Copaifera langsdorffii Desf. é conhecida popularmente como \"copaíba\", sendo encontrada nas regiões norte e nordeste do Brasil. Nesta tese reportam-se o estudo fitoquímico das folhas de C. langsdorffii, por meio do fracionamento de seu extrato hidroalcoólico, o isolamento e a purificação de seus metabólitos secundários majoritários, a biotransformação do epóxido do ácido caurenóico, bem como a avaliação das atividades analgésica e anti-inflamatória do extrato e compostos isolados. Para avaliação do perfil cromatográfico, o extrato hidroalcoólico das folhas (Cop) foi particionado em hexano, diclorometano, acetato de etila, n-butanol e água. Com o uso de filtração em gel, Cromatografia Contra Corrente e CLAE preparativa foram isolados os compostos quercetina-3-O-?-L-ramnopiranosídeo (quercitrina), canferol-3-O-?-L-ramnopiranosídeo (afzelina), bem como os ácidos 4\',4\'\'-dimetóxi-4,5-di-O-galoilquínico e 4-(4\'\'-metóxi galoil)-3,5-di-O-galoilquínico. O ácido caurenóico e o caurenol foram isolados em coluna de gel de sílica a partir da fração em acetato de etila. O ácido caurenóico foi submetido a epoxidação com ácido 3-cloroperbenzóico e foi submetido à biotransformação pelo fungo Beauveria sulfurenscens em meio sintético. A biotransformação do epóxido do ácido caurenóico forneceu o ácido 7?,17-diidroxi-ent-caur-15-en-19-oico, até então desconhecido, bem como o ácido 7?,17-diidroxi-16?-ent-cauran-19-oico, o ácido 7?,17-diidroxi-16?-ent-cauran-19-oico, o ácido 9?,16?,17-triidroxi-ent-cauran-19-oico e o ácido 16?,17-diidroxi-ent-cauran-19-óico. Cop e caurenol reduziram a inflamação induzida por ácido acético com máxima inibição de 40,3 e 53,6%, respectivamente. Na segunda fase do ensaio de formalina foi observada redução de 54,5 e 64,6%, respectivamente. A resposta inflamatória observada por carragenina e dextrana mostrou máxima redução de 52,3 e 43,6% para Cop e de 64,3 e 80% para caurenol, respectivamente. Cop e caurenol reduziram a produção de NO estimulada por LPS e aumentaram a liberação de TNF-?, mas não modularam a expressão de IL-6 e IL-10. Portanto, caurenol está envolvido na atividade antiedematogênica do extrato. Já a quercitrina e a afzelina não foram ativas nos protocolos utilizados. Cop e caurenol não alteraram a primeira fase do ensaio de formalina, a latência em placa quente, o desempenho motor dos animais e a migração celular. Concluiu-se que Cop e caurenol possuem atividade antiedematogênica atuando em sítios periféricos, contudo essa propriedade não está associada com a regulação da migração celular, TNF-?, IL-6 e IL-10. / Copaifera langsdorffii Desf., known as \"copaiba\", is found in the northern and northeastern of Brazil. This thesis reports the phytochemical study of C. langsdorffii leaves, through its hydroalcoholic extract (Cop) fractionation, isolation and purification of its major secondary metabolites, the biotransformation of kaurenoic acid epoxide, as well the evaluation of the analgesic and anti-inflammatory activities of the extract and isolated compounds. For the evaluation of the chromatographic profile, the extract was partitioned into hexane, dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol and water fractions. With the use of gel filtration chromatography, counter current chromatography and preparative HPLC, quercetin-3-O-?-L-rhamnopyranoside (quercitrin), kaempferol-3-O-?-L-rhamnopyranoside (afzelin), 4\'- 4\'\'-dimethoxy-4 ,5-di-O-galloylquinic acid and 4-(4-methoxy galloyl\'\')-3,5-di-O-galloylquinic were isolated. The epoxidation of kaurenoic acid was performed with 3-chloroperbenzoic acid and it was submitted to biotransformation by the fungus Beauveria sulfurenscens in synthetic medium. Biotransformation of kaurenoic acid epoxide furnished the unknown compound 7?,17-dihydroxy-ent-kaur-15-en-19-oic acid and the compounds 7?,17-dihydroxy-16?-ent-kauran-19-oic acid, 7?,17-dihydroxy-16?-ent-kauran-19-oic acid, 9?, 16?,17-trihydroxy-ent-kauran-19-oic acid and 16?,17-dihydroxy-19-ent-kauran-oic acid. Cop and kaurenol reduced the inflammation induced by acetic acid in mice with a maximal inhibition of 40.3 and 53.6%, respectively. The second phase in the formalin test in mice showed maximal reduction of 54.5 and 64.6%, respectively. The inflammatory responses induced by both carrageenan and dextran in rats showed maximal reduction of 52.3 and 43.6 % for Cop, as well as 64.3% and 80.0% for kaurenol, respectively. Cop and kaurenol reduced the NO production stimulated by LPS in a dose-dependent manner, and increased the release of TNF-?, but did not regulate IL-6 and IL-10. Therefore, kaurenol is involved in the extract antiedematogenic activity of the extract, whereas quercitrin and afzelin were not active in the used protocols. Cop and kaurenol did not alter the formalin first phase, hot-plate latency, motor performance or cell migration. The obtained results show that C. langsdorffi extract and kaurenol possess antiedematogenic properties acting on peripheral sites, but these properties are not associated with cell migration, TNF-?, IL-6 or IL-10 regulation.

