Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-11-21T15:24:13Z No. of bitstreams: 1 Luiz Cosme da Silva Junior.pdf: 2262385 bytes, checksum: 934698e0a82f5115f0317ed2075d1c57 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-21T15:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luiz Cosme da Silva Junior.pdf: 2262385 bytes, checksum: 934698e0a82f5115f0317ed2075d1c57 (MD5) Previous issue date: 2017-08-30 / Financiadora de Estudos e Projetos - Finep / The economic impact caused by Aujeszky's disease (AD) has decreased with the use of vaccines deleted for the gE gene of the AD Virus and diagnostic tests for the detection of antibodies specific to the protein corresponding to the deleted gene for differentiation of infected animals from the vaccinated - DIVA (Differentiating Infected from Vaccinated individuals). The goal of this work was to clone and express the gene related to the extramembrane portion of the gE glycoprotein of the DA virus in E. coli expression system using synthetic gene with optimized codons and thioredoxin fused protein (Trx), and to evaluate its potential use in ELISA. After cloning, expression and identification of recombinant gE protein (gErec*Trx) in Western blotting with anti-His antibody, gErec*Trx (approximately 60 kDa) was used as antigen in ELISA (ELISAgErec) using Protein G peroxidase as conjugate. Samples previously tested in virus neutralization (VN) and in commercial ELISA were tested in ELISAgErec, and the cutoff point (> 0.13) was defined by ROC curve analysis. A total of 599 sera from pigs were used, of which 208 were positive VN and 391 negative in commercial ELISA for the detection of antigE antibodies from the DA virus, of which 300 originated from Certified Porcine Breeding Farms (GRSCs) and 91 from Technological properties of the State of Pernambuco. ELISAgErec presented sensitivity of 97.6% and specificity of 96.4%. To evaluate the analytical sensitivity and limit of detection, the international reference serum for AD was used, and for analysis of the analytical specificity were tested sera from pigs Pathogen-Specific Free (SPF) vaccinated with the main vaccines used in pigs. ELISAgEr showed greater sensitivity than the commercial ELISA thus demonstrating its ability to distinguish healthy and vaccinated animals from infected animals. In addition, to showing good solubility, gErec remained immunoreactive in the same titre in ELISAgErec after several months stored at 4 °C, and even after thermal stress at 70 °C it presented the same results. / O impacto econômico causado pela Doença de Aujeszky (DA) tem diminuído com uso de vacinas deletadas para o gene gE do Vírus da DA e testes diagnósticos para detecção de anticorpos específicos para a proteína correspondente ao gene deletado, para diferenciação dos animais infectados dos vacinados - DIVA (Differentiating Infected from Vaccinated individuals). O objetivo com este trabalho foi clonar e expressar o gene referente a porção extramembranar da glicoproteína gE do vírus da DA em sistema de expressão E. coli utilizando gene sintético com códons otimizados e proteína fusionada a tiorredoxina (Trx), e avaliar seu potencial uso em ELISA. Após a clonagem, expressão e a identificação da proteína gE recombinante (gErec*Trx) em Western blotting com anticorpo anti-His, a gErec*Trx (aproximadamente 60 kDa) foi usada como antígeno em ELISA (ELISAgErec) utilizando Proteina G peroxidase como conjugado. Amostras previamente testadas em virusneutralização (VN) e em ELISA comercial foram testadas no ELISAgErec, e o ponto de corte (>0,13) foi definido por análise da curva ROC. Foram utilizados 599 soros de suínos, sendo 208 positivos virusneutralização (VN) e 391 negativos em ELISA comercial para detecção de anticorpos antigE do vírus da DA, sendo 300 oriundas de Granjas de Reprodutores Suínos Certificadas (GRSCs) e 91 de propriedades tecnificadas do estado de Pernambuco. O ELISAgErec apresentou sensibilidade de 97,6% e especificidade de 96,4%. Para avaliar a sensibilidade analítica e o limite de detecção foi testado o soro internacional de referência para a DA, e para avaliação da especificidade analítica foram testados soros de suínos Livre de Patógenos Específicos (SPF) vacinados com as principais vacinas usadas em suínos. O ELISAgEr apresentou maior sensibilidade que o ELISA comercial demonstrando assim sua capacidade de distinguir animais sadios e vacinados dos animais infectados. Além de apresentar boa solubilidade a gErec se manteve imunorreativa no mesmo título no ELISAgErec após vários meses estocada a 4 °C, e mesmo após estresse térmico a 70 °C apresentou mesmos resultados.