A associação entre os fármacos delapril (DEL) e manidipino (MAN) apresenta um efeito anti-hipertensivo sinérgico de longa duração, sendo considerada uma importante alternativa no tratamento e controle da hipertensão arterial. O presente trabalho faz referência à utilização de diversas técnicas instrumentais para avaliar a qualidade de DEL e MAN na forma farmacêutica e matérias-primas. Neste sentido, amostras de matérias-primas dos fármacos provenientes de diferentes fornecedores foram analisadas utilizando a calorimetria diferencial exploratória, termogravimetria, difração de raios X, espectrofotometria no infravermelho, espectroscopia Raman e microscopia eletrônica de varredura. Os resultados permitiram observar inconsistências entre as amostras de DEL, provavelmente devido à presença de uma impureza em uma das substâncias, demonstrando a importância da pesquisa e controle dos insumos farmacêuticos, bem como de programas de qualificação de fornecedores. Além disso, metodologias analíticas por espectrofotometria derivada, cromatografia líquida com detecção no ultravioleta (CL-UV) e CL acoplada à espectrometria de massas (EM) foram desenvolvidas objetivando a determinação de DEL e MAN nos comprimidos. Os procedimentos foram validados, cumprindo com os requisitos internacionalmente aceitos para especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez e limites de detecção e quantificação, além de demonstrarem diferença não significativa (p > 0,05) entre si na quantificação simultânea dos fármacos. A estabilidade dos fármacos nas condições alcalina e fotolítica (para o DEL e MAN, respecivamente) também foi investigada. Através dos métodos por CL-UV e CL-EM pode-se propor a identidade dos principais produtos de degradação formados, os quais não apresentaram evidências de citotoxicidade em estudo utilizando células mononucleares humanas. Além disso, os estudos de cinéticas de degradação indicaram que o DEL segue uma cinética de primeira ordem (R2 = 0,9991) enquanto o MAN segue uma reação de ordem zero (R2 = 0,9867). De forma adicional, foi desenvolvido e validado um método de dissolução para avaliação de comprimidos contendo DEL e MAN. O uso de tampão citrato pH 3,2 como meio de dissolução e dispositivo pá a 75 rpm demonstrou resultados satisfatórios para a avaliação da liberação simultânea dos fármacos do produto farmacêutico, bem como capacidade de simular o comportamento in vivo do MAN a partir de dados da literatura. Desse modo, estabeleceram-se procedimentos analíticos que podem ser aplicados para aprimorar o controle da qualidade dos medicamentos a serem comercializados, bem como contribuir para garantir a segurança e eficácia no uso terapêutico. / The association of delapril (DEL) and manidipine (MAN) has a synergic antihypertensive effect and may be regarded as an important alternative to arterial hypertension treatment. The present study refers to use of some instrumental techniques to assess the quality of DEL and MAN in pharmaceutical formulation and raw materials. In this context, samples of the drugs raw materials, obtained from different suppliers, were evaluated using differential scanning calorimetry, thermogravimety, X-ray powder diffraction, infrared spectroscopy, Raman spectroscopy and scanning electron microscopy. Inconsistent results were observed between DEL samples, probably due to an impurity presence in some substance, demonstrating the importance of research and control of pharmaceutical ingredients, as well as the quality programs of pharmaceuticals suppliers. In addition, a derivative spectrophotometric, liquid chromatography (LC) and LC coupled to mass spectrometry (MS) methods were developed for simultaneous analysis of DEL and MAN in commercial tablets. The procedures were validated and the results were in accordance with internationally accepted requirements by specificity, linearity, precision, accuracy, robustness and detection and quantitation limits. Therefore, the methods were successfully applied for the simultaneous quantitative analysis of DEL and MAN in the tablet dosage form, showing non-significant difference (p > 0.05). The drugs stability in alkaline and photolytic conditions (for DEL and MAN, respectively) was also investigated. The main degradation products formed were analyzed by LC-UV and LC-ESI-MS methods and its identity could be suggested, without isolation or purification processes. Additionally, the degradation kinetic of both drugs and the cytotoxicity of the degraded samples were also studied. No evidence of cytotoxicity in human mononuclear cells was observed for drugs degraded samples. Furthermore, the present study also conducted the development and validation of a dissolution method for DEL and MAN combination tablets. The use of citrate buffer pH 3.2 as dissolution medium in combination with paddle at rotation of 75 rpm, resulted in an appropriate dissolution profile of both drugs, allowing the simultaneous quality control of DEL and MAN in combination tablets, as well as the ability to simulate the in vivo behavior of MAN from literature data. Then, the established procedures can be applied to improve the quality control of the products that will be marketed, as well as to contribute for assure the safety and therapeutic efficacy of the drugs.