As copaíbas, pertencentes à família Leguminosae, subfamília Caesalpinioideae, são conhecidas pela produção de uma óleo-resina com propriedades antiinflamatórias, utilizada na medicina popular e pela indústria farmacêutica. A substância é retirada do tronco da árvore, através do uso de um trado que perfura o caule até que a óleo-resina escorra. Esta óleo-resina parece ser produzida, armazenada e secretada por dois tipos de estruturas secretoras, os canais e as cavidades secretores. Embora muitos trabalhos tratem das análises químicas e das atividades biológicas da óleo-resina de espécies de Copaifera, poucos são os que tratam dos mecanismos subcelulares da produção, do armazenamento e da secreção da óleo-resina. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar comparativamente a distribuição, a morfologia, o desenvolvimento e o conteúdo secretor dos canais e/ou cavidades secretores de óleo-resina no caule e na folha de Copaifera trapezifolia Hayne, única dentre as 35 espécies do gênero que ocorre na Floresta Atlântica. Foi testado se os canais e/ou cavidades secretores produzem óleo-resina na folha, assim como relatado para o caule, a fim de propor alternativas para a utilização do tronco da árvore como fonte da secreção. Como a natureza química da secreção já é conhecida para o caule, o estudo ultraestrutural visa relacionar as populações de organelas às substâncias produzidas, ampliando o conhecimento sobre os mecanismos de produção e secreção de óleo-resina pelas células epiteliais secretoras dos canais e/ou cavidades. Para tal, gemas axilares contendo primórdios foliares e caulinares e folíolos medianos completamente expandidos foram coletados de três indivíduos no Jardim Botânico do Rio de Janeiro, e processados para estudos anatômicos, de histolocalização de óleo-resina, ultra-estruturais e de diafanização de folhas inteiras. Os dados indicam que estruturas com forma isodiamétrica, denominadas cavidades secretoras, ocorrem na folha e no caule em estrutura primária e secundária. Na lâmina foliar, estão localizadas entre os parênquimas paliçádico e lacunoso e na face abaxial da nervura central; no pecíolo as cavidades ocorrem no córtex; no caule ocorrem imersas nos parênquimas cortical e medular. Originam-se de células do meristema fundamental, a partir de uma divisão periclinal seguida de duas anticlinais; o lúmen é originado por esquizogenia. O conteúdo das cavidades tanto do caule como da folha contém óleo e resina, conforme consta na literatura para o gênero. Isto permite inferir que a extração da óleo-resina seria menos prejudicial para a planta se extraída da folha. A presença de um epitélio bisseriado na folha e no caule, assim como o que foi encontrado em C. langsdorffii, constitui um dado inédito para Leguminosae e, provavelmente, representa a reposição das células epiteliais que já secretaram. As células epiteliais, no início da produção dos metabólitos, são polarizadas: núcleo próximo à parede periclinal interna e citoplasma próximo à parede periclinal externa. O citoplasma é rico em mitocôndrias e retículos endoplasmáticos liso e rugoso, associados a vesículas (folha) ou plastídeos (caule). Vesículas de conteúdo distinto (elétron-denso e elétron-opaco) são produzidas nos retículos, transportadas por entre as microfibrilas das paredes anticlinal e periclinal interna e liberadas para o lúmen. Produção e secreção de metabólitos para o lúmen não são sincronizadas nas células epiteliais de uma mesma cavidade. Sugere-se que o componente resinoso seja produzido nos retículos rugosos e plastídeos, e o oleoso nos retículos lisos. A comparação entre C. langsdorffii e C. trapezifolia utilizando caracteres com valor diagnóstico representa um resultado pioneiro se considerado o grande número de espécies e morfo-espécies do gênero. No entanto, a inclusão de um maior número de espécies nos estudos de estruturas secretoras de Copaifera permitiriam auxiliar a delimitação infragenérica do grupo. / Copaíbas (Leguminosae, Caesalpinioideae) are best known for the production of an oilresin with anti-inflammatory properties, used in the folk medicine and pharmaceutical industry. The substance is usually taken from the stem, through the use of an auger to drill the stem until the oilresin drips. This oilresin seems to be produced, stored and secreted by two types of secretory structures, canals and secretory cavities. Although many studies address the chemical analysis and the biological activity of the oilresin in species of Copaifera, the cellular mechanisms of production, storage and secretion have rarely been exploited. The objective of this study was to compare the distribution, morphology, development and secretion biology of oilresin-secreting canals and/or cavities, in the stem and in the leaf of Copaifera trapezifolia Hayne, unique among the 35 species of the genus that occurs in the Atlantic Rain Forest. The study tested wheather canals and/or cavities produce oilresin in the leaf, as reported to the stem, in order to propose alternatives to the use of the trunk of the tree as a source of secretion. Considering that the chemical nature of the secretion is already known to the stem, the ultrastructural study of canal/cavity in several stages of development aim at to associate subcellular components with substances produced and secreted. Data obtained can increase the knowledge on the production and secretion mechanisms of within epithelial cells of secretory canals and/or cavities. Materials include axillary buds containing leaf and stem primordial, besides mature middle leaflets and portions of stem in primary and secondary growth. They were collected from three individuals in the Botanic Garden of Rio de Janeiro and prepared to be employed in anatomy, histolocalization of oilresin, ultrastructure and clearing of whole leaves. Secretory cavities were observed in the leaf and the stem (primary and secondary growth), between the palisade and spongy mesophyll, petiole cortex, and shoot cortex and pith. Cavities originate from ground meristem cells by a periclinal division followed by two anticlinals; the lumen is formed by esquizogenous process. The content of the cavities of both the stem and leaf contains oil and resin, as shown in the literature for the genus. This suggests that the extraction of the oleoresin would be less harmful for the plant if extracted from the leaf. The presence of a biseriate epithelium in foliar and shoot cavities, as similarly found in C. langsdorffii, is a novelty for Leguminosae, and probably represents the replacement of epithelial cells that have secreted. In the beginning of substance production epithelial cells are polarized: nucleus near the inner periclinal wall and cytoplasm near the outer periclinal wall. The cytoplasm is rich in mitochondria, and smooth and rough endoplasmic reticulum associated to vesicles (leaf) or plastids (stem). There is a greater amount of smooth endoplasmic reticulum in cells of the leaf cavities and rough endoplasmic reticulum in cells of the stem cavities. Vesicles with different content (electron-dense and electron-opaque) are produced by the reticulum, transported through microfibrils of anticlinals and inner periclinal walls and released into the lumen. Production and secretion of metabolites are not synchronized in epithelial cells of the same cavity. It is suggested that the resin component is produced in the rough reticulum and plastids, and the oily component in the smooth reticulum. The comparison between C. langsdorffii and C. trapezifolia using characters with diagnostic value represents a pioneer result if considered the number of species and morpho-species of the genus. However, the inclusion of a greater number of species in studies of secretory structures of Copaifera would certainly help the complex infrageneric division of this group.

