A Copaifera (Fabaceae, Caesalpinioideae), conhecida popularmente como \"copaíba\", \"copaibeira\" ou \"pau d\'óleo\", é uma árvore de grande porte que se encontra amplamente distribuída pelo Brasil, desde a floresta amazônica até a vegetação do cerrado. A oleorresina é constituída principalmente por sesquiterpenos e diterpenos, sendo utilizada na medicina popular no tratamento de processos infecciosos e inflamatórios. Os hidrocarbonetos sesquiterpênicos constituem cerca de 80% das oleorresinas representando uma fração de grande importância. Estudos sobre métodos analíticos capazes de quantificar os voláteis na oleorresina ainda são escassos. Sendo assim, foi proposto desenvolver e validar método analítico por cromatografia gasosa com detector por ionização de chama (DIC) para análise de compostos voláteis presentes nas oleorresinas e folhas de Copaifera sp. e avaliação da atividade antimicrobiana dos compostos voláteis em mistura e isolados. Para tanto, os óleos voláteis foram obtidos por meio da hidrodestilação das oleorresinas das espécies Copaifera langsdorffii Desff; C. duckey Dewer; C. multijuga Hayne; C. paupera (Herzog) Dewer; C. reticulata Ducke e C. publifora Benth. Os óleos voláteis de C. multijuga, C. paupera e C. publifora foram submetidos ao destilador de bancada (800 Automatic Micro Spinning Band Distillation) visando o fracionamento dos compostos voláteis majoritários. Os compostos foram purificados por meio de cromatografia em coluna aberta utilizando-se sílica gel e identificados por CG/EM e por RMN 1H e 13C. Foram isolados os sesquiterpenos ?-copaeno, ?-elemeno, ?-cadineno, ?-cariofileno, ?-humuleno e O-cariofileno. O método analítico foi avaliado frente aos parâmetros seletividade, linearidade, precisão, exatidão e robustez e mostrou-se adequado para quantificação dos sesquiterpenos nas oleoresinas das diferentes espécies de Copaifera estudadas. O método analítico também foi utilizado no estudo de sazonalidade, que foi realizado nas folhas de C. langsdorffi, com o qual foi possível identificar três constituintes sesquiterpênicos, sendo eles ?-cariofileno, germacreno D e ?-elemeno, sendo que o germacreno D apresentou o maior teor. Na análise sazonal desses compostos o germacreno D foi o composto que mais variou durante o período estudado com variação de até 63%. Foi avaliado também o potencial antimicrobiano dos sesquiterpenos isolados e das oleoresinas. Os óleos voláteis de C. paupera, C. duckey, C. langsdorffii apresentaram baixa e moderada atividade contra S. aureus, apresentando efeito bactericida nas concentrações de 500, 500, 125 ?g/mL, respectivamente. Os mesmos óleos voláteis apresentaram efeito semelhante frente às linhagens de S. choleraesuis, mas apenas com efeito bacteriostático. Os óleos voláteis de C. duckey e C. langsdorffii apresentaram alta atividade contra C. glabrata, C. tropicalis, C. krusei. Nenhum dos constituintes sesquiterpênicos isolados foi ativo frente às bactérias e leveduras pois apresentaram atividade em uma concentração maior do que 400 ?g/mL. / Copaifera (Fabaceae, Caesalpinioideae), popularly known as \"copaiba\", \"copaibeira\" or \"pau d\'óleo \", is a large tree that is widely distributed throughout Brazil, from the Amazon forest to the vegetation of the cerrado. Its Oleoresin is composed mainly of sesquiterpenes and diterpenes, and it is used in folk medicine in the treatment of infectious and inflammatory disorders. Sesquiterpene hydrocarbons constitute approximately 80% of the oleoresins, representing an oleoresin fraction of great importance. Studies on analytical methods capable of quantifying volatiles in oleoresin are still scarce. Thus, it was proposed to develop and validate an analytical method by gas chromatography with flame ionization detector (FID) for the analysis of volatile compounds present in the oleoresins and leaves of Copaifera sp. and evaluation of the antimicrobial activity of volatile compounds in mixture and isolated. For this purpose, the volatile oils were obtained by hydrodistillation of the oleoresins of Copaifera langsdorffii Desff; C. duckey Dewer; C. multijuga Hayne; C. paupera (Herzog) Dewer; C. reticulata Ducke and C. Publifora Benth. The volatile oils of C. multijuga, C. paupera and C. publifora were submitted to the automatic distiller (800 Automatic Micro Spinning Band Distillation) for the fractionation of the major volatile compounds. The compounds were isolated by means of open column chromatography loaded with silica gel and were identified by GC/MS and by 1H and 13C NMR. The sesquiterpenes ?-cubebene, ?-elemene, ?-cadinene, ?-caryophyllene, ?-humulene and O-caryophyllene were isolated. The analytical method was evaluated for selectivity, linearity, precision, accuracy and robustness parameters and was adequate for quantification of the sesquiterpenes in the oleoresins of the different Copaifera species studied. The analytical method was also used in the seasonality study, which was performed on the leaves of C. langsdorffii, allowing to identify three sesquiterpene constituents, being ?-caryophyllene, ?-elemene, and germacrene D wich present in higher contents. In the seasonal analysis of these compounds, germacrene D was the compound that most varied during the evaluated period with variation up to 63%. The antimicrobial potential of isolated sesquiterpenes and oleoresins were also evaluated. The volatiles oils of C. paupera, C. duckey and C. langsdorffii presented low and moderate activity against S. aureus, showing bactericidal effect at concentrations of 500, 500, 125 ?g/mL, respectively. The same volatile oils had a similar effect against S. choleraesuis strains, but only with a bacteriostatic effect. The volatile oils of C. duckey and C. langsdorffi showed high activity against C. glabrata, C. tropicalis and C. krusei. None of the isolated sesquiterpene constituents was active against bacteria and yeasts because they presented activity at a concentration higher than 400 ?g / mL

Orientador: Cláudia Helena Pellizzon / Resumo: A pele é fundamental para manter a integridade do organismo e a descontinuidade desse sistema promove o mecanismo cicatricial, processo fisiológico que pode ser dividido em fase inflamatória, proliferativa e de remodelamento. As lesões cutâneas têm grande importância no investimento de recursos públicos devido à possibilidade de algum tipo de deficiência física ou até mesmo levar à morte. A Copaifera langsdorffii Desf. (Leguminosae) é uma árvore que, segundo conhecimento popular, apresenta atividades anti-inflamatória, antimicrobiana e de cicatrização de feridas. Sendo assim, o projeto teve por objetivo investigar o potencial cicatrizante dos cremes à base de extrato hidroalcoólico das folhas (10% EH) ou óleo-resina das cascas (10% OR) de Copaifera langsdorffii em feridas cutâneas de ratos e os mecanismos envolvidos. Ratos Wistar machos foram randomicamente divididos em quatro grupos experimentais (n = 8): creme base lanette (controle negativo - veículo), creme Collagenase 1.2 UI (controle positivo), cremes 10% EH ou 10% OR. Os animais foram submetidos à anestesia e indução da lesão dorsal de 2 cm de diâmetro. As lesões foram tratadas uma vez por dia e tiveram a área medida durante 3, 7 e 14 dias. Após a eutanásia, a região da ferida foi destinada a análises moleculares, histológicas, imunohistoquímicas e determinação de atividade anti-inflamatória local. Nossos resultados mostram o potencial cicatricial dos tratamentos 10% EH e 10% OR, com a significativa retração das lesões... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The skin is fundamental to maintain the integrity of the body and the disruption of this system promotes the wound healing mechanism, physiological process that can be divided into inflammatory, proliferative and remodeling phases. The skin wounds have great importance in the investment of public resources due to the possibility of some type of physical disability or even death. The Copaifera langsdorffii Desf. (Leguminosae) is a tree that, according to popular knowledge, has anti-inflammatory, antimicrobial and wound healing activities. Therefore, the aim of this study was to investigate the healing potential of the ointments containing hydroalcoholic extracts of the leaves (10% EH) or oleoresin of the bark (10% OR) of Copaifera langsdorffii in cutaneous wounds of rats and the mechanisms involved. Male Wistar rats were randomly divided into four experimental groups (n = 8): lanette ointment (negative control - vehicle), Collagenase 1.2 IU ointment (positive control), 10% EH or 10% OR ointments. The animals were submitted to anesthesia and induction of the dorsal lesion of 2 cm in diameter. The lesions were treated once a day and had their areas measured for 3, 7 and 14 days. After euthanasia, the wounds were assigned to molecular, histological, immunohistochemical analysis and determination of the local anti-inflammatory activity. Our results show the healing potential of treatments 10% EH and 10% OR, with significant retraction of the wounds compared to the Lanette group. T... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

The oil-resin of C. langsdorffii is produced within the secretory structures, whose anatomical studies are rare, especially at different stages of plant development. It is a species with normal initial growth, but it is slow in the subsequent phase. Are few studies on the chemical composition of intra-specific essential oil in different plant organs. The aim of this study was to characterize the anatomy of secretory elements in vegetative organs at different stages of development and environment, test the effects of heat stress and intensity and light quality on young plants, and analyze the content and perform identification of chemical constituents of essential oil in different organs of the adult plant. The anatomical study was performed using the native plant material on the campus of UFLA, Lavras-MG and was sued by light microscopy and electron. After thirty days of the onset of germination, the young plants firom seeds were acclimatized in two experiments: under bine mesh, red and black (50%), black (70%) and full sun, the second experiment was conducted in chambers BODs temperatures: 15 ° C, 25 ° C, 35 ° C, and the witness, who remained in the greenhouse (29 C). Samples of leaf, stem, pericarp and seeds were cut, packed and stored at -20 ° C freezer for subsequent extraction of essential oil by hydrodistillation in Clevenger. We measured the essential oil content in 240 samples of leaves, stems and pericarps, each organ was analyzed in five different specimens and four different times of hydrodistillation. The chemical composition was identified by gas chromatography / mass spectrometry firom five samples of leaves, stems and pericarps and four samples of seeds. The essential oil accumulates in secretory cavities in leaves, and secretory ducts in the stem of juvenile and adult plants. In both experiments under different environments, it was found variations in stomatal density, thickness of mesophyll leaf arca and dry biomass production, for the seedlings grown under mesh red and bine for the young plants under 25 ° C, which became stronger, with better conditions morphoanatomical in vegetative organs, structures and leaves. There was significant variation in leveis of essential oil firom organs and specimens, the highest yield observed in the pericarp, followed by leaves and stems. 5-elemene, a-copaenee, (l-cubcbcnc. ciperene, (l-caryophyillcnc. coumarin, germacrene D, viridiflorene, bicyclogermacrene, 5-cadinene, spathulenol, caryophyllene óxide, epóxide of humulene II, /.vo-spatluilcnol. y/v-a-muurolol. a-muurolol, a-cadinol e (2E, 6/•.')- famesoato de metila. A significant intraspecific variation and a greater similarity between the chemical constituents ofleaves and stems. / O óleo-resina de C. langsdorffn é produzido no interior de estruturas secretoras, cujos estudos anatômicos são raros, sobretudo em diferentes fases de desenvolvimento da planta. E uma espécie com crescimento inicial normal, porém, ele toma-se lento na fase subsequente. São escassos os estudos sobre a composição química intraespecífica do óleo essencial nos diferentes órgãos da planta. Este trabalho foi realizado com os objetivos de caracterizar a anatomia dos elementos secretores nos órgãos vegetativos, em diferentes ambiente e fases de desenvolvimento; testar os efeitos do estresse térmico e a intensidade e a qualidade de luz sobre as plantas jovens e, ainda, analisar o teor e realizar a identificação dos constituintes químicos do óleo essencial nos diferentes órgãos da planta adulta. O estudo anatômico foi realizado a partir do material botânico nativo do campus da UFLA, em Lavras, MG e foi processado em microscopia fotônica e eletrônica. Após trinta dias do início da germinação, as plantas jovens provenientes de sementes foram aclimatizadas em dois experimentos. No primeiro, sob malhas azul, vermelha e preta (50%), preta (70%) e pleno sol; no segundo experimento, em câmaras BOD, nas temperaturas de 15°C, 25°C, 35°C e a testemunha, que permaneceu em casa de vegetação (290C). As amostras de folha, caule, pericarpos e sementes foram reduzidas, acondicionadas e armazenadas em freezer, a -20oC, para posterior extração do óleo essencial por hidrodestilação em Clevenger. Foi medido o teor de óleo essencial em 240 amostras das folhas, caules e pericarpos. Cada órgão foi analisado em cinco diferentes espécimes e em quatro diferentes tempos de hidrodestilação. A composição química foi identificada por cromatografia em fase gasosa/espectrometria de massas, a partir de cinco mostras das folhas, caules e pericarpos e quatro amostras das sementes. O óleo essencial acumula-se em cavidades secretoras nas folhas e em duetos secretores no caule das plantas jovens e adultas. Nos dois experimentos, sob diferentes ambientes, constataramse variações na densidade estomática, na espessura do mesofilo, na área foliar e na produção de biomassa seca, para as mudas cultivadas sob malhas vermelha e azul e para as plantas jovens submetidas a 250C, que se tomaram mais vigorosas,com melhores condições morfoanatômicas nos órgãos vegetativos, estruturas e tecidos foliares. Ocorreu significativa variação nos teores de óleo essencial entre os órgãos e os espécimes, tendo o maior rendimento sido observado nos pericarpos, seguido das folhas e dos caules. Os compostos majoritários encontrados em todos os espécimes e órgãos avaliados foram 5-elemeno, acopaeno, (l-cubcbcno. cipereno, (l-cariofilcno. cumarina, germacreno D, viridifloreno, biciclogermacreno, 5-cadineno, espatulenol, óxido de cariofileno, epóxido de humuleno II, No-espatulenol, e/u-a-muurolol, a-muurolol, a-cadinol e (1E, ó/O-Tarncsoato de metila. Houve significativa variação intraespecífica e maior similaridade entre os constituintes químicos das folhas e dos caules. Palavras-chave: Caracterização anatômica. Aclimatização. Óleo essencial. Constituintes voláteis. C. langsdorffii.

