En la República Argentina la apicultura tiene un alto valor social y económico y de esta actividad dependen numerosos productores, quienes destinan el producto al consumo interno y para exportación. Para conservar y mejorar la posición de Argentina en el comercio mundial de la miel, resulta indispensable satisfacer un mercado cada día más exigente, propiciado fundamentalmente por el surgimiento de normas y requisitos de calidad. Algunas de las metodologías utilizadas en el control de calidad de este producto son laboriosas, consumen tiempo y emplean gran cantidad de reactivos y muestra. Otras, emplean instrumentación de alto costo, no siempre disponible en laboratorios analíticos de rutina. Es por ello que surge la necesidad de implementar técnicas analíticas rápidas, simples, de bajo costo y que sean amigables con el medio ambiente para llevar a cabo el control de calidad de la miel. Éste es el principal objetivo de esta Tesis Doctoral, dando lugar a los siguientes trabajos: En una primera etapa se desarrolló un sistema automático Flow-Batch para la determinación de mercurio por espectroscopia de absorción atómica por vapor frío. El sistema propuesto es adecuado para la determinación de mercurio en las muestras de miel, reduciendo el tiempo de digestión de 2 h (método AOAC) a 16 min. Los resultados obtenidos por el método propuesto fueron validados utilizando el método de la AOAC, mostrando una buena concordancia entre ellos. En una segunda etapa se obtuvieron imágenes digitales de muestras de miel, utilizando como información analítica los histogramas correspondientes a los modelos de color RGB (rojo, verde y azul), escala de grises y HSB (matiz, saturación y brillo), dando lugar al desarrollo de dos trabajos. El primero de ellos, consistió en diseñar un sistema Flow-Batch para clasificar las muestras según su origen geográfico. Se emplearon histogramas de las imágenes y el Algoritmo de las Proyecciones Sucesivas (SPA), asociado con el Análisis Discriminante Lineal (LDA). Los datos obtenidos mostraron una separación de las muestras según su lugar de procedencia. El segundo trabajo consistió en la determinación de color mediante el análisis de imágenes digitales combinada con calibración multivariada. A partir de los histogramas generados y de los valores obtenidos con el colorímetro Pfund Koehler (método de referencia), se construyeron modelos de calibración empleando Mínimos Cuadrados Parciales (PLS). Los resultados obtenidos a partir de HSB y PLS, indican que el uso de imágenes digitales combinadas con calibración multivariada permite cuantificar el color en muestras de miel. En una tercera etapa, se desarrolló un método analítico, que no requiere pretratamiento de muestra, para la determinación simultánea de fructosa, glucosa y prolina en muestras de miel de Argentina y Suecia, mediante la técnica de Electroforesis Capilar. El método propuesto posibilita la determinación de los analitos en un tiempo menor a 5 min. Por otro lado es simple y permite reducir la cantidad de reactivos, muestra y la generación de residuos. / In Argentina, beekeeping has a high social and economic value and their products are used for domestic consumption and for export. The honey market in Argentina must ensure product quality. Some of the methodologies used in the quality control of these products are laborious, time consuming, employ large amount of reagents and high-cost instrumentation. Then, new analytical methods must be proposed. This is the main objective of this Thesis resulting to the following research: An automatic Flow-Batch system for cold vapor atomic absorption spectroscopy determination of mercury was developed. The proposed system is suitable for the determination of mercury in the honey samples, reducing digestion time from 2 h (AOAC method) to 16 min. The obtained results by the proposed method were validated using the AOAC method, showing good agreement. In a second stage digital images of honey samples were obtained. Using the corresponding histograms of the color models RGB (red, green and blue), grayscale and HSB (hue, saturation and brightness) two works were developed. In the first one a geographic origin classification of honey samples from Argentina was proposed. For this reason a Flow-Batch system was carried out. The histograms and the Successive Projections Algorithm (SPA), associated with the Linear Discriminant Analysis (LDA) were used. The obtained data showed a good classification of the samples according to their geographical origin. The second work was the determination of color by digital image analysis combined with multivariate calibration. From the histograms generated and the Pfund values (reference method), calibration models using Partial Least Squares (PLS) were constructed. The obtained results from HSB and PLS indicate that the use of digital images combined with multivariate calibration allows quantifying the color of honey samples. Finally, an analytical method which requires no sample pretreatment, for the simultaneous determination of fructose, glucose and proline in honey from Argentina and Sweden, using Capillary Electrophoresis was developed. The proposed method enables the determination of the analytes in approximately 5 minutes.

