Submitted by FERNANDA DA SILVA VON PORSTER (fdsvporster@univates.br) on 2017-01-04T10:58:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2016MonicaKrauzeSiegert.pdf: 1293165 bytes, checksum: 4e5c4c6cfd0d325dc17164b6e76817f2 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Lisboa Monteiro (monteiro@univates.br) on 2017-01-06T17:32:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2016MonicaKrauzeSiegert.pdf: 1293165 bytes, checksum: 4e5c4c6cfd0d325dc17164b6e76817f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-06T17:32:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2016MonicaKrauzeSiegert.pdf: 1293165 bytes, checksum: 4e5c4c6cfd0d325dc17164b6e76817f2 (MD5) Previous issue date: 2017-01 / Ácaros de importância econômica encontrados em armazéns de grãos, farinhas e rações, assim como, nas prateleiras dos estabelecimentos comerciais são comuns no Brasil. Este estudo teve como objetivo reconhecer a fauna acarina, associando a fatores ambientais e locais onde estão presentes em fábrica de rações. As coletas foram realizadas no período de dezembro de 2013 a setembro de 2014 numa fábrica de ração do Município de Estrela, Rio Grande do Sul. As amostragens foram realizadas mensalmente no rada pé do depósito de embalagens (DE), na tampa da moega de farelo de arroz (FA) na fita transportadora de milho (FM), na abertura inferior do silo de farelo de soja (FS), ninhos de pombos (NP), no elevador de produto de origem animal (OA), e na estrutura estrena do resfriador da peletizadora (RP), e telhado (TE) de uma fábrica de rações. Foram encontrados 2.401 ácaros pertencentes às famílias Acaridae, Blattisocidae, Caligonellidae Cheyletidae, Glycyphagidae, Macrochelidae, Macronyssidae, Melicharidae, Phytoseiidae, Pyroglyphidae, Raphignathidae, Tydeidae, além de Uropodidae e a Subordem Oribatida. Cheyletidae apresentou maior riqueza. Em NP e FS houve maior riqueza. Dermatophagoides farinae foi a espécie mais abundante (883 espécimmes), seguido por Tyrophagus putrescentiae (654 espécimes) e Cheyletus malaccensis (506). Em RP, local de maior contaminação, observou-se 36% do total de ácaros coletados, seguido por FM, com 17,5% e FA, FS, com 14%. Entre março e agosto houve maior abundância acarina, sendo que em março houve maiores populações de Dermatophagoides farinae, agosto, Tyrophagus putrescentiae enquanto que de dezembro a fevereiro prevaleceu Cheyletus malaccensis. / Mites of economic importance found in grain warehouse, flour and feed, as well as, on the shelves of commercial establishments are common in Brazil. This study aimed to recognize the acarina fauna, associating environmental factors and localities where they are presented in the feed factory. Samples were collected from December 2013 to September 2014 at a feed mill in the city of Estrela, Rio Grande do Sul. Samples were taken monthly in the foot of the packaging deposit (DE), in the lid of the bran hopper of rice (FA), conveyor belt of corn (FM), the lower opening of the soybean meal silo (FS), pigeon nests (NP), in the animal origin product elevator (OA), And in the structure of the pelletizer cooler (RP), and roof (TE) of a feed mill. We found 2,401 mites belonging to the families Acaridae, Blattisocidae, Caligonellidae Cheyletidae, Glycyphagidae, Macrochelidae, Macronyssidae, Melicharidae, Phytoseiidae, Pyroglyphidae, Raphignathidae, Tydeidae, as well as Uropodidae and Oribatida Suborder. Cheyletidae showed greater resource. In NP and FS there was greater resource. Dermatophagoides farinae was the most abundant species (883 specimens), followed by Tyrophagus putrescentiae (654 specimens) and Cheyletus malaccensis (506). In RP, the most contaminated site, 36% of the total mites were collected, followed by FM, with 17.5% and FA, FS, with 14%. Between March and August there was greater abundance of acarina, and in March there were larger populations of Dermatophagoides farinae, August, Tyrophagus putrescentiae whereas from December to February Cheyletus malaccensis prevailed.