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No. of bitstreams: 1 Tese - Ana Paula Meneses Rodrigues Bastos.pdf: 7482245 bytes, checksum: 53c78d7c961001851193f9c1a2562e55 (MD5) Previous issue date: 2011-09-28 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Adult plants Copaifera genus are known to have one of the resin oils most commonly used in folk medicine, which credited to several pharmacological and cosmetic properties. In plant oil resin produced in secondary xylem, is used for its defense against various internal agents and external. In this paper we analyzed the essential oil extracted in young plants Copaifera Hayne multijuga in order to confirm the presence of coding sequences enzymes responsible for synthesis of oil and to generate a cDNA library. To the oil extraction was used the technique of steam distillation in Clevenger apparatus modified and then the spectrophotometric analysis of masses for classification of sesquiterpene compounds (essential oil). In chromatographic analysis allowed identification of various compounds present in both the young plant as the plant the adult Copaifera gender, such as ß-caryophyllene, α-copaene, D germacrene, α- humulene, δ-cadineno, γ-elemene, α-cubebeno and α-bergamotene etc. Minority studied. In one approach we used immunohistochemistry methods microscopic to locate secretory canals of the plant, where slides were prepared using semi-automated microtome, stained blue solution toluidine reagent and NADI. After these analyzes, proved the presence of these secretory ducts in young leaves, a cDNA library was constructed, utilizandose as a source of mRNA similar biological material (young leaves of C. multijuga), and subsequently their nucleotides sequenced by pirosenquenciamento the which was analyzed by computational biology, using programs prioritized biosynthesis of terpenes and sesquiterpenes, where their coding sequences enzymes were found, showing engagement of the mRNA in the oil construction not essential in adult plants of this species. Using techniques chromatography to identify phytochemicals compounds, together with methods histological and then the sequencing of genes expressed in young leaves and therefore the secretory oil rosin, allow confirmation of the biosynthesis various substances present in this oil as well as their metabolic pathways. Those Data are presented for the first time together, believing that they can helping to open new frontiers in research and development biotechnologies based upon its results. / As plantas adultas do gênero Copaifera são conhecidas por possuírem um dos óleos resina mais utilizados na medicina popular, ao qual creditam-se diversas propriedades farmacológicas e cosméticas. Na planta, o óleo resina, produzido no xilema secundário, é utilizado para sua defesa contra diversos agentes internos e externos. Neste trabalho analisou-se o óleo essencial extraído em plantas jovens de Copaifera multijuga Hayne, a fim de confirmar a presença de seqüências codificadoras de enzimas responsáveis pela síntese do óleo e gerar uma biblioteca de cDNA. Para a extração do óleo foi usada a técnica de arraste a vapor em aparelho de clevenger modificado e a seguir a análise espectrofotométrica de massas para classificação dos compostos sesquiterpênicos (óleo essencial). Na análise cromatográfica permitiu a identificação de vários compostos presentes tanto na planta jovem quanto na planta adulta do gênero Copaifera, como: ß-cariofileno, α-copaeno, D germacreno, α- humuleno, δ-cadineno, γ-elemeno, α-cubebeno e α-bergamoteno entre outros minoritários estudados. Numa abordagem histoquímica utilizou-se métodos microscópicos para localizar canais secretores da planta, onde lâminas foram preparadas utilizando o micrótomo semi-automático, coradas em solução de azul de toluidina e em reagente de NADI. Após estas análises, comprovada a presença desses ductos secretores em folhas jovens, foi construída uma biblioteca de cDNA, utilizandose como fonte de mRNA material biológico similar (folhas jovens de C. multijuga), sendo posteriormente seqüenciado seus nucleotídeos por meio de pirosenquenciamento, o qual foi analisado por biologia computacional, utilizando-se programas que priorizaram a biossíntese dos terpenos e sesquiterpenos, onde suas seqüências codificadoras de enzimas foram encontradas, mostrando envolvimento do mRNA na construção do óleo essencial em plantas não adultas desta espécie. A utilização de técnicas cromatográficas para identificação de compostos fitoquímicos, aliadas a métodos histológicos e posteriormente ao seqüenciamento de genes expressos de folhas jovens e, portanto secretoras de óleo resina, permitiram a confirmação da biossíntese de diversas substâncias presentes nesse óleo, bem como suas rotas metabólicas. Esses dados são apresentados pela primeira vez conjuntamente, acreditando-se que possam contribuir para a abertura de novas fronteiras na pesquisa e no desenvolvimento de biotecnologias baseadas em seus resultados.