A determinaÃÃo dos nÃveis de nitratos e nitrogÃnio total (NT) em Ãguas constitui uma ferramenta importante no sentido de avaliar o controle de seus nÃveis para proteÃÃo da saÃde humana bem como para caracterizar a eutrofizaÃÃo dos corpos aquÃticos. O presente trabalho faz um estudo da espectrofotometria derivativa (ED) para determinaÃÃo de nitratos e NT pelo mÃtodo zero-pico por ED, em segunda derivada, no mÃximo de absorÃÃo do nitrato (225nm). Neste estudo foram avaliados os interferentes comumente encontrados nas matrizes onde a metodologia foi aplicada, que foram Ãguas minerais, Ãguas adicionadas de sais e Ãguas superficiais (aÃudes e rios): bicarbonato, carbonato, ferro, cobre, sulfato, cloreto, brometo, iodeto, fosfato, sulfato, nitrito e matÃria orgÃnica dissolvida (MOD). Esta metodologia foi aplicada na determinaÃÃo de nitratos em amostras Ãguas minerais, adicionada de sais e Ãguas de aÃudes monitorados pela COGERH, onde nesta Ãltima matriz foi determinado tambÃm NT. Os interferentes avaliados nÃo apresentaram interferÃncia na segunda derivada do nitrato dentro de limites aceitÃveis, com exceÃÃo dos Ãons nitrito e carbonato, onde foi necessÃrio a remoÃÃo destes pela adiÃÃo de uma soluÃÃo de Ãcido sulfÃmico com HCl. Segundo o teste t (student) pareado, para amostras de Ãguas minerais e adicionadas sais, que foram analisados os teores de nitratos tanto por ED quanto pelo mÃtodo da reduÃÃo em coluna de cÃdmio com posterior determinaÃÃo pelo mÃtodo da sulfanilamida, nÃo apresentaram diferenÃas significativas a um nÃvel de confianÃa de 95%. Para as amostras de Ãguas superficiais, a determinaÃÃo de nitratos por ED demonstrou nÃo ser aplicÃvel. JÃ determinaÃÃo de NT demonstrou-se promissora, porÃm, estudos preliminares sugerem que a MOD presente nas amostras dos aÃudes estudados apresenta interferÃncia espectral, uma vez que, tais aÃudes estudados apresentaram indÃcios de contaminaÃÃo de origem alÃctone, se encontrando, na maioria, eutrofizados. / The determination of the levels of nitrates and total nitrogen (TN) in water is an important tool to assess the control levels for the protection of human health as well as to characterize the eutrophication of water bodies. The present work is a study of derivative spectrophotometry (DS) for the determination of nitrate and TN zero-peak method for DS in the second derivative maximum absorption of nitrate (225nm). In this study we evaluated the interferences commonly found in matrices where the methodology was applied, which were mineral water, added salts and surface water (reservoirs and rivers): bicarbonate, carbonate, iron, copper, sulfate, chloride, bromide, iodide, phosphate, sulphate, nitrite and dissolved organic matter (DOM). This methodology was applied in the determination of nitrate in mineral water samples, added salt and water reservoirs monitored by COGERH where the latter matrix was also determined TN. The interfering evaluated showed no interference in the second derivative of nitrate within acceptable limits, with the exception of nitrite and carbonate ions, where it was necessary to remove these by adding a solution of sulfamic acid with HCl. According to the t test (student) paired samples of mineral waters and added salts, which were analyzed nitrate levels both DS as the method of cadmium reduction column with subsequent determination by the method of sulfanilamide, showed no significant differences a confidence level of 95%. For surface water samples, the determination of nitrates by DS proved not to be applicable. Determination of TN already proved to be promising, however preliminary studies suggest that the DOM present in the samples studied the reservoirs presents spectral interference, since such, dams studied showed signs of contamination of allochthonous origin, lying mostly eutrophic.