One of the purposes of allergen-specific immunotherapy (SIT) is to modulate the humoral immune response against allergens with significant increases in allergen-specific IgG1 and IgG4 levels. These antibodies are associated with blocking activity by preventing IgE binding to allergen and leading to reduced inflammatory responses. This study aimed to investigate in vitro blocking activity of allergen-specific IgG antibodies on IgE reactivity to D. pteronyssinus (Dpt) in sera from atopic patients. Dpt-specific IgG antibodies were obtained from atopic sera and irrelevant IgG from non-atopic sera. IgG antibodies were purified by ammonium sulfate precipitation followed by Protein-G affinity chromatography and evaluated with regards to purity by SDS-PAGE and immunoreactivity by slot-blot and immunoblot assays. The blocking activity was evaluated by inhibition ELISA. The electrophoretical profile after salting-out precipitation showed an enrichment of high molecular weight proteins in the precipitated fraction and strongly stained bands in the ligand fraction after chromatography, compatible with molecular weight of human IgG. It was detected strong immunoreactivity to IgG, negligible to IgA, and no reactivity to IgE and IgM. Dpt-specific IgG fraction was capable to significantly reduce levels of IgE anti-Dpt, resulting in 35-51% inhibition of IgE reactivity to Dpt in atopic patient sera. Allergen-specific IgG antibodies purified using available and standardized methodology are able to inhibit IgE reactivity to Dpt allergen extract. In addition to the clinical symptoms improvement (subjective parameter), this approach reinforces that the intermittent measurement of serum allergen-specific IgG antibodies will be an important objective laboratorial parameter that will help specialists to follow their patients under SIT. / Uma das propostas da imunoterapia alérgeno específica é a de modular a resposta imune humoral contra alérgenos, com aumento significativo nos níveis de IgG1 e IgG4 específicos. Esses anticorpos estão associados com uma atividade bloqueadora, impedindo a ligação de anticorpos IgE ao alérgeno e levando a uma redução nas respostas inflamatórias. Esse estudo objetivou investigar a atividade bloqueadora, in vitro, de anticorpos IgG específicos sobre a reatividade de IgE a D. pteronyssinus (Dpt) em soros de pacientes atópicos. Anticorpos IgG específicos foram obtidos de soros de pacientes atópicos, e IgG irrelevante a partir de soros de não atópicos, e depois purificados por precipitação com sulfato de amônio, seguido de cromatografia de afinidade em Proteina G-agarose. A pureza desses anticorpos foi avaliada por SDS-PAGE, a imunoreatividade por ensaios de slot-blot e immunoblot, e a atividade bloqueadora por ELISA inibição. O perfil eletroforético, após precipitação com sulfato de amônio, mostrou um enriquecimento de proteínas de alto peso molecular na fração precipitada,e bandas fortemente coradas na fração ligante após a cromatografia, compatíveis com o peso molecular de IgG humana. Foi detectada uma forte imunoreatividade para IgG, leve para IgA, e nenhuma reatividade para IgE e IgM. A Fração IgG específica foi capaz de reduzir significantemente os níveis de IgE anti-Dpt, resultando em 35-51% de inibição da reatividade de IgE a Dpt em pools de soros de pacientes atópicos. Anticorpos IgG específicos purificados, através de uma metodologia disponível e padronizada, são capazes de inibir a reatividade de IgE ao extrato alergênico Dpt. Além da melhoria da sintomatologia clínica, considerada um parâmetro subjetivo, essa abordagem reforça que a avaliação intermitente de anticorpos IgG alérgeno-específicos pode ser uma ferramenta importante, auxiliando especialistas a acompanharem seus pacientes em processo de imunoterapia específica. / Mestre em Ciências da Saúde

This study aimed to evaluate the clinical efficacy and systemic/mucosal antibody response changes after sublingual immunotherapy (SLIT) using Dermatophagoides pteronyssinus (Dpt) allergens with or without bacterial extracts in mite-allergic children. One-hundred and two patients presenting allergic rhinitis with or without asthma were selected for a randomized double-blind, placebo-controlled trial and distributed into three groups: DPT (Dpt allergen extract, n=34), DPT+MRB (Dpt allergen plus mixed respiratory bacterial extracts, n=36), and Placebo (n=32). Clinical evaluation and immunological analyses were carried out before and after 12 and 18 months of treatment, including rhinitis/asthma symptom and medication scores, skin prick test (SPT) to Dpt extract, and measurements of Dpt, Der p 1, Der p 2 specific IgE, IgG4, and IgG1 in serum and specific IgA in saliva and nasal lavage fluid. Clinical results showed a significant decline in rhinitis/asthma symptom scores in all groups, but medication use decreased only in DPT group after 12 months. SPT results showed no significant changes and SLIT was generally safe, with no severe systemic reactions. SLIT using Dpt allergen alone induced increased serum IgG4 levels to Dpt, Der p 1 and Der p 2, and increased serum IgG1 and salivary IgA levels to Dpt and Der p 1. SLIT using DPT+MRB was able to decrease IgE levels to Der p 2, to increase salivary IgA levels to Der p 1, but had no changes on specific IgG4 and IgG1 levels. In conclusion, clinical improvement was observed both in the SLIT group and the control, but only active SLIT was able to modulate the mucosal/systemic antibody responses. These findings support the role of specific serum IgG4 and IgG1, in addition to salivary IgA, as probable blocking antibodies or biomarkers of tolerance that may be useful for monitoring the allergen specific immunotherapy. / Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia clínica e alterações da resposta de anticorpos sistêmicos e de mucosa após a imunoterapia sublingual (SLIT), utilizando alérgenos de Dermatophagoides pteronyssinus (Dpt), com ou sem extratos bacterianos em crianças alérgicas a ácaros. Cento e dois pacientes com rinite alérgica com ou sem asma foram selecionados para um estudo randomizado duplocego, controlado por placebo e distribuídos em três grupos: DPT (extrato alergênico de Dpt, n=34), DPT+MRB (extrato alergênico de Dpt associado com extrato de bactérias mistas do trato respiratório, n=36), e Placebo (n=32). Avaliação clínica e análises imunológicas foram realizadas antes do tratamento e após 12 e 18 meses, incluindo a pontuação de escores de sintomas e medicamentos de rinite/asma, teste cutâneo (SPT) ao extrato Dpt, e medidas de anticorpos específicos IgE, IgG4 e IgG1 para Dpt, Der p 1, Der p 2 no soro e IgA específicos na saliva e no lavado nasal. Os resultados clínicos mostraram uma redução significativa nos escores de sintomas de rinite/asma em todos os grupos, mas o uso de medicamentos diminuiu apenas no grupo DPT após 12 meses. Resultados de SPT não mostraram mudanças significativas e SLIT foi geralmente segura, sem reação sistêmica grave. SLIT usando somente alérgeno Dpt induziu aumento dos níveis de IgG4 para Dpt, Der p 1 e Der p 2 no soro, e aumentou os níveis de IgG1 no soro e salivares de IgA para Dpt e Der p 1. SLIT usando DPT+MRB foi capaz de diminuir os níveis de IgE para Der p 2, aumentar os níveis salivares de IgA para Der p 1, mas não tiveram alterações nos níveis de anticorpos específicos de IgG4 e IgG1. Em conclusão, foi observado melhora clínica tanto no grupo da SLIT como do controle, porém somente na SLIT com alérgeno foi capaz de modular as respostas de anticorpos sistêmicos e de mucosa. Estes achados reforçam o papel de anticorpos IgG4 e IgG1 séricos específicos, além de IgA salivar, como prováveis anticorpos bloqueadores ou biomarcadores de tolerância que podem ser úteis para monitoramento da imunoterapia alérgeno-específica. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

O aumento da prevalência de doenças alérgicas como a asma, tem sido atribuído à falta de estímulos infecciosos. A atopia, que embasa as manifestações alérgicas, caracteriza-se por uma disfunção imune com predomínio da resposta do tipo Th2. Experimentos em modelos animais com micobactérias e seus produtos têm demonstrado resultados promissores na proteção e reversão de resposta imune do tipo Th2. A imunoterapia para alérgenos inalatórios tem mostrado resultados positivos e o uso do BCG como adjuvante poderia trazer benefícios adicionais. Em estudo randomizado duplo cego foram avaliados 21 indivíduos de ambos os sexos, com idades de 8 a 17 anos sensibilizados ao Dermatophagoides pteronissynus (Dpt) e portadores de asma leve ou moderada persistentes. Os pacientes foram divididos em dois grupos e tratados com imunoterapia específica (ITE) para Dpt. O Grupo A recebeu como adjuvante, no início da ITE, uma aplicação do diluente do BCG e o Grupo B uma dose da vacina BCG. Na avaliação realizada após o período de indução da ITE constatou-se nos dois grupos diminuição significativa dos sintomas, da necessidade de medicação para asma, da hiperreatividade brônquica inespecífica, da reatividade cutânea ao Dpt juntamente com a melhora da função pulmonar. Houve uma redução no índice de estimulação da cultura de células mononucleares do sangue periférico estimuladas com Dpt, acompanhada de uma elevação da IL-10 no sobrenadante e dos níveis da IgG específica para Dpt e da IgE total. Os eosinófilos, a IgE específica para Dpt do sangue e o óxido nítrico no ar exalado não se alteraram. Não houve diferença na comparação dentre os grupos, exceto na proliferação das células mononucleares do sangue periférico estimuladas com PPD, que foi maior no Grupo B. Conclusão: a ITE levou a resultados satisfatórios com melhora clínica e alterações imunológicas já ao final do período de indução. A avaliação do uso do BCG como adjuvante, não mostrou benefícios adicionais. / The increase of allergic diseases, such as asthma, has often been explained by a decline in infectious stimulation. Atopy that is characterized as an immune dysfunction promotes a strong type Th2 immune response and underlines allergic diseases. Experimental animal models researches with mycobacteria and its products had led to promising results in prevention or reversion of type Th2 response. Positive results have been obtained to allergens specific immunotherapy (SIT) and its association with BCG vaccine, as an adjuvant, could promote additional benefits. In a randomized double blind study 21 patients sensitized to mite Dermatophagoides pteronyssinus (Dpt) with mild or moderate persistent asthma, aged 8 to 17 years of both sex were evaluated. Patients were divided in two groups. Group A received at the beginning of SIT one dose of BCG diluent and Group B one dose of BCG vaccine. After the SIT induction period we observed in both groups a significant decrease in asthma symptoms, bronchial hyperreactivity, immediate cutaneous reactivity to Dpt and the necessity of drugs intake. Specific lymphoproliferation against Dpt significantly decreased while IL-10 levels, specific IgG and total IgE increased. Blood eosinophils, specific IgE, others immunoglobulins levels and nitric oxide in exhaled air didn\'t change. There were no differences in all parameters evaluated between the two groups except on specific lymphoproliferation against PPD that was higher in Group B. Conclusions: improvement in symptoms and immunologicals changes where observed at the end of SIT induction period. BCG as adjuvant didn\'t add additional benefits.