Copaifera langsdorffii Desf., popularmente conhecida como \"copaíba\", distribui-se abundantemente no cerrado brasileiro, sendo que diversas atividades biológicas já foram descritas na literatura para o seu oleorresina. Contudo, nos últimos anos, nosso grupo de pesquisa vem estudando as partes aéreas desta espécie e verificou-se que o extrato hidroalcoólico das folhas de C. langsdorffii apresentava atividade antilitiásica. Com a intenção de descobrir quais são os compostos relacionados a esta atividade, foi realizado o estudo fitoquímico das folhas. Com o auxílio de análises cromatográficas foi possível verificar o perfil de cada fração e, assim, escolher as mais promissoras para isolamento de compostos. A partir da fração em acetato de etila obtiveram-se os flavonoides quercetina-3-O-?-L-ramnopiranosídeo (quercitrina) e canferol-3-O-?-L-ramnopiranosídeo (afzelina), isolados por cromatografia contra-corrente (HSCCC), seguida de purificação por cromatografia líquida de alta eficiência preparativa (CLAE-preparativa). Já a partir da fração aquosa obtiveram-se os derivados galoilquínicos 5\'\'-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico e 5\',5\'\'-di-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico por cromatografia de filtração em gel (Sephadex), seguida de purificação em CLAE-preparativa. Nos testes farmacocinéticos, o extrato hidroalcoólico, quercitrina e o galoilquínico 5\',5\'\'-di-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico foram os compostos selecionados para serem estudados. Para ambos os compostos, métodos analíticos foram validados em plasma e em salina para a realização dos estudos farmacocinéticos. Realizou-se também a calibração da sonda de microdiálise in vitro por retrodiálise, para se determinar as condições a serem empregadas in vivo. De maneira geral, quercitrina se ajustou ao modelo farmacocinético de dois compartimentos e, após administração intravenosa de 1 mg/kg, apresentou meia vida curta (t1/2 = 0,40 ± 0,07 h), uma rápida (? = 11,32 ± 1,90 h-1) e boa (Vdss = 2,10 ± 0,52 L/kg) distribuição tecidual e alta depuração (CL = 6,85 ± 0,62 L/h/kg). Por análise dos microdialisados renais, a fração livre de quercitrina nos rins foi 13 vezes maior do que a concentração livre no plasma. O composto galoilquínico, por se tratar de um composto inédito, foi estudado farmacocineticamente por via intravenosa em três concentrações (1 mg/kg, 1,5 mg/kg e 2 mg/kg) e se ajustou bem ao modelo de dois compartimentos com eliminação por Michaelis-Menten, apresentando comportamento não linear (ASC0-? 103,85 ± 23,90; 273,7 ± 81,6 e 363,6 ± 142,32 ?g h/mL, respectivamente). Não foi possível quantificar a concentração livre nos rins por microdiálise para o galoilquínico, pois o mesmo se ligava a sonda. Dessa maneira, o estudo de distribuição tecidual foi realizado, demonstrando que tanto quercitrina quanto o galoilquínico apresentavam alta penetrabilidade nos rins, com uma razão tecido renal/plasma de 23,7 e 12,4, respectivamente. Com relação ao perfil farmacocinético do extrato hidroalcoólico de C. langsdorffii e da fração butanólica após administração por via oral, verificou-se que não foi possível detectar nenhum dos isolados no plasma, sugerindo que tais substâncias foram metabolizadas e, provavelmente, tornaram-se ainda mais hidrossolúveis para posterior eliminação por via renal. Frente aos resultados, conclui-se que quercitrina e galoilquínico são substâncias de rápida eliminação e que podem estar relacionadas à atividade antilitiásica descrita para o extrato das folhas de C. langsdorffii. / Copaifera langsdorffii Desf., popularly known as \"copaíba\" is abundantly distributed in the Brazilian cerrado, with several biological activities that have been described in the literature for its oleoresin. However, since few years ago, our research group has been studying the aerial parts of this species, and it was found that the hydroalcoholic extract of its leaves display antilithiatic activity. Aiming to identify the compounds related to this activity, the phytochemical study of the leaves hydroalcoholic extract was undertaken. By using chromatography techniques, it was possible to choose the most promising fractions to isolate compounds. From the ethyl acetate fraction, it was isolated by countercurrent chromatography (HSCCC) followed by preparative HPLC purification, the flavonoids quercetin-3-O-?-L-rhamnopyranoside (quercitrin) and kaempferol-3-O-?-L-rhamnopyranoside (afzelin). From the aqueous fraction, it was isolated the galloylquinic acid derivatives 5\'\'-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic and 5\',5\'\'-di-O-methyl-3,4-O-di-galloylquinic by using gel filtration chromatography (Sephadex) followed by preparative HPLC purification. For the pharmacokinetic assays, the hydroalcoholic extract, quercitrin and 5\', 5\'\'-di-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic acid were chosen to be studied. For both compounds, it was validated analytical methods in plasma and saline, to perform pharmacokinetic studies. It was also held the microdialysis probe calibration in vitro by retrodialysis, to determine the conditions to be employed in vivo. In general, quercitrin fitted to a two-compartmental pharmacokinetic model and after intravenous administration of 1 mg/kg, it presented a short half-life (t1/ 2 = 0.40 ± 0.07 h) a fast (? = 11.32 ± 1.90 h-1) and good (Vdss = 2.10 ± 0.52 L/kg) tissue distribution and high clearance (CL = 6.85 ± 0.62 L/h/kg). In the kidney microdialisates analyses, the free renal fraction of quercitrin was 13 times greater than the free plasma concentration. The galloylquinic compound, which is a new isolated one, was studied intravenously in three concentrations (1 mg/kg, 1.5 mg/kg and 2 mg/kg) and fitted to a two-compartmental model with Michaelis-Menten elimination, presenting the non-linear behavior (ASC0-? 103.85 ± 23.90, 273.7 ± 81.6 and 363.6 ± 142.32 ?g h/mL, respectively). It was not possible to quantify the free concentration of galloylquinic in the kidney by microdialysis, because it bound to the probe. Thus, the study of tissue distribution was performed, in which it was demonstrated that both quercitrin and galloylquinic showed high penetration in the kidneys, with a tissue/plasma ratio of 23.7 and 12.4, respectively. With regard to the pharmacokinetic profile of the hydroalcoholic extract of C. langsdorffii and n-butanol fraction after oral administration, it was found that it was not possible to detect any of the isolated compounds in plasma, suggesting that these compounds were metabolized and probably become even more water soluble for disposal renally. Based on the results, it is concluded that quercitrin and galloylquinic are rapidly eliminated and may be related to antilithiatic activity of the leaves of C. langsdorffii.

