Syftet med denna studie är att undersöka om och i så fall hur motiveringarna bakom beslut gällande omedelbart omhändertagande med stöd av lag (1990:52) med särskilda bestämmelser om vård av unga (LVU), skiljer sig utifrån kön. Syftet med denna studie är också att undersöka vilka likheter och skillnader som finns i de ungas livsbakgrunder, som resulterat i beslut om omedelbara omhändertaganden enligt 6 § LVU. Vi ämnar att uppfylla studiens syfte med hjälp av följande frågeställningar: 1) Vilka beteenden och händelser leder till beslut om omedelbart omhändertagande för de unga? Hur kan dessa förstås ur ett genusperspektiv?  2) På vilket sätt formuleras likheter och skillnader i hur pojkars och flickors beteende och problematik beskrivs och bedöms i beslut enligt 6 § LVU? Metoden som har använts tillhör den hermeneutiska traditionen och är en textanalys formulerad av Lennart Hellspong och Per Ledin. Teorierna vi använt oss av är dels genusteori utifrån Judith Butler och denna kompletteras med de teoretiska begreppen normer och avvikande beteende. Resultatet visar att det finns både likheter och skillnader i besluten gällande flickor och pojkar. Skillnaderna är dels att de utifrån kön omhändertas på grund av olika beteenden, där pojkarna framför allt har problem som brottslighet och missbruk, medan flickornas problem snarare handlar om destruktivitet och miljön de befinner sig i. Vidare skiljer sig även formuleringarna utifrån kön, där pojkarnas beteenden är mer explicit beskrivna, medan flickornas beslut upplevs mer vaga och implicita i sina formuleringar. / The purpose of this study is to examine whether and if so, what the reasons behind the decisions on immediate custody under the Care of Young Persons Act (CYPA), differs by gender. The purpose of this study is also to examine the similarities and differences in young people's life backgrounds, which resulted in the decision on immediate care order under § 6 CYPA. We intend to examinate this using the following questions: 1) What behaviors and events leads to the decision on immediate custody of the young? How can these be understood from a gender perspective? 2) How are the similarities and differences in boys' and girls' behavior and problems described and evaluated in the decision regarding § 6 CYPA? The method used belongs to the hermeneutic tradition and is a text analysis formulated by Lennart Hellspong and Per Ledin. The theories we have used is partly based on gender theory by Judith Butler which is complemented by the theory concepts norms and deviant behavior. The result shows that there are both similarities and differences in decisions concerning girls and boys. The differences are that depending on gender the young are beeing taken in to immediate custody because of different behaviors, where the boys especially have problems like crime and abuse, while the girls' problems rather are focusing on the destructiveness and the environment they find themselves in. Furthermore, we also found different formulations based on gender. The boys' behavior is more explicitly described, and the girls' decisions are perceived more vague and implicit.