Para minimizar os efeitos danosos a pele causados pelas radiações ultravioleta (UV), novos produtos cosméticos contendo filtros solares tem sido desenvolvidos e estão disponíveis no comércio. Consequentemente é necessário o desenvolvimento e validação de métodos analíticos para determinação quantitativa desses filtros solares em produtos cosméticos. O objetivo desta pesquisa foi a determinação quantitativa e simultânea dos filtros solares químicos, tais como, benzofenona-3, metoxicinamato de octila e salicilato de octila contidos em preparações cosméticas, por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e espectrofotometria no UV/visível. Paralelamente foi determinado o FPS para as amostras utilizando a espectrofotometria no uv/visível. A separação e determinação quantitativa pelo método cromatográfico foi realizada usando uma coluna LiChrospher® 100 RP-18 (5µm), fase móvel constituída de metanol-água (85:15, v/v), com vazão de 1,0mL/min e detecção no UV a 310nm. Os coeficientes de correlação e percentuais de recuperação para benzofenona-3, metoxicinamato de octila e salicilato de octila foram de 0,9999 e98,9%; 0,9995 e 99,9%;0,9998 e 98,9%, respectivamente. A média do desvio padrão relativo foi de 0,6%. A determinação espectrofotométrica só foi possível quando os filtros em estudo estão de forma isolada nas preparações cosméticas. O método espectrofotométrico foi validado a 287nm, 310nm e 306nm para benzofenona-3, metoxicinamato de octila e salicilato de octila, respectivamente; os coeficientes de correlação foram de 0,9998; 0,9999; 0,9998, respectivamente. O percentual de recuperação para a amostra comercial contendo apenas metoxicinamato de octila foi de 99,6%. A média do desvio padrão relativo foi de 0,5%. O Fator de Proteção Solar (FPS) determinado pelo método espectrofotométrico, para as preparações comerciais, não correspondeu aos mesmos valores rotulados. / In order to minimize the damaging effects to the skin caused by the ultraviolet (UV) radiation, several cosmetic products containing sunscreens has been developed and are available commercially. Consequently, it is necessary to develop and validate an analytical method for quantitative determination of sunscreen agents in cosmetic products. The aim of this research was to develop a high performance liquid chromatographic and a UV / visible spectrophotometric quantitative method for simultaneous determination of chemical sunscreens benzophenone-3, octyl methoxycinnamate and octyl salicylate contained in cosmetic product. At the same time, the Sun Protection Factor (SPF) was determined for the samples using UV / visible spectrophotometry. The separation and quantitative determination was achieved using a LiChrospher® 100 RP-18 (5µm) column, a mobile phase constituted of methanol-water (85: 15, v/v), a flow-rate of 1.0 mL/min and UV detection at 310nm. The correlation coefficient and percentage of recovery for benzophenone-3, octyl methoxycinnamate and octyl salicylate were 0.9999 and 99.05%; 0.9995 and 100.55%; 0.9998 and 98.05%, respectively. The average relative standard deviation (RSD) was 0.6%. The spectrophotometric determination was possible only when the sunscreens studied were in an isolated form, in cosmetic preparations. The spectrophotometric method was validated at 287nm, 310nm and 306nm for benzophenone-3, octyl methoxycinnamate and octyl salicylate, respectively. The correlation coefficients were 0.9998, 0.9999 and 0.9998, respectively. The percentage of recovery for commercial sample containing only octyl methoxycinnamate was 99.6%. The average relative standard deviation (RSO) was 0.5%. The Sun Protection Factor (SPF) determined by the spectrophotometric method, in the commercial preparations, did not corresponded to the labeled values.