O aumento da prevalência de doenças alérgicas como a asma, tem sido atribuído à falta de estímulos infecciosos. A atopia, que embasa as manifestações alérgicas, caracteriza-se por uma disfunção imune com predomínio da resposta do tipo Th2. Experimentos em modelos animais com micobactérias e seus produtos têm demonstrado resultados promissores na proteção e reversão de resposta imune do tipo Th2. A imunoterapia para alérgenos inalatórios tem mostrado resultados positivos e o uso do BCG como adjuvante poderia trazer benefícios adicionais. Em estudo randomizado duplo cego foram avaliados 21 indivíduos de ambos os sexos, com idades de 8 a 17 anos sensibilizados ao Dermatophagoides pteronissynus (Dpt) e portadores de asma leve ou moderada persistentes. Os pacientes foram divididos em dois grupos e tratados com imunoterapia específica (ITE) para Dpt. O Grupo A recebeu como adjuvante, no início da ITE, uma aplicação do diluente do BCG e o Grupo B uma dose da vacina BCG. Na avaliação realizada após o período de indução da ITE constatou-se nos dois grupos diminuição significativa dos sintomas, da necessidade de medicação para asma, da hiperreatividade brônquica inespecífica, da reatividade cutânea ao Dpt juntamente com a melhora da função pulmonar. Houve uma redução no índice de estimulação da cultura de células mononucleares do sangue periférico estimuladas com Dpt, acompanhada de uma elevação da IL-10 no sobrenadante e dos níveis da IgG específica para Dpt e da IgE total. Os eosinófilos, a IgE específica para Dpt do sangue e o óxido nítrico no ar exalado não se alteraram. Não houve diferença na comparação dentre os grupos, exceto na proliferação das células mononucleares do sangue periférico estimuladas com PPD, que foi maior no Grupo B. Conclusão: a ITE levou a resultados satisfatórios com melhora clínica e alterações imunológicas já ao final do período de indução. A avaliação do uso do BCG como adjuvante, não mostrou benefícios adicionais. / The increase of allergic diseases, such as asthma, has often been explained by a decline in infectious stimulation. Atopy that is characterized as an immune dysfunction promotes a strong type Th2 immune response and underlines allergic diseases. Experimental animal models researches with mycobacteria and its products had led to promising results in prevention or reversion of type Th2 response. Positive results have been obtained to allergens specific immunotherapy (SIT) and its association with BCG vaccine, as an adjuvant, could promote additional benefits. In a randomized double blind study 21 patients sensitized to mite Dermatophagoides pteronyssinus (Dpt) with mild or moderate persistent asthma, aged 8 to 17 years of both sex were evaluated. Patients were divided in two groups. Group A received at the beginning of SIT one dose of BCG diluent and Group B one dose of BCG vaccine. After the SIT induction period we observed in both groups a significant decrease in asthma symptoms, bronchial hyperreactivity, immediate cutaneous reactivity to Dpt and the necessity of drugs intake. Specific lymphoproliferation against Dpt significantly decreased while IL-10 levels, specific IgG and total IgE increased. Blood eosinophils, specific IgE, others immunoglobulins levels and nitric oxide in exhaled air didn\'t change. There were no differences in all parameters evaluated between the two groups except on specific lymphoproliferation against PPD that was higher in Group B. Conclusions: improvement in symptoms and immunologicals changes where observed at the end of SIT induction period. BCG as adjuvant didn\'t add additional benefits.