Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2016-08-18T13:16:28Z No. of bitstreams: 1 Roberto Carlos Gomes da Silva.pdf: 3176847 bytes, checksum: b508a4a3eb30a62abd86ea9330f277e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-18T13:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roberto Carlos Gomes da Silva.pdf: 3176847 bytes, checksum: b508a4a3eb30a62abd86ea9330f277e4 (MD5) Previous issue date: 2008-04-09 / Since DNA structure was described, several studies have been carried out in genetics that promoted a revolution in the practice of medicine. Human syndromes that were practically undiagnosed became easily diagnosed with molecular tools. However, most of the genetic diseases remain under diagnostic obscurity, increasing health concerns for affected people and public demand for preventive health care such as the case of Fragile-X Syndrome, the most common heritable form of mental retardation in humans. FXS is caused by an expansion of CGG repeat sequence in the promoter region of FMR1 gene, located in Xq27.3. Both men and women are affected by FXS and pre-mutation can expand to a full mutation in the next generation. Under full mutation status ( 200 repeats) the gene is silenced and FMRP protein is not produced causing mental retardation, speech delay, and behavior problems, the most frequent symptoms in FXS. Prevalence of FXS is estimated in 1:4000 and 1:8000 and of carriers in the general population as 1:813 and 1:259 for men and women, respectively. Because of FXS potential to affect subsequent generations it is crucial to properly diagnose the syndrome. Laboratory analysis of DNA from FXS, using PCR or Southern Blotting, allows reaching the diagnosis in 99% of cases carrying mutated genes. However, to date the Brazilian Public Health System does not recognize the molecular methods to reach complete diagnostic in FXS. Early diagnose would allow fore more appropriate and efficient therapy approaches, favoring satisfactory development of all affected people, minimizing their suffering and the burden on their families, increasing, on the other hand, their quality of life which should go beyond survival. / A partir da descrição da estrutura do DNA, várias pesquisas foram desenvolvidas na área da Genética, promovendo uma revolução na prática da medicina. Síndromes, antes difíceis ou até impossíveis de serem detectadas, com tecnologia e ferramentas moleculares, tornaram-se facilmente diagnosticadas. Entretanto, diversas doenças ainda persistem na obscuridade de diagnóstico e geram problemas de saúde pública como é o caso da Síndrome do X-Frágil (SXF), que é a causa mais comum de retardo mental masculino herdado, e que consiste na expansão do número de cópias de uma seqüência de bases CGG do DNA no gene FMR1, localizado no cromossomo Xq27.3. A SXF afeta tanto homens quanto mulheres e a pré-mutação poderá expandir-se à mutação completa nas próximas gerações. Os portadores da pré-mutação continuam produzindo a proteína FMRP e os portadores da mutação completa são afetados pela SXF, pois o gene FMR1 é silenciado, e a proteína não é produzida, causando retardo mental, problemas de linguagem e de comportamento. A prevalência da SXF é estimada em 1:4000 e 1:8000, e para portadores na população em geral é 1:813 e 1:259 para homens e mulheres respectivamente. A importância do reconhecimento clínico e diagnóstico da SXF vem do fato de que as gerações futuras poderão estar comprometidas. O estudo do DNA para X-frágil pela PCR e Southern blotting permite determinar com segurança superior a 99% quem é portador da pré-mutação do gene FMR1 e quem possui a mutação completa. Entretanto, o SUS não reconhece os métodos moleculares, apesar do diagnóstico permitir intervenções terapêuticas, com respostas bastante eficientes, favorecendo o desenvolvimento de modo integral das pessoas afetadas, minimizando seu sofrimento e de seus familiares, uma vez que a qualidade de vida deve ir além da sobrevivência.