As estatinas são substâncias que inibem a síntese de colesterol. Por não existir métodos analíticos simples e de baixo custo para determinação quantitativa de pravastatina sódica, fluvastatina sódica, atorvastatina cálcica e rosuvastatina cálcica, o objetivo desta pesquisa foi desenvolver, validar e comparar os métodos por cromatografia líquida de alta eficiência e espectrofotometria direta e derivada no ultravioleta para a determinação quantitativa de estatinas em comprimidos. Os métodos cromatográficos foram realizados em coluna LiChrospher® RP-18 com fase móvel composta de metanol-água e pH ajustado a 3,0 com ácido fosfórico. Os métodos espectrofotométricos foram validados utilizando NaOH 0,1 M como solvente. A análise estatística com os testes t e F, não mostraram diferença significativa entre os métodos propostos ao nível de confiança de 95%. Os métodos são simples, eficientes e podem ser utilizados em análises de rotina para o controle de qualidade de estatinas em comprimidos. / The statins are substances that inhibit the synthesis of cholesterol. There is no simple and low cost analytical methods for quantitative determination of pravastatin sodium, fluvastatin sodium, atorvastatin calcium and rosuvastatin calcium; the objective of this research was to develop, to validate and to compare the methods as high performance liquid chromatography and ultraviolet direct and derivative spectrophotometry for quantitative determination of statins in tablets. The chromatographic methods were carried out with a LiChrospherB RP-18 column with a mobile phase composed of methanol-water and pH adjusted to 3.0 with phosphoric acid. The spectrophotometric methods were validated using NaOH 0.1 M as solvent. The statistical analysis using tests t and F, did not show significant difference between the methods considering the 95% confidence level. The methods are simple, efficient and can be used in routine analyses for quality control of statins in tablets.

As estatinas são substâncias que inibem a síntese de colesterol. Por não existir métodos analíticos simples e de baixo custo para determinação quantitativa de pravastatina sódica, fluvastatina sódica, atorvastatina cálcica e rosuvastatina cálcica, o objetivo desta pesquisa foi desenvolver, validar e comparar os métodos por cromatografia líquida de alta eficiência e espectrofotometria direta e derivada no ultravioleta para a determinação quantitativa de estatinas em comprimidos. Os métodos cromatográficos foram realizados em coluna LiChrospher® RP-18 com fase móvel composta de metanol-água e pH ajustado a 3,0 com ácido fosfórico. Os métodos espectrofotométricos foram validados utilizando NaOH 0,1 M como solvente. A análise estatística com os testes t e F, não mostraram diferença significativa entre os métodos propostos ao nível de confiança de 95%. Os métodos são simples, eficientes e podem ser utilizados em análises de rotina para o controle de qualidade de estatinas em comprimidos. / The statins are substances that inhibit the synthesis of cholesterol. There is no simple and low cost analytical methods for quantitative determination of pravastatin sodium, fluvastatin sodium, atorvastatin calcium and rosuvastatin calcium; the objective of this research was to develop, to validate and to compare the methods as high performance liquid chromatography and ultraviolet direct and derivative spectrophotometry for quantitative determination of statins in tablets. The chromatographic methods were carried out with a LiChrospherB RP-18 column with a mobile phase composed of methanol-water and pH adjusted to 3.0 with phosphoric acid. The spectrophotometric methods were validated using NaOH 0.1 M as solvent. The statistical analysis using tests t and F, did not show significant difference between the methods considering the 95% confidence level. The methods are simple, efficient and can be used in routine analyses for quality control of statins in tablets.