Copaifera langsdorffii (Fabaceae, Caesalpinioideae), conhecida popularmente como \"copaíba\", \"copaibeira\" ou \"pau d\'óleo\", é uma árvore de grande porte que se encontra amplamente distribuída pelo Brasil, desde a floresta amazônica até a vegetação do cerrado. A oleorresina, constituída principalmente por sesquiterpenos e diterpenos, é utilizada na medicina popular no tratamento de desordens infecciosas e inflamatórias. Por outro lado, estudos sobre suas folhas, as quais são constituídas majoritariamente por flavonoides e derivados galoilquínicos, são escassos. Assim, foi proposto o isolamento de marcadores químicos, desenvolvimento e validação de método analítico por CLAE-UV-DAD, bem como o estudo sazonal. O extrato bruto obtido das folhas foi particionado com solventes de polaridade crescente: diclorometano, acetato de etila e n-butanol. As frações em n-butanol e aquosa apresentaram, majoritariamente, compostos polares, dentre os quais se destacaram os derivados galoilquínicos. Para isolamento desses compostos utilizaram-se a cromatografia de permeação em gel de Sephadex LH-20 e a cromatografia líquida de alta eficiência preparativa. Nas análises por CLAE-UV-DAD empregou-se coluna analítica Synergi Polar-RP (100 mm x 3,0 mm, 2,5 ?m) e fase móvel composta por ácido fórmico-água (0,1:99,9, solvente A) e isopropanol- metanol-acetonitrila (0,5:4:6, solvente B). O gradiente de eluição foi A:B (90:10 para 85:15) em 8,33 minutos, seguido por A:B (85:15 para 64:36) até 29,17 minutos, utilizando vazão de 0,68 mL/min. Os estudos de sazonalidade foram realizados com 10 acessos de C. langsdorffii cultivados no Sítio Beija-Flor (Cajuru/SP). A partir da fração aquosa foram isolados e identificados 16 derivados galoilquínicos: ácido 5\'-O-metil-3-Ogaloilquínico (AGQ-1), ácido 5\'\'-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico (AGQ-2), ácido 5\',5\'\'-di-Ometil- 3,4-di-O-galoilquínico (AGQ-3), ácido 3,4-di-O-galoilquínico (AGQ-4), ácido 5\'\'-Ometil- 3,5-di-O-galoilquínico (AGQ-5), ácido 5\'-O-metil-3,5-di-O-galoilquínico (AGQ-6), ácido 5\'-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico (AGQ-7), ácido 5\',5\'\'-di-O-metil-3,5-di-Ogaloilquínico (AGQ-8), ácido 5\',5\'\'-di-O-metil-4,5-di-O-galoilquínico (AGQ-9), ácido 3,5-di- O-galoilquínico (AGQ-10), ácido 4,5-di-O-galoilquínico (AGQ-11), ácido 5\'-O-metil-4,5-di- O-galoilquínico (AGQ-12), ácido 5\'\'-O-metil-4,5-di-O-galoilquínico (AGQ-13), ácido 3,4,5- tri-O-galoilquínico (AGQ-14), ácido 5\'\'-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico (AGQ-15), ácido 5\',5\'\',5\'\'\'-tri-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico (AGQ-16). Além disso, por meio das análises realizadas por CLAE-EM foi possível constatar a presença de outros 10 derivados galoilquínicos: ácido 3-O-galoilquínico, ácido 4-O-galoilquínico, ácido 5-O-galoilquínico, ácido 5\'-O-metil-4-O-galoilquínico, ácido 5\'-O-metil-5-O-galoilquínico, ácido 5\'-O-metil- 3,4,5-tri-O-galoilquínico, ácido 5\'\'\'-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico, ácido 5\',5\'\'-di-Ometil- 3,4,5-tri-O-galoilquínico, ácido 5\',5\'\'\'-di-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico, ácido 5\'\',5\'\'\'-di-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico. O método analítico mostrou-se adequado para quantificação de nove derivados galoilquínicos (AGQ-1, AGQ-5, AGQ-6, AGQ-7, AGQ-8, AGQ-9, AGQ-10, AGQ-15, AGQ-16) e dois flavonoides, quercitrina e afzelina, frente aos parâmetros seletividade, linearidade, sensibilidade, precisão e exatidão. Por meio de análise estatística multivariada dos estudos sazonais concluiu-se que os acessos apresentaram perfis químicos qualitativos e quantitativos semelhantes nas coletas isoladas e perfis quantitativos diferentes ao longo dos meses. / Copaifera langsdorffii (Fabaceae, Caesalpinioideae), popularly known as \"copaíba\", \"copaibeira\" or \"pau d\'oleo\", is a large tree widely distributed in Brazil, from Amazon rainforest to savannah vegetation. Its oleoresin, composed mainly of sesquiterpenes and diterpenes, is widely used in folk medicine to treat inflammatory and infectious disorders. On the other hand, studies about its leaves, composed mainly of flavonoids and galloylquinic acid derivatives, are scarce. Therefore, it was proposed to isolate leaves major compounds, to develop and validate an analytical method by HPLC-UV-DAD, as well as to udertake seasonal studies. The crude extract of the leaves was partitioned with solvents of increasing polarity: dichloromethane, ethyl acetate and n-buthanol, in sequence. Chemical profiles of n-buthanol and aqueous fractions showed to be composed of polar compounds, especially galloylquinic acid derivatives. These compounds were isolated by gel permeation chromatography using Sephadex LH-20 and preparative high-performance liquid chromatography. The HPLC-UV-DAD analyses were carried out on a Synergi Polar-RP (100 x 3.0 mm, 2.5 ?m) column. The mobile phase was made up of formic acid-water (0.1:99.9, solvent A), and isopropanol-methanol-acetonitrile (0.5:4:6, solvent B). The elution gradient was A:B (90:10 to 85:15) in 8.33 minutes, followed by A:B (85:15 to 64:36) up to 29.17 minutes using a flow rate of 0.68 mL/ min. The seasonal studies were performed from 10 C. langsdorffii accesses grown on Beija-Flor farm (Cajuru/SP). From the aqueous fraction it was isolated and identified 16 galloylquinic acid derivatives: 5\'-O-methyl-3-Ogalloylquinic acid (GQA-1), 5\'\'-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic acid (GQA-2), 5\',5\'\'-di-Omethyl- 3,4-di-O-galloylquinic acid (GQA-3), 3,4-di-O-galloylquinic acid (GQA-4), 5\'\'-Omethyl- 3,5-di-O-galloylquinic acid (AGQ-5), 5\'-O-methyl-3,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-6), 5\'-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic acid (AGQ-7), 5\',5\'\'-di-O-methyl-3,5-di-Ogalloylquinic acid (GQA-8), 5\',5\'\'-di-O-methyl-4,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-9), 3,5-di- O-galloylquinic acid (GQA-10), 4,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-11), 5\'-O-methyl-4,5-di- O-galloylquinic acid (GQA-12), 5\'\'-O-methyl-4,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-13), 3,4,5- tri-O-galloylquinic acid (GQA-14), 5\'\'-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid (GQA-15), 5\',5\'\',5\'\'\'-tri-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid (GQA-16). Furthermore, through HPLC-MS analysis it was identified additional 10 galloylquinic acid derivatives: 3-Ogalloylquinic acid, 4-O-galloylquinic acid, 5-O-galloylquinic acid, 5\'-O-methyl-4-Ogalloylquinic acid, 5\'-O-methyl-5-O-galloylquinic acid, 5\'-O-methyl-3,4,5-tri-Ogalloylquinic acid, 5\'\'\'-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid, 5\',5\'\'-di-O-methyl-3,4,5-tri- O-galloylquinic acid, 5\',5\'\'\'-di-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid, 5\'\',5\'\'\'-di-O-methyl- 3,4,5-tri-O- galloylquinic acid. The HPLC developed method was suitable to quantify nine galloylquinic derivatives (GQA-1, GQA-5, GQA-6, GQA-7, GQA-8, GQA-9, GQA-10, GQA-15, GQA-16) and two flavonoids, quercitrin and afzelin, related to the selectivity, linearity, sensitivity, precision and accuracy parameters. Through multivariate statistical analysis, it was possible to conclude that all ten diferrent populations of C. langsdorffii cultivated displayed similar qualitative and quantitative chemical profiles among isolated months and different quantitative profiles among different months.