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-02Bitstream added on 2014-06-13T20:48:03Z : No. of bitstreams: 1 martinhago_cd_dr_botfm_prot.pdf: 1810275 bytes, checksum: 5592d92db2f6fd8dea862970f2f6df15 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Cpdp - Centro Paulista de Pesquisa e Diagnostico / O diagnóstico genético pré-implantacional (PGD) é um procedimento o qual permite que embriões sejam testados perante uma doença genética antes de sua transferência para o útero materno, ou seja, antes... / Preimplantation genetic diagnosis (PGD) is a procedure that permits embryos to be tested for a possible genetic diseade before being transferred to the maternal uterus, i.e., before the beginning of pregnancy... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-27Bitstream added on 2014-06-13T20:26:11Z : No. of bitstreams: 1 derussi_aap_dr_botfmvz_parcial.pdf: 278460 bytes, checksum: c548ab3874a6050b11ce0ea59427ce09 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-19T18:32:45Z: derussi_aap_dr_botfmvz_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-12-19T18:33:33Z : No. of bitstreams: 1 000714514.pdf: 6158132 bytes, checksum: 4200f8ab8ae717221756a68f1f123a5e (MD5) / Este trabalho teve como objetivo investigar a expressão dos receptores hormonais: estrógeno beta (ER-β), estrógeno alpha (ER- α), progesterona (PR), ocitocina (OTR) e também do fator inibidor de leucemia (LIF) e seu receptor (LIFR) e da osteopontina (OPN) em embriões e tecido materno durante diestro gestacional e cíclico, realizar a análise ultra-estrutural de embriões e tecido materno e avaliar o perfil protéico de lavados uterinos e tubáricos de fêmeas gestantes e não gestantes. Foram utilizadas 24 fêmeas separadas em – GRUPO I- subdividido em: Grupo IA - 05 fêmeas submetidas à OSH aos 8 dias de gestação; Grupo IB - 05 cadelas submetidas à OSH aos 12 dias de gestação e Grupo IC - 05 cadelas submetidas à OSH 21 dias de gestação e Grupo ID- 4 cadelas submetidas a cesariana 60 dias de gestação. O GRUPO II- 05 cadelas, não inseminadas, que foram submetidas a OSH, 12 dias após a onda pré-ovulatória de LH. Para a expressão gênica foi usada a técnica de qRT- PCR, em tecido materno e em embriões dos Grupos I e II. Para a caracterização eletroforética das proteínas do lavado uterino e tubárico foi utilizada a técnica de eletroforese unidimensional. Na avaliação ultraestrutural dos embriões e tecido materno foi realizada a técnica de microscopia eletrônica de transmissão. Os genes ER-, PR, LIF-R foram expressos somente em blastocistos; não houve expressão de ER-, OPN e LIF e o gene OTR esteve presente tanto em mórulas quanto em blastocistos caninos. Os genes ER- α, ER- β, PR, OTR, LIFR, OPN e LIF foram expressos em tubas e útero de cadelas gestantes e não gestantes, sendo que somente o LIF-R foi mais expresso em útero e tuba de cadelas não gestantes. Somente a expressão do gene ER- β foi significativamente superior em tubas de... / We aimed to investigate the gene expression of leukemia inhibitory factor (LIF) and it receptor (LIFR), osteopontin (OPN) and hormonal receptors: estrogen beta (ER-β), estrogen alpha (ER-β), progesterone (PR) and oxytocin (OTR) in bicthes embryos and maternal tissue during cyclic and gestational diestrus. We also aimed to performed the ultrastructural analysis of bitches embryos and maternal tissue and evaluate the protein profile of uterine and oviducts washes in pregnant and non pregnant bitches. Twenty-for bitches were placed in: GROUP I subdivided in: Group IA – 05 females submitted to OVH at day 8 of pregnancy; GROUP IB - 05 females submitted to OVH at day 12 of pregnancy; GROUP IC – 05 females submitted to OVH at day 21 of pregnancy and GROUP ID – 05 females submitted to OVH at day 60 of pregnancy. And GROUP II - 05 females, not inseminated submitted to OVH 12 after the LH surge. For gene expression the qRT-PCR was used in embryos and maternal tissue at group I and II. For electrophoretic characterization of protein flushes from uterus and oviduct the unidimensional electrophoresis was used. The transmission electron microscopy technique was performed for the ultrastructural evaluation of embryos and maternal tissue. The ER-, PR, LIF-R genes were expressed only in blastocysts; there were no ER-, OPN e LIF expression and the OTR gene was present in both morula and blastocysts. The ER- α, ER- β, PR, OTR, LIFR, OPN and LIF genes were expressed in oviduct and uterus of pregnant and non pregnant bitches, however the LIF-R was more expressed in non pregnant females. Only the ER- β was more expressed in the oviduct of non pregnant femaleshas opposite to the OPN expression. Ultrastructural changes were observed during the embryo development. The uterine enviroment modified... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Fabiana Ferreira Souza / Banca: Maria Isabel Mello Martins / Banca: Maria Dalva Cesario / Resumo: Este trabalho teve como objetivo investigar a expressão dos receptores hormonais: estrógeno beta (ER-β), estrógeno alpha (ER- α), progesterona (PR), ocitocina (OTR) e também do fator inibidor de leucemia (LIF) e seu receptor (LIFR) e da osteopontina (OPN) em embriões e tecido materno durante diestro gestacional e cíclico, realizar a análise ultra-estrutural de embriões e tecido materno e avaliar o perfil protéico de lavados uterinos e tubáricos de fêmeas gestantes e não gestantes. Foram utilizadas 24 fêmeas separadas em - GRUPO I- subdividido em: Grupo IA - 05 fêmeas submetidas à OSH aos 8 dias de gestação; Grupo IB - 05 cadelas submetidas à OSH aos 12 dias de gestação e Grupo IC - 05 cadelas submetidas à OSH 21 dias de gestação e Grupo ID- 4 cadelas submetidas a cesariana 60 dias de gestação. O GRUPO II- 05 cadelas, não inseminadas, que foram submetidas a OSH, 12 dias após a onda pré-ovulatória de LH. Para a expressão gênica foi usada a técnica de qRT- PCR, em tecido materno e em embriões dos Grupos I e II. Para a caracterização eletroforética das proteínas do lavado uterino e tubárico foi utilizada a técnica de eletroforese unidimensional. Na avaliação ultraestrutural dos embriões e tecido materno foi realizada a técnica de microscopia eletrônica de transmissão. Os genes ER-, PR, LIF-R foram expressos somente em blastocistos; não houve expressão de ER-, OPN e LIF e o gene OTR esteve presente tanto em mórulas quanto em blastocistos caninos. Os genes ER- α, ER- β, PR, OTR, LIFR, OPN e LIF foram expressos em tubas e útero de cadelas gestantes e não gestantes, sendo que somente o LIF-R foi mais expresso em útero e tuba de cadelas não gestantes. Somente a expressão do gene ER- β foi significativamente superior em tubas de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: We aimed to investigate the gene expression of leukemia inhibitory factor (LIF) and it receptor (LIFR), osteopontin (OPN) and hormonal receptors: estrogen beta (ER-β), estrogen alpha (ER-β), progesterone (PR) and oxytocin (OTR) in bicthes embryos and maternal tissue during cyclic and gestational diestrus. We also aimed to performed the ultrastructural analysis of bitches embryos and maternal tissue and evaluate the protein profile of uterine and oviducts washes in pregnant and non pregnant bitches. Twenty-for bitches were placed in: GROUP I subdivided in: Group IA - 05 females submitted to OVH at day 8 of pregnancy; GROUP IB - 05 females submitted to OVH at day 12 of pregnancy; GROUP IC - 05 females submitted to OVH at day 21 of pregnancy and GROUP ID - 05 females submitted to OVH at day 60 of pregnancy. And GROUP II - 05 females, not inseminated submitted to OVH 12 after the LH surge. For gene expression the qRT-PCR was used in embryos and maternal tissue at group I and II. For electrophoretic characterization of protein flushes from uterus and oviduct the unidimensional electrophoresis was used. The transmission electron microscopy technique was performed for the ultrastructural evaluation of embryos and maternal tissue. The ER-, PR, LIF-R genes were expressed only in blastocysts; there were no ER-, OPN e LIF expression and the OTR gene was present in both morula and blastocysts. The ER- α, ER- β, PR, OTR, LIFR, OPN and LIF genes were expressed in oviduct and uterus of pregnant and non pregnant bitches, however the LIF-R was more expressed in non pregnant females. Only the ER- β was more expressed in the oviduct of non pregnant femaleshas opposite to the OPN expression. Ultrastructural changes were observed during the embryo development. The uterine enviroment modified... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:02:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3641_1.pdf: 6593022 bytes, checksum: 0f5771c7ba5a598c9b448775b9fef6c4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A leucemia promielocítica aguda (LPA) corresponde a cerca de 20-28% das LMAs nos países latino-americanos, sendo caracterizada pelo acúmulo de células leucêmicas na medula óssea semelhantes a promielócitos e clinicamente associada à coagulopatia, que é responsável pela alta mortalidade precoce nas fases iniciais de tratamento. Apesar da LPA ser geralmente reconhecida por seus caracteres morfológicos, existem casos atípicos. A LPA é uma patologia beneficiada pelo tratamento com ATRA e, portanto, um rápido e eficiente diagnóstico é essencial. A citogenética em geral e a RT-PCR são amplamente utilizadas na detecção da fusão gênica PML-RARα. Estas técnicas fornecem informações adicionais sobre a presenca de outras anormalidades citogenéticas, porém consomem tempo e requerem laboratórios especializados. O padrão da PML provou-se útil ao diagnostico da LPA clássica através de técnicas imunológicas utilizando anticorpos monoclonais ou policlonais. Neste estudo foram analisados 15 pacientes, de ambos os sexos, idade variando de 4 a 17 anos, diagnosticados com LPA no Centro de Oncohematologia Pediátrica do HUOC ou Instituto Nacional do Câncer entre os anos de 2004 a 2008. As amostras de medula óssea dos pacientes foram tratadas de acordo com protocolos padrões sendo realizadas as técnicas de bandeamento G, RT-PCR, FISH usando sonda para o rearranjo PML-RARα e imunofluorescência com anticorpo monoclonal PG-M3. A análise por bandeamento G revelou alterações cromossômicas, com excessão de dois casos que apresentaram cariótipos normais. O estudo apresentou: um cariótipo complexo 47,XX,del(12p),add(14q),del(15q),i(19q),+mar, onde não foi detectada a fusão PML-RARα pela RT-PCR, nem pela FISH; um 48,XX,+2mar, no qual também não foi detectada a fusão PMLRARα pelas técnicas moleculares. Estes dois casos podem conter fusões variantes. Sete casos com t(15;17) foram detectados pela citogenética e confirmados pela FISH; cinco casos com t(15;17) confirmados pela FISH quando não foi possível realizar a análise citogenética. Em três casos a RT-PCR mostrou-se divergente da FISH. A imunofluorescência foi realizada em cinco casos e todos confirmaram o diagnóstico da LPA clássica. Sete pacientes estão vivos, seis em remissão, um em tratamento e oito foram a óbito. Estes dados mostram a importância da união de diversas metodologias para o aperfeiçoamento da eficiência e sensibilidade do diagnóstico e do tratamento desta doença

O diabetes mellitus tipo MODY (maturity-onset diabetes of the young) é caracterizado por defeito na secreção de insulina, herança autossômica dominante, hiperglicemia de início precoce e anticorpos anti-células beta negativos. Até o momento, já foram descritas mutações em 14 genes diferentes. A confirmação do diagnóstico de MODY é feita por estudo genético-molecular, tradicionalmente pelo método de Sanger. Diante da grande heterogeneidade genética de MODY, acrescida da dificuldade de estudo de alguns genes por seu grande tamanho e ausência de hotspots, o sequenciamento em larga escala (SLE) mostra-se promissor para uma análise genética custo-efetiva na suspeita de MODY. No Brasil, existem poucos estudos genéticos de rastreamento de MODY e uma alta prevalência de casos sem mutações identificadas nos genes testados (MODY X). Os objetivos deste estudo foram: 1) analisar simultaneamente todos os genes associados a MODY em uma coorte de pacientes com suspeita clínica, utilizando um painel de SLE; 2) avaliar a patogenicidade das variantes alélicas identificadas de acordo com os critérios da Sociedade Americana de Genética Médica (ACMG). Foram selecionados 80 casos com fenótipo de MODY e análise prévia negativa dos 2 genes mais prevalentes, GCK e HNF1A, pelo método de sequenciamento de Sanger. Estes casos foram analisados pelo método de SLE, direcionado para regiões gênicas alvo, por meio de um painel customizado, com sequenciamento simultâneo de 51 genes nucleares e do genoma mitocondrial. As mutações identificadas foram correlacionadas com o fenótipo e foi realizada a segregação familiar. Uma cobertura de no mínimo 20x foi obtida em 98% das regiões alvo. Dos 80 pacientes avaliados, foram detectadas variantes patogênicas/potencialmente patogênicas em 16 casos (20%), confirmando o diagnóstico genético de MODY. Em 15 dos 80 pacientes foram