamber BOD using type Gerbox ( 15x15 cm ) boxes containing sterilized sand and distilled water with a temperature of 30 ? C and 16 h photoperiod . , Scarification on Emery , PA scarification with sulfuric acid for 5 minutes, immersion in boiling water for 5 minutes , and soaking in water at room temperature for 24 hours Control : The following treatments to break dormancy were tested. The moisture and germination were performed on freshly harvested and 2 , 4 and 6 months of storage in cold camera seeds . For disinfestation were mounted four experiments . At first, the seeds of T. fagifolia were washed, scarified in sulfuric acid for 5 minutes and then immersed in 70% alcohol for 30 seconds and, subsequently , in a solution of sodium hypochlorite 5 % with added 4 to 5 drops of Tween 20 per 100 ml of solution. Immersion times of 5 , 10, 15 , 20 and 25 minutes in a sodium hypochlorite 5 % , which constitute five treatments were used. In experiment II, the procedures were similar to those described in experiment I, differing with respect to treatments. Immersion times of 5, 10, 15, 20 and 25 minutes in a solution of chlorhexidine gluconate to 5 mgL - ? were tested. In the experiments III and IV, T. argentea, the procedures were similar to the experiment, however, in Experiment IV, the seeds were removed from their integument. After desisnfesta??o seeds were inoculated and test tubes with 10 ml of MS medium. In the multiplication phase, for the first subculture, seedlings of T. argentea obtained in the previous step experiment IV were segmented and their nodal segments were inoculated in MS medium plus 0.03 mg L - ? and BAP at concentrations of 0.1, 0.15, 0.2 , 0.4 and 0.6 mg L- 1. For 1 and 2 subcultures , shoots originating from the initial subculture and 1 , respectively , growing axillary buds were inoculated into test tubes containing 10 ml of the basic culture medium added 0.15 mg L- ? BAP and 0.03 mg L- ? NAA. For rooting , the plantlets subculture of 2 longer than 2 cm were inoculated in studies containing 10 ml of MS medium supplemented with 0 , 1.0, 2.0 and 4.0 mg L - ? IBA . Generally, the storage time and the pre- germination treatment did not affect the germination of T. fagifolia . T. argentea storage for two months and immersion in water for 24 hours resulted in the highest germination percentages. For in vitro disinfection with sodium hypochlorite and chlorhexidine gluconate were not effective to promote decontaminating seeds, however, the removal of the seed coat and soaking the seeds for 25 minutes in a solution of sodium hypochlorite at 2.5% proved to promote efficient disinfection and germination in vitro of T. argentea. In the multiplication phase the addition of 0.15 mg L - ? BAP favored the emergence of shoots in nodal segments of T. argentea while the addition of 4.0 mg L - ? BAP to the culture medium favored rooting for this species.