Copaifera langsdorffii Desf., popularmente conhecida como \"copaíba\", distribui-se abundantemente no cerrado brasileiro, sendo que diversas atividades biológicas já foram descritas na literatura para o seu oleorresina. Contudo, nos últimos anos, nosso grupo de pesquisa vem estudando as partes aéreas desta espécie e verificou-se que o extrato hidroalcoólico das folhas de C. langsdorffii apresentava atividade antilitiásica. Com a intenção de descobrir quais são os compostos relacionados a esta atividade, foi realizado o estudo fitoquímico das folhas. Com o auxílio de análises cromatográficas foi possível verificar o perfil de cada fração e, assim, escolher as mais promissoras para isolamento de compostos. A partir da fração em acetato de etila obtiveram-se os flavonoides quercetina-3-O-?-L-ramnopiranosídeo (quercitrina) e canferol-3-O-?-L-ramnopiranosídeo (afzelina), isolados por cromatografia contra-corrente (HSCCC), seguida de purificação por cromatografia líquida de alta eficiência preparativa (CLAE-preparativa). Já a partir da fração aquosa obtiveram-se os derivados galoilquínicos 5\'\'-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico e 5\',5\'\'-di-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico por cromatografia de filtração em gel (Sephadex), seguida de purificação em CLAE-preparativa. Nos testes farmacocinéticos, o extrato hidroalcoólico, quercitrina e o galoilquínico 5\',5\'\'-di-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico foram os compostos selecionados para serem estudados. Para ambos os compostos, métodos analíticos foram validados em plasma e em salina para a realização dos estudos farmacocinéticos. Realizou-se também a calibração da sonda de microdiálise in vitro por retrodiálise, para se determinar as condições a serem empregadas in vivo. De maneira geral, quercitrina se ajustou ao modelo farmacocinético de dois compartimentos e, após administração intravenosa de 1 mg/kg, apresentou meia vida curta (t1/2 = 0,40 ± 0,07 h), uma rápida (? = 11,32 ± 1,90 h-1) e boa (Vdss = 2,10 ± 0,52 L/kg) distribuição tecidual e alta depuração (CL = 6,85 ± 0,62 L/h/kg). Por análise dos microdialisados renais, a fração livre de quercitrina nos rins foi 13 vezes maior do que a concentração livre no plasma. O composto galoilquínico, por se tratar de um composto inédito, foi estudado farmacocineticamente por via intravenosa em três concentrações (1 mg/kg, 1,5 mg/kg e 2 mg/kg) e se ajustou bem ao modelo de dois compartimentos com eliminação por Michaelis-Menten, apresentando comportamento não linear (ASC0-? 103,85 ± 23,90; 273,7 ± 81,6 e 363,6 ± 142,32 ?g h/mL, respectivamente). Não foi possível quantificar a concentração livre nos rins por microdiálise para o galoilquínico, pois o mesmo se ligava a sonda. Dessa maneira, o estudo de distribuição tecidual foi realizado, demonstrando que tanto quercitrina quanto o galoilquínico apresentavam alta penetrabilidade nos rins, com uma razão tecido renal/plasma de 23,7 e 12,4, respectivamente. Com relação ao perfil farmacocinético do extrato hidroalcoólico de C. langsdorffii e da fração butanólica após administração por via oral, verificou-se que não foi possível detectar nenhum dos isolados no plasma, sugerindo que tais substâncias foram metabolizadas e, provavelmente, tornaram-se ainda mais hidrossolúveis para posterior eliminação por via renal. Frente aos resultados, conclui-se que quercitrina e galoilquínico são substâncias de rápida eliminação e que podem estar relacionadas à atividade antilitiásica descrita para o extrato das folhas de C. langsdorffii. / Copaifera langsdorffii Desf., popularly known as \"copaíba\" is abundantly distributed in the Brazilian cerrado, with several biological activities that have been described in the literature for its oleoresin. However, since few years ago, our research group has been studying the aerial parts of this species, and it was found that the hydroalcoholic extract of its leaves display antilithiatic activity. Aiming to identify the compounds related to this activity, the phytochemical study of the leaves hydroalcoholic extract was undertaken. By using chromatography techniques, it was possible to choose the most promising fractions to isolate compounds. From the ethyl acetate fraction, it was isolated by countercurrent chromatography (HSCCC) followed by preparative HPLC purification, the flavonoids quercetin-3-O-?-L-rhamnopyranoside (quercitrin) and kaempferol-3-O-?-L-rhamnopyranoside (afzelin). From the aqueous fraction, it was isolated the galloylquinic acid derivatives 5\'\'-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic and 5\',5\'\'-di-O-methyl-3,4-O-di-galloylquinic by using gel filtration chromatography (Sephadex) followed by preparative HPLC purification. For the pharmacokinetic assays, the hydroalcoholic extract, quercitrin and 5\', 5\'\'-di-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic acid were chosen to be studied. For both compounds, it was validated analytical methods in plasma and saline, to perform pharmacokinetic studies. It was also held the microdialysis probe calibration in vitro by retrodialysis, to determine the conditions to be employed in vivo. In general, quercitrin fitted to a two-compartmental pharmacokinetic model and after intravenous administration of 1 mg/kg, it presented a short half-life (t1/ 2 = 0.40 ± 0.07 h) a fast (? = 11.32 ± 1.90 h-1) and good (Vdss = 2.10 ± 0.52 L/kg) tissue distribution and high clearance (CL = 6.85 ± 0.62 L/h/kg). In the kidney microdialisates analyses, the free renal fraction of quercitrin was 13 times greater than the free plasma concentration. The galloylquinic compound, which is a new isolated one, was studied intravenously in three concentrations (1 mg/kg, 1.5 mg/kg and 2 mg/kg) and fitted to a two-compartmental model with Michaelis-Menten elimination, presenting the non-linear behavior (ASC0-? 103.85 ± 23.90, 273.7 ± 81.6 and 363.6 ± 142.32 ?g h/mL, respectively). It was not possible to quantify the free concentration of galloylquinic in the kidney by microdialysis, because it bound to the probe. Thus, the study of tissue distribution was performed, in which it was demonstrated that both quercitrin and galloylquinic showed high penetration in the kidneys, with a tissue/plasma ratio of 23.7 and 12.4, respectively. With regard to the pharmacokinetic profile of the hydroalcoholic extract of C. langsdorffii and n-butanol fraction after oral administration, it was found that it was not possible to detect any of the isolated compounds in plasma, suggesting that these compounds were metabolized and probably become even more water soluble for disposal renally. Based on the results, it is concluded that quercitrin and galloylquinic are rapidly eliminated and may be related to antilithiatic activity of the leaves of C. langsdorffii.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-27T18:53:59Z No. of bitstreams: 1 daniellecristinazimmermannfranco.pdf: 1980224 bytes, checksum: 136850704bd6cd949245b93374380f44 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-27T19:17:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 daniellecristinazimmermannfranco.pdf: 1980224 bytes, checksum: 136850704bd6cd949245b93374380f44 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T19:17:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 daniellecristinazimmermannfranco.pdf: 1980224 bytes, checksum: 136850704bd6cd949245b93374380f44 (MD5) Previous issue date: 2012-07-30 / As dermatofitoses são micoses que afetam os tecidos queratinizados, causadas por fungos pertencentes ao grupo dos dermatófitos e que afetam o homem e os animais. O óleo resina de copaíba possui diversas ações farmacológicas, incluindo antimicrobiana. Assim, pode ser uma alternativa para o tratamento farmacológico das dermatofitoses. O objetivo deste estudo foi determinar o perfil químico do óleo resina de Copaifera langsdorffii Desf. e investigar sua atividade antifúngica frente aos principais fungos causadores de dermatofitoses: Microsporum spp e Tricophyton spp. Foram analisados o perfil químico do óleo resina de copaíba por cromatografia gasosa de alta resolução (CG-AR) e a atividade antifúngica do óleo por meio da determinação de sua concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração fungicida mínima (CFM). Os fármacos de referência, cetoconazol e terbinafina, foram empregados como controles positivos. Por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV), foram investigadas as alterações morfológicas causadas nos fungos expostos aos tratamentos propostos. O ácido copálico foi identificado na amostra, confirmando a originalidade do óleo resina de copaíba e o β-cariofileno foi encontrado como componente majoritário (31,4%). O óleo resina de copaíba, por meio do teste de triagem da atividade antifúngica, mostrou-se inativo frente a M. canis ATCC 32903, M. gypseum ATCC 14683, T. mentagrophytes ATCC 9533 e T. mentagrophytes ATCC 11480, apresentando atividade fungicida frente às linhagens de T. mentagrophytes ATCC 11481, com valores de CIM e CFM iguais a 31,25 μg de β-cariofileno.mL-1; e de T. rubrum com valores de CIM igual a 250 μg de β-cariofileno.mL-1 e de CFM igual a 500 μg de β-cariofileno.mL-1. Os fungos expostos a ação do óleo e dos fármacos de referência apresentaram deformações em suas estruturas. Os resultados estimulam a realização de ensaios in vivo para aplicação do óleo resina de copaíba no tratamento das dermatofitoses humanas e animais causadas por fungos do gênero Tricophyton spp. / The dermatophytosis are mycosis that affect the keratinized tissues caused by fungi of the dermatophytes group and affect the humans and the animals. The oleoresin extracted from copaiba has numerous pharmacological actions, including antimicrobial activity. Thus, it may be an alternative for pharmacological treatments of the dermatophytosis. The aim of this study was to determine the chemical profile of the oleoresin extracted from Copaifera langsdorffii Desf. and investigate him antifungic activity against the main fungi that cause the dermatophytosis: Microsporum spp and Tricophyton spp. The chemical profile of the oleoresin extracted from copaiba by high resolution gas chromatography (HR-GC) and the oleoresin’s antifungical activity by determination of him minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal fungidal concentration (MFC) were analyzed. The reference drugs, ketoconazole and terbinafine, were used as positive control. The scanning electron microscopy (SEM) allowed to investigate the morfological alterations caused in the fungi exposed to the proposed treatments. The copalic acid was identified confirming the originality of the oleoresin from copaiba and the β-caryophyllene was the majority compound (31.4%) found. The oleoresin extracted from copaiba showed no active against M. canis ATCC 32903, M. gypseum ATCC 14683, T. mentagrophytes ATCC 9533 and T. mentagrophytes ATCC 11480. This oleoresin showed fungicidal activity against the T. mentagrophytes ATCC 11481, with the MIC and CFM values equal to 31.25 μg of β-caryophyllene.mL-1; and T. rubrum, with MIC equal to 250 μg of β-caryophyllene.mL-1 and MFC equal to 500 μg of β-caryophyllene.mL-1. The fungi exposed to the action of the oleoresin and drugs reference presented damage on its structures. The results stimulate the achievement of in vivo assays to confirm the benefits from the application of the oleoresin extracted from copaiba in the treatment of dermatophytoses in humans and animal caused by fungi of the Tricophyton spp gender.

