A análise da qualidade microbiana de matérias-primas e de produtos por meio da técnica convencional de contagem de microrganismos exige demanda elevada de trabalho e fornece resultados em período de tempo não compatível com o desenvolvimento da tecnologia. A indústria farmacêutica e cosmética necessita de liberação rápida de seus produtos, assim métodos alternativos podem reduzir o tempo de trabalho e custo. O método de ATP bioluminescência detecta a presença ou ausência de microrganismos em até 24 horas. O método baseia-se na reação do ATP (adenosina trifosfato) provenientes do microrganismo com o complexo luciferina - luciferase, produzindo luz. Os componentes da formulação de produtos cosméticos, como os corantes e os pigmentos podem interferir na reação e influenciar na leitura da Unidade Relativa de Luz (URL). O objetivo do experimento foi validar método de ATP bioluminescência para avaliação da qualidade microbiana do pigmento Green Nº 7 e dos corantes FD&C Blue Covanor e o FD&C Red Nº 5, usados em produtos cosméticos, verificando se esses podem interferir na reação de ATP-bioluminescência , utilizando os meios de cultura TAT(Tryptone-Azolectin-Tween) , DE ( Dey Engly Neutralization Broth) e LB (Letheen Broth) . A primeira etapa da validação do sistema ATP bioluminescência foi determinar o Efeito da Amostra nas suspensões o qual verifica a presença de ATP não microbiano. A sensibilidade do ensaio foi analisada por meio do teste de limite de detecção inoculando-se os microorganismos Escherichia coli ATCC 8739, Burkholderia cepacea ATCC 25416, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Candida albicans ATCC 10231 na suspensão das amostras. Para C. albicans não foi possível a detecção pois houve a necessidade de tempo maior de incubação. O meio de cultura TAT sem acréscimo de polissorbato 80 apresentou as melhores condições para a validação do pigmento Green Nº 7. Para corantes há necessidade ainda de uma investigação mais criteriosa, estudando outros meios de cultura, reagentes e condições que propiciem resultados adequados em conformidade com as especificações para a validação. / The analysis of the microbiology quality of raw materiais and finished products by means of the conventional technique of counting of microorganism demands high time of work and supplies resulted in period of not compatible time with the development of the technology. The rapid methods provide reliable and cost effective analysis for the microbiological evaluation the pharmaceutical and cosmetic industry. The ATP Bioluminescence detect the presence or absence of microorganisms the reduction in detection times and analysis from 72 hours to 24 hours. The bioluminescence assay is based upon the light-producing enzyme luciferase that will hydrolyze ATP to produce light. Light production is detected by a luminometer and recorded as relative light units (RLU). The purpose of this investigation was to develop and validate the use an ATP bioluminescence assay for detection microbial contamination in artificially contaminated commercial Green Nº 7 pigment and FD&C Blue Covanor e o FD&C Red Nº 5 dyes with some microbial cultures, TAT (Tryptone-Azolectin-Tween) , DE (Dey Engly Neutralization Broth) e LB (Letheen Broth), and to compare the results against standard microbiological analysis. The first step in validation of the ATP bioluminescence system was to determine the sample effect of the sample suspensions on the bioluminescence reaction where analyzed to determine whether the sample contained nonmicrobial ATP. The sensitivity of the assay to detect different levels of Escherichia coli ATCC 8739, Burkholderia cepacea ATCC 25416, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Candida albicans ATCC 10231 was analyzed by spiking into the samples suspensions. For C. albicans contamination detection has not been possible because it has required more time than bacteria. The microbial culture TAT without addition of polissorbato 80 has presented the best conditions for the validation of the Green pigment n° 7. For dyes has still been necessity of studying other microbial culture, reagents and conditions that they propitiate resulted adequate in compliance with the specifications for the validation.