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-06Bitstream added on 2014-06-13T20:40:26Z : No. of bitstreams: 1 moreno_ah_dr_arafcf.pdf: 734221 bytes, checksum: 23d30186e23eb1eee2cdbb3e636c93ab (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A ceftazidima é uma cefalosporina semi-sintética de terceira geração com grande atividade antibacteriana, muito usada no tratamento de infecções bacterianas freqüentes, incluindo espécies de Proteus e Pseudomonas aeruginosa e foi considerada fármaco de escolha para infecções graves causadas por espécies de Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Providencia, Serratia e Haemophylus. Entre elas, infecções biliares, ósseas e nas articulações, fibrose cística (infecções do trato respiratório), endoftalmites, infecções em pacientes imunodeprimidos (neutropênicos), meningite, peritonite, pneumonia, septicemia, infecções da pele (queimaduras e ulcerações) e infecções do trato urinário. As propriedades favoráveis da ceftazidima são penetração eficiente na parede celular bacteriana, resistência à degradação enzimática pelas bactérias, amplo espectro de atividade, toxicidade muito baixa, extensa penetração nos tecidos, estabilidade metabólica e baixa taxa de ligação a proteínas plasmáticas. A ceftazidima é de administração injetável como sal sódico ou em solução com arginina, sendo amplamente distribuída nos tecidos e fluidos; ela atravessa a placenta e é distribuída no leite materno. A penetração no humor aquoso do olho é relativamente boa após administração sistêmcia de ceftazidima. Há algumas evidências de que concentrações suficientes para terapia de infecções oculares causadas por microrganismos gram-positivos ou gram-negativos podem ser obtidas após administração sistêmica. Apesar de a ceftazidima ser bem estudada no que se refere à atividade terapêutica e comercialização, há somente um método oficial farmacopéico para sua quantificação por cromatografia líquida de lata eficiência. / Ceftazidime is a semisynthetic cephalosporin of the third generation with high antibacterial activity, widely used in the treatment of commonly-occurring bacterial infections, including indole-positive Proteus species and Pseudomonas aeruginosa and have been considered to be the drugs of choice for serious infections caused by Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Providencia, Serratia and Haemophylus species. They include biliarytract infections, bone and joint infections, cystic fibrosis (respiratory-tract infections), endophthalmitis, infections in immunocompromised patients (neutropenic patients), meningitis, peritonitis, pneumonia, septicaemia, skin infections (including burns, ulceration) and urinary-tract infections. The favorable properties of ceftazidime include efficient penetration of the bacterial cell wall, resistance to bacterial enzyme degradation, a broad spectrum of activity, very low toxicity, extensive tissue penetration, metabolic stability, and a low degree of serum protein binding. Ceftazidime is administrated by injection as the sodium salt or in solution with arginine and is widely distributed in body tissues and fluids; it crosses the placenta and is distributed into breast milk. Penetration into the aqueous humor of the eye is relatively good after systemic administration of ceftazidime. There is some evidence that concentrations sufficient for therapy of ocular infections due to gram-positive and certain gram-negative microorganisms can be achieved after systemic administration. Although ceftazidime has been studied in terms of therapeutic activity and commercialized, there is only one official pharmacopoeial monograph on its quantification by high performance liquid chromatography.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-15Bitstream added on 2014-06-13T20:13:55Z : No. of bitstreams: 1 hiene_mac_me_arafcf.pdf: 643028 bytes, checksum: 1c3d3d785a2c78ba4805dcf8f62218b6 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O azumoleno sódico é um fármaco desenvolvido para combater a hipertermia maligna, que é caracterizada por predisposição genética e desencadeada pelo uso de agentes anestésicos inalatórios em processos cirúrgicos podendo levar a óbito 70% dos enfermos. Este fármaco mostra-se como congênere do dantroleno sódico, e devido à sua solubilidade ser 30 vezes maior, apresenta vantagens durante seu uso emergencial. Por tratar-se de um novo fármaco, há poucos estudos relacionados às suas características físicoquímicas, impurezas e métodos de análises. Os objetivos são desenvolver e validar métodos analíticos eficazes na identificação e na quantificação de azumoleno sódico. A análise qualitativa foi realizada por análise térmica, espectrofotometria de absorção na região do ultravioleta, espectroscopia na região do infravermelho e espectrofotometria de absorção na região do visível com utilização de ácido cloranílico 0,1% como