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-01-10Bitstream added on 2014-06-13T19:43:39Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_lg_dr_jabo.pdf: 2434476 bytes, checksum: 7f35c972fe80e9df46284df3347b98ab (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A doença de Aujeszky (DA) é uma enfermidade conhecida na suinocultura pelo seu grande impacto produtivo e econômico. O Estado de São Paulo (SP) não é considerado área livre para DA, pois há evidências de circulação do vírus. Por isso, este trabalho teve como objetivo a identificação, o diagnóstico da situação epidemiológica e a avaliação de estratégias para a erradicação de focos de DA em sistema de produção de suínos no Estado de SP. Foram identificados dois focos da enfermidade no Município de Cerqueira César, um apresentou somente animais sororreagentes (Foco 1), e outro, casos clínicos da enfermidade (Foco 2). Para a erradicação da DA foram tomadas ações de defesa sanitária animal, sendo avaliadas duas estratégias: (A) eliminação de animais sororreagentes e (B) despovoamento gradual, com acompanhamento durante 12 meses. A erradicação por eliminação dos sororreagentes foi aplicada no Foco 1 e compreendeu: identificação por teste sorológico, isolamento e abate dos sororreagentes; vacinação dos negativos, reposição no plantel com animais livre de DA e avaliação dos índices produtivos. No início do estudo, 68% do plantel eram sororreagentes e, no final, 51%. No Foco 2 utilizou-se o despovoamento gradual; todos os animais foram enviados gradativamente ao abate sanitário, até que fosse estabelecido o vazio sanitário das instalações e, somente depois repovoado com animais livres da DA. Como essa última estratégia, apresentou maior eficácia, pois erradicou a DA no Foco 2, a mesma também foi aplicada no Foco 1, tendo em vista o insucesso da estratégia A inicialmente aplicada. Ao final, após monitoramentos sorológicos, concluiu-se que a DA foi erradicada em todos os focos identificados / Aujeszky´s disease (AD) is an important viral affection within the swine production, once it plays a significant role in economic losses. São Paulo state is not considered free of the disease, once evidences show that there is circulation of the virus. This study aimed to identify the epidemiologic situation and evaluation strategies for the eradication of outbreaks of AD in system of swine production in the state of Sao Paulo. Two outbreaks were identified in the Cerqueira César county, one of them only seroreagents were observed (Outbreak 1), and in the other, clinical signs were seen (Outbreak 2). In order to eradicate the disease, two sanitary strategies were tested: (A) eradication by means of positive serology and; (B) gradual depopulation, with a follow up of 12 months. The eradication by means of serology was used in the Outbreak 1, and included the identification, isolation and sacrifice of positives animals; vaccination of negative subjects, replacement with naive subjects, and assessment of production indices. At the beginning, 68% of animals were positive, and at the end 51% were positive. In Outbreak 2, gradual depopulation was employed, and all animals were sent to sanitary slaughter, until facilities were completely empty. Afterwards, animals free of the disease were used to repopulation. At the end of the study, it was observed that the last strategy was more effective, being, therefore, used in the outbreak 1. Finally, after serological monitoring, it was concluded that the AD was eradicated in all outbreaks identified

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-16T15:17:17Z No. of bitstreams: 1 Edmilson Ferreira de Oliveira Filho.pdf: 272329 bytes, checksum: 16d20686e6f6a8e0363aedcc5c9e300e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-16T15:17:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Edmilson Ferreira de Oliveira Filho.pdf: 272329 bytes, checksum: 16d20686e6f6a8e0363aedcc5c9e300e (MD5) Previous issue date: 2007-08-03 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Brucelosis is an emergent disease and its complexity because the large number of bacterial involved species and also each one shows different epidemiological aspects associated to the pathogenesis in each host species. Aujezsky Disease has also a big potential to become an emergent disease as a consequence to the large host range and the ability to the viruses from Herpesviridae family jump to another species. The aim of this study was determine the Brucella abortus and Pseudorabies virus (PrV) prevalence in neotropical captive wild carnivores from three Zoos in the northeast of Brazil. Blood samples were collected from 42 animals, including 17 coatis (Nasua nasua), eight crabeating raccoons (Procyon cancrivorus), three crab-eating foxes (Cerdocyon thous), three hoary foxes (Lycalopex vetulus), two little spotted cats (Leopardus tigrinus), five tayras (Eira barbara), two greater grisons (Galictis vittata) and two neotropical river otters (Lontra longicaudis). To detect B. abortus antibodies, two different serological tests were performed; the Rose-Bengal test (RBT) and the Complement Fixation Test (CFT) and to detect PrV antibodies the virusneutralization was performed. Antibodies to PrV were not detected. Our results showed 19 (45.34%) negative and 23 (54.76%) positive in BBAT test. On CFT 8 (19.50%) were positive and 15 (80.50%). To determine the Pseudorabies epidemiological situation more studies should be necessary in another keep-in-captivity and also in free-range animal populations to well conclude that this virus is not present in these neotropical wild carnivores populations. We are far to incriminate any of these species as wild reservoir and as interfering with national control programs. However, the lack of knowledge of epidemiological aspects in wild populations certainly is an obstruction to evaluate the Brucellosis control program in