A análise da qualidade microbiana de matérias-primas e de produtos por meio da técnica convencional de contagem de microrganismos exige demanda elevada de trabalho e fornece resultados em período de tempo não compatível com o desenvolvimento da tecnologia. A indústria farmacêutica e cosmética necessita de liberação rápida de seus produtos, assim métodos alternativos podem reduzir o tempo de trabalho e custo. O método de ATP bioluminescência detecta a presença ou ausência de microrganismos em até 24 horas. O método baseia-se na reação do ATP (adenosina trifosfato) provenientes do microrganismo com o complexo luciferina - luciferase, produzindo luz. Os componentes da formulação de produtos cosméticos, como os corantes e os pigmentos podem interferir na reação e influenciar na leitura da Unidade Relativa de Luz (URL). O objetivo do experimento foi validar método de ATP bioluminescência para avaliação da qualidade microbiana do pigmento Green Nº 7 e dos corantes FD&C Blue Covanor e o FD&C Red Nº 5, usados em produtos cosméticos, verificando se esses podem interferir na reação de ATP-bioluminescência , utilizando os meios de cultura TAT(Tryptone-Azolectin-Tween) , DE ( Dey Engly Neutralization Broth) e LB (Letheen Broth) . A primeira etapa da validação do sistema ATP bioluminescência foi determinar o Efeito da Amostra nas suspensões o qual verifica a presença de ATP não microbiano. A sensibilidade do ensaio foi analisada por meio do teste de limite de detecção inoculando-se os microorganismos Escherichia coli ATCC 8739, Burkholderia cepacea ATCC 25416, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Candida albicans ATCC 10231 na suspensão das amostras. Para C. albicans não foi possível a detecção pois houve a necessidade de tempo maior de incubação. O meio de cultura TAT sem acréscimo de polissorbato 80 apresentou as melhores condições para a validação do pigmento Green Nº 7. Para corantes há necessidade ainda de uma investigação mais criteriosa, estudando outros meios de cultura, reagentes e condições que propiciem resultados adequados em conformidade com as especificações para a validação. / The analysis of the microbiology quality of raw materiais and finished products by means of the conventional technique of counting of microorganism demands high time of work and supplies resulted in period of not compatible time with the development of the technology. The rapid methods provide reliable and cost effective analysis for the microbiological evaluation the pharmaceutical and cosmetic industry. The ATP Bioluminescence detect the presence or absence of microorganisms the reduction in detection times and analysis from 72 hours to 24 hours. The bioluminescence assay is based upon the light-producing enzyme luciferase that will hydrolyze ATP to produce light. Light production is detected by a luminometer and recorded as relative light units (RLU). The purpose of this investigation was to develop and validate the use an ATP bioluminescence assay for detection microbial contamination in artificially contaminated commercial Green Nº 7 pigment and FD&C Blue Covanor e o FD&C Red Nº 5 dyes with some microbial cultures, TAT (Tryptone-Azolectin-Tween) , DE (Dey Engly Neutralization Broth) e LB (Letheen Broth), and to compare the results against standard microbiological analysis. The first step in validation of the ATP bioluminescence system was to determine the sample effect of the sample suspensions on the bioluminescence reaction where analyzed to determine whether the sample contained nonmicrobial ATP. The sensitivity of the assay to detect different levels of Escherichia coli ATCC 8739, Burkholderia cepacea ATCC 25416, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Candida albicans ATCC 10231 was analyzed by spiking into the samples suspensions. For C. albicans contamination detection has not been possible because it has required more time than bacteria. The microbial culture TAT without addition of polissorbato 80 has presented the best conditions for the validation of the Green pigment n° 7. For dyes has still been necessity of studying other microbial culture, reagents and conditions that they propitiate resulted adequate in compliance with the specifications for the validation.