Copaifera langsdorffii Desf. é conhecida popularmente como \"copaíba\", sendo encontrada nas regiões norte e nordeste do Brasil. Nesta tese reportam-se o estudo fitoquímico das folhas de C. langsdorffii, por meio do fracionamento de seu extrato hidroalcoólico, o isolamento e a purificação de seus metabólitos secundários majoritários, a biotransformação do epóxido do ácido caurenóico, bem como a avaliação das atividades analgésica e anti-inflamatória do extrato e compostos isolados. Para avaliação do perfil cromatográfico, o extrato hidroalcoólico das folhas (Cop) foi particionado em hexano, diclorometano, acetato de etila, n-butanol e água. Com o uso de filtração em gel, Cromatografia Contra Corrente e CLAE preparativa foram isolados os compostos quercetina-3-O-?-L-ramnopiranosídeo (quercitrina), canferol-3-O-?-L-ramnopiranosídeo (afzelina), bem como os ácidos 4\',4\'\'-dimetóxi-4,5-di-O-galoilquínico e 4-(4\'\'-metóxi galoil)-3,5-di-O-galoilquínico. O ácido caurenóico e o caurenol foram isolados em coluna de gel de sílica a partir da fração em acetato de etila. O ácido caurenóico foi submetido a epoxidação com ácido 3-cloroperbenzóico e foi submetido à biotransformação pelo fungo Beauveria sulfurenscens em meio sintético. A biotransformação do epóxido do ácido caurenóico forneceu o ácido 7?,17-diidroxi-ent-caur-15-en-19-oico, até então desconhecido, bem como o ácido 7?,17-diidroxi-16?-ent-cauran-19-oico, o ácido 7?,17-diidroxi-16?-ent-cauran-19-oico, o ácido 9?,16?,17-triidroxi-ent-cauran-19-oico e o ácido 16?,17-diidroxi-ent-cauran-19-óico. Cop e caurenol reduziram a inflamação induzida por ácido acético com máxima inibição de 40,3 e 53,6%, respectivamente. Na segunda fase do ensaio de formalina foi observada redução de 54,5 e 64,6%, respectivamente. A resposta inflamatória observada por carragenina e dextrana mostrou máxima redução de 52,3 e 43,6% para Cop e de 64,3 e 80% para caurenol, respectivamente. Cop e caurenol reduziram a produção de NO estimulada por LPS e aumentaram a liberação de TNF-?, mas não modularam a expressão de IL-6 e IL-10. Portanto, caurenol está envolvido na atividade antiedematogênica do extrato. Já a quercitrina e a afzelina não foram ativas nos protocolos utilizados. Cop e caurenol não alteraram a primeira fase do ensaio de formalina, a latência em placa quente, o desempenho motor dos animais e a migração celular. Concluiu-se que Cop e caurenol possuem atividade antiedematogênica atuando em sítios periféricos, contudo essa propriedade não está associada com a regulação da migração celular, TNF-?, IL-6 e IL-10. / Copaifera langsdorffii Desf., known as \"copaiba\", is found in the northern and northeastern of Brazil. This thesis reports the phytochemical study of C. langsdorffii leaves, through its hydroalcoholic extract (Cop) fractionation, isolation and purification of its major secondary metabolites, the biotransformation of kaurenoic acid epoxide, as well the evaluation of the analgesic and anti-inflammatory activities of the extract and isolated compounds. For the evaluation of the chromatographic profile, the extract was partitioned into hexane, dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol and water fractions. With the use of gel filtration chromatography, counter current chromatography and preparative HPLC, quercetin-3-O-?-L-rhamnopyranoside (quercitrin), kaempferol-3-O-?-L-rhamnopyranoside (afzelin), 4\'- 4\'\'-dimethoxy-4 ,5-di-O-galloylquinic acid and 4-(4-methoxy galloyl\'\')-3,5-di-O-galloylquinic were isolated. The epoxidation of kaurenoic acid was performed with 3-chloroperbenzoic acid and it was submitted to biotransformation by the fungus Beauveria sulfurenscens in synthetic medium. Biotransformation of kaurenoic acid epoxide furnished the unknown compound 7?,17-dihydroxy-ent-kaur-15-en-19-oic acid and the compounds 7?,17-dihydroxy-16?-ent-kauran-19-oic acid, 7?,17-dihydroxy-16?-ent-kauran-19-oic acid, 9?, 16?,17-trihydroxy-ent-kauran-19-oic acid and 16?,17-dihydroxy-19-ent-kauran-oic acid. Cop and kaurenol reduced the inflammation induced by acetic acid in mice with a maximal inhibition of 40.3 and 53.6%, respectively. The second phase in the formalin test in mice showed maximal reduction of 54.5 and 64.6%, respectively. The inflammatory responses induced by both carrageenan and dextran in rats showed maximal reduction of 52.3 and 43.6 % for Cop, as well as 64.3% and 80.0% for kaurenol, respectively. Cop and kaurenol reduced the NO production stimulated by LPS in a dose-dependent manner, and increased the release of TNF-?, but did not regulate IL-6 and IL-10. Therefore, kaurenol is involved in the extract antiedematogenic activity of the extract, whereas quercitrin and afzelin were not active in the used protocols. Cop and kaurenol did not alter the formalin first phase, hot-plate latency, motor performance or cell migration. The obtained results show that C. langsdorffi extract and kaurenol possess antiedematogenic properties acting on peripheral sites, but these properties are not associated with cell migration, TNF-?, IL-6 or IL-10 regulation.

As copaíferas fazem parte de um importante gênero de plantas que produzem um exsudato denominado como oleorresina, que é constituído por uma mistura de sesquiterpenos e diterpenos ácidos. A medicina popular utiliza a oleorresina de diferentes espécies de Copaifera com diversas indicações, tais como: ação anti-inflamatória, antimicrobiana, cicatrizante, antitumoral, entre outras. Desta forma, numerosos pesquisadores têm investigado a composição química e as atividades biológicas e toxicológicas deste produto natural, a fim de reconhecer os benefícios e a segurança deste produto. Todavia, estudos da composição química e das atividades biológicas dos constituintes das folhas são escassos. Assim, neste projeto buscou-se investigar a composição química de diferentes extratos de folhas e de oleorresinas de copaíferas coletadas na flora brasileira, bem como produtos comerciais (óleo de copaíba) propondo e aplicando métodos analíticos em cromatografia para determinação dos principais constituintes das amostras. Dez amostras de folhas e oleorresinas autênticas de diferentes espécies foram coletadas no norte e sudeste do Brasil (C. langsdorffi Desf., C. duckei Dwyer, C. reticulata Ducke, C. multijuga Hayne, C. paupera (Herzog) Dwyer, C. pubiflora Benth, C. lucens Dwyer, C. oblogifolia Mart, C. trapezifolia Hayne, e Copaifera sp.) e mais seis amostras comerciais foram adquiridas. Os compostos voláteis foram separados da oleorresina bruta utilizando-se o aparelho de Clevenger. Os padrões cromatográficos foram isolados utilizando-se diferemntes modalidades cromatográficas. As oleorresinas de C. multijulga e C. langsdorffii apresentaram os maiores teores de óleo volátil das amostras com 92 e 72%, respectivamente. Três diterpenos foram isolados da oleorresina de C. duckei: os ácidos ent-poliáltico, ent-diidroagático e ent-agático-15-metil éster. Uma análise qualitativa foi otimizada usando microextração em fase sólida seguido de análise em CG-EM, a qual revelou a presença em comum do ?-copaeno, ?-elemeno, ?-cariofileno e ?-bergamoteno em todas as amostras de oleorresina analisadas. Dois métodos analíticos utilizando CLUE-EM/EM e CG-DIC foram desenvolvidos, otimizados e validados para análise de nove diterpenos ácidos e quatro sesquiterpenos, os quais apresentaram adequada seletividade/especificidade, faixa de trabalho, limite de detecção, limite de quantificação, precisão e exatidão. Todavia, em ambos os métodos há necessidade de controle rigoroso das condições analíticas dos sistemas cromatográficos. Os resultados obtidos aplicando os dois métodos indicaram a presença frequente do ?