this country. / A brucelose é uma doença emergente a sua complexidade devido ao grande número de espécies da bactéria envolvidas e cada uma delas apresenta distintos fatores epidemiológicos, particulares da patogenia de cada espécie. A Doença de Aujezsky apresenta um grande risco potencial de se transformar em uma doença emergente devido à grande variação de hospedeiros e a capacidade dos vírus da família herpesviridae saltar para outras espécies. Objetivou-se com esse estudo realizar a pesquisa de anticorpos anti- Vírus da Pseudoraiva (VPr), e anti-Brucella abortus em carnívoros silvestres neotropicais mantidos em cativeiro nos estados de Pernambuco e Paraíba. Foram utilizadas 42 amostras de soro, provenientes da população de 17 quatis (Nasua nasua), oito guaxinins (Procyon cancrivorus), três raposas (Cerdocyon thous), três raposas-do-campo (Lycalopex vetulus) e dois gatos-do-mato (Leopardus tigrinus), cinco papa-méis (Eira barbara), dois furões (Galictis vittata) e duas lontras (Lontra longicaudis), oriundos das populações do Horto de Dois Irmãos (Recife, PE), Zoológico Municipal Melo Verçosa (Vitória de Santo Antão, PE) e o Parque Zoobotânico Arruda Câmara (João Pessoa, PB). As amostras foram submetidas aos testes de vírusneutralização para a pesquisa de anticorpos anti-VPr e os testes do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e Fixação do Complemento (FC) para a pesquisa de anticorpos anti B. Abortus. Na prova de soroneutralização, nenhuma amostra testada demonstrou presença de anticorpos anti-VPr. Na pesquisa de anticorpos para B. abortus foram encontrados um total 19 (45,34%) amostras negativas, 23 (54,76%) amostras positivas na prova do AAT e 15 (80,5%) das amostras negativas e 8 (19,5%) amostras positivas no teste de FC. Em relação a Pseudoraiva mais estudos serão necessários incluíndo animais de vida livre e domésticos, para determinar se ocorre ou não a circulação do vírus na região. Esse foi o primeiro relato de anticorpos contra B. abortus nessas espécies. Os resultados aqui apresentados estão longe de incriminar alguma dessas espécies como um reservatório silvestre bem como interferir no programa nacional de controle. No entanto, o desconhecimento dos aspectos epidemiológicos nas populações silvestres é com certeza um obstáculo para avaliar o Programa Nacional de Controle da Brucelose no Brasil.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-18T13:57:04Z No. of bitstreams: 1 Luiz Cosme da Silva Junior.pdf: 2139311 bytes, checksum: 61623be0472d19428bedbc6968b00716 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-18T13:57:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luiz Cosme da Silva Junior.pdf: 2139311 bytes, checksum: 61623be0472d19428bedbc6968b00716 (MD5) Previous issue date: 2013-02-25 / Aujeszky's disease (AD) is caused by Suid Herpesvirus 1 (SHV1) and affects a wide variety of animals, the pig being the most important host. The DA has caused considerable direct and indirect economic losses to the pig industry worldwide, from the impact on production. The use of control measures using diagnostic test able to differentiate infected animals from vaccinated animals and removal of positive animals in the squad is key to controlling the spread of the virus. The use of vaccines for the gE gene deleted of SHV1 has been used to decrease clinical signs and virus transmission. Although some epitopes gE gene has already been cloned into the Pichia pastoris expression system, relative to the portion extramembranares epitopes using synthetic sequence (gEs) yeast codon optimized for this has not yet been cloned in this system. In this work this sequence was cloned and expressed in P. pastoris, which produced the recombinant antigen gEr. The gEs was cloned in strains X-33 and KM71H this yeast. The two strains were induced to express cloned gEr. The recombinant protein was detected in both clones by colony blot and visualized on SDS-PAGE gel, revealing a protein of approximately 50 kDa. / A Doença de Aujeszky (DA) é causada pelo Herpesvírus Suino 1 (SHV1), que acomete uma ampla variedade de animais, sendo o suíno o hospedeiro principal. A DA tem causado consideráveis perdas econômicas diretas e indiretas à indústria suinícola mundial, decorrentes do impacto na produção. O emprego de medidas de controle utilizando teste diagnóstico capaz de diferenciar os animais infectados dos animais vacinados e a retirada dos animais positivos do plantel é fundamental para controlar a disseminação do virus. O uso de vacinas deletadas para o gene gE do SHV1 tem sido utilizada para diminuir os sinais clínicos e a transmissão do vírus. Apesar de alguns epítopos do gene gE já terem sido clonados no sistema de expressão Pichia pastoris, a porção referente aos epítopos extramembranares, utilizando sequência sintética (gEs) códon otimizada para esta levedura, ainda não foi clonada neste sistema. Neste trabalho essa sequência foi clonada e expressa em P. pastoris, que produziu o antígeno recombinante gEr. O gEs foi clonado nas linhagens X-33 e KM71H dessa levedura. As duas linhagens clonadas foram induzidas a expressar gEr. A proteína recombinante foi identificada em ambos os clones por colloning blot e visibilizada em gel SDS-PAGE, revelando uma proteína de aproximadamente 50 kDa.