?rea de concentra??o: Qu?mica anal?tica. / Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2016-12-21T13:02:41Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) glauber_antonio_reis_andrade.pdf: 2400963 bytes, checksum: 99ec593844d6ba3a1107158d86656739 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-01-21T11:09:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 9 bytes, checksum: 42dd12a06de379d3ffa39b67dc9c7aff (MD5) glauber_antonio_reis_andrade.pdf: 2400963 bytes, checksum: 99ec593844d6ba3a1107158d86656739 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-21T11:09:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 9 bytes, checksum: 42dd12a06de379d3ffa39b67dc9c7aff (MD5) glauber_antonio_reis_andrade.pdf: 2400963 bytes, checksum: 99ec593844d6ba3a1107158d86656739 (MD5) Previous issue date: 2016 / A Teofilina (TF), Clindamicina (CM), Varfarina (VF) e Verapamil (VP) s?o f?rmacos de baixo ?ndice terap?utico que necessitam de um controle de qualidade rigoroso na elabora??o de suas formula??es. O desenvolvimento de m?todos mais simples e r?pidos para doseamento desses medicamentos ? de grande interesse no setor farmac?utico. Neste sentido, o presente trabalho apresenta uma nova metodologia para determina??o desses f?rmacos por amperometria de m?ltiplos pulsos (MPA) acoplada ao sistema de an?lise por inje??o em batelada (BIA), utilizando o eletrodo de Diamante dopado com Boro (DDB). A an?lise em BIA foi realizada em uma c?lula eletroqu?mica do tipo Wall Jet, onde as inje??es foram realizadas por meio de uma micropipeta autom?tica ou, manualmente, por uma seringa descart?vel para TF, CM e VF, mostrando a possibilidade de diminuir custo do sistema de an?lise. O comportamento eletroqu?mico da TF, CM, VF e VP foi investigado por voltametria c?clica e os eletr?litos suportes escolhidos foram o ?cido sulf?rico 0,1 mol L-1, tamp?o fosfato 0,1 mol L-1 (pH 7,0), tamp?o fosfato 0,1 mol L-1 (pH 7,0) com 10% de ?lcool et?lico e ?cido sulf?rico 0,2 mol L-1, respectivamente. Nesses eletr?litos tr?s f?rmacos apresentaram um ?nico processo de oxida??o: a TF em +1,33V, a CM em +1,18 V e a VF em +0,90 V. J? o VP apresentou tr?s processos de oxida??o entre +1,2V e +1,5V, al?m de um processo de redu??o em +0,2V depende das oxida??es. A detec??o MPA-BIA foi baseada na aplica??o de um pulso de potencial de detec??o e outro de limpeza do DDB para tr?s f?rmacos. Neste caso, os pulsos de potencial para detec??o da TF, CM e VF foram todos aplicados por 100ms em +1,5V, +1,6V e +1,2V, respectivamente. Para determina??o do VP foram utilizados tr?s pulsos de potencial, um para oxida??o do VP (gerador) em +1,6V/50ms, um para redu??o do produto gerado (coletor) e quantifica??o do VP em -0,1V/30ms, e um terceiro em +1,1V/100ms para limpeza da superf?cie do DDB. A velocidade de inje??o da MA foi otimizada em 100?L s-1, exceto para VP que foi de 47?Ls-1, e com a SD a velocidade de inje??o foi de aproximadamente 107 ?Ls-1 pra a TF, CM e VF, proporcionando uma frequ?ncia anal?tica te?rica de pelo menos 53 determina??es por hora desses f?rmacos. Um baixo desvio padr?o relativo (10 medidas) foi obtido para todos os f?rmacos, n?o ultrapassando 3,0% tanto pela inje??o autom?tica quanto pela manual. As curvas anal?ticas foram estabelecidas e uma boa faixa linear foi obtida para todos os f?rmacos com pelo menos duas ordens de concentra??o. Os coeficientes de correla??o linear para todas as regress?es foram maiores que 0,992 em todos os estudos. Os estudos de adi??o e recupera??o mostraram valores pr?ximos a 100 % para todas as amostras farmac?uticas analisadas. O m?todo proposto usando a inje??o autom?tica e manual foi devidamente validado pelo m?todo oficial para cada um dos f?rmacos avaliados. Portanto, a detec??o MPA-BIA usando o eletrodo de DDB mostrou ser uma alternativa mais simples e r?pida para determina??o da TF, CM, VF e VP em formula??es farmac?uticas, possibilitando ainda uma diminui??o do custo do sistema BIA pela substitui??o da micropipeta autom?tica por uma seringa descart?vel. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2016. / Theophylline (TF), Clindamycin (CM), Warfarin (VF) and Verapamil (VP) are drugs of narrow therapeutic index that require a strict quality control in the preparation of their formulations. Thus, the development of simple and rapid methods for determination of these drugs is very important in the pharmaceutical industry. In this sense, this paper presents a new methodology for determination of these drugs by multiple-pulse amperometry (MPA) coupled to batch injection analysis (BIA), using the boron-doped diamond (BDD) electrode. The analysis in BIA system was performed in an electrochemical cell (Wall Jet), where the injections were performed by automatic micropipette or manually by an disposable syringe for TF, CM and VF, showing a possibility to reduction of the analysis cost. The electrochemical behavior of the analytes was investigated by cyclic voltammetry and the support electrolytes were chosen for TF, CM, VF and VP in medium of sulfuric acid 0.1 mol L-1, phosphate buffer 0.1 mol L-1 (pH 7.0), phosphate buffer 0.1 mol L-1 (pH 7.0) with 10% ethyl alcohol and sulfuric acid 0.2 mol L-1, respectively. In these conditions, three drugs exhibited a single oxidation process: TF in +1.33V, the CM in +1.18V and the VF in +0.90V (vs Ag/AgCl). Already