reagente, permitindo a identificação do azumoleno sódico. Os métodos de análise quantitativos desenvolvidos e validados envolveram: (i) espectrofotometria no UV, com comprimento de onda a 340 nm, que apresentou resposta linear entre a faixa de concentração de 7,0 e 12,0 Ng/mL, na qual foram analisados satisfatoriamente os parâmetros de precisão, exatidão, robustez, limite de detecção e limite de quantificação, com teor médio de 98,86% e CV de 0,62 %; (ii) espectrofotometria na região visível, com utilização de ácido cloranílico 0,1% como reagente e acetonitrila como solvente, com comprimento de onda a 507 nm e faixa de concentração linear de 8,0 a 13,0 Ng/mL, com avaliação dos parâmetros de precisão, exatidão, robustez, limite de detecção... / Azumolene sodium is a drug designed to fight malignant hyperthermia, which is characterized by genetic predisposition and triggered by the use of inhalational anesthetics in surgical procedures can lead to death 70% of patients. This drug is shown as a congener of dantroleno sodium, and due to its solubility is 30 times larger, has advantages for its emergency use. As this is a new drug, there are few studies related to their physical and chemical characteristics, impurities and methods of analysis. The objectives are to develop and validate analytical methods effective in the identification and quantification of azumolene sodium. Qualitative analysis was performed by thermal analysis, absorption spectrophotometry in ultraviolet and visible region using 0.1% chloranilic acid as reagent and spectroscopy infrared absorption, allowing the identification of azumolene sodium. The methods of analysis developed and validated involved: (i) UV spectrophotometry, with wavelength at 340 nm, which showed linear response the concentration range of 7.0 and 12.0 Ng/mL, which were analyzed satisfactorily the parameters of precision, accuracy, robustness, limit of detection and limit of quantitation, with percentage average of 98.86% and CV 0.62%, (ii) visible spectrophotometry, using 0.1% chloranilic acid reagent and acetonitrile as solvent, at 507 nm and linear concentration range from 8.0 to 13.0 mg/mL, with evaluation of precision, accuracy, robustness, limit of detection and limit of quantification, showed the percentage average of 98.15% and CV 0.66%, (iii) high performance liquid chromatography, which used reverse-phase column C18 and a mobile phase consisting of methanol: water... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:32:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6387_1.pdf: 760934 bytes, checksum: c4968eb5520a6771e0432db4f14e679b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Os fármacos nitroimidazóis atuam inibindo a síntese de DNA microbiano e atualmente o metronidazol é o fármaco de escolha desta classe. O ornidazol, derivado dos 5- nitroimidazólicos, apresenta vantagens terapêuticas em relação ao metronidazol, por apresentar um maior tempo de meia-vida, acarretando na redução da freqüência de dosagem e na duração do tratamento na maioria das infecções clínicas de maior relevância. O ornidazol pode ser sintetizado a partir de diferentes rotas sintéticas, podendo apresentar diferentes substâncias químicas correlacionadas (SQC) também conhecidas como impurezas. Este trabalho teve como objetivo a caracterização térmica do fármaco e o desenvolvimento e validação de métodos analíticos aplicados ao controle de qualidade da matéria-prima e forma farmacêutica comprimido revestido. Três matérias-primas de diferentes fornecedores foram analisadas por meio das técnicas espectrofotométricas, térmicas e cromatográficas. Desenvolveu-se e validou-se dois métodos analíticos quantitativos aplicados ao doseamento do ornidazol, sendo o primeiro um método analítico capaz de quantificar simultaneamente o ornidazol matéria-prima e a suas SQC por meio da Cromatografia Liquida de Alta Eficiência (CLAE) e o segundo destina-se a análise do produto final por meio da Espectrofotometria no Ultravioleta-Visível (ESPECTRO UV-VÍS). Um terceiro método analítico de performance foi desenvolvido e validado para a realização do teste de dissolução da forma farmacêutica. Por meio das técnicas termoanalíticas pôde-se comprovar a pureza das matérias-primas, investigar a cinética de degradação do fármaco ornidazol e realizar um estudo de compatibilidade entre o fármaco selecionado e excipientes consagrados na prática farmacêutica, por meio da caracterização térmica do fármaco, excipientes, misturas binárias e forma farmacêutica final. As matérias-primas dos três fornecedores apresentaram qualidade adequada e os métodos analíticos desenvolvidos e validados apresentaram resultados satisfatórios para todos os quesitos avaliados. Diante dos resultados alcançados, pode-se garantir a obtenção da forma farmacêutica comprimido revestido à base do fármaco ornidazol com qualidade e confiabilidade comprovadas, requisitos fundamentais no desenvolvimento de um medicamento segundo as Boas Práticas de Fabricação e Controle (BPFC), preconizados pelo órgão regulatório (ANVISA-MS)