Lentiviruses can infect postmitotic cells, indicative of a role for the nucleocytoplasmic transport machinery. Genome-wide RNA interference screens identified transportin 3 (TNPO3) that may regulate human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) preintegration complex (PIC) nuclear import but plays no role during murine leukemia virus (MLV) infection. Independently, TNPO3 was shown to bind HIV-1 integrase (IN), a PIC component, suggesting a potential mechanism for nuclear import. We demonstrated direct binding between TNPO3 and several retroviral INs, which did not correlate with TNPO3 dependency profiles of the respective retroviruses. Infectivity assays employing HIV-1/MLV chimeric viruses ascertained that the capsid (CA) domain, but not IN, was the functional determinant of TNPO3 dependence. A carboxy-terminal truncation mutant of the serine-arginine rich (SR) protein family member, cleavage and polyadenylation specific factor 6 (CPSF6), CPSF6-358, which lacks its RS domain, was shown to restrict HIV-1 PIC nuclear import. We demonstrated that CPSF6 interacts with HIV-1 CA, and a single point mutation in CA, Asn74Asp (N74D), abolished this interaction. N74D also rendered HIV-1 TNPO3-independent and impaired cyclophilin A (CypA) binding to CA. The CA:CPSF6 binding interface, as described in a partial co-crystal structure, defined a surface pocket on CA that faces the CA hexamer:hexamer interspace. Infectivities and CA binding profiles of CA mutants within this pocket or with aberrant CypA-related phenotypes were assessed to compare their CPSF6-358 sensitivity and TNPO3 dependence, which largely correlated. We showed an overall correlation between the CPSF6/CPSF6-358 binding profiles of these HIV-1 CA mutants and their CPSF6-358 sensitivity, whereas TNPO3 binding and TNPO3 dependence did not correlate. Based on similar infectivity profiles of CA mutants and the loss of the RS domain from CPSF6-358 we tested for a direct interaction between CPSF6 and TNPO3. We demonstrated specific binding between recombinant TNPO3 and the CPSF6.RS domain. Mutagenesis experiments suggested a multicontact binding interface. The interaction was downmodulated by Ras-related nuclear protein (Ran)-GTP, indicating that CPSF6 is a bona fide import substrate of TNPO3. Our results support a model where TNPO3 regulates nuclear CPSF6 localization and that in its absence CPSF6 may restrict infection by directly interacting with HIV-1 CA at the hexamer:hexamer interface.

Cyclophilin A (CypA) is the well-studied member of a group of ubiquitous and evolutionarily conserved families of enzymes called peptidyl–prolyl isomerases (PPIases). These enzymes catalyze the cis-trans isomerization of peptidyl-prolyl bond in many proteins. The distinctive functional path triggered by each isomeric state of peptidyl-prolyl bond renders PPIase-catalyzed isomerization a molecular switching mechanism to be used on physiological demand. PPIase activity has been implicated in protein folding, signal transduction, and ion channel gating as well as pathological condition such as cancer, Alzheimer’s, and microbial infections. The more than five order of magnitude speed-up in the rate of peptidyl–prolyl cis–trans isomerization by CypA has been the target of intense research. Normal and accelerated molecular dynamic simulations were carried out to understand the catalytic mechanism of CypA in atomistic details. The results reaffirm transition state stabilization as the main factor in the astonishing enhancement in isomerization rate by enzyme. The ensuing intramolecular polarization, as a result of the loss of pseudo double bond character of the peptide bond at the transition state, was shown to contribute only about −1.0 kcal/mol to stabilizing the transition state. This relatively small contribution demonstrates that routinely used fixed charge classical force fields can reasonably describe these types of biological systems. The computational studies also revealed that the undemanding exchange of the free substrate between β- and α-helical regions is lost in the active site of the enzyme, where it is mainly in the β-region. The resultant relative change in conformational entropy favorably contributes to the free energy of stabilizing the transition state by CypA. The isomerization kinetics is strongly coupled to the enzyme motions while the chemical step and enzyme–substrate dynamics are in turn buckled to solvent fluctuations. The chemical step in the active site of the enzyme is therefore not separated from the fluctuations in the solvent. Of special interest is the nature of catalysis in a more realistic crowded environment, for example, the cell. Enzyme motions in such complicated medium are subjected to different viscosities and hydrodynamic properties, which could have implications for allosteric regulation and function.