identificadas 16 variantes de significado incerto, restando ainda 42 casos com diagnóstico molecular não esclarecido. Dos 16 casos confirmados geneticamente: 6 foram no gene GCK, 1 no HNF1A, 1 no HNF4A, 1 no HNF1B, 6 em genes raros associados a MODY (1 no ABCC8, 1 no KCNJ11, 1 no PDX1, 2 no PAX4, 1 no NEUROD1), e 1 no NEUROG3, gene associado a diabetes neonatal. Dentre estas 16 variantes, 2 não haviam sido descritas previamente. As 6 mutações no GCK não tinham sido detectadas na análise prévia por: a) 4 casos falso negativos no sequenciamento por Sanger (3 devido ao fenômeno genético de allelic dropout e 1 por erro na leitura do eletroferograma); b) 2 erros na hipótese clínica inicial do subtipo de MODY (baseada no padrão glicêmico e na resposta terapêutica dos pacientes), levando ao sequenciamento prévio de outro gene. A variante no HNF1A não foi detectada previamente por erro na leitura do eletroferograma (caso falso negativo no Sanger). Uma variante foi identificada no gene HNF4A, que não tinha sido sequenciado anteriormente e apresenta fenótipo semelhante ao do HNF1A. O paciente com variante no HNF1B não apresentava relato prévio de cistos renais ou malformações genito-urinárias e por isso não tinha sido considerada a hipótese clínica de MODY5. Além disso, o SLE confirmou o diagnóstico genético de 6 pacientes com variantes em genes de MODY considerados raros, que habitualmente não são sequenciados na rotina de Sanger e ainda detectou uma variante em um gene de diabetes neonatal (sendo necessário maiores estudos para estabelecer uma relação causal com MODY). Em 13 dos 16 casos índices diagnosticados, os familiares encontravam-se disponíveis para exame genético e a co-segregação foi concordante em 8 famílias. Todos os probandos avaliados apresentavam características clínico-laboratoriais típicas de MODY. Os achados deste estudo mostraram que o SLE foi capaz de aumentar a acurácia no diagnóstico de MODY, permitindo a confirmação molecular de 20% dos casos antes negativos e reduzindo, assim, o número de casos MODY X no Brasil. A abordagem genética por painel de SLE para diagnosticar casos com suspeita clínica de MODY mostrou-se promissora para elucidar as bases genéticas desse tipo de diabetes monogênico / Diabetes mellitus type MODY (maturity-onset diabetes of the young) is characterized by defects in insulin secretion, autosomal dominant inheritance, early onset of hyperglycemia, and negative anti-beta cell antibodies. To date, mutations in 14 genes are associated with MODY. The definitive diagnosis relies on genetic tests, traditionally by Sanger sequencing. However, given the genetic heterogeneity of this condition, added to the difficulty of studying some genes due to their large size and lack of hotspots, large-scale sequencing (LSS) seems promising for cost-effective genetic analysis on suspicion of MODY. In Brazil, there are few cohorts screened for MODY and a high prevalence of MODY X (unclear genetic diagnosis). This study aimed to analyze simultaneously all MODY genes in a cohort of clinically suspected patients using a LSS panel; and to evaluate the pathogenicity of identified allelic variants according to the criteria of the American College of Medical Genetics and Genomics (ACMG). We selected 80 subjects with MODY phenotype and negative previous analysis of the 2 most prevalent genes, GCK and HNF1A, by Sanger sequencing method. These cases were analyzed by LSS method, with simultaneous sequencing of target genes. We designed a customized panel, including 51 nuclear genes and the mitochondrial genome. The identified mutations were correlated to the phenotype and family segregation was evaluated. At least 20x coverage was obtained in 98% of the targeted regions. Of 80 evaluated subjects, pathogenic/probably pathogenic variants were detected in 16 cases (20%), confirming the genetic diagnosis of MODY. In 15 of 80 patients, 16 variants of uncertain significance were identified, remaining 42 cases with unexplained molecular diagnosis. Of the 16 genetically confirmed cases: 6 were in the GCK gene, 1 in HNF1A, 1 in HNF4A, 1 in HNF1B, and 6 in rare genes associated with MODY (1 in ABCC8, 1 in KCNJ11, 1 in PDX1, 2 in PAX4 and 1 in NEUROD1), and 1 in NEUROG3, a gene associated with