El presente estudio tuvo como objetivo principal formular una crema dermocosmética a base de Mauritia flexuosa L. f. y Copaifera reticulata var. peruviana y comprobar su efecto regenerador en piel lesionada de ratones Mus musculus Balb c. Se evaluaron las características fisicoquímicas del aceite de aguaje y la oleorresina de copaiba. Posteriormente se diseñaron tres formulaciones: crema a base de aceite de Mauritia flexuosa L. f. “aguaje”, crema a base de oleorresina de Copaifera reticulata var. peruviana “copaiba” y una mezcla de ambas, en las cuales se realizaron estudios de estabilidad acelerada a la temperatura de 40 0C y 5 0C durante 120 días teniendo como parámetros análisis organolépticos (aspecto, color y olor), fisicoquímicos (pH, viscosidad) y carga microbiológica total. El efecto regenerador de la piel lesionada de las cremas dermocosmética se evaluó mediante el método tensiométrico y corroborado por estudios histológicos. Se emplearon ratones Mus musculus Balb c de 33 ± 2.7g de peso y como tratamientos las cremas dermocosméticas a base de aguaje al 8%, copaiba al 10% y una mezcla de ambas a las mismas concentraciones mencionadas, comparando los resultados con el grupo control (sin tratamiento) y con el grupo tratado con una crema comercial Cicalfate. Se obtuvo mayor efecto regenerador de la piel lesionada con la crema dermocosmética a base de aguaje y copaiba comprobada por presentar mayor porcentaje de cicatrización 57.4%, el cual se corroboró mediante el estudio histológico de la piel regenerada, donde se observaron inicios de reepitelización, tejido de granulación y aumento de colágeno en la dermis. Palabras clave: Mauritia flexuosa L. f. “aguaje”, Copaifera reticulata var. peruviana “copaiba”, crema dermocosmética, efecto regenerador. / This present study was main objective to formulate a dermocosmetic cream based Mauritia flexuosa L. f. and Copaifera reticulata var. peruviana and to check its regenerative effect on damaged skin of mice Mus musculus Balb c. The physicochemical characteristics aguaje oil and copaiba oleoresin were evaluated. Subsequently, three formulations were designed: cream based oil of Mauritia flexuosa L. f. “aguaje”, cream based oleoresin of Copaifera reticulata var. peruviana "copaiba" and a mixture of both, which perfomed accelerated stability studies at the temperature of 40 0C and 5 0C for 120 days having as parameters organoleptic analysis (appearance, color and odor), physicochemical (pH, viscosity) and load microbial total. The regenerating effect in the injured skin was assessed by method tensiometric and corroborated by histological studies. Mus musculus Balb c mice of 33 ± 2.7g of weight were used and as treatments dermocosmetic creams based of aguaje 8%, copaiba 10% and a mixture of both at the same concentrations mentioned, comparing the results with the control group (untreated) and treated group with a commercial cream Cicalfate. The highest regenerative effect of damaged skin was obtained with the dermocosmetic cream based of aguaje and copaiba proven by to present higher percentage of healing 57.4%, which was confirmed by histological study of the regenerated skin, where were observed early epithelialization, tissue granulating and increasing collagen in the dermis. Key words: Mauritia flexuosa L. f. "aguaje", Copaifera reticulata var. peruviana "copaiba", dermocosmetic cream, regenerating effect. / Tesis

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O Ãleo-resina da Copaifera langsdorffii (Leguminaceae) Ã utilizado popularmente no tratamento de processos inflamatÃrios e na cicatrizaÃÃo de feridas e Ãlceras. Estudos prÃvios estabeleceram as propriedades gastroprotetora e antiinflamatÃria em modelos animais. O presente estudo avaliou o potencial antiinflamatÃrio do Ãleo-resina da Copaifera langsdorffii (ORCL) e de seu constituinte diterpÃnico, Ãcido kaurenÃico (AK) nos modelos experimentais de colite induzida por Ãcido acÃtico (UC-AA), por Ãcido trinitrobenzÃnico sulfÃnico (UC-TNBS), e ainda, indometacina e isquemia-reperfusÃo induzindo inflamaÃÃo intestinal (II-IND e II-I/R). E tambÃm, o potencial de cicatrizaÃÃo de feridas foi avaliado em ratos com feridas abertas e com incisÃo. Ratos foram prÃ-tratados via oral (15 e 2 horas antes) ou retal 2 horas apÃs a induÃÃo da colite, com ORCL (200 e 400mg/Kg), AK (50 e 100mg/Kg) ou veÃculo (1mL, 2% Tween 80 ou 1mL, 2% DMSO). A colite foi induzida pela aplicaÃÃo de 2mL de Ãcido acÃtico 4% (v/v) ou TNBS (0,25 mL com 20mg) e 24 ou 72 horas depois, os danos na mucosa do cÃlon foram avaliados, medidos os nÃveis de mieloperoxidase e malonaldeÃdo. No modelo de (CU-AA), houve uma importante reduÃÃo no escore da lesÃo e peso Ãmido nos animais tratados com as substÃncias teste, quando comparado ao controle veÃculo. Os efeitos foram confirmados na bioquÃmica pela significante reduÃÃo da atividade da mieloperoxidase (MDA), o marcador da infiltraÃÃo de neutrÃfilos e pela marcada diminuiÃÃo nos nÃveis de malonaldeÃdo, um indicador da lipoperoxidaÃÃo. AlÃm de o Ãcido acÃtico aumentar os nÃveis de nitrito e da enzima catalase no cÃlon, onde o tratamento com ORCL diminuiu significativamente. A anÃlise microscÃpica revelou uma diminuiÃÃo da infiltraÃÃo de cÃlulas inflamatÃrias e do edema da submucosa, nos segmentos do cÃlon tratados com ORCL ou AK. De maneira similar, no modelo de UC-TNBS, houve uma reduÃÃo do escore da lesÃo e peso Ãmido do cÃlon de animais prÃ-tratados com ORCL (400mg/Kg, v.o. ou retal) 2, 24 e 48 horas apÃs a injeÃÃo intracolÃnica de TNBS. A atividade da MPO, mas nÃo MDA e catalase foram significativamente afetados pelo prÃ-tratamento com ORCL. As observaÃÃes histolÃgicas indicam uma proteÃÃo parcial do ORCL, como UC-TNBS Ã um modelo crÃnico, talvez houvesse necessidade de uma terapia mais prolongada. No modelo de II-I/R, quarenta e cinco minutos de isquemia seguida de uma hora de reperfusÃo da artÃria mesentÃrica superior causou significante aumento nos nÃveis de MPO, catalase, MDA e nitrito, com uma significante diminuiÃÃo dos grupos sulfidrÃlicos nÃo-protÃicos (NP-SH/GSH) indicando um estresse oxidativo. Estes valores foram sigificamente revertido pelo prÃ-tratamento via oral com ORCL (200 e 400mg/Kg), sugerindo que ORCL anula o estresse oxidativo. Animais prÃ-tratados com ORCL (200 e 400mg/Kg, v.o.) ou AK (100mg/Kg, v.o.), 12 e 2 horas antes da administraÃÃo de 20mg/Kg de indometacina causando toxicidade intestinal, foi capaz de ser evidenciado pela diminuiÃÃo nos nÃveis de MPO e nitrito. Diferente da indometacina, ORCL mas nÃo AK falharam em induzir o aumento signifativo na permeabilidade intestinal. Este efeito do ORCL foi similar ao inibidor seletivo de COX-2, rofecoxibe. Estas observaÃÃes sugerem que ORCL Ã isento de toxicidade intestinal diferente da toxicidade intestinal dos inibidores clÃssicos nÃo seletivos da COX. AlÃm disso, ORCL promove cicatrizaÃÃo de feridas aberta ou com incisÃo em ratos evidenciada pela contraÃÃo e tensÃo da pele. Os dados indicam um potencial antiinflamatÃrio do Ãleo-resina da copaÃba e do seu diterpeno Ãcido kaurenÃico, possivelmente mediado pelos mecanismos antioxidantes e anti-lipoperoxidativo / Copaiba oil-resin from Copaifera langsdorffii (Leguminaceae) is a reputed traditional remedy for the treatment of inflammatory conditions and to promote healing of ulcers and wounds. Previous studies established its anti-inflammatory and gastroprotective properties through animal experimentation. The present study extended these earlier studies to analyse the intestinal anti-inflammatory potential of oil-resin Copaifera langsdorffii (ORCL) and its diterpene constituent, kaurenoic acid (KA) in rat models of ulcerative colitis induced by acetic acid (AA-UC), and trinitribenzene sulfonic acid (TNBS-UC), and in indomethacin -and ischemia-reperfusion-induced intestinal inflammation (IND-II and I/R-II). Further, its wound healing potential was evaluated in rats on open and incision wounds. Rats were pretreated orally (15 hrs and 2 hrs before) or rectally 2 hrs before the induction of colitis with ORCL (200 and 400 mg/kg), KA (50 and 100 mg/kg) or vehicle (1 ml, 2% Tween 80 or 1 ml, 