Aujeszky s disease (AD) or pseudorabies is an important viral disease of swine and has significant economic impact on the pig industry worldwide. The infection produces direct and indirect economic losses, mainly due to restrictions to international trade of swine products. Since the beginning of the 20th century, AD had been notified in several Brazilian regions, yet Rio Grande do Sul state (RS) remained as a provisionally free area under the International Organization of Epizooties (OIE) guidelines. In 2003, two outbreaks were notified in swine herds located in northern RS, boundary with Santa Catarina, a state where the infections is endemic. Control/eradication measures consisted in tracing back all swine movements, quarantine and eradication of the affected herds by sanitary slaughter under official inspection. In outbreak # 1 (Pinheirinho do Vale, January/2003) six herds were affected, one of which presented animals with clinical signs. Starting from this outbreak, 146 herds and 42.399 pigs were traced back, six herds (7.822 animals) being depopulated the herd where the index outbreak plus five other herds with positive serology. The outbreak #2 (Aratiba, September/2003) resulted in a wider spread of the infection, involving another three counties and 77 herds (nine with clinical signs; 68 with positive serology). From the index case, 109.316 pigs in 630 herds were traced back; 28.443 animals from positive herds were slaughtered. Total numbers reached 151.715 traced back animals in 776 herds; 71 herds were found serologically positive. The adopted measures were efficient to eliminate the outbreaks and to stop the disease spread to neighboring areas, reestablishing the sanitary status previous to the outbreaks. / A doença de Aujeszky (DA), ou pseudoraiva, é uma enfermidade infecto-contagiosa de etiologia viral de grande importância para a suinocultura comercial em todo o mundo. A infecção causa perdas econômicas diretas e indiretas, pela restrição ao comércio internacional de produtos suínos. Embora a DA venha sendo notificada em várias regiões do Brasil desde o início do século XX, o Rio Grande do Sul (RS) permanecia provisoriamente livre com base em critérios da Organização Internacional de Epizootias (OIE). Em 2003 ocorreram dois focos da enfermidade em municípios do norte do RS, limítrofes com Santa Catarina, Estado que tem registrado vários focos nos últimos anos. Como estratégia de combate foram determinados o rastreamento da movimentação de suínos, a interdição da área e a erradicação dos focos através de abate sanitário em matadouros sob Inspeção Federal. No evento 1 (Pinheirinho do Vale, janeiro de 2003) cinco unidades produtoras de leitões (UPLs) foram afetadas, sendo que uma apresentou animais com sinais clínicos. A partir desse foco foram rastreados 42.399 suínos em 146 rebanhos, sendo eliminados seis rebanhos o foco índice e cinco outras com sorologia positiva num total de 7.822 animais. No evento 2 (Aratiba, setembro de 2003), a disseminação da infecção foi maior, atingindo outros três municípios e 77 granjas (nove com sinais clínicos, 68 com sorologia positiva). Foram rastreados 109.316 suínos em 630 rebanhos, com a erradicação de 28.443 animais das granjas que apresentaram sinais clínicos ou sorologia positiva. No total foram rastreados 151.715 animais em 776 rebanhos, sendo detectados 71 rebanhos com sorologia positiva. Essas medidas foram eficazes na erradicação dos focos e impediram a disseminação da enfermidade para outras regiões, permitindo ao RS readquirir o status sanitário anterior aos surtos.