neonatal diabetes. Of these 16 variants, 2 had not been previously described. Those 6 variants in GCK were not detected in the prior analysis because of: a) 4 false negative cases in Sanger sequencing (allelic dropout had occurred in 3 cases and one variant was overlooked, due to electropherogram interpretation failure); b) 2 errors in the initial clinical hypothesis of the MODY subtype (based on the glycemic pattern and therapeutic response), leading to the prior sequencing of another gene. The variant in HNF1A was not previously identified due to misinterpretation in electropherogram (Sanger false negative case). One variant were detected in the HNF4A gene, not formerly sequenced, and had a similar phenotype to that of HNF1A. The patient with HNF1B variant did not have a previous report of renal cysts or genito-urinary malformations and therefore the clinical hypothesis of MODY5 was not considered. In addition, LSS confirmed the genetic diagnosis of 6 patients harboring variants in MODY genes considered to be rare, which are not usually sequenced in the Sanger routine, and also detected one variant in a neonatal diabetes gene (further studies are necessary to establish a causal relationship with MODY). Relatives were available for genetic testing in 13 of these 16 index cases diagnosed and co-segregation was concordant in 8 families. All probands evaluated showed typical clinical and laboratory characteristics of MODY. These study findings showed that targeted-LSS could increase accuracy in MODY diagnosis, enabling molecular confirmation of 20% of previous negative cases and thus reducing the number of MODY X cases in Brazil. The genetic approach of LSS panel to diagnose cases with clinical suspicion of MODY has shown promise for elucidating the genetic basis of this type of monogenic diabetes

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T15:29:17Z No. of bitstreams: 2 TESE Bethânia de Araújo Amaral.pdf: 4449052 bytes, checksum: f014da1c40afd7489d798e17efed3d13 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T15:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Bethânia de Araújo Amaral.pdf: 4449052 bytes, checksum: f014da1c40afd7489d798e17efed3d13 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / UFPE; CAPES; FACEPE / A leucemia promielocítica aguda (LPA) requer uma atenção especial dentre as leucemias mielóides agudas devido às suas implicações prognósticas e terapêuticas. A taxa de sobrevida de no mínimo cinco anos na LPA chega a 80% dos pacientes com a terapia atual e a taxa de cura excede os 70%. No entanto, a real situação dos resultados do tratamento da LPA em países em desenvolvimento, como o Brasil, é desconhecida. Este trabalho visou contribuir na investigação dos casos de LPA infantil em pacientes na nossa população objetivando a identificação de marcadores que possam redirecionar o acompanhamento e tratamento destes pacientes. A investigação da ocorrência de mutações dos genes FLT3 e NPM1 é importante na determinação prognostica das LMAs, contribuindo para a estratificação de grupos de maior ou menor risco e auxiliando o direcionamento do tratamento. Dezesseis pacientes pediátricos com LPA, representando 29,09% dos casos de LMA infantil, foram atendidos no CEONHPE/HUOC/UPE de 2004 a 2013. A idade variou de 5 a 17 anos (média de 11,81 anos). Análises citogenética e molecular por FISH e RT-PCR foram realizadas para confirmação do diagnóstico genético, na identificação do rearranjo PML-RARα decorrente da t(15;17), além da pesquisa das mutações dos genes FLT3 e NPM1. A análise cariotípica com o bandeamento G revelou alterações cromossômicas em 10 pacientes. Três apresentaram cariótipos complexos com presença de cromossomos marcadores. A técnica de FISH para a t(15;17) confirmou o rearranjo em 14 pacientes. Divergência entre as análises moleculares foram observadas em cinco pacientes, sendo positiva a detecção da t(15;17) pela FISH e negativa pela RT-PCR. A mutação do FLT3/ITD foi detectada em dois pacientes (12,5%), enquanto a mutação FLT3/TKD foi detectada em apenas um paciente (6,25%). A pesquisa para a mutação no gene NPM1 foi negativa para todos os casos. Quanto ao status oito pacientes encontramse vivos ou na fase de manutenção do tratamento e oito foram a óbito, sendo que destes sete tiveram óbitos precoces ainda na fase de indução. Os motivos primários dos óbitos foram hemorragias, septicemia e manifestação da síndrome do ATRA. Este dado é alarmante uma vez que estas mortes são difíceis de prevenir e assinalam o alto risco de ocorrência destes eventos em nossa população. Destacamos a importância do uso de técnicas citogenéticas moleculares na confirmação genética do diagnóstico da LPA e a necessidade de uma melhor adaptação do regime terapêutico aos casos de LPA na infância em nossa população.