Para minimizar os efeitos danosos a pele causados pelas radiações ultravioleta (UV), novos produtos cosméticos contendo filtros solares tem sido desenvolvidos e estão disponíveis no comércio. Consequentemente é necessário o desenvolvimento e validação de métodos analíticos para determinação quantitativa desses filtros solares em produtos cosméticos. O objetivo desta pesquisa foi a determinação quantitativa e simultânea dos filtros solares químicos, tais como, benzofenona-3, metoxicinamato de octila e salicilato de octila contidos em preparações cosméticas, por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e espectrofotometria no UV/visível. Paralelamente foi determinado o FPS para as amostras utilizando a espectrofotometria no uv/visível. A separação e determinação quantitativa pelo método cromatográfico foi realizada usando uma coluna LiChrospher® 100 RP-18 (5µm), fase móvel constituída de metanol-água (85:15, v/v), com vazão de 1,0mL/min e detecção no UV a 310nm. Os coeficientes de correlação e percentuais de recuperação para benzofenona-3, metoxicinamato de octila e salicilato de octila foram de 0,9999 e98,9%; 0,9995 e 99,9%;0,9998 e 98,9%, respectivamente. A média do desvio padrão relativo foi de 0,6%. A determinação espectrofotométrica só foi possível quando os filtros em estudo estão de forma isolada nas preparações cosméticas. O método espectrofotométrico foi validado a 287nm, 310nm e 306nm para benzofenona-3, metoxicinamato de octila e salicilato de octila, respectivamente; os coeficientes de correlação foram de 0,9998; 0,9999; 0,9998, respectivamente. O percentual de recuperação para a amostra comercial contendo apenas metoxicinamato de octila foi de 99,6%. A média do desvio padrão relativo foi de 0,5%. O Fator de Proteção Solar (FPS) determinado pelo método espectrofotométrico, para as preparações comerciais, não correspondeu aos mesmos valores rotulados. / In order to minimize the damaging effects to the skin caused by the ultraviolet (UV) radiation, several cosmetic products containing sunscreens has been developed and are available commercially. Consequently, it is necessary to develop and validate an analytical method for quantitative determination of sunscreen agents in cosmetic products. The aim of this research was to develop a high performance liquid chromatographic and a UV / visible spectrophotometric quantitative method for simultaneous determination of chemical sunscreens benzophenone-3, octyl methoxycinnamate and octyl salicylate contained in cosmetic product. At the same time, the Sun Protection Factor (SPF) was determined for the samples using UV / visible spectrophotometry. The separation and quantitative determination was achieved using a LiChrospher® 100 RP-18 (5µm) column, a mobile phase constituted of methanol-water (85: 15, v/v), a flow-rate of 1.0 mL/min and UV detection at 310nm. The correlation coefficient and percentage of recovery for benzophenone-3, octyl methoxycinnamate and octyl salicylate were 0.9999 and 99.05%; 0.9995 and 100.55%; 0.9998 and 98.05%, respectively. The average relative standard deviation (RSD) was 0.6%. The spectrophotometric determination was possible only when the sunscreens studied were in an isolated form, in cosmetic preparations. The spectrophotometric method was validated at 287nm, 310nm and 306nm for benzophenone-3, octyl methoxycinnamate and octyl salicylate, respectively. The correlation coefficients were 0.9998, 0.9999 and 0.9998, respectively. The percentage of recovery for commercial sample containing only octyl methoxycinnamate was 99.6%. The average relative standard deviation (RSO) was 0.5%. The Sun Protection Factor (SPF) determined by the spectrophotometric method, in the commercial preparations, did not corresponded to the labeled values.