2% DMSO). Colitis was induced by intracolonic instillation of a 2 ml of 4% (v/v) acetic acid solution or TNBS (0.25 ml of 20 mg) and 24 hrs or 72 hrs latter, the colonic mucosa was analysed for the severity of macroscopic colonic damage, the myeloperoxidase and the malondialdehyde levels. In AA-UC model, a marked reduction in Gross damage score and in wet weight/length ratio of colonic tissue were evident in animals pretreated orally or rectally with test substances, as compared to vehicle alone-treated controls. This effect was confirmed biochemically by a significant reduction in colonic myeloperoxidase (MPO) activity, the marker of neutrophilic infiltration and by a marked decrease in malondialdehyde (MDA) level, an indicator of lipoperoxidation. Besides, AA elevated increase in the levels of nitrite and catalase activity in colon tissue was also significantly decreased by ORCL treatment. Furthermore, microscopical examination revealed the diminution of inflammatory cell infiltration, and the submucosal edema in colon segments of rats pretreated with ORCL or KA. In a similar manner, in TNBS-UC, a marked reduction in Gross damage score and in wet weight/length ratio of colonic tissue was evident by ORCL pretreatment (400 mg/kg, p.o. or intra-rectal) at 2, 24 and 48 hrs after intracolonic injection of TNBS. MPO activity but not the MDA and catalase levels were significantly affected by ORCL treatment. Histological observations also indicated only a partial protection by ORCL, suggesting that TNBS-UC being a chronic model, a more prolonged therapy may be needed. In the model of I/R-II, five forty minute of ischemia followed by one hour reperfusion of superior mesenteric artery caused significant elevations of MPO, catalase, MDA and nitrite levels with a significant decrease in non-protein sulfhydryls (NP-SH/ GSH) indicating an oxidative stress. These changes were significantly reversed by oral pretreatment with ORCL (200 and 400 mg/kg), suggesting that ORCL obliterates oxidative stress. Pretreatment of animals with ORCL (200 and 400 mg/kg, p.o.) or KA (100 mg/kg, p.o.), 12 and 2 hrs before the administration of 20 mg/kg indomethacin mitigated the intestinal toxicity as evidenced by decreases in tissue levels of MPO and nitrite. Unlike indomethacin, ORCL but not KA at either dose failed to induce a significant increase in intestinal permeability. This effect of ORCL simulated that of a selective COX-2 inhibitor, rofecoxib. These observations suggest that ORCL is devoid of intestinal toxicity unlike the classical non-selective COX inhibitors. Also, ORCL promoted wound healing in rats on experimental open or incision wounds as evidenced by an early wound contraction and increased wound tensile strength. The data indicate a significant anti-inflammatory potential of copaiba oil-resin and its diterpenoid, kaurenoic acid possibly mediated through an antioxidant/anti-lipoperoxidative mechanism(s)

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-14T19:38:24Z No. of bitstreams: 1 Tese - Ederly Santos Silva.pdf: 1737064 bytes, checksum: 3f36097378fc3cdeb2502d467b6793ac (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-16T18:26:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Ederly Santos Silva.pdf: 1737064 bytes, checksum: 3f36097378fc3cdeb2502d467b6793ac (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-16T18:30:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Ederly Santos Silva.pdf: 1737064 bytes, checksum: 3f36097378fc3cdeb2502d467b6793ac (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-16T18:30:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Ederly Santos Silva.pdf: 1737064 bytes, checksum: 3f36097378fc3cdeb2502d467b6793ac (MD5) Previous issue date: 2011-08-01 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Copaibas are trees that are native to tropics, with nine species found in Brazilian Amazonia. Copaiba trees produce an oil-resin that is found in secretory channels located in the trunks. Copaifera reticulata is the predominant species in the Tapajós National Forest. The socioeconomic aspects of the communities of Pedreira and São Domingos, who are authorized to collect copaiba, and the phytodemographic, genetic and physical-chemical aspects of the copaiba populations available to these communities were analyzed, with the objective of subsidizing future actions of copaiba management in the Tapajós Flona. In the socioeconomic study, semi-structured interviews with the communities extractors elucidated the current local situation with respect to the extraction of copaiba. In the phytodemographic study, the species was identified, the density of potentially productive individuals was quantified, and these were mapped. Microsatellite markers developed by Embrapa Genetic Resources and Biotechnology were used for the genetic analyses. The physical-chemical parameters used were density and viscosity of the oil-resin, as these are associated with potential uses and for the chemical study it was the refraction index, acidity, saponificacion and éster. The management of copaiba is technologically simple, but the extractors identified numerous difficulties, including less advantage in the sale of the oil-resin than formerly, showing that the situation in the past that stimulated them is very different from the current situation, especially in the commercialization process. The density of productive trees in the collection area of Km 67 was 5,5 and of Km 72 was 6,2, with 200 adult individuals geo-referenced. The largest number of productive trees was in the diameter class 51-70 cm, totaling 88 trees, and the largest diameter found was 120 cm. To C. reticulata it presents an oil-resin with viscosity 9 (mPa.s) very variable and it lowers acidity (mg of KOH/g), which could serve as a basis for oil-resin differentiation. With the six microsatellite loci that transferred, 78 alleles were observed. The genetic diversity (He) varied from 0.59 to 0.85 per locus, considered high for Neotropical tree species; however, the observed heterozygosity was smaller than the expected heterozygosity by the Hardy-Weinberg equilibrium in the collection areas, demonstrating a reasonable level of inbreeding (f = 0.375 to 0.419), probably due to a clumped distribution. The analysis with Structure did not identify two populations based on the collection areas, but two genetic groupings based on different combinations of alleles. Most of the genetic variation was found within the collection areas (97%), with weak genetic differentiation among the areas (Fst = 0.030). A little less genetic variation it was found within the genetic groups (93%), with a corresponding increase in divergence (Fst = 0.070). The noncorrespondence between collection areas and genetic groupings could be due to unknown historical events, but, combined with the high genetic diversity founds, suggests that the current levels of inbreeding won't be a problem for a management plan, although the isolation of the Tapajós Flona in the future could contribute to elevate inbreeding to worrying levels. The information presented here will serve as a baseline for future comparison, guiding improvements in the management plan. / As copaíbas são árvores nativas da região tropical das quais nove espécies podem ser encontradas na Amazônia brasileira. As árvores de copaíba produzem um óleo-resina que é encontrado em canais secretores localizados no tronco das árvores. Copaifera reticulata é a espécie predominante na área deste estudo. Foram analisados os aspectos socioeconômicos das Comunidades de Pedreira e São Domingos na Flona do Tapajós, Santarém, Pará, por serem autorizadas a coletar copaíba na Flona, e os aspectos fito-demográficos, genéticos e físicos das populações de copaibeiras disponíveis a estas comunidades, com objetivo de subsidiar futuras ações de manejo de copaíba na Flona. No estudo socioeconômico, realizouse entrevistas semi-estruturadas com os extratores das comunidades para saber a real situação local quanto a extração do produto. No estudo fito-demográfico, identificou-se a espécie, quantificou-se a densidade dos indivíduos que foram potencialmente