Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carol pdf.pdf: 1930051 bytes, checksum: b9c82e79bb7e104735c36e05b2702150 (MD5) Previous issue date: 2008-02-25 / The plant Duguetia furfuracea (St. Hil.) Benth and Hook. f. (1862), belongs to the family Annonaceae, is popularly known as sofre&#8208;do&#8208;rim&#8208;quem&#8208;quer, araticum&#8208;do&#8208;cerrado and ata&#8208;do&#8208;mato. This plant occurres in several Brazilian states, as Amazonas, Bahia, Distrito Federal, Goiás, Minas Gerais, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul and São Paulo. It is commonly used by people as anti&#8208;rheumatic and to cure renal colic. Previous studies have described therapeutic activity of this plant with trypanocidal, antiplasmodial and antiprotozoal effects. Due to the large utilization of this plant by the local people, the present work aimed to evaluate the genotoxic/mutagenic, antigenotoxic/antimutagenic and cytotoxic activities of lyophilized leaf extract of D. furfuracea by the lisogenic induction test (Inductest) and the mice bone marrow micronucleus assay (Micronucleus Test). The lisogenic induction test was performed according Moreau et al., (1976) using E. coli WP2s(&#955;) and RJF013 strains. To evaluate the genotoxic and toxic activities, the doses employed were 1 mg, 2 mg, 5 mg e 10 mg, while to evaluate the antigenotoxic action the doses were of 0,5 mg, 1 mg, 2 mg, 5 mg e 10 mg co&#8208;treated with 0,5 &#956;g de mitomycin C. Micronucleus test in the bone marrow of mice was performed according to Schmid (1975). To evaluate mutagenic activity, mice were treated with three different doses of plant extract (100, 200 and 300 mg/Kg body weight), to evaluate antimutagenic activity, mice were treated with the same doses co&#8208;administered with 4 mg/kg of mitomycin C. The genotoxic action was evaluated by the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) and cytotoxicity was evaluated by the polychromatic and normochromatic erythrocytes ratio (PCE/NCE). The results obtained from the evaluation of mutagenicity of this plant showed that the extract of D. Furfuracea didn t increase significantly (p>0.05) the frequency of MNPCE compared to negative control. Cytotoxicity was evident in all applied doses (p<0.05). Concerning antimutagenicity, all doses of extract reduced significantly the frequency of MNPCE compared to the positive control group (p<0.05). In both tests, the results obtained demonstrated that the extract of D. furfuracea presented cytotoxicity; however, it didn t show genotoxic or mutagenic effects in bacteria and mice bone marrow respectively. In the other hand, it was observed a antigenotoxic and antimutagenic action. / A planta Duguetia furfuracea (St. Hil.) Benth e Hook. f. (1862), pertence à família Annonaceae, é conhecida popularmente como sofre&#8208;do&#8208;rim&#8208;quem&#8208;quer, araticum&#8208;do&#8208;cerrado e ata&#8208;do&#8208;mato. Esta planta ocorre em vários estados brasileiros, como Amazonas, Bahia, Distrito Federal, Goiás, Minas Gerais, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul e São Paulo. É comumente utilizada pela população como anti&#8208;reumática e para combater cólicas renais. Estudos anteriores têm descrito a atividade terapêutica da planta com ação tripanomicida, antiprotozoárica e antiplasmódica. Devido à grande utilização da planta D. furfuracea pela população, o presente trabalho teve como objetivo avaliar as atividades genotóxica/mutagênica, antigenotóxica/antimutagênica e citotóxica do extrato liofilizado de folhas de D. furfuracea pelo teste de indução do profago &#955; (Induteste) em cepas de E. coli e pelo teste do micronúcleo em medula óssea de camundongos (Teste do Micronúcleo). O teste de indução do profago &#955; foi realizado de acordo com Moreau et al. (1976), utilizando as cepas de E. coli WP2s(&#955;) e RJF013. Para a avaliação das atividades genotóxica e tóxica foram empregadas as doses de 1 mg, 2 mg, 5 mg e 10 mg, enquanto que na avaliação da ação antigenotóxica foram testadas as doses de 0,5 mg, 1 mg, 2 mg, 5 mg e 10 mg co&#8208;tratadas com 0,5 &#956;g de mitomicina C. O teste do micronúcleo em medula óssea de camundongos foi realizado de acordo com a metodologia de Schmid (1975). Para a avaliação da atividade mutagênica, os animais foram tratados com três diferentes doses do extrato da planta (100, 200 e 300 mg/Kg p.c.), enquanto que para a avaliação da atividade antimutagênica foram administradas as mesmas doses (100, 200 e 300 mg/Kg p.c.) concomitantemente de uma dose de 4 mg/Kg de mitomicina C. A genotoxicidade foi avaliada pela freqüência de eritrócitos policromáticos micronucleados (EPCMN) e a citotoxicidade foi analisada pela razão eritrócitos policromáticos e normocromáticos (EPC/ENC). Os resultados obtidos na avaliação da mutagenicidade mostraram que todas as doses do extrato de D. furfuracea não aumentaram significativamente o número de EPCMN (p>0,05), quando comparados com o grupo controle negativo. A citotoxicidade foi evidente em todas as doses testadas (p<0,05). Em relação à antimutagenicidade, todas as doses administradas reduziram significativamente a freqüência de EPCMN, em relação ao grupo controle positivo (p<0,05). Em ambos os testes, os resultados obtidos mostraram&#8208;se concordantes, nos quais o extrato de D. furfuracea apresentou atividade citotóxica; porém, não demonstrou atividade genotóxica em bactérias e ação mutagênica em camundongos. Por outro lado, foi observada ação antigenotóxica e antimutagênica.