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal. / L'interaction moléculaire de la cyclosporine A (CsA) avec ses deux cibles pharmacologiques principales, la P-glycoprotéine (P-gp) et la cyclophiline A (CypA), a été examinée au cours de cette étude. Dans une première approche, nous avons évalué l'efficacité avec laquelle la CsA et ses différents analogues interagissent avec la P-gp par deux méthodes. La première méthode utilisée consiste à mesurer l'activité ATPasique de la P-gp en présence de la CsA et de ses analogues. La P-gp a été solubilisée par une extraction séquentielle au CHAPS à partir des membranes des cellules d'ovaires d'hamster chinois résistantes à la colchicine (CHRC5). Ensuite, l'activité ATPasique de la P-gp solubilisée a été mesurée en absence ou en présence de la CsA et de ses analogues par une méthode continue où on mesure le taux d'oxydation de NADH en fonction du temps. La deuxième méthode utilisée consiste à mesurer l'accumulation de la rhodamine 123 à l'intérieur des cellules CHRC5 en présence de la CsA et de ses analogues. L'activité ATPasique de la P-gp a été inhibée par la CsA, par ses analogues et par ses métabolites à des concentrations de l'ordre du nM. Les métabolites de la CsA (AM1C, AM1, AM1C9 et AM9) ainsi que les métabolites de la CsG (GM4N, GM1 et GM9) causent une inhibition similaire de l'activité ATPasique de la P-gp. Parmi les analogues de la CsA étudiés, le PSC-833, une molécule non immunosuppressive, a été le meilleur inhibiteur de l'activité ATPasique de la P-gp. Le peptolide 280-446, un peptide cyclique non apparenté, a été presqu'aussi efficace que le PSC-833. Ces résultats révèlent que l'interaction des analogues de la CsA avec la P-gp n'est pas en corrélation avec leur activité immunosuppressive et que les modifications de la CsA en position 1 et 2 sont critiques pour leur interaction avec la P-gp. Dans une deuxième approche, nous avons caractérisé la CypA qui semble être présente dans les membranes à bordure en brosse (MBB) préparées à partir du cortex rénal de rat. Nous avons tenté de caractériser la nature de son attachement membranaire et de déterminer la quantité de la CypA dans les MBB. Nous avons également étudié les conditions où la CypA membranaire est relarguée, ainsi que son interaction avec la CsA. La CypA semble se trouver dans les MBB et dans la fraction soluble à une concentration de 4,9 et 3,6 g/mg de protéines, respectivement. Nous avons observé une extraction complète de la CypA des MBB par le Na2CO3 et par le CHAPS mais non par le NaC1, indiquant son attachement membranaire par des interactions hydrophobes. Nous avons aussi tenté de vérifier l'effet de différentes substances sur le relargage de la CypA des MBB. Ainsi, la CsA et le P-mercaptoéthanol n'ont pas entraîné un relargage de la CypA des MBB in vitro. Par contre, le substrat pour mesurer l'activité de peptidyle prolyle cis trans isomérase (PPIase) de la CypA, le peptide succinyl-alanine-alanine-cis-proline-phényl-pnitroanilide, cause un relargage significatif de la CypA associée aux MBB. Le photomarquage de la CypA relarguée et de la CypA qui reste membranaire suite à une centrifugation par un analogue photoactivable de la CsA (Diazérine-CsA) (Dz-CsA), démontre que la CypA relarguée est photomarquée plus efficacement que la CypA qui reste attachée aux MBB. La présence de la CypA au niveau des MBB, nous a incité à vérifier si la CypA recombinante pourrait se transférer dans les MBB in vitro. Ainsi, lorsque nous avons incubé la CypA recombinante en présence de MBB, elle se transfère à 40 % dans les MBB. Suite à cette observation, nous avons analysé l'effet de la formation des complexes CypA recombinante-CsA et CypA recombinante-CsA-Calcineurine sur la translocation de la CypA recombinante dans les MBB. Nos résultats révèlent que la translocation de la CypA recombinante dans les MBB diminue de 9 et de 38 %, lorsqu'elle se trouve sous une forme complexée avec la CsA ou avec la CsA/Calcineurine, respectivement. Afin de vérifier si la translocation de la CypA recombinante dans