produtivos, e mapeou-se as árvores. Marcadores microssatélites desenvolvidos pela Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia serão utilizados para as análises genéticas. Os parâmetros escolhidos para o estudo físico foram a determinação da densidade e viscosidade do óleo-resina por serem relacionados aos usos potenciais, e para o estudo químico foram os índices de refração, acidez, saponificação e éster. O processo de manejo da copaíba apresenta tecnologia simples para a retirada do óleo-resina, mas os extratores apontaram muitas dificuldades em relação ao manejo da espécie. Extrativistas afirmaram que atualmente tem-se menos vantagem na venda do óleo-resina de copaíba do que antigamente, indicando que a situação no passado que os estimulava é bem diferente do quadro atual, necessitando de apoio no processo de comercialização. As densidades dos indivíduos na área de coleta do Km 67 foi 5,5 indivíduos por hectare e no Km 72 foi 6,2 indivíduos por hectare, e 200 indivíduos adultos foram georeferenciados. O maior número de matrizes produtivas encontram-se na classe diamétrica 51-70 cm, totalizando 88 árvores, e o maior diâmetro encontrado foi 120 cm de DAP. A C. 7 reticulata apresenta um óleo-resina com viscosidade (mPa.s) muito variável e baixa acidez (mg de KOH/g), podendo servir de base para diferenciação de óleos-resina. Com os seis locos microssatélites que transferiram foram observados 78 alelos. A diversidade genética (He) variou de 0,59 a 0,85 por locos, considerada alta para a maioria das espécies neotropicais; no entanto, a heterozigosidade observada foi menor que a heterozigosidade esperada pelas proporções do EHW para as áreas de estudo, demonstrando um razoável nível de endogamia (f = 0,375 a 0,419) nas áreas de coleta, provavelmente devido a sua distribuição agrupada. As análises com Structure não identificaram duas populações baseadas nas áreas de coleta, mas sim dois agrupamentos genéticos baseados em conjuntos distintos de alelos. A maior parte da variação genética foi encontrada dentro das áreas de coleta (97%), enquanto encontrou-se uma fraca diferenciação genética entre as áreas (FST = 0,030). Um pouco menos de variação genética foi encontrada dentro dos grupos genéticos (93%), com um aumento correspondente na divergência (FST = 0,070). A não correspondência entre áreas de coleta e agrupamentos genéticos poderia ser devido a eventos históricos desconhecidos, mas, combinada com a alta diversidade encontrada, sugere que a endogamia atual não será um problema para um plano de manejo, embora o isolamento da Flona no futuro poderia contribuir para elevar a endogamia a níveis preocupantes. As informações aqui apresentadas servirão como linha base para comparação futura, orientando melhorias no plano de manejo.

Espécies do gênero Copaifera (Leguminosae) são nativas de regiões tropicais da América Latina e África. No Brasil, seu óleo-resina é amplamente utilizado em medicina popular como antiinflamatório, antisséptico e cicatrizante. No presente trabalho, avaliou-se, em uma primeira fase, a atividade antiinflamatória em modelo experimental agudo das seguintes amostras de óleo-resina: comercial, gentilmente cedida pela empresa Pronatus, Copaifera reticulata, C. multijuga e C. paupera. As amostras foram administradas pela via oral, sendo selecionada, das amostras identificadas botanicamente, a C. reticulata por apresentarem maior atividade. A amostra comercial também foi ensaiada no modelo experimental acima. Os óleo-resinas foram analisados por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas tendo revelado a presença de sesquiterpenos e diterpenos. Foram identificados vinte e dois compostos na amostra comercial e vinte seis na amostra de C. reticulata. Deste total, seis substâncias foram comuns a ambas as amostras. A seguir, os óleos-resinas foram destilados e separadas suas respectivas frações sesqui e diterpênicas. Tanto os óleos-resinas quanto suas frações foram avaliados farmacologicamente. As atividades farmacológicas testadas foram: atividade antiinflamatória aguda, subcrônica, crônica e ensaios de toxicidade aguda, subcrônica e citotoxicidade. A atividade antiinflamatória foi testada em cinco modelos: edema de pata induzido pela carragenina, nistatina e miconazol; indução de formação de tecido granulomatoso e dermatite induzida pelo óleo de cróton. Nos modelos utilizados as doses testadas foram de 2,47 ml/kg (DE50 no modelo da carragenina) para a amostra comercial e suas frações sesqui e diterpênicas e 2,02 ml/kg (Dose equipotente no modelo da carragenina) para a amostra de C. reticulata e suas frações sesqui e diterpênicas). Em todos os ensaios realizados com as amostras, evidenciaram-se intensa atividade antiflogística, com exceção da C. reticulata que apresentou elevada toxicidade no modelo de indução do tecido granulomatoso. Nos ensaios de toxicidade aguda, a amostra C. reticulata (DL50 = 4,48 ml/kg) apresentou toxicidade maior que a amostra comercial (DL50 > 12,35 ml/kg). Suas frações sesquiterpênicas foram bem menos tóxicas que seus correspondentes óleos-resinas com DL50 maiores que 9,14 e 20 ml/kg, respectivamente para C. reticulata e amostra comercial: Por outro lado, a fração resinosa (diterpênica) apresentou alta toxicidade com DL50 superiores a 2,85 e 1,29 ml/kg, respectivamente para a amostra comercial e C. reticulata. Nos ensaios de toxicidade subcrônica confirmou-se a toxicidade menor para a fração sesquiterpênica da amostra de C. reticulata. O óleo-resina de C. reticulata apresentou toxicidade renal e alterações hepáticas indicando que pode haver um comprometimento hepático. / Species of the genus Copaifera (Leguminosae) are native of tropical regions in Latin America and Africa. In Brazil, its oil-resin is widely utilized in popular medicine as anti-inflammatory, antiseptic and cicatrizing medicine. In the present work, we initially evaluated the acute anti-inflammatory activity of the following samples: commercial, Copaifera reticulata, C. multijuga and C. paupera. All the samples were administered by oral route. This initial pharmacological evaluation revealed that the C. reticulata was clearly more effective. In the second part of this work, the C. reticulata and the commercial samples, kindly provided by Pronatus-Manaus, were investigated. The oil-resins of the selected samples were analyzed by gas chromatography connected with mass spectrometry, revealing the presence of sesquiterpens and diterpens. Twenty two compounds in the commercial sample and twenty six in the C. reticulata were identified. Then after, the oil-resins were distilled and separated in their respective sesqui and diterpens fractions. Both oil-resins and their fractions were pharmacologically evaluated. The pharmacological evaluations were: acute, sub-chronic and chronic anti-inflammatory activities and acute, sub-chronic toxicities and cito-toxicities assays. The anti-inflammatory activity was studied in five experimental models: carrageenan, nistatin and miconazole paw oedema; induction of granulomatous tissue formation and croton oil dermatitis. The administered doses by oral route were 2.47 ml/kg (EQ50 for carrageenan model) to commercial sample and its sesqui and diterpens fractions, and 2.02 ml/kg to C. reticulata sample and its sesqui and diterpens fractions. All the assays carried out with the selected samples showed intense anti-flogistic activity, except for C. reticulata that exhibited high toxicity in the granulomatous tissue model. In the acute toxicity studies, C. reticulata (LD50 = 4.48 ml/kg) revealed greater toxicity in comparison with the commercial sample (LD50 > 12.35 ml/kg). Its sesquiterpens fractions were less toxic that its correspondent oil-resins with LD50 higher than 9.14 and 20 m1/kg, for C. reticulata and commercial sample, respectively. On the other hand, resin fraction (diterpenic) presented high toxicity with LD50 higher than 2.85 and 1.29 ml/kg for commercial and C. reticulata samples, respectively. The sub-chronic assays, confirmed the less toxicity for the C. reticulta sesquiterpenic fraction. The C. reticulata oil-resin presented renal toxicity and hepatics alterations.