Interações planta-animal, tais como polinização, são a chave de processos ecológicos in muitas comunidades terrestres. O estudo de quem interage com quem é uma importante ferramenta para se entender os processos ecológicos e evolucionários. Em algumas comunidades tropicais, mais de um quarto de todas as espécies de planta pode ser polinizado por besouros. Eles são um grupo de inseto muito antigo e diversificado e eles interagem com angiospermas desde o período de suas origens e princípio da diversificação. Adicionalmente, a interação entre besouros e recursos florais provém singular oportunidade para se avaliar a complexidade de interações e a possibilidade de generalização como a tendência para plantas para usar uma enorme proporção da fauna de besouros visitantes como polinizadores, ou especialização com plantas usando uma proporção relativamente pequena da fauna disponível de visitantes como polinizadores. A distribuição espacial de espécies vegetais tem sido considerada um importante componente na determinação de interações planta-animal, sendo esperado que muitos padrões observados nestes sistemas resultem de variações na distribuição de recursos vegetais. A disponibilidade de recursos florais apresenta variações espaço-temporais que podem influenciar a eficiência dos polinizadores do ponto de vista quantitativo, pela freqüência de ocorrência da interação, ou qualitativo pela contribuição dada ao sucesso reprodutivo das espécies. Os principais objetivos da presente tese foram: 1) descrever a história natural e interação flores besouros em espécies de Cerrado em relação à heterogeneidade espaço-temporal da distribuição de recursos entre fitofisionomias localizadas na Estação Ecológica de Itirapina (EEI) e em área de Cerradão pertencente ao Instituto Arruda Botelho (22º12- 22º10S e 47º55- 47º57W, respectivamente) durante dois anos consecutivos; 2) verificar o padrão local de distribuição de flores e besouros em quatro fitofisionomias de cerrado estudadas; 3) caracterizar a nível de comunidade os padrões de interações observados na comunidade composta por besouros associados a flores; 4) finalmente, compreender detalhadamente um dos diversos sistemas de interação besouros-plantas registrados na área de estudo. Escolhemos o sistema de interação de D. furfuracea-besouros com o objetivo de descrever sua fenologia de floração e frutificação e seu sistema reprodutivo, verificando se há limitação polínica e de recursos. Também foi avaliada a função e o efeito dos visitantes florais sobre o sistema reprodutivo. Uma alta proporção de espécies de plantas tem suas flores visitadas por besouros em todas quatro fitofisionomias de Cerrado estudadas (12-40%), indicando que os dados disponíveis até o momento subestimam a ocorrência de cantarofilia para áreas de Cerrado. Este consiste no primeiro estudo focando toda uma comunidade de besouros associados a flores. Não houve variação temporal entre anos tanto para as redes de visitantes-flores ou para redes de polinizadores-plantas. Redes de polinizadores-plantas tiveram espécies de besouros altamente especialistas. Attalea geraensis¸ C. pubescens, D. furfuracea>, D. hispida, K. coriacea, S. petrea, T. formosa e X. aromatica consistem em espécies de planta envolvidas em muitas interações e foram consideradas espécies centrais. Tanto as redes de visitantes-flores, como a rede de polinizadores-plantas evidenciaram uma estrutura composta combinando estrutura de rede aninhada com compartimentada, mas com predomínio do padrão compartimentado. Estes compartimentos são resultantes tanto das muitas interações espécie-específica entre espécies de besouros e plantas, como daquelas espécies de planta que interagem com várias espécies especialistas de besouros. De modo geral, focando atenção nos besouros, ambas as redes, visitantes-flores e polinizadores-plantas foram definidas como altamente especializadas já que visitaram flores poucas espécies de planta tanto para comparações entre anos, como entre fitofisionomias. O presente estudo mostrou que o Cerrado apresenta sistemas de interação entre besouros e flores de espécies de planta com alta especificidade. Dentre as várias espécies de planta compreendidas nestas redes de interação de alta especificidade, merece desta D. furfuracea que apresenta uma fauna composta por várias espécies de besouros polinizadores altamente especialistas. Duguetia furfuracea é uma espécie auto-incompatível, cuja população estudada apresentou limitação polínica e de recursos no solo. Há duas guildas especializadas de besouros interagindo com esta espécie de planta. A primeira é composta por uma única espécie de curculionídeo (Plasilia sp.) que visitou suas flores em baixa abundância (média de 0,55 besouros por flor), mas com alta freqüência de ocorrência (44,9% das flores) e suas larvas consomem as sementes dos frutos que se desenvolvem. A segunda guilda é composta por várias espécies de besouros nitidulídeos, principalmente Colopterus sp.3 que visitaram as flores em grande abundância (média de 99 besouros por flor) e também com alta ocorrência de visitação (92% das flores) e que efetivamente promoveram a polinização. O sistema de polinização de D. furfuracea consiste no primeiro caso de polinização mutualística obrigatória envolvendo diferentes guildas de visitantes florais. Este também é o primeiro sistema de polinização combinando polinizadores previsíveis e confiáveis, consumo de sementes, limitação polínica e limitação por recursos, o que resulta em um complexo e eficiente mecanismo para regulação da população do visitante floral consumidor de sementes e para otimizar o sucesso reprodutivo da