les MBB se fait par l'interaction avec une ou plusieurs autre(s) protéine(s) membranaire(s), nous avons procédé à la translocation de la CypA recombinante dans les MBB chauffées, dans les MBB prétraitées avec des concentrations croissantes de trypsine et dans des protéoliposomes préparés à partir des MBB. Nos résultats démontrent que le chauffage des MBB ne diminue pas la translocation de la CypA recombinante, et que la CypA recombinante se transfère au même taux dans les MBB que dans les protéoliposomes préparés à partir des MBB. Par contre, la translocation de la CypA recombinante diminue considérablement, lorsque les MBB sont prétraitées avec des concentrations croissantes de trypsine. Le relargage de la CypA associée aux MBB, ainsi que la translocation de la CypA recombinante dans les MBB a lieu de façon maximale à un pH proche du pH physiologique, soit aux pH 7 et 8, suggérant un équilibre dynamique entre la CypA cytosolique et la CypA membranaire dans les conditions physiologiques. Enfin, nous avons étudié l'effet des différents métaux divalents sur le photomarquage de la CypA des MBB, de la fraction soluble et de la CypA recombinante par un analogue photoactivable de la CsA (Dz-CsA). Parmi les métaux divalents étudiés (Mg2+, Mn2+, Ca2+, Zn2+ et Cis-Pt2+), seulement le Zn2+ a démontré une inhibition significative du photomarquage de la CypA des MBB, de la fraction soluble et de la CypA recombinante par la Dz-CsA. Cette inhibition causée par le Zn2+, est dépendante de la concentration et est de l'ordre du pM. Les agents réducteurs, le Hg2+ et le 13-mercaptoéthano1, ont aussi diminué le photomarquage de la CypA des MBB et de la fraction soluble par la Dz-CsA, tandis que la CypA recombinante, prétraitée avec le Hg2+ et le 13-mercaptoéthano1, démontre une augmentation du photomarquage par la Dz-CsA.

Les protéines étant au coeur d’un grand nombre de processus biologiques, elles sont des cibles thérapeutiques largement convoitées. Les foldamères, notamment les oligoamides aromatiques, présentent une structure bien définie, prévisible, stable en solution et à l’état solide. Ajouté à cela, leur taille moyenne en fait de bons candidats pour la reconnaissance de surfaces de protéines, grâce à leurs chaînes latérales protéinogènes. Cette thèse présente les différentes étapes de leur conception, de la synthèse de la brique constitutive à l’obtention d’un foldamère fonctionnalisé grâce à la synthèse en phase supportée. La stratégie d’investigation des interactions entre un foldamère et une protéine est détaillée. L’originalité réside dans le fait que le foldamère est ancré directement à la protéine et le dichroïsme circulaire sert de méthode de screening. L’analyse structurale des hits permet de générer de nouveaux foldamères dans le but d’améliorer les interactions avec la protéine : c’est une stratégie itérative. Cette approche est appliquée premièrement à l’anhydrase carbonique humaine II, protéine modèle qui sert de preuve de principe pour cette approche ; puis à des protéines d’intérêt thérapeutique plus important : l’interleukine 4 et la cyclophiline A. Enfin, une étude concernant l’introduction de flexibilité au sein de foldamères de quinolines est présentée. / Since proteins are at the basis of many biological processes, they are widely studied as therapeutic targets. Aromatic oligoamide foldamers have a very well defined structure, predictable and stable both in solution and solid state. Because of their medium size, they appear as potent candidates for protein surface recognition thanks to their proteinogenic side chains. This manuscript presents the different steps of their design, from the scaffold’s synthesis to obtaining a functionalized foldamer, thanks to solid phase synthesis. The strategy to investigate protein/foldamer interactions will be detailed. Its originality lies in the fact that the foldamer is anchored to the protein. Circular dichroism has been used as a screening method to detect foldamer/protein interactions. Structural analysis of the hits will allow the design of new foldamers with the objective of enhancing foldamer/protein interactions: it is an iterative strategy. This approach has been applied firstly to human carbonic anhydrase II (HCA). This protein is used as a model system and proof of concept before moving to more therapeutically relevant proteins; interleukin 4 and cyclophilin A. Finally, a study on introducing flexibility in quinoline foldamers is presented.