As plantas do gênero Copaifera mais bem conhecidas como \"copaibeira\" são árvores tropicais, reconhecidas pela produção de uma oleorresina extraída do tronco, a qual vem sendo empregada por mais de 500 anos na medicina tradicional popular. Entre as espécies mais abundantes no Brasil destaca-se Copaifera langsdorffii L., que nas suas folhas têm um grande número de compostos fenólicos com potencial atividade biológica como antioxidante. Este estudo teve como finalidade isolar compostos das classes de flavonoides e galoilquínicos presentes nas folhas de C. langsdorffii e investigar seus possíveis efeitos citoprotetores frente à intoxicação com metais pesados. Foi obtido o extrato hidroalcoólico das folhas, e foi submetido a partições líquido-líquido. A fração em acetato de etila foi fracionada através de cromatografia contracorrente de alta velocidade (HSCCC), e a fração em n-butanol por cromatografia de exclusão em gel Sephadex. Foram isolados e identificados por RMN, dois flavonoides (quercitrina e afzelina) da fração em acetato de etila e dez derivados galoilquínicos da fração n-butanólica. Os flavonoides e dois derivados galoilquínicos (AGQ3 e AGQ4), foram avaliados em ensaios de citotoxidade com o protocolo de alamar blue nas linhagens celulares de hepatocarcinoma humano (HepG2) e feocromocitoma da medula suprarrenal de rato (PC12), em três diferentes concentrações (1, 10 e 100 ?M) por 24 h. A segurança do composto AGQ4 também foi avaliada através do ensaio de eficiência clonogênica contra a linhagem de pulmão de hamster chinês (V79). Após foram feitos ensaios de associação realizando pré-tratamentos de 1 hora com os compostos, para posterior exposição a doses tóxicas dos metais. Os ensaios de citotoxidade demostraram que nenhuma das concentrações avaliadas dos quatro compostos afetou a viabilidade das linhagens celulares. O ensaio de eficiência clonogênica mostrou que apenas uma concentração de 3,8 mM consegue reduzir significativamente a viabilidade na linhagem V79, mostrando o AGQ4 como um composto seguro para o uso in vitro. Os ensaios de associação mostraram que os quatro compostos têm efeito citoprotetor significativo na linhagem HepG2, contra mercúrio e chumbo a exceção do AGQ3 que em concentração de 100 ?M não mostrou proteger contra o chumbo. Por outro lado, os compostos não foram ativos contra o mercúrio na linhagem PC12, mostrando efeito contrário, pois os tratamentos metal-composto diminuíram a viabilidade em comparação com os tratamentos só com o metal. Apenas nas concentrações de 1 e 10 ?M se evidenciou efeito protetor dos compostos contra o chumbo. Em geral também foi observado um efeito de menor atividade na maior concentração do composto, que pode estar relacionado ao efeito pró-tóxico que alguns polifenóis apresentam em concentrações maiores. Tanto os flavonoides quanto os derivados galoilquínicos isolados de C. langsdorffii se mostraram com potencial na citoproteção contra a exposição ao chumbo e ao mercúrio / The Copaifera plants, better known as \"copaibeira\", are tropical trees recognized by the production of an oleoresin extracted from the tree trunk, which has been used for more than 500 years in traditional folk medicine. Among the most abundant species in Brazil is Copaifera langsdorffii L., which in its leaves have a large number of phenolic compounds with potential biological activity as antioxidant. Then, this study aimed to isolate compounds of the classes of flavonoids and galloylquinic derivatives present in the leaves of C. langsdorffii and to investigate their possible cytoprotective effects against heavy metal poisoning. The hydroalcoholic extract of the leaves was obtained and submitted to liquid-liquid partitions. The ethyl acetate fraction was subjected to high-speed countercurrent chromatography (HSCCC), and the fraction in n-butanol was subjected to Sephadex gel exclusion chromatography. Two flavonoids (quercitrin and afzelin) from the ethyl acetate fraction and ten galloylquinic derivatives of n-butanolic fraction were isolated and identified by NMR, using semi-preparative high performance liquid chromatography (CLAE-UV). Flavonoids and two galloylquinic acids (AGQ3 and AGQ4) were evaluated in alamar blue cytotoxicity assays in HepG2 cell lines (human hepatocarcinoma cells) and PC12 (rat adrenal pheochromocytoma cells), in three different concentrations (1, 10 and 100 ?M) for 24 h. The safety of compound AGQ4 was also assessed by the clonogenic efficiency assay against V79 (Chinese hamster lung) cell line. Once was proved that compound concentrations did not affect cell viability, association assays were performed by one hour pre-treatments of the compounds for further exposure to toxic doses of the metals. Cytotoxicity assays demonstrated that none of the evaluated concentrations of the four compounds affected the viability of the cell lines. The clonogenic efficiency assay showed that only a concentration of 3.8 mM of AGQ4 can significantly reduce viability in the normal cell line, showing the galloylquinic derivative as a highly safe compound for in vitro use. The association assays showed that the four compounds have a significant cytoprotective effect for the HepG2 cell line against Hg and Pb, except for AGQ3 which at 100 ?M concentration did not show protection against lead. Also the compounds did not show activity against Hg in the cell line PC12 and, in addition, they gave the opposite effect by decreasing cell viability in comparison with the treatments with only the metal. Only the concentrations of 1 and 10 ?M showed a protective effect of the compounds against lead. In general, a lower activity effect was also observed at the higher concentrations of the compounds, which may be related to the protoxic effect of some phenolic compounds. Both flavonoids and galloylquinic acid derivative compounds showed potential on the cytoprotection for exposure to lead and methylmercury.