planta. / Plant-animal interactions, such as pollination, are a key element in many terrestrial communities. The study of who interacts with whom is an important approach for understanding ecological and evolutionary processes. In some tropical communities, up to one quarter of all plant species may be pollinated by beetles. They are an ancient and much diversified insect group and they interact with angiosperms since the time of their origin and early diversification. Additionally, the interaction between beetle and floral resource provide unique opportunity to evaluate the complexity of interactions and the possibility of generalization as the tendency for plants to use a large proportion of the available beetle-visiting fauna as pollinators, or specialization with plants using a relatively small proportion of the available beetle visiting fauna as pollinators. The spatial distributions of plant species have been considered an important component in the determination of plant-animal interactions, and it is expected that many patterns observed in these systems resulting from variations in the resource distribution of plants. The availability of floral resources presents spatio-temporal variations that may affect the pollinator efficiency in its quantitative traits through frequency of occurrence of the interaction, or qualitative by its contribution to the fitness plant. Thus, the main objectives of this present thesis were: 1) describe the natural history and interactions of beetle with flowers in Cerrado species focusing the spatio-temporal heterogeneity of the resource distribution among phytophysiognomies located in the Itirapina Ecological Station and in the Cerradão area belongs to the Arruda Botelho Institute (22º12- 22º10S and 47º55- 47º57W, respectively) during two consecutive years.; 2) verify the local pattern of flowers and beetle distribution in the four cerrado phytophysiognomies studied; 3) characterize in the community level the interaction patterns observed in the community composed by beetles associated to flowers; 4) finally, comprehend deeply one of the several beetle-flower systems recorded to this studied area. We chose the D. furfuracea-beetle interaction system with aim to describe its flowering and fruit phenology and its reproductive biology verifying if there are pollen and resource limitation. Also was evaluated the role and effect of floral visitors in the fitness plant. A high number of flowering species was visited by beetles (12-40%) indicating that the data available up to now underestimate the representation of this interaction in Cerrado areas. This work represents the first study focusing in the entire beetle community associated to flowers. Was found no temporal variation in the interaction between beetles and flowers. Pollinator-plant webs had beetle species highly specialist. A. geraensis¸ C. pubescens, D. furfuracea, D. hispida, K. coriacea, S. petrea, T. formosa and X. aromatica , involved in many interactions were considered as core species. Both the visitor-flower and the pollinator-plant webs showed a compound structures mixing nested and compartmented networks structure, but predominating the compartmented pattern. These compartments are resultant from both of the many species-specific interactions between beetle and plant species and of the plant species that interact with several specialist beetle species. Both visitor-flower and pollinator-plant webs may be denominated as highly specialist from the beetle perspective whereas that these beetle fauna visited flowers of very few plant taxa over time and space. The present study showed that the Cerrado presents interaction systems between beetles and plants species with high specificity. Among the several plant species comprised in these interaction webs with high specificity, D. furfuracea presents a very interesting pollinator system, presenting a fauna composed by several pollinator beetle species highly specialized. D. furfuracea is a self-incompatible species, which studied population presented pollen and resource limitation. There are two specialized beetle guilds interacting with this plant species. The first guild is composed just by one curculionid species (Plasilia sp.) that visited flowers with low abundance (median of 0.55 beetles per flower), but presenting high frequency of occurrence (44.9% of the flowers) and their larvae consumed seed of that fruits that developed. The second guild is composed by several nitidulid beetles, principally Colopterus sp.3 that visited flowers in large abundance (median of 99 beetles per flower) and also presented high visitation occurrence (92% of flowers) and that effectively promoted the pollination. The pollination system of D. furfuracea consists is the first case of obligate pollination mutualism case involving different guilds of floral visitors. This also constitutes the first pollination system combining predictable and reliable pollinators, seed consumption, pollen and resource limitation resulting in a complex and efficient mechanism to regulate the seed consuming by floral visitor`s population and to optimize the plant fitness

Interações planta-animal, tais como polinização, são a chave de processos ecológicos in muitas comunidades terrestres. O estudo de quem interage com quem é uma importante ferramenta para se entender os processos ecológicos e evolucionários. Em algumas comunidades tropicais, mais de um quarto de todas as espécies de planta pode ser polinizado por besouros. Eles são um grupo de inseto muito antigo e diversificado e eles interagem com angiospermas desde o período de suas origens e princípio da diversificação. Adicionalmente, a interação entre besouros e recursos florais provém singular oportunidade para se avaliar a complexidade de interações e a possibilidade de generalização como a tendência para plantas para usar uma enorme proporção da fauna de besouros visitantes como polinizadores, ou especialização com plantas usando uma proporção relativamente pequena da fauna disponível de visitantes como polinizadores. A distribuição espacial de espécies vegetais tem sido considerada um importante componente na determinação de interações planta-animal, sendo esperado que muitos padrões observados nestes sistemas resultem de variações na distribuição de recursos vegetais. A disponibilidade de recursos florais apresenta variações espaço-temporais que podem influenciar a eficiência dos polinizadores do ponto de vista quantitativo, pela freqüência de ocorrência da interação, ou qualitativo pela contribuição dada ao sucesso reprodutivo das espécies. Os principais objetivos da presente tese foram: 1) descrever a história natural e interação flores besouros em espécies de Cerrado em relação à heterogeneidade espaço-temporal da distribuição de recursos entre fitofisionomias localizadas na Estação Ecológica de Itirapina (EEI) e em área de Cerradão pertencente ao Instituto Arruda Botelho (22º12- 22º10S e 47º55- 47º57W, respectivamente) durante dois anos consecutivos; 2) verificar o padrão local de distribuição de flores e besouros em quatro fitofisionomias de cerrado estudadas; 3) caracterizar a nível de comunidade os padrões de interações observados na comunidade composta por besouros associados a flores; 4) finalmente, compreender detalhadamente um dos diversos sistemas de interação besouros-plantas registrados na área de estudo. Escolhemos o sistema de interação de D. furfuracea-besouros com o objetivo de descrever sua fenologia de floração e frutificação e seu sistema reprodutivo, verificando se há limitação polínica e de recursos. Também foi avaliada a função e o efeito dos visitantes florais sobre o sistema reprodutivo. Uma alta proporção de espécies de plantas tem suas flores visitadas por besouros em todas quatro fitofisionomias de Cerrado estudadas (12-40%), indicando que os dados disponíveis até o momento subestimam a ocorrência de cantarofilia para áreas de Cerrado. Este consiste no primeiro estudo focando toda uma comunidade de besouros associados a flores. Não houve variação temporal entre anos tanto para as redes de visitantes-flores ou para redes de polinizadores-plantas. Redes de polinizadores-plantas tiveram espécies de besouros altamente especialistas. Attalea geraensis¸ C. pubescens, D. furfuracea>, D. hispida, K. coriacea, S. petrea, T. formosa e X. aromatica consistem em espécies de planta envolvidas em muitas interações e foram consideradas espécies centrais. Tanto as redes de visitantes-flores, como a rede de polinizadores-plantas evidenciaram uma estrutura composta combinando estrutura de rede aninhada com compartimentada, mas com predomínio do padrão compartimentado. Estes compartimentos são resultantes tanto das muitas interações espécie-específica entre espécies de besouros e plantas, como daquelas espécies de planta que interagem com várias espécies especialistas de besouros. De modo geral, focando atenção nos besouros, ambas as redes, visitantes-flores e polinizadores-plantas foram definidas como altamente especializadas já que visitaram flores poucas espécies de planta tanto para comparações entre anos, como entre fitofisionomias. O presente estudo mostrou que o Cerrado apresenta sistemas de interação entre besouros e flores de espécies de planta com alta especificidade. Dentre as várias espécies de planta compreendidas nestas redes de interação de alta especificidade, merece desta D. furfuracea que apresenta uma fauna composta por várias espécies de besouros polinizadores altamente especialistas. Duguetia furfuracea é uma espécie auto-incompatível, cuja população estudada apresentou limitação polínica e de recursos no solo. Há duas guildas especializadas de besouros interagindo com esta espécie de planta. A primeira é composta por uma única espécie de curculionídeo (Plasilia sp.) que visitou suas flores em baixa abundância (média de 0,55 besouros por flor), mas com alta freqüência de ocorrência (44,9% das flores) e suas larvas consomem as sementes dos frutos que se desenvolvem. A segunda guilda é composta por várias espécies de besouros nitidulídeos, principalmente Colopterus sp.3 que visitaram as flores em grande abundância (média de 99 besouros por flor) e também com alta ocorrência de visitação (92% das flores) e que efetivamente promoveram a polinização. O sistema de polinização de D. furfuracea consiste no primeiro caso de polinização mutualística obrigatória envolvendo diferentes guildas de visitantes florais. Este também é o primeiro sistema de polinização combinando polinizadores previsíveis e confiáveis, consumo de sementes, limitação polínica e limitação por recursos, o que resulta em um complexo e eficiente mecanismo para regulação da população do visitante floral consumidor de sementes e para otimizar o sucesso reprodutivo da planta. / Plant-animal interactions, such as pollination, are a key element in many terrestrial communities. The study of who interacts with whom is an important approach for understanding ecological and evolutionary processes. In some tropical communities, up to one quarter of all plant species may be pollinated by beetles. They are an ancient and much diversified insect group and they interact with angiosperms since the time of their origin and early diversification. Additionally, the interaction between beetle and floral resource provide unique opportunity to evaluate the complexity of interactions and the possibility of generalization as the tendency for plants to use a large proportion of the available beetle-visiting fauna as pollinators, or specialization with plants using a relatively small proportion of the available beetle visiting fauna as pollinators. The spatial distributions of plant species have been considered an important component in the determination of plant-animal interactions, and it is expected that many patterns observed in these systems resulting from variations in the resource distribution of plants. The availability of floral resources presents spatio-temporal variations that may affect the pollinator efficiency in its quantitative traits through frequency of occurrence of the interaction, or qualitative by its contribution to the fitness plant. Thus, the main objectives of this present thesis were: 1) describe the natural history and interactions of beetle with flowers in Cerrado species focusing the spatio-temporal heterogeneity of the resource distribution among phytophysiognomies located in the Itirapina Ecological Station and in the Cerradão area belongs to the Arruda Botelho Institute (22º12- 22º10S and 47º55- 47º57W, respectively) during two consecutive years.; 2) verify the local pattern of flowers and beetle distribution in the four cerrado phytophysiognomies studied; 3) characterize in the community level the interaction patterns observed in the community composed by beetles associated to flowers; 4) finally, comprehend deeply one of the several beetle-flower systems recorded to this studied area. We chose the D. furfuracea-beetle interaction system with aim to describe its flowering and fruit phenology and its reproductive biology verifying if there are pollen and resource limitation. Also was evaluated the role and effect of floral visitors in the fitness plant. A high number of flowering species was visited by beetles (12-40%) indicating that the data available up to now underestimate the representation of this interaction in Cerrado areas. This work represents the first study focusing in the entire beetle community associated to flowers. Was found no temporal variation in the interaction between beetles and flowers. Pollinator-plant webs had beetle species highly specialist. A. geraensis¸ C. pubescens, D. furfuracea, D. hispida, K. coriacea, S. petrea, T. formosa and X. aromatica , involved in many interactions were considered as core species. Both the visitor-flower and the pollinator-plant webs showed a compound structures mixing nested and compartmented networks structure, but predominating the compartmented pattern. These compartments are resultant from both of the many species-specific interactions between beetle and plant species and of the plant species that interact with several specialist beetle species. Both visitor-flower and pollinator-plant webs may be denominated as highly specialist from the beetle perspective whereas that these beetle fauna visited flowers of very few plant taxa over time and space. The present study showed that the Cerrado presents interaction systems between beetles and plants species with high specificity. Among the several plant species comprised in these interaction webs with high specificity, D. furfuracea presents a very interesting pollinator system, presenting a fauna composed by several pollinator beetle species highly specialized. D. furfuracea is a self-incompatible species, which studied population presented pollen and resource limitation. There are two specialized beetle guilds interacting with this plant species. The first guild is composed just by one curculionid species (Plasilia sp.) that visited flowers with low abundance (median of 0.55 beetles per flower), but presenting high frequency of occurrence (44.9% of the flowers) and their larvae consumed seed of that fruits that developed. The second guild is composed by several nitidulid beetles, principally Colopterus sp.3 that visited flowers in large abundance (median of 99 beetles per flower) and also presented high visitation occurrence (92% of flowers) and that effectively promoted the pollination. The pollination system of D. furfuracea consists is the first case of obligate pollination mutualism case involving different guilds of floral visitors. This also constitutes the first pollination system combining predictable and reliable pollinators, seed consumption, pollen and resource limitation resulting in a complex and efficient mechanism to regulate the seed consuming by floral visitor`s population and to optimize the plant fitness

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Duguetia furfuracea is a common shrub from Brazilian cerrado areas, known as "ata brava", often used as a medicinal plant especially in treatment of renal colic and rheumatism. However, pharmacological studies with extracts obtained from different parts of this plant have shown cytotoxic activity, bactericidal and anti-tumor. Thus, this study aimed to identify and quantify the phenolic compounds of the hydroalcoholic extract of leaves D. furfuracea (HEDP), methanol (Mt-OH) and ethyl acetate (Ac-OEt) fractions by HPLC, and carry out phytochemical screening for different classes of compounds. In addition the antioxidant activity by the DPPH and FRAP assays, toxicity of the crude extract in the Drosophila melanogaster model, and the antifungal/modulatory activity were evaluated. The phytochemical screening revealed the presence of alkaloids, tannins, xanthones, chalcones, flavonoids, aurones and phenolic acids. HPLC analysis revealed that major components of HEDF were caffeic acid (33.17 ± 0.03 mg/g) and rutin (20.56 ± 0.01 mg/g), for the Mt-OH fraction were, caffeic acid (32.47 ± 0.03 mg/g) and quercitrin (31.96 ± 0.03 mg/g), and for Ac-OEt fraction were, quercitrin (32.97 ± 0.03 mg/g) and isoquercitrin (31.56 ± 0.01 mg/g). Although highest levels of phenols and total flavonoids were found in Ac-OEt fraction, the crude extract showed the highest antioxidant (in vitro) potential. The toxicity of the extract was confirmed (in vivo) associating the extract with standard diet of D. melanogaster at different concentrations. The extract caused a significant increase in mortality on the third day of exposure of flies at higher concentrations (100 and 200 mg/ml). The 50mg/ml concentration promoted decrease in motility of flies. Interestingly, the activity of acetylcholinesterase (AchE) was increased in flies exposed to concentrations of 1 and 10mg/ml and inhibited by the concentration of 50 mg/ml of HEDF. The cell viability was significantly compromised flies at all HEDF concentrations (1, 10 and 50 mg/ml) although it has been observed a significant increase in production of reactive oxygen species flies exposed only in the concentration of 50mg/ml. In this context it was evaluated the influence of extract (ex vivo) in the activity of antioxidant defenses of D. melanogaster exposed to concentrations of 1 and 10 mg/ml of HEDF resulted in a significant increase in the activity of enzymes Glutathione s-transferase (GST), Superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), however, for the concentration of 50 mg/ml of extract, there was a dramatic decrease in the activity of GST with no change in SOD activity and CAT. The cleavage of PARP investigated as a general index of cell death by apoptosis was confirmed in flies exposed to all HEDF concentrations. Yet exposure of the flies to HEDF 10 mg/mL significantly increased the phosphorylation of kinase ERK. The extract and fractions tested against Candida albicans, Candida tropicalis and Candida krusei showed no fungicidal activity since the minimum inhibitory concentration (MIC) was ≥ 1.024 μg/ml for all fungal strains tested. However, the HEDF and the fractions Ac-OEt and Mt-OH had a synergistic effect when combined with fluconazole, indicating modulatory action against fungi when associated with clinically relevant medicine. The HEDF and the fraction Mt-OH potentiated the effect of fluconazole when tested against C. kruzei, and the fraction Mt-OH also showed synergy with fluconazol against C. tropicalis. The fraction Ac-OEt potentiated the effect of fluconazol against C. albicans. The set of results suggests that oxidative stress may be an important mechanism underlying the toxicity induced by extract of D. furfuracea in Drosophila melanogaster. Additionally modulatory activity of the extract and fractions towards fluconazol improve the biomedical applications D. furfuracea. / Duguetia furfuracea é um arbusto comum em áreas do cerrado brasileiro, conhecida como ata brava , costuma ser usada como planta medicinal especialmente no combate a cólica renal e reumatismo. Entretanto, estudos farmacológicos com extratos obtidos de diferentes partes dessa planta têm evidenciado atividades citotóxica, bactericida e antitumoral. Assim, esse trabalho teve como objetivos identificar e quantificar os compostos fenólicos do extrato hidroalcoólico das folhas de Duguetia furfuracea (EHDF) e frações metanólica (Mt-OH) e acetato de etila (Ac-OEt) por meio de HPLC, e realizar triagem fitoquímica para diferentes classes de compostos. Ainda avaliar a atividade antioxidante por meio dos ensaios DPPH e FRAP, a toxicidade do extrato bruto no modelo de Drosophila melanogaster, a atividade antifúngica e modulatória do extrato e frações. A triagem fitoquímica revelou presença de alcalóides, taninos, xantonas, chalconas, flavonoides, auronas e ácidos fenólicos. A análise por HPLC no EHDF revelou como principais componentes ácido caféico (33,17 ± 0,03 mg/g) e rutina (20,56 ± 0,01 mg/g), para a fração Mt-OH, o ácido caféico (32,47 ± 0,03 mg/g) e quercitrina (31,96 ± 0,03 mg/g), e para Ac-OEt, quercitrina (32,97 ± 0,03 mg/g) e isoquercitrina (31,56 ± 0,01 mg/g). Os mais altos níveis de fenois e flavonoides totais foram encontrados na fração Ac-OEt, entretanto, o extrato bruto apresentou maior poder antioxidante (in vitro) do que as frações. A toxicidade do extrato foi confirmada no modelo in vivo Drosophila melanogaster. O extrato promoveu aumento significativo da mortalidade no terceiro dia de exposição das moscas nas concentrações mais altas (100 e 200mg/ml). A concentração de 50mg/ml promoveu redução na motilidade das moscas. A atividade da acetilcolinesterase (AchE) foi aumentada nas moscas expostas as concentrações de 1 e 10 mg/ml e inibida na concentração de 50 mg/ml do EHDF. A viabilidade celular das moscas foi significativamente comprometida em todas as concentrações do EHDF (1; 10 e 50mg/ml) embora tenha sido observado um aumento significativo na produção de espécies reativas de oxigênio apenas nas moscas expostas a concentração de 50mg/ml. Nesse contexto foram avaliadas as defesas antioxidantes de D. melanogaster A exposição das moscas as concentrações de 1 e 10 mg/ml do HEDF resultou em aumento significativo na atividade das enzimas Glutationa s-transferase (GST), Superóxido dismutase (SOD) e Catalase (CAT), entretanto, na concentração de 50 mg/ml do extrato, houve diminuição na atividade da GST sem alterações na atividade da SOD e CAT. A clivagem da PARP, investigada como índice geral de morte celular por apoptose, foi confirmada nas moscas expostas a todas as concentrações do EHDF. Ainda a exposição das moscas a 10 mg/mL do EHDF aumentou significativamente a fosforilação de ERK. O extrato e frações testados contra Candida albicans, Candida tropicalis e Candida krusei não apresentaram atividade fungicida considerando que a concentração inibitória mínima (CIM) foi ≥ 1,024 μg/ml para todas as estirpes de fungos testadas. Entretanto, o extrato e as frações Ac-OEt e Mt-OH apresentaram efeito sinérgico quando associadas ao fluconazol, indicando ação moduladora contra fungos mediante associação a medicamento clinicamente relevantes. O EHDF e a fração Mt-OH potencializaram o efeito do fluconazol quando testados contra a C. kruzei, e a fração Mt-OH também apresentou sinergismo com fluconazol contra C. tropicalis. A fração Ac-OEt potencializou o efeito do fluconazol contra C. albicans. O conjunto dos resultados sugere que o estresse oxidativo pode ser um mecanismo importante subjacente a toxicidade induzida por Duguetia furfuracea em Drosophila melanogaster, e atividade modulatória do extrato e frações junto ao fluconazole amplia as aplicações biomédicas de Duguetia furfuracea.

Dois dos principais aspectos da Química de Produtos Naturais são a identificação e a determinação estrutural dos compostos orgânicos presentes em materiais de origem vegetal ou animal. Para realizar esta tarefa são empregados diversos métodos de separação e espectroscópicos. Dentre os métodos espectroscópicos, destaca-se a espectroscopia de ressonância magnética nuclear pela riqueza dos dados fornecidos. Entretanto, o desenvolvimento da área exige métodos cada vez mais eficientes e sensíveis, para permitir o estudo de amostras em quantidades cada vez menores. Neste trabalho, empregamos três estratégias distintas para aumentar a eficiência da análise de amostras de produtos naturais por RMN. A primeira estratégia busca acelerar o processo de identificação dos componentes de frações de extratos vegetais através da separação virtual dos componentes da mistura, baseada nas diferenças de seus coeficientes de difusão. Esta estratégia permitiu identificar os quatro componentes majoritários da fração em acetato de etila do extrato etanólico das partes aéreas de Bidens sulphurea (Asteraceae) através de um estudo de RMN DOSY-2D. A segunda estratégia é dedicada ao problema da baixa sensibilidade da RMN 13C, o que torna difícil, e em alguns casos, proibitiva em termos do tempo necessário, a análise de amostras muito pequenas. Dada a dificuldade de se obter diretamente um espectro com uma relação sinal/ruído adequada, uma abordagem possível se baseia em estratégias de pós-processamento de um espectro de RMN em que predomina o ruído. A estratégia utilizada neste trabalho fornece um espectro reconstruído de secções que foram previamente processadas para a eliminação do ruído pela decomposição do valor singular (SVD). Os espectros assim processados nos auxiliaram na identificação e/ou elucidação estrutural de dois alcalóides obtidos de Duguetia furfuraceae (Annonaceae) e um poliacetileno e dois flavonóides de B. sulphurea (Asteraceae). A terceira estratégia utilizada neste trabalho se baseia na ampliação dos parâmetros rotineiramente obtidos numa análise por RMN, com a finalidade de fornecer novos subsídios para a determinação da estrutura de produtos naturais. Neste sentido, a determinação das constantes de acoplamento heteronuclear forneceu dados valiosos para a identificação de dois poliacetilenos obtidos de B. gardneri. / Two major aspects of Natural Products Chemistry are the identification and structure determination of organic compounds in materials of vegetable or animal. To accomplish this task are used various methods of separation and spectroscopic. Among spectroscopic methods, we highlight the spectroscopy of nuclear magnetic resonance by the wealth of data provided. However, the development of the area requires methods increasingly efficient and sensitive to allow the study of small or diluted samples. In this work, we employ three different strategies to increase the efficiency of analysis of samples of natural products by NMR. The first strategy seeks to accelerate the process of identifying the components of fractions of plant extracts through the virtual separation of the components of the mixture based on differences in their diffusion coefficients. With this strategy we have identified four major components of the in ethyl acetate fraction of ethanol extract of aerial parts of Bidens sulphurea (Asteraceae) by 2D DOSY NMR. The second strategy is devoted to the problem of low sensitivity of 13C NMR, which makes it difficult, and in some cases prohibitive in terms of time, the analysis of very small samples. Due to the difficulty of obtaining directly a spectrum with a signal-to-noise ratio adequate, a possible approach is based on strategies for post-processing of an NMR spectrum in which noise predominates. This strategy used here provides a spectrum of reconstructed sections were first processed to remove noise by singular value decomposition (SVD). Spectra processed of this way helped us in identifying and / or structural elucidation of two alkaloids derived from Duguetia furfuraceae (Annonaceae) and a polyacetylene and two flavonoids from Bidens gardneri (Asteraceae). The third strategy used in this work is based on expansion of the parameters routinely obtained in an analysis by NMR in order to provide new subsidies for the structure determination of natural products. In this sense, the determination of heteronuclear coupling constants provided valuable data for the identification of two polyacetylenes obtained from B. gardneri.

Dois dos principais aspectos da Química de Produtos Naturais são a identificação e a determinação estrutural dos compostos orgânicos presentes em materiais de origem vegetal ou animal. Para realizar esta tarefa são empregados diversos métodos de separação e espectroscópicos. Dentre os métodos espectroscópicos, destaca-se a espectroscopia de ressonância magnética nuclear pela riqueza dos dados fornecidos. Entretanto, o desenvolvimento da área exige métodos cada vez mais eficientes e sensíveis, para permitir o estudo de amostras em quantidades cada vez menores. Neste trabalho, empregamos três estratégias distintas para aumentar a eficiência da análise de amostras de produtos naturais por RMN. A primeira estratégia busca acelerar o processo de identificação dos componentes de frações de extratos vegetais através da separação virtual dos componentes da mistura, baseada nas diferenças de seus coeficientes de difusão. Esta estratégia permitiu identificar os quatro componentes majoritários da fração em acetato de etila do extrato etanólico das partes aéreas de Bidens sulphurea (Asteraceae) através de um estudo de RMN DOSY-2D. A segunda estratégia é dedicada ao problema da baixa sensibilidade da RMN 13C, o que torna difícil, e em alguns casos, proibitiva em termos do tempo necessário, a análise de amostras muito pequenas. Dada a dificuldade de se obter diretamente um espectro com uma relação sinal/ruído adequada, uma abordagem possível se baseia em estratégias de pós-processamento de um espectro de RMN em que predomina o ruído. A estratégia utilizada neste trabalho fornece um espectro reconstruído de secções que foram previamente processadas para a eliminação do ruído pela decomposição do valor singular (SVD). Os espectros assim processados nos auxiliaram na identificação e/ou elucidação estrutural de dois alcalóides obtidos de Duguetia furfuraceae (Annonaceae) e um poliacetileno e dois flavonóides de B. sulphurea (Asteraceae). A terceira estratégia utilizada neste trabalho se baseia na ampliação dos parâmetros rotineiramente obtidos numa análise por RMN, com a finalidade de fornecer novos subsídios para a determinação da estrutura de produtos naturais. Neste sentido, a determinação das constantes de acoplamento heteronuclear forneceu dados valiosos para a identificação de dois poliacetilenos obtidos de B. gardneri. / Two major aspects of Natural Products Chemistry are the identification and structure determination of organic compounds in materials of vegetable or animal. To accomplish this task are used various methods of separation and spectroscopic. Among spectroscopic methods, we highlight the spectroscopy of nuclear magnetic resonance by the wealth of data provided. However, the development of the area requires methods increasingly efficient and sensitive to allow the study of small or diluted samples. In this work, we employ three different strategies to increase the efficiency of analysis of samples of natural products by NMR. The first strategy seeks to accelerate the process of identifying the components of fractions of plant extracts through the virtual separation of the components of the mixture based on differences in their diffusion coefficients. With this strategy we have identified four major components of the in ethyl acetate fraction of ethanol extract of aerial parts of Bidens sulphurea (Asteraceae) by 2D DOSY NMR. The second strategy is devoted to the problem of low sensitivity of 13C NMR, which makes it difficult, and in some cases prohibitive in terms of time, the analysis of very small samples. Due to the difficulty of obtaining directly a spectrum with a signal-to-noise ratio adequate, a possible approach is based on strategies for post-processing of an NMR spectrum in which noise predominates. This strategy used here provides a spectrum of reconstructed sections were first processed to remove noise by singular value decomposition (SVD). Spectra processed of this way helped us in identifying and / or structural elucidation of two alkaloids derived from Duguetia furfuraceae (Annonaceae) and a polyacetylene and two flavonoids from Bidens gardneri (Asteraceae). The third strategy used in this work is based on expansion of the parameters routinely obtained in an analysis by NMR in order to provide new subsidies for the structure determination of natural products. In this sense, the determination of heteronuclear coupling constants provided valuable data for the identification of two polyacetylenes obtained from B. gardneri.