As copaíferas fazem parte de um importante gênero de plantas que produzem um exsudato denominado como oleorresina, que é constituído por uma mistura de sesquiterpenos e diterpenos ácidos. A medicina popular utiliza a oleorresina de diferentes espécies de Copaifera com diversas indicações, tais como: ação anti-inflamatória, antimicrobiana, cicatrizante, antitumoral, entre outras. Desta forma, numerosos pesquisadores têm investigado a composição química e as atividades biológicas e toxicológicas deste produto natural, a fim de reconhecer os benefícios e a segurança deste produto. Todavia, estudos da composição química e das atividades biológicas dos constituintes das folhas são escassos. Assim, neste projeto buscou-se investigar a composição química de diferentes extratos de folhas e de oleorresinas de copaíferas coletadas na flora brasileira, bem como produtos comerciais (óleo de copaíba) propondo e aplicando métodos analíticos em cromatografia para determinação dos principais constituintes das amostras. Dez amostras de folhas e oleorresinas autênticas de diferentes espécies foram coletadas no norte e sudeste do Brasil (C. langsdorffi Desf., C. duckei Dwyer, C. reticulata Ducke, C. multijuga Hayne, C. paupera (Herzog) Dwyer, C. pubiflora Benth, C. lucens Dwyer, C. oblogifolia Mart, C. trapezifolia Hayne, e Copaifera sp.) e mais seis amostras comerciais foram adquiridas. Os compostos voláteis foram separados da oleorresina bruta utilizando-se o aparelho de Clevenger. Os padrões cromatográficos foram isolados utilizando-se diferemntes modalidades cromatográficas. As oleorresinas de C. multijulga e C. langsdorffii apresentaram os maiores teores de óleo volátil das amostras com 92 e 72%, respectivamente. Três diterpenos foram isolados da oleorresina de C. duckei: os ácidos ent-poliáltico, ent-diidroagático e ent-agático-15-metil éster. Uma análise qualitativa foi otimizada usando microextração em fase sólida seguido de análise em CG-EM, a qual revelou a presença em comum do ?-copaeno, ?-elemeno, ?-cariofileno e ?-bergamoteno em todas as amostras de oleorresina analisadas. Dois métodos analíticos utilizando CLUE-EM/EM e CG-DIC foram desenvolvidos, otimizados e validados para análise de nove diterpenos ácidos e quatro sesquiterpenos, os quais apresentaram adequada seletividade/especificidade, faixa de trabalho, limite de detecção, limite de quantificação, precisão e exatidão. Todavia, em ambos os métodos há necessidade de controle rigoroso das condições analíticas dos sistemas cromatográficos. Os resultados obtidos aplicando os dois métodos indicaram a presença frequente do ?-cariofileno e dos ácidos ent-copálico e ent-caurenoico como as substâncias mais encontradas em oleorresinas de copaíferas autênticas e comerciais. A análise qualitativa empregando CLUE-EM indicou a presença dos ácidos di-O-metil-3,5-di-O-galoilquínico (AGQ-8), 5\',5\'\'-di-O-metil-4,5-di-O-galoilquínico (AGQ-9), 5\',5\'\',5\'\'\'-tri-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico (AGQ-16), afzelina e quercitrina nos extratos das folhas de nove amostras de copaíferas. Os métodos analíticos desenvolvidos são confiáveis para as análises dos componentes fixos e voláteis e os resultados obtidos neste trabalho confirmam a variabilidade da composição química das oleorresinas desse gênero vegetal. / Copaifera plants are part of an important genus that produces an exsudate called oleoresin, which consists of a mixture of sesquiterpenes and acid diterpenes. Folk medicine uses the oleoresin of different Copaifera species for different health problems, such as: anti-inflammatory, antimicrobial, wound healing and antitumor, among others. Thus, numerous researchers have investigated the chemical composition, biological and toxicological activities of this natural product in order to recognize its benefits and safety. However, investigation of chemical composition and biological activities of leaf contituents are scarce. In this project we aimed to investigate the chemical composition of different leaf extracts and Copaifera oleoresins collected in the Brazilian flora and acquired in the market (copaíba oil) by proposing and applying chromatographic analytical methods to determine their main constituents. Ten samples of leaves and authentic oleoresins of different species were collected in northern and southeastern parts of Brazil (C. langsdorffi Desf., C. duckei Dwyer, C. reticulata Ducke, C. multijuga Hayne, C. paupera (Herzog) Dwyer, C. pubiflora Benth, C. lucens Dwyer, C. oblogifolia Mart, C. trapezifolia Hayne, e Copaifera sp.) and six commercial samples were purchased. The volatile fraction of the crude oleoresin was obtained by using Clevenger apparatus, and the chromatographic standards were isolated by using different chromatographic techniques. The oleoresins of C. langsdorffii and C. multijuga displayed the highest volatile oil contents. Three diterpenes were isolated from C. duckei oleoresin: ent-polialthic, ent-dihydroagathic and ent-agathic-15-metil ester acids. A qualitative analysis was optimized using solid phase micro-extraction followed by GC-MS analysis, which revealed the presence of ?-copaene, ?-elemene, ?-caryophyllene and ?-bergamotene in all investigated oleoresins. Two analytical methods using UPLC-MS/MS and GC-FID were developed, optimized and validated for the analysis of nine acid diterpenes and four sesquiterpenes, which gave adequate selectivity/specificity, range, limit of detection, limit of quantification, precision and accuracy. However, in both methods there is a need for rigorous control of the analytical conditions. The results generated by the two methods indicated the frequent presence of ?-caryophyllene, ent-copalic and ent-kaurenoic acids as the compounds frequently found in authentic and commercial Copaifera oleoresins. Qualitative analysis of leaf extracts using UPLC-MS/MS indicated the presence of 5\',5\'\'-di-O-methyl-3,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-8), 5\',5\'\'-di-O-methyl-4,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-9), 5\',5\'\',5\'\'\'-tri-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid (GQA-16), afzelin and quercetrin in all studied species. The analytical developed methods are reliable for the analyses of both fixed and volatile compounds of the oleoresins. The obtained results confirm the variability among the composition of the Copaifera oleoresins.

A síndrome da imunodeficiência adquirida é causada pelo vírus da imunodeficiência humana e é caracterizada por provocar depleção física e funcional do sistema imune do organismo, através da infecção citopática de células CD4+. Muitos fármacos anti-retrovirais tem sido desenvolvidos e estão disponíveis comercialmente. Para atuar no controle de qualidade de medicamentos deve-se continuamente estudar o desenvolvimento e a validação de novas metodologias para quantificação de fármacos, para serem aplicadas nos estudos de estabilidade de formulações farmacêuticas e na análise de produtos de degradação. Neste trabalho foram utilizadas duas técnicas analíticas, a espectrofotometria direta no UV/VIS e a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), para a determinação quantitativa de zidovudina (AZT) e estavudina (d4T).em medicamentos. Ambos os métodos foram validados com relação à linearidade, exatidão, precisão, especificidade e limite de detecção e quantificação. O método validado para a CLAE foi também empregado para a determinação quantitativa da timina, produto de degradação do AZT e da d4T. A metodologia validada por CLAE foi utilizada na realização de estudos de estabilidade acelerada dos anti-retrovirais contidos nas diferentes preparações farmacêuticas. Realizou-se o estudo da estabilidade em três diferentes condições: temperatura ambiente, 40 oC / 75% UR e 50 oC / 90% UR. Tanto a zidovudina (Fabricante A) e estavudina (Fabricante B) apresentaram decaimento cinético de zero ordem com prazos de validade a 50 oC / 90% UR de 10, 3 e 2 meses, respectivamente. / The acquired immunodeficiency syndrome is characterized by causing physical and functional depletion of the organism’s immune system, through the cytophatic infection of CD4+ cells. Several antiretroviral drugs has been developed and commercially made available. In order to assure the quality control of drugs it is necessary to develop and validate new analytical methodologies to perform the quantitative determination of drugs and stability studies of pharmaceutical formulations by determining the drug itself and its degradation products. In this research two analytical techniques, direct UV/VIS spectrophotometry and high performance liquid chromatography (HPLC), were used for the quantitative determination of zidovudine (AZT) and stavudine (d4T) in pharmaceutical preparations. Both methods were validated and parameters like linearity, precision, accuracy, specificity, limit of detection and limit of quantification, were determined. The validated HPLC method was also applied for quantitative determination of timine, a degradation product of AZT and d4T. The validated HPLC method was applied to accelerate stability studies of AZT and d4T in different pharmaceutical preparations. The stability studies were performed at three different conditions: room temperature, 40 oC / 75% RH and 50 oC / 90% RH. Both AZT and d4T (Industry A) and d4T (Industry B) pharmaceutical preparations presented a zero order degradation reaction. The three formulations presented a shelf-life of 10, 3 and 2 months, respectively, at 50 oC / 90% RH.