O fumarato de fesoterodina (FESO) é um potente fármaco antimuscarínico recentemente desenvolvido para o tratamento da síndrome da bexiga hiperativa, também conhecida como incontinência urinária. A análise de fármacos é necessária em todas as fases do desenvolvimento farmacêutico, como estabilidade e controle de qualidade dos produtos comercializados. Nenhum relato de determinação quantitativa e de estudos de estabilidade do fármaco em comprimidos foi encontrado na literatura. No presente trabalho, a caracterização da substância química de referência de FESO foi realizada por espectrometria de massas e ressonância magnética nuclear de hidrogênio. Métodos analíticos por espectrofotometria derivada, cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), eletroforese capilar e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas sequencial foram desenvolvidos para determinação qualitativa e quantitativa de FESO em comprimidos de liberação prolongada. Os procedimentos foram validados, avaliando-se os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez e limite de detecção e quantificação, cujos resultados cumpriram os requisitos preconizados. Os resultados obtidos através destes métodos foram comparados estatisticamente por ANOVA, que indicou não haver diferenças estatisticamente significativas entre os mesmos. A cinética de fotodegradação da FESO também foi avaliada utilizando o método por CLAE, na qual foi obtido um modelo de ordem zero. Um método por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas foi aplicado para análise de FESO e de seus produtos de degradação, possibilitando identificar os íons moleculares destes e propor a rota de fragmentação do fármaco. Além disso, desenvolveu-se e validou-se um método de dissolução de FESO em comprimidos. Através deste método, foi observado que a formulação possui uma cinética de dissolução de acordo com o modelo de Higuchi. Desse modo, estabeleceram-se procedimentos que podem ser aplicados para aprimorar o controle da qualidade dos medicamentos comercializados, bem como contribuir para garantir a segurança e eficácia no uso terapêutico. / Fesoterodine fumarate (FESO) is a potent antimuscarinic drug recently developed for the treatment of overactive bladder, a lower urinary tract disorder characterized by urinary urgency. The drug analysis is necessary in all steps of the pharmaceutical development, as stability and quality control tests of marketed products. The absence of the reports in the literature of quantitative determination and stability studies of the drug in pharmaceutical formulation were observed. In the present study, the characterization of the FESO reference substance was performed by mass spectrometry and proton nuclear magnetic resonance techniques. Analytical methods by derivative spectrophotometry, liquid chromatography (LC), capillary electrophoresis and liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry were developed for qualitative and quantitative determination of FESO in extended-release tablets. The procedures were validated, evaluating the parameters of specificity, linearity, precision, accuracy, robustness, and limit of detection and quantitation, whose results have met the requirements recommended. The results obtained through these analytical methods were compared by ANOVA, which showed no significant statistically difference between them. The photodegradation kinetic of FESO was also evaluated using the validated LC method, following the zero-order kinetics. A liquid chromatography coupled to mass spectrometry method was applied for analysis of FESO and its degradation products, enabling to identify the respective molecular ions and propose the drug photodegradation pathway. Besides, a dissolution method for FESO extended-release tablets was developed and validated. It method allowed to observe that the kinetics of drug release of the presented pharmaceutical formulation was better described by the Higuchi model. Then, the established procedures can be applied to improve the quality control of the commercialized pharmaceutical formulations, as well as to contribute for assure the safety and therapeutic efficacy of the drug.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T18:33:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CarlaMariaUggeriNegretto.pdf: 1746117 bytes, checksum: 50d675658fbe05428861169424e0b28b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T18:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CarlaMariaUggeriNegretto.pdf: 1746117 bytes, checksum: 50d675658fbe05428861169424e0b28b (MD5) Previous issue date: 2014-03-28 / Vitamin E is an important agent in the prevention of skin aging, which is associated with oxidative stress generated, mainly, by free radicals. It is considered a potent antioxidant, which acts protecting membranes against lipid peroxidation. As most of the antioxidants, vitamin E has low water solubility and high sensitivity to light, heat, and oxygen, representing a problem