-cariofileno e dos ácidos ent-copálico e ent-caurenoico como as substâncias mais encontradas em oleorresinas de copaíferas autênticas e comerciais. A análise qualitativa empregando CLUE-EM indicou a presença dos ácidos di-O-metil-3,5-di-O-galoilquínico (AGQ-8), 5\',5\'\'-di-O-metil-4,5-di-O-galoilquínico (AGQ-9), 5\',5\'\',5\'\'\'-tri-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico (AGQ-16), afzelina e quercitrina nos extratos das folhas de nove amostras de copaíferas. Os métodos analíticos desenvolvidos são confiáveis para as análises dos componentes fixos e voláteis e os resultados obtidos neste trabalho confirmam a variabilidade da composição química das oleorresinas desse gênero vegetal. / Copaifera plants are part of an important genus that produces an exsudate called oleoresin, which consists of a mixture of sesquiterpenes and acid diterpenes. Folk medicine uses the oleoresin of different Copaifera species for different health problems, such as: anti-inflammatory, antimicrobial, wound healing and antitumor, among others. Thus, numerous researchers have investigated the chemical composition, biological and toxicological activities of this natural product in order to recognize its benefits and safety. However, investigation of chemical composition and biological activities of leaf contituents are scarce. In this project we aimed to investigate the chemical composition of different leaf extracts and Copaifera oleoresins collected in the Brazilian flora and acquired in the market (copaíba oil) by proposing and applying chromatographic analytical methods to determine their main constituents. Ten samples of leaves and authentic oleoresins of different species were collected in northern and southeastern parts of Brazil (C. langsdorffi Desf., C. duckei Dwyer, C. reticulata Ducke, C. multijuga Hayne, C. paupera (Herzog) Dwyer, C. pubiflora Benth, C. lucens Dwyer, C. oblogifolia Mart, C. trapezifolia Hayne, e Copaifera sp.) and six commercial samples were purchased. The volatile fraction of the crude oleoresin was obtained by using Clevenger apparatus, and the chromatographic standards were isolated by using different chromatographic techniques. The oleoresins of C. langsdorffii and C. multijuga displayed the highest volatile oil contents. Three diterpenes were isolated from C. duckei oleoresin: ent-polialthic, ent-dihydroagathic and ent-agathic-15-metil ester acids. A qualitative analysis was optimized using solid phase micro-extraction followed by GC-MS analysis, which revealed the presence of ?-copaene, ?-elemene, ?-caryophyllene and ?-bergamotene in all investigated oleoresins. Two analytical methods using UPLC-MS/MS and GC-FID were developed, optimized and validated for the analysis of nine acid diterpenes and four sesquiterpenes, which gave adequate selectivity/specificity, range, limit of detection, limit of quantification, precision and accuracy. However, in both methods there is a need for rigorous control of the analytical conditions. The results generated by the two methods indicated the frequent presence of ?-caryophyllene, ent-copalic and ent-kaurenoic acids as the compounds frequently found in authentic and commercial Copaifera oleoresins. Qualitative analysis of leaf extracts using UPLC-MS/MS indicated the presence of 5\',5\'\'-di-O-methyl-3,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-8), 5\',5\'\'-di-O-methyl-4,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-9), 5\',5\'\',5\'\'\'-tri-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid (GQA-16), afzelin and quercetrin in all studied species. The analytical developed methods are reliable for the analyses of both fixed and volatile compounds of the oleoresins. The obtained results confirm the variability among the composition of the Copaifera oleoresins.

Copaifera langsdorffii (Fabaceae, Caesalpinioideae), conhecida popularmente como \"copaíba\", \"copaibeira\" ou \"pau d\'óleo\", é uma árvore de grande porte que se encontra amplamente distribuída pelo Brasil, desde a floresta amazônica até a vegetação do cerrado. A oleorresina, constituída principalmente por sesquiterpenos e diterpenos, é utilizada na medicina popular no tratamento de desordens infecciosas e inflamatórias. Por outro lado, estudos sobre suas folhas, as quais são constituídas majoritariamente por flavonoides e derivados galoilquínicos, são escassos. Assim, foi proposto o isolamento de marcadores químicos, desenvolvimento e validação de método analítico por CLAE-UV-DAD, bem como o estudo sazonal. O extrato bruto obtido das folhas foi particionado com solventes de polaridade crescente: diclorometano, acetato de etila e n-butanol. As frações em n-butanol e aquosa apresentaram, majoritariamente, compostos polares, dentre os quais se destacaram os derivados galoilquínicos. Para isolamento desses compostos utilizaram-se a cromatografia de permeação em gel de Sephadex LH-20 e a cromatografia líquida de alta eficiência preparativa. Nas análises por CLAE-UV-DAD empregou-se coluna analítica Synergi Polar-RP (100 mm x 3,0 mm, 2,5 ?m) e fase móvel composta por ácido fórmico-água (0,1:99,9, solvente A) e isopropanol- metanol-acetonitrila (0,5:4:6, solvente B). O gradiente de eluição foi A:B (90:10 para 85:15) em 8,33 minutos, seguido por A:B (85:15 para 64:36) até 29,17 minutos, utilizando vazão de 0,68 mL/min. Os estudos de sazonalidade foram realizados com 10 acessos de C. langsdorffii cultivados no Sítio Beija-Flor (Cajuru/SP). A partir da fração aquosa foram isolados e identificados 16 derivados galoilquínicos: ácido 5\'-O-metil-3-Ogaloilquínico (AGQ-1), ácido 5\'\'-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico (AGQ-2), ácido 5\',5\'\'-di-Ometil- 3,4-di-O-galoilquínico (AGQ-3), ácido 3,4-di-O-galoilquínico (AGQ-4), ácido 5\'\'-Ometil- 3,5-di-O-galoilquínico (AGQ-5), ácido 5\'-O-metil-3,5-di-O-galoilquínico (AGQ-6), ácido 5\'-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico (AGQ-7), ácido 5\',5\'\'-di-O-metil-3,5-di-Ogaloilquínico (AGQ-8), ácido 5\',5\'\'-di-O-metil-4,5-di-O-galoilquínico (AGQ-9), ácido 3,5-di- O-galoilquínico (AGQ-10), ácido 4,5-di-O-galoilquínico (AGQ-11), ácido 5\'-O-metil-4,5-di- O-galoilquínico (AGQ-12), ácido 5\'\'-O-metil-4,5-di-O-galoilquínico (AGQ-13), ácido 3,4,5- tri-O-galoilquínico (AGQ-14), ácido 5\'\'-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico (AGQ-15), ácido 5\',5\'\',5\'\'\'-tri-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico (AGQ-16). Além disso, por meio das análises realizadas por CLAE-EM foi possível constatar a presença de outros 10 derivados galoilquínicos: ácido 3-O-galoilquínico, ácido 4-O-galoilquínico, ácido 5-O-galoilquínico, ácido 5\'-O-metil-4-O-galoilquínico, ácido 5\'-O-metil-5-O-galoilquínico, ácido 5\'-O-metil- 3,4,5-tri-O-galoilquínico, ácido 5\'\'\'-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico, ácido 5\',5\'\'-di-Ometil- 3,4,5-tri-O-galoilquínico, ácido 5\',5\'\'\'-di-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico, ácido 5\'\',5\'\'\'-di-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico. O método analítico mostrou-se adequado para quantificação de nove derivados galoilquínicos (AGQ-1, AGQ-5, AGQ-6, AGQ-7, AGQ-8, AGQ-9, AGQ-10, AGQ-15, AGQ-16) e dois flavonoides, quercitrina e afzelina, frente aos parâmetros seletividade, linearidade, sensibilidade, precisão