O diabetes mellitus tipo MODY (maturity-onset diabetes of the young) é caracterizado por defeito na secreção de insulina, herança autossômica dominante, hiperglicemia de início precoce e anticorpos anti-células beta negativos. Até o momento, já foram descritas mutações em 14 genes diferentes. A confirmação do diagnóstico de MODY é feita por estudo genético-molecular, tradicionalmente pelo método de Sanger. Diante da grande heterogeneidade genética de MODY, acrescida da dificuldade de estudo de alguns genes por seu grande tamanho e ausência de hotspots, o sequenciamento em larga escala (SLE) mostra-se promissor para uma análise genética custo-efetiva na suspeita de MODY. No Brasil, existem poucos estudos genéticos de rastreamento de MODY e uma alta prevalência de casos sem mutações identificadas nos genes testados (MODY X). Os objetivos deste estudo foram: 1) analisar simultaneamente todos os genes associados a MODY em uma coorte de pacientes com suspeita clínica, utilizando um painel de SLE; 2) avaliar a patogenicidade das variantes alélicas identificadas de acordo com os critérios da Sociedade Americana de Genética Médica (ACMG). Foram selecionados 80 casos com fenótipo de MODY e análise prévia negativa dos 2 genes mais prevalentes, GCK e HNF1A, pelo método de sequenciamento de Sanger. Estes casos foram analisados pelo método de SLE, direcionado para regiões gênicas alvo, por meio de um painel customizado, com sequenciamento simultâneo de 51 genes nucleares e do genoma mitocondrial. As mutações identificadas foram correlacionadas com o fenótipo e foi realizada a segregação familiar. Uma cobertura de no mínimo 20x foi obtida em 98% das regiões alvo. Dos 80 pacientes avaliados, foram detectadas variantes patogênicas/potencialmente patogênicas em 16 casos (20%), confirmando o diagnóstico genético de MODY. Em 15 dos 80 pacientes foram identificadas 16 variantes de significado incerto, restando ainda 42 casos com diagnóstico molecular não esclarecido. Dos 16 casos confirmados geneticamente: 6 foram no gene GCK, 1 no HNF1A, 1 no HNF4A, 1 no HNF1B, 6 em genes raros associados a MODY (1 no ABCC8, 1 no KCNJ11, 1 no PDX1, 2 no PAX4, 1 no NEUROD1), e 1 no NEUROG3, gene associado a diabetes neonatal. Dentre estas 16 variantes, 2 não haviam sido descritas previamente. As 6 mutações no GCK não tinham sido detectadas na análise prévia por: a) 4 casos falso negativos no sequenciamento por Sanger (3 devido ao fenômeno genético de allelic dropout e 1 por erro na leitura do eletroferograma); b) 2 erros na hipótese clínica inicial do subtipo de MODY (baseada no padrão glicêmico e na resposta terapêutica dos pacientes), levando ao sequenciamento prévio de outro gene. A variante no HNF1A não foi detectada previamente por erro na leitura do eletroferograma (caso falso negativo no Sanger). Uma variante foi identificada no gene HNF4A, que não tinha sido sequenciado anteriormente e apresenta fenótipo semelhante ao do HNF1A. O paciente com variante no HNF1B não apresentava relato prévio de cistos renais ou malformações genito-urinárias e por isso não tinha sido considerada a hipótese clínica de MODY5. Além disso, o SLE confirmou o diagnóstico genético de 6 pacientes com variantes em genes de MODY considerados raros, que habitualmente não são sequenciados na rotina de Sanger e ainda detectou uma variante em um gene de diabetes neonatal (sendo necessário maiores estudos para estabelecer uma relação causal com MODY). Em 13 dos 16 casos índices diagnosticados, os familiares encontravam-se disponíveis para exame genético e a co-segregação foi concordante em 8 famílias. Todos os probandos avaliados apresentavam características clínico-laboratoriais típicas de MODY. Os achados deste estudo mostraram que o SLE foi capaz de aumentar a acurácia no diagnóstico de MODY, permitindo a confirmação molecular de 20% dos casos antes negativos e reduzindo, assim, o número de casos MODY X no Brasil. A abordagem genética por painel de SLE para diagnosticar casos com suspeita clínica de MODY mostrou-se promissora para elucidar as bases genéticas desse tipo de diabetes monogênico / Diabetes mellitus type MODY (maturity-onset diabetes of the young) is characterized by defects in insulin secretion, autosomal dominant inheritance, early onset of hyperglycemia, and negative anti-beta cell antibodies. To date, mutations in 14 genes are associated with MODY. The definitive diagnosis relies on genetic tests, traditionally by Sanger sequencing. However, given the genetic heterogeneity of this condition, added to the difficulty of studying some genes due to their large size and lack of hotspots, large-scale sequencing (LSS) seems promising for cost-effective genetic analysis on suspicion of MODY. In Brazil, there are few cohorts screened for MODY and a high prevalence of MODY X (unclear genetic diagnosis). This study aimed to analyze simultaneously all MODY genes in a cohort of clinically suspected patients using a LSS panel; and to evaluate the pathogenicity of identified allelic variants according to the criteria of the American College of Medical Genetics and Genomics (ACMG). We selected 80 subjects with MODY phenotype and negative previous analysis of the 2 most prevalent genes, GCK and HNF1A, by Sanger sequencing method. These cases were analyzed by LSS method, with simultaneous sequencing of target genes. We designed a customized panel, including 51 nuclear genes and the mitochondrial genome. The identified mutations were correlated to the phenotype and family segregation was evaluated. At least 20x coverage was obtained in 98% of the targeted regions. Of 80 evaluated subjects, pathogenic/probably pathogenic variants were detected in 16 cases (20%), confirming the genetic diagnosis of MODY. In 15 of 80 patients, 16 variants of uncertain significance were identified, remaining 42 cases with unexplained molecular diagnosis. Of the 16 genetically confirmed cases: 6 were in the GCK gene, 1 in HNF1A, 1 in HNF4A, 1 in HNF1B, and 6 in rare genes associated with MODY (1 in ABCC8, 1 in KCNJ11, 1 in PDX1, 2 in PAX4 and 1 in NEUROD1), and 1 in NEUROG3, a gene associated with neonatal diabetes. Of these 16 variants, 2 had not been previously described. Those 6 variants in GCK were not detected in the prior analysis because of: a) 4 false negative cases in Sanger sequencing (allelic dropout had occurred in 3 cases and one variant was overlooked, due to electropherogram interpretation failure); b) 2 errors in the initial clinical hypothesis of the MODY subtype (based on the glycemic pattern and therapeutic response), leading to the prior sequencing of another gene. The variant in HNF1A was not previously identified due to misinterpretation in electropherogram (Sanger false negative case). One variant were detected in the HNF4A gene, not formerly sequenced, and had a similar phenotype to that of HNF1A. The patient with HNF1B variant did not have a previous report of renal cysts or genito-urinary malformations and therefore the clinical hypothesis of MODY5 was not considered. In addition, LSS confirmed the genetic diagnosis of 6 patients harboring variants in MODY genes considered to be rare, which are not usually sequenced in the Sanger routine, and also detected one variant in a neonatal diabetes gene (further studies are necessary to establish a causal relationship with MODY). Relatives were available for genetic testing in 13 of these 16 index cases diagnosed and co-segregation was concordant in 8 families. All probands evaluated showed typical clinical and laboratory characteristics of MODY. These study findings showed that targeted-LSS could increase accuracy in MODY diagnosis, enabling molecular confirmation of 20% of previous negative cases and thus reducing the number of MODY X cases in Brazil. The genetic approach of LSS panel to diagnose cases with clinical suspicion of MODY has shown promise for elucidating the genetic basis of this type of monogenic diabetes