in the preparation of cosmetic formulations. The incorporation of this important antioxidant to a nanostructure is a promising system capable of protecting the drug against degradation and making the formulation stable and acceptable for cosmetic use. Among the various nanostructured systems, we can highlight the nanostructured lipid carriers (NLC), since they present occlusive adhesive properties increasing the bioavailability of the drug in the skin. In this context, various analytical methods can be used to determine and quantify nanostructured vitamin E. Among these methods, we highlight UV spectrophotometry and UV derivative spectrophotometry (UVD) because they have low cost, are easy to use, and are simple to read the results. It is also important to evaluate the antioxidant power of these nanostructures through assays such as the ferric-reducing antioxidant power (FRAP), which is considered a simple, reproducible and inexpensive assay. The objectives of this study were to characterize the vitamin E – loaded nanoestrutured lipid carriers (NCL-VITE), to develop and to validate methods using UV and UVD spectrophotometry for the quantitative determination of vitamin E in NLC, to compare the analytical methods, and to evaluate the antioxidant activity of vitamin E and NCL-VITE, using FRAP assay. The characterization of NCL-VITE samples showed particle size of 169.20 ± 1.01 nm, 0.11 ± 0.01 polydispersity index (PDI) and zeta potential -25.50 mV ± 3.84. The analytical parameters studied in the validation by UV and UVD spectrophotometry indicated specificity, linearity, precision, accuracy and robustness of both methods. Likewise, the antioxidant activity of vitamin E and NCL-VITE evaluated using the FRAP assay was considered acceptable. We can conclude that the NCL-VITE showed good homogeneity and average diameter in acceptable range. All these features enabled the sample to be used in the development and validation of the methods. The UV and UVD spectrophotometry were considered analytical methods that can be applied with safety and reliability in the determination of NCL-VITE. Moreover, the FRAP assay showed to be simple and with good reproduction regarding vitamin E and NCL-VITE. / A vitamina E representa um importante agente na prevenção do envelhecimento cutâneo que está associado ao estresse oxidativo gerado, principalmente, pelos radicais livres. É considerada um potente antioxidante, agindo como protetor das membranas contra a lipoperoxidação. Como grande parte dos antioxidantes, a vitamina E apresenta baixa solubilidade em água e elevada sensibilidade á luz, calor e oxigênio, fazendo de seu uso um problema na elaboração de formulações cosméticas. Com isso, a incorporação deste importante antioxidante a uma nanoestrutura representa um promissor sistema capaz de proteger o fármaco contra a degradação tornando a formulação estável e aceitável para o uso cosmético. Dentre os mais variados sistemas nanoestruturados destacam-se os transportadores lipídicos nanoestruturados (NLCs) por apresentarem, principalmente, propriedades adesivas e oclusivas aumentando assim, a biodisponibilidade do fármaco na pele. Dentro deste contexto, vários métodos analíticos podem ser utilizados para identificar e quantificar a vitamina E nanoestruturada, dentre eles a espectrofotometria ultravioleta (UV) e espectrofotometria ultravioleta derivada (UVD) que se destacam pelo custo baixo, fácil utilização e interpretação simples dos resultados. Evidencia-se também a importância da avaliação do poder antioxidante destas nanoestruturas através de ensaios como o FRAP (poder antioxidante por redução do ferro) considerado um ensaio simples, reprodutível e pouco dispendioso. Os objetivos deste estudo foram caracterizar as suspensões de NCLs contendo vitamina E (NVITE), desenvolver e validar métodos através da espectrofotometria UV e UVD para a determinação quantitativa de vitamina E nos NLCs, comparar os métodos analíticos e avaliar a atividade antioxidante da vitamina E e da NVITE através do ensaio FRAP. Como resultado da caracterização das amostras de NVITE, estas apresentaram tamanho de partícula de 169,20 nm ± 1,01, índice de polidispersão (PDI) 0,11 ± 0,01 e potencial zeta -25,50 mV ± 3,84. Os parâmetros analíticos estudados na validação por espectrofotometria UV e UVD indicaram especificidade, linearidade, precisão, exatidão e robustez de ambos os métodos. Da mesma forma, a capacidade antioxidante da vitamina E e da NVITE feita através do ensaio FRAP foi considerada satisfatória. Concluiu-se que a NVITE analisada apresentou boa homogeneidade e diâmetro médio em escala aceitável, sendo que todas estas características a capacitaram para o uso no desenvolvimento e validação dos métodos. A espectrofotometria UV e UVD foram consideradas métodos analíticos que podem ser aplicados com segurança e confiabilidade na determinação das NVITE e o ensaio FRAP demonstrou ser simples, e com boa reprodutibilidade no que se refere a vitamina E e a NVITE.

O cetoconazol é um derivado imidazólico com atividade antifúngica, empregado no tratamento de grande variedade de infecções cutâneas. O objetivo deste trabalho foi a padronização e a validação dos métodos analíticos empregando-se a espectrofotometria no ultravioleta ( UV ) por derivada de primeira ordem e a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para a determinação do cetoconazol em formulações farmacêuticas sob a forma de creme obtidas no comércio e formuladas em laboratório. O estudo da estabilidade física das formulações obtidas em laboratório foi realizado após o armazenamento sob diferentes condições de tempo, temperatura e umidade. O método espectrofotométrico no UV por derivada de primeira ordem foi padronizado a 257nm , no intervalo de concentração de 5,0 a 30,0 µg/mL em metanol. O coeficiente de correlação linear foi de 0,9997, o percentual de recuperação foi de 100,24%. A média do desvio padrão relativo foi de 0,56% para a amostra simulada e 0,41% para a amostra comercial. A determinação de cetoconazol por CLAE foi realizada empregando-se uma coluna LiChrospher® 100 RP- 18 ( 5µm ) e fase móvel constituída por uma mistura de trietilamina em metanol( 1:500 ) e solução de acetato de amônio em água (1:200 ) na proporção de 75 : 25 v/v, com vazão de 1,0 mL/min e detecção no UV a 225 nm. O terconazol foi utilizado como padrão interno. O coeficiente de correlação linear foi de 0,9981, o percentual de recuperação foi de 100,88%, a média do desvio padrão foi de 2,13% para a amostra simulada e 1,25% para a amostra comercial. A amostra simulada apresentou comportamento pseudoplástico e tixotropia em decorrência das medidas reológicas obtidas experimentalmente. / Ketoconazole is an imidazole antifungal agent used in the treatment of great variety of skin infectious diseases. The aim of this research was the standardization and the validation of two analytical methods, first derivative ultraviolet ( UV ) spectrophotometry and high performance liquid chromatography( HPLC ) to determine ketoconazole in commercial and simulated cream dosage forms preparations. The validated methods were used to study the stability of the simulated cream after storage under high temperatures and high percentage of humidity. First derivative UV spectrophotometry was standardized at 257 nm, in a range of concentration from 5.0 to 30.0 µg/mL in methanol. The coefficient of correlation was 0.9997 and the recovery average was 100.24%. The average relative standard deviation ( RSD ) was 0.56% for simulated preparation and 0.41 % for commercial preparation. The determination of ketoconazole by HPLC was performed using a LiChrospher® 100 RP-18(5µm ) column, a mobile phase consisting of triethylamine in methanol (1:500) and ammonium acetate solution in water(1:200 ) 75:25 ( v/v ), a flow rate of 1.0 mL/min and UV detection at 225nm. Terconazole was used as internal standard. The coefficient of correlation was 0.9981, the recovery average was 100.88%, the average relative standard deviation ( RSD ) was 2.13% for the simulated preparations and 1.25% for the commercial preparations. The rheological measurements showed that the simulated preparation presented pseudoplastic and thixotropic behavior.