e exatidão. Por meio de análise estatística multivariada dos estudos sazonais concluiu-se que os acessos apresentaram perfis químicos qualitativos e quantitativos semelhantes nas coletas isoladas e perfis quantitativos diferentes ao longo dos meses. / Copaifera langsdorffii (Fabaceae, Caesalpinioideae), popularly known as \"copaíba\", \"copaibeira\" or \"pau d\'oleo\", is a large tree widely distributed in Brazil, from Amazon rainforest to savannah vegetation. Its oleoresin, composed mainly of sesquiterpenes and diterpenes, is widely used in folk medicine to treat inflammatory and infectious disorders. On the other hand, studies about its leaves, composed mainly of flavonoids and galloylquinic acid derivatives, are scarce. Therefore, it was proposed to isolate leaves major compounds, to develop and validate an analytical method by HPLC-UV-DAD, as well as to udertake seasonal studies. The crude extract of the leaves was partitioned with solvents of increasing polarity: dichloromethane, ethyl acetate and n-buthanol, in sequence. Chemical profiles of n-buthanol and aqueous fractions showed to be composed of polar compounds, especially galloylquinic acid derivatives. These compounds were isolated by gel permeation chromatography using Sephadex LH-20 and preparative high-performance liquid chromatography. The HPLC-UV-DAD analyses were carried out on a Synergi Polar-RP (100 x 3.0 mm, 2.5 ?m) column. The mobile phase was made up of formic acid-water (0.1:99.9, solvent A), and isopropanol-methanol-acetonitrile (0.5:4:6, solvent B). The elution gradient was A:B (90:10 to 85:15) in 8.33 minutes, followed by A:B (85:15 to 64:36) up to 29.17 minutes using a flow rate of 0.68 mL/ min. The seasonal studies were performed from 10 C. langsdorffii accesses grown on Beija-Flor farm (Cajuru/SP). From the aqueous fraction it was isolated and identified 16 galloylquinic acid derivatives: 5\'-O-methyl-3-Ogalloylquinic acid (GQA-1), 5\'\'-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic acid (GQA-2), 5\',5\'\'-di-Omethyl- 3,4-di-O-galloylquinic acid (GQA-3), 3,4-di-O-galloylquinic acid (GQA-4), 5\'\'-Omethyl- 3,5-di-O-galloylquinic acid (AGQ-5), 5\'-O-methyl-3,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-6), 5\'-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic acid (AGQ-7), 5\',5\'\'-di-O-methyl-3,5-di-Ogalloylquinic acid (GQA-8), 5\',5\'\'-di-O-methyl-4,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-9), 3,5-di- O-galloylquinic acid (GQA-10), 4,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-11), 5\'-O-methyl-4,5-di- O-galloylquinic acid (GQA-12), 5\'\'-O-methyl-4,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-13), 3,4,5- tri-O-galloylquinic acid (GQA-14), 5\'\'-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid (GQA-15), 5\',5\'\',5\'\'\'-tri-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid (GQA-16). Furthermore, through HPLC-MS analysis it was identified additional 10 galloylquinic acid derivatives: 3-Ogalloylquinic acid, 4-O-galloylquinic acid, 5-O-galloylquinic acid, 5\'-O-methyl-4-Ogalloylquinic acid, 5\'-O-methyl-5-O-galloylquinic acid, 5\'-O-methyl-3,4,5-tri-Ogalloylquinic acid, 5\'\'\'-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid, 5\',5\'\'-di-O-methyl-3,4,5-tri- O-galloylquinic acid, 5\',5\'\'\'-di-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid, 5\'\',5\'\'\'-di-O-methyl- 3,4,5-tri-O- galloylquinic acid. The HPLC developed method was suitable to quantify nine galloylquinic derivatives (GQA-1, GQA-5, GQA-6, GQA-7, GQA-8, GQA-9, GQA-10, GQA-15, GQA-16) and two flavonoids, quercitrin and afzelin, related to the selectivity, linearity, sensitivity, precision and accuracy parameters. Through multivariate statistical analysis, it was possible to conclude that all ten diferrent populations of C. langsdorffii cultivated displayed similar qualitative and quantitative chemical profiles among isolated months and different quantitative profiles among different months.

As copaíbas, pertencentes à família Leguminosae, subfamília Caesalpinioideae, são conhecidas pela produção de uma óleo-resina com propriedades antiinflamatórias, utilizada na medicina popular e pela indústria farmacêutica. A substância é retirada do tronco da árvore, através do uso de um trado que perfura o caule até que a óleo-resina escorra. Esta óleo-resina parece ser produzida, armazenada e secretada por dois tipos de estruturas secretoras, os canais e as cavidades secretores. Embora muitos trabalhos tratem das análises químicas e das atividades biológicas da óleo-resina de espécies de Copaifera, poucos são os que tratam dos mecanismos subcelulares da produção, do armazenamento e da secreção da óleo-resina. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar comparativamente a distribuição, a morfologia, o desenvolvimento e o conteúdo secretor dos canais e/ou cavidades secretores de óleo-resina no caule e na folha de Copaifera trapezifolia Hayne, única dentre as 35 espécies do gênero que ocorre na Floresta Atlântica. Foi testado se os canais e/ou cavidades secretores produzem óleo-resina na folha, assim como relatado para o caule, a fim de propor alternativas para a utilização do tronco da árvore como fonte da secreção. Como a natureza química da secreção já é conhecida para o caule, o estudo ultraestrutural visa relacionar as populações de organelas às substâncias produzidas, ampliando o conhecimento sobre os mecanismos de produção e secreção de óleo-resina pelas células epiteliais secretoras dos canais e/ou cavidades. Para tal, gemas axilares contendo primórdios foliares e caulinares e folíolos medianos completamente expandidos foram coletados de três indivíduos no Jardim Botânico do Rio de Janeiro, e processados para estudos anatômicos, de histolocalização de óleo-resina, ultra-estruturais e de diafanização de folhas inteiras. Os dados indicam que estruturas com forma isodiamétrica, denominadas cavidades secretoras, ocorrem na folha e no caule em estrutura primária e secundária. Na lâmina foliar, estão localizadas entre os parênquimas paliçádico e lacunoso e na face abaxial da nervura central; no pecíolo as cavidades ocorrem no córtex; no caule ocorrem imersas nos parênquimas cortical e medular. Originam-se de células do meristema fundamental, a partir de uma divisão periclinal seguida de duas anticlinais; o lúmen é originado por esquizogenia. O conteúdo das cavidades tanto do caule como da folha contém óleo e resina, conforme consta na literatura para o gênero. Isto permite inferir que a extração da óleo-resina seria menos prejudicial para a planta se extraída da folha. A presença de um epitélio bisseriado na folha e no caule, assim como o que foi encontrado em C. langsdorffii, constitui um dado inédito para Leguminosae e, provavelmente, representa a reposição das células epiteliais que já secretaram. As células epiteliais, no início da produção dos metabólitos, são polarizadas: núcleo próximo à parede periclinal interna e citoplasma próximo à parede periclinal externa. O citoplasma é rico em mitocôndrias e retículos endoplasmáticos liso e rugoso, associados a vesículas (folha) ou plastídeos (caule). Vesículas de conteúdo distinto (elétron-denso e elétron-opaco) são produzidas nos retículos, transportadas por entre as microfibrilas das paredes anticlinal e periclinal interna e liberadas para o lúmen. Produção e secreção de metabólitos para o lúmen não são sincronizadas nas células epiteliais de uma mesma cavidade. Sugere-se que o componente