the VP presented three oxidation processes between +1.2V and +1.5V, besides a reduction process in +0.20 V that depends on the oxidation. The MPA-BIA detection for three drugs (TF, CM, VF) was based on the application of two potential pulses, one for detection and other for cleaning BDD electrode. In this case, the potential pulses to detection the TF, CM and VF were all applied for 100ms at +1.5V, +1.2V and +1.6 V, respectively. In determination of the VP, were used three potential pulses, one for oxidation of VP (generator potential pulse) in +1.6V/50ms, one for reducing the generated product (collector potential pulse) and performed quantification of VP in -0.1V/30ms, and a third potential pulse at +1.1V/100ms for cleaning BDD electrode. The injection speed using automatic micropipette was 100?L s-1, except for VP that was 47?Ls-1, and injection speed by insulin syringe was approximately 107?Ls-1, which provide theoretical analytical frequency of at least 53 determinations per hour of these drugs. A low standard relative deviation (10 measures) was obtained for all drugs, not extending beyond 3.0% by both injections systems. The analytical curves were established and a good linear range was obtained for all drugs with at least two orders of concentration. The linear correlation coefficients for all regressions were higher than 0.992. The addition and recovery studies show values close to 100% for all drug samples analyzed. The proposed method using automatic and manual injection was validated by official method for each analyte. Therefore, this paper presented a fast and simple method for the determination of TF, CM, VF and VP in pharmaceutical formulations using BIA-MPA detection with BBD electrode. Moreover, this work demonstrated an inexpensive method for application in routine analysis of narrow therapeutic index drugs, mainly using a manual injection in BIA system by an disposable syringe.

O objetivo desta pesquisa foi desenvolver e validar métodos analíticos para o fármaco besilato de anlodipino (ABC) em comprimidos. O método espectrofotométrico no ultra violeta e o método por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) desenvolvidos foram considerados simples, exatos e precisos. Foram analisadas amostras contendo 5 mg,10 mg e uma amostra formulada de 5mg de ABC/comprimido. Para o método espectrofotométrico, a primeira diluição das amostras foi feita em metanol e as subseqüentes em água. A leitura foi efetuada a 364,4 nm. A linearidade para ABC foi estabelecida na faixa de 41,0-61,0 mg/mL e o coeficiente de correlação foi R= 0,9996. O limite de detecção e o de quantificação foram respectivamente 0,54 e 1,8 mcg/mL. A exatidão e a precisão foram 98,99% e 0,37%, respectivamente. Nas análises por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), foram utilizadas as seguintes condições: coluna LiChrospher ® 100 RP-18 Merck ® (250 mm x 4,6 mm, 5µm), fase móvel constituída por metanol: água: (35:65) com 1% de TEA e pH ajustado para 5.0 com ácido fosfórico; fluxo de 1,0 mL/min; detecção UV a 238 nm e temperatura de 22 ±1°C.Tempo de retenção (RT) ABC foi de 3,7 min. Foi obtida linearidade no intervalo de 50 a 350 mcg/mL e coeficiente de correlação = 0,9999. O limite de detecção e o de quantificação foram respectivamente de 2,26 mcg/mL e 7,52 mcg/mL. A exatidão foi de 100,18% e a precisão foi de 0,37% para a CLAE. Ambos os métodos podem ser usados na rotina de análise para o controle de qualidade de comprimidos contendo ABC. / The objective of this research was to develop and validate analytical methods for the amlodipine besylate (ABC) determination in tablets. Simple, accurate and precise spectrophotometric and HPLC methods were validate for ABC determination in samples containing 5.0 and 10.0 mg of ABC / tablet. For the spectrophotometric method, the first dilutions of samples were made in methanol and the consecutive in distilled water. Determination was made at 364.4 nm. Linearity was in the range of 41.0-61.0 µg/mL and r= 0.9996. The detection and quantitation limits were respectively, 0.54 µg/mL and 1.80 µg/mL. Accuracy and precision were respectively, 98.99% and 0.37%. For HPLC analysis, the following conditions were used: a LiChrospher ® 100 RP-18 Merck® (250 mm x 4,6 mm, 5µm) column; methanol: water with 1% of triethylamine adjusted to pH 5.0 with phosphoric acid (35:65), as mobile phase; a flow rate of 1.0 mL /min; UV detection at 238 nm and temperature of 22 ±1 °C . Retention time was 3.7 min. Linearity was in the range of 50.0 - 350.0 µg/mL and r = 0.9999. The detection and quantitation limits were respectively, 2.26 µg/mL and 7.52 µg/mL. Accuracy and precision were respectively, 100.18% and 0.37%. Both methods can be used in routine analysis for quality control of tablets containing ABC.