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Multiplicação in vitro de mamoeiro Tainung 01SCHMILDT, O. 23 February 2006 (has links)
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Previous issue date: 2006-02-23 / Foram realizados experimentos em meio de estabelecimento e de
multiplicação com o objetivo de avaliar a micropropagação do mamoeiro (Carica papaya L.) Híbrido Tainung 01, geração F1, utilizando-se segmentos apicais e segmentos apicais de brotações laterais provenientes das plantas juvenis cultivadas em casa de vegetação. No meio de estabelecimento MS, utilizando-se segmentos apicais, foram testadas diferentes combinações dos reguladores de crescimento
ANA (0,093; 0,931 e 1,862 mg L-1) e Cinetina (5,38; 10,76 e 21,52 mg L-1) para identificação da melhor relação para a sobrevivência, a reatividade e a massa de calo. Com a utilização de 0,093 mg L-1 de ANA combinado com 5,38 mg L-1 de Cinetina, obteve-se a melhor formação de roseta foliar com 100% de culturas reativas, indicando haver adaptação dos explantes in vitro, além da menor formação
de calo, podendo ser comprovado com a boa reação destes explantes em meio de multiplicação MS com ANA a 0,093 mg L-1 e BAP a 0,45 mg L-1, durante cinco subcultivos, com taxa de multiplicação constante de 5,288:1. Numa segunda etapa, com a utilização de segmentos apicais de brotações laterais, avaliou-se a multiplicação em meio MS com diferentes níveis de sulfato de adenina. Para o preparo do meio de estabelecimento, utilizou-se a melhor combinação dos reguladores de crescimento ANA e Cinetina obtidos anteriormente, enquanto que
para o meio de multiplicação, usou-se ANA a 0,093 mg L-1, BAP a 0,45 mg L-1 e diferentes níveis de sulfato de adenina (0; 30; 60; 90 e 120 mg L-1), associados com remoção ou não das folhas da roseta foliar formada no meio de estabelecimento. Os tufos de ramos foram subcultivados a cada 30 dias em tufos menores, e ao final do
quarto subcultivo, foram feitas as avaliações da massa fresca da parte aérea, número de ramos aptos (≥ 5 mm) e não aptos (< 5 mm) ao enraizamento e o aspecto visual dos tufos de ramos. As melhores respostas para o número de ramos aptos ao enraizamento (≥ 5 mm) foram encontradas com a presença das folhas para os tratamentos 0, 30, 60 e 90 mg L-1 de sulfato de adenina. Recomenda-se utilizar 30
mg L-1 de sulfato de adenina no meio de multiplicação pela qualidade e
homogeneidade das partes aéreas produzidas, com ramos alongados e pecíolos longos, com bom padrão para posterior enraizamento.
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MORFOMETRIA, GERMINAÇÃO IN VITRO E EX VITRO E ADEQUAÇÃO METODOLÓGICA DO TESTE DE TETRAZÓLIO EM SEMENTES DE Passiflora foetida var. glaziovii KILLIP (PASSIFLORACEAE)COSTA, P. R. 25 February 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-02-25 / A Passiflora foetida é uma Liana herbácea, que se encontra distribuída ao longo dos trópicos americanos, sendo frequentemente introduzida em outras regiões tropicais. Esta espécie apresenta grande valor ornamental, medicinal e etnobotânico sendo utilizada no tratamento de doenças como asma, emenagogo, erisipela, biliousnes, icterícia, entre outras. Entre as espécies do gênero Passiflora esta é a que apresenta a maior variedade, além de ser a única que possui glândulas de resina. Apesar da ampla utilidade da P. foetida L. poucos são estudos referentes à sua propagação, principalmente em nível de variedade. Desta forma objetivou-se caracterizar a variedade botânica de P. foetida encontrada no município de São Mateus, ES e descrever o seu comportamento germinativo através de estudos fisiológicos (germinação in vitro e ex vitro) e bioquímico (teste de tetrazólio). A caracterização e identificação botânica foram realizadas conforme descrições da chave de identificação de Killip (1938) e terminologia morfológica empregada segue a sugerida por Vidal & Vidal (2000). Foram realizadas a análise e descrição morfológica (comprimento, largura e diâmetro), o peso de mil sementes, a porcentagem de umidade e a curva de embebição. A avaliação da qualidade fisiológica das sementes foi realizada através da germinação ex vitro e in vitro. As avaliações ex vitro foram realizadas em rolo e sobre papel Germitest nas temperaturas de 20-30 e 25°C. Posteriormente sementes totalmente desprovidas de tegumento foram utilizadas nos testes de germinação in vitro e de tetrazólio. Para a germinação in vitro utilizou-se o meio Murashige & Skoog (1962), sendo as sementes acondicionadas a diferentes qualidades de luz (branca, vermelha, vermelha extrema e ausência) e duas temperaturas (20-30 e 25 °C) e as médias obtidas foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade, com auxilio software GENES (CRUZ, 2006). No teste de tetrazólio as sementes foram submergidas, em soluções de tetrazólio em concentrações de 2,5; 5,0; 7,5 e 10 g L-1 nas temperaturas de 30, 35, 40 e 45 °C por duas horas na ausência de luz. Paralelamente ao teste de tetrazólio realizou-se um teste de germinação in vitro com a finalidade de associar os padrões de coloração às classes de vigor. Para avaliar a associação entre o TZ e o teste de germinação in vitro, foram calculados em cada repetição o número de embriões pertencentes a cada classe aplicando posteriormente o teste Qui-quadrado a 5% de probabilidade, com auxilio software Bioestat 5.0 (AYRES et al., 2007). A espécie estudada foi identificada como Passiflora foetida var. glaziovii, sendo suas sementes caracterizadas como não-fotoblásticas. A germinação é favorecida quando realizada in vitro e em temperatura alternada de 20-30°C. Em relação ao teste de tetrazólio a combinação da concentração de 10 g L-1 e temperatura de 30 °C é a indicada para esta espécie.
Palavras-chave: etnobotânica, ornamental, propagação, medicinal, Liana herbácea.
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Indução de mutação em feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp., cultivar BR-14 mulato, visando à obtenção de mutantes tolerantes à salinidadeMillena de Arruda Azevedo, Hayana 31 January 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Dentre os feijões cultivados, o feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.] se destaca pelo alto conteúdo protéico e pela capacidade de crescer em condições adversas. Sendo assim, esta espécie se tornou uma das culturas de subsistência mais importantes para a população do agreste nordestino. No entanto, a salinização dos solos, devido à irrigação inadequada, tem provocado além de crescentes problemas ambientais, a redução da produtividade de várias espécies vegetais, inclusive a do feijão-caupi. Sendo assim, o uso de técnicas biotecnológicas, como a mutagênese in vitro, mostra-se como alternativa para o desenvolvimento de novas cultivares. Com a finalidade de produzir variedades de feijão-caupi tolerantes à salinidade, a indução de mutação in vitro com uso de raios gama foi aplicada no presente trabalho. Foi escolhida a cultivar BR14-Mulato por ter sido aquela que em estudos primários mostraram satisfatória capacidade regenerativa in vitro tratando-se de importante cultivar para a agricultura do Nordeste brasileiro. O segundo passo foi estabelecer um protocolo apropriado para pressão de seleção in vitro das sementes irradiadas através da determinação da concentração de NaCl que inibisse a regeneração, fazendo-se uso das concentrações de 172 mM (1% - Tratamento 1), 258 mM (1,5% - Tratamento 2), 344 mM (2% - Tratamento 3) e 0 mM (Tratamento Controle), chegando-se, então, à conclusão de que a concentração de 172 mM seria a mais apropriada. Por fim, sementes foram irradiadas com três doses de radiação gama (100 Gy, 150 Gy e 200 Gy), além do material controle (0 Gy), e seus tecidos foram isolados e inoculados in vitro, simultaneamente, em meios de cultura com e sem sal. Como resultado, foi obtido um possível variante somaclonal advindo de material não irradiado (0 Gy) e inoculado em meio não seletivo, sendo transferido, posteriormente, para meio contendo NaCl, sobrevivendo a este. Outro resultado de grande importância foi a obtenção de um provável mutante sólido provocado pela dose de 150 Gy que, inicialmente, formou calo embriogênico na ausência de NaCl, sendo posto sob pressão de seleção na etapa conseguinte e, após verificada a possível mutação, retirado da condição de salinidade e preparado, através da indução de enraizamento, para futuras análises em campo e molecular. Os resultados obtidos forneceram subsídio com o desenvolvimento de protocolos bem estabelecidos para estudos posteriores de regeneração e indução de mutação in vitro, com os prováveis mutantes (induzidos ou espontâneos) oferecendo possibilidade de geração de variedade tolerante à salinidade
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