resinoso seja produzido nos retículos rugosos e plastídeos, e o oleoso nos retículos lisos. A comparação entre C. langsdorffii e C. trapezifolia utilizando caracteres com valor diagnóstico representa um resultado pioneiro se considerado o grande número de espécies e morfo-espécies do gênero. No entanto, a inclusão de um maior número de espécies nos estudos de estruturas secretoras de Copaifera permitiriam auxiliar a delimitação infragenérica do grupo. / Copaíbas (Leguminosae, Caesalpinioideae) are best known for the production of an oilresin with anti-inflammatory properties, used in the folk medicine and pharmaceutical industry. The substance is usually taken from the stem, through the use of an auger to drill the stem until the oilresin drips. This oilresin seems to be produced, stored and secreted by two types of secretory structures, canals and secretory cavities. Although many studies address the chemical analysis and the biological activity of the oilresin in species of Copaifera, the cellular mechanisms of production, storage and secretion have rarely been exploited. The objective of this study was to compare the distribution, morphology, development and secretion biology of oilresin-secreting canals and/or cavities, in the stem and in the leaf of Copaifera trapezifolia Hayne, unique among the 35 species of the genus that occurs in the Atlantic Rain Forest. The study tested wheather canals and/or cavities produce oilresin in the leaf, as reported to the stem, in order to propose alternatives to the use of the trunk of the tree as a source of secretion. Considering that the chemical nature of the secretion is already known to the stem, the ultrastructural study of canal/cavity in several stages of development aim at to associate subcellular components with substances produced and secreted. Data obtained can increase the knowledge on the production and secretion mechanisms of within epithelial cells of secretory canals and/or cavities. Materials include axillary buds containing leaf and stem primordial, besides mature middle leaflets and portions of stem in primary and secondary growth. They were collected from three individuals in the Botanic Garden of Rio de Janeiro and prepared to be employed in anatomy, histolocalization of oilresin, ultrastructure and clearing of whole leaves. Secretory cavities were observed in the leaf and the stem (primary and secondary growth), between the palisade and spongy mesophyll, petiole cortex, and shoot cortex and pith. Cavities originate from ground meristem cells by a periclinal division followed by two anticlinals; the lumen is formed by esquizogenous process. The content of the cavities of both the stem and leaf contains oil and resin, as shown in the literature for the genus. This suggests that the extraction of the oleoresin would be less harmful for the plant if extracted from the leaf. The presence of a biseriate epithelium in foliar and shoot cavities, as similarly found in C. langsdorffii, is a novelty for Leguminosae, and probably represents the replacement of epithelial cells that have secreted. In the beginning of substance production epithelial cells are polarized: nucleus near the inner periclinal wall and cytoplasm near the outer periclinal wall. The cytoplasm is rich in mitochondria, and smooth and rough endoplasmic reticulum associated to vesicles (leaf) or plastids (stem). There is a greater amount of smooth endoplasmic reticulum in cells of the leaf cavities and rough endoplasmic reticulum in cells of the stem cavities. Vesicles with different content (electron-dense and electron-opaque) are produced by the reticulum, transported through microfibrils of anticlinals and inner periclinal walls and released into the lumen. Production and secretion of metabolites are not synchronized in epithelial cells of the same cavity. It is suggested that the resin component is produced in the rough reticulum and plastids, and the oily component in the smooth reticulum. The comparison between C. langsdorffii and C. trapezifolia using characters with diagnostic value represents a pioneer result if considered the number of species and morpho-species of the genus. However, the inclusion of a greater number of species in studies of secretory structures of Copaifera would certainly help the complex infrageneric division of this group.

Orientador: Luiz Fernando Rolim de Almeida / Resumo: As plantas estão expostas à seca extrema e cada vez mais frequente devido aos cenários das mudanças climáticas. A superação dos períodos de estresse hídrico e a rápida recuperação com o retorno da estação chuvosa são características de ajuste importantes para o estabelecimento e distribuição dos vegetais. Para amenizar os danos causados pela seca e intensa radiação, o metabolismo vegetal dispõe de mecanismos bioquímicos, anatômicos e epigenéticos que auxiliam na eliminação de radicais livres, no transporte e reserva de água e garantem respostas mais rápidas à reidratação assim que a água estiver novamente disponível no ambiente. Neste contexto, estudos baseados na deficiência hídrica se limitam em expor plantas a apenas um ciclo de défice, o que não acontece normalmente no ambiente. Os vegetais armazenam informações de estresses precedentes que não se resumem a padrões de sinalização isolados, mas funcionam como marcas deixadas anteriormente que auxiliam nas respostas a adversidades futuras. Deste modo, as consequências da seca de forma recorrente relacionando o estresse e a reidratação pós-estresse ainda não são bem compreendidos. A espécie utilizada para este estudo foi a Copaifera langsdorffii Desf. que possui folhas com mecanismos anatômicos e fisiológicos para superação das alterações ambientais. É conhecida pelas propriedades medicinais por meio do óleo amplamente consumido pela população em geral. Copaifera langsdorffii que ocorre em ambientes de diferentes regimes híd... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Plants are exposed to extreme drought increasingly frequent due to climate change scenarios. Overcoming periods of water stress and fast recovery with the rainy season return are characteristics of important adjustment for the establishment and wide vegetables distribution. To mitigate the damages caused by drought and intense radiation, plant metabolism features biochemical, anatomical and epigenetic mechanisms that assist in scavenging free radicals, increase the transport and water supply and ensure faster response to rehydration as soon as water is available in the environment again. In this context, studies based on water deficiency are limited to exposing plants only in one deficit cycle, which does not normally happen in the environment. Vegetables store information from previous stresses that are not limited to isolated signaling patterns, but function as previously left imprint that assist in responses to future adversities. Thus, the consequences of recurrent drought form related to stress and post-stress rehydration are not well understood yet. The species used for this study was Copaifera langsdorffii Desf. which has leaves with anatomical and physiological mechanisms to overcome environmental changes. The species has medicinal properties through the oil widely consumed by Brazilian population. It is present in several vegetation types in Brazil and South America that have different water and light pattern. These factors, among others, make this one of the most im... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor