Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 432505.pdf: 1390397 bytes, checksum: 39fab4614d11925a0667ad6e40789290 (MD5) Previous issue date: 2011-03-22 / Em focos de introdu??o recente da esquistossom?se, como Esteio na regi?o metropolitana de Porto Alegre, a parasitose ocorre com baixas preval?ncias e cargas parasit?rias, resultando em dificuldades para o diagn?stico parasitol?gico, em virtude da sensibilidade inadequada dos m?todos cl?ssicos. O principal objetivo deste trabalho foi otimizar o desempenho de m?todos de diagn?stico, em situa??es que os ovos nas fezes s?o um evento raro. A estrat?gia foi examinar grandes quantidades de fezes, o que resultou na descri??o e avalia??o de um novo m?todo de diagn?stico para detec??o de ovos de Schistosoma mansoni nas fezes denominado Helmintex. Este ? um m?todo de concentra??o, onde as fezes passam por uma sequ?ncia de sedimenta??o espont?nea, tamisagem, centrifuga??o com acetato de etila (Ritchie) e uma etapa final onde os ovos s?o isolados atrav?s de intera??o com part?culas paramagn?ticas em um campo magn?tico. Ap?s a concentra??o, na etapa de detec??o dos ovos todo o sedimento resultante ? analisado atrav?s de microscopia ?ptica. Na segunda etapa deste trabalho o objetivo foi avaliar o desempenho da PCR em tempo real (tecnologia Taqman) como alternativa de m?todo de detec??o no sedimento final do Helmintex, substituindo a an?lise microsc?pica. Para realiza??o da primeira etapa, ovos de S. mansoni foram adicionados em 30 g de fezes negativas para a infec??o, formando suspens?es de 0,1 a 1,34 ovos por grama de fezes (opg), e as fezes foram submetidas a todas as etapas de concentra??o do m?todo. Para cada suspens?o testada foi encontrado pelo menos 1 ovo em 20% (0.1 opg); 50% (0.24); 50% (0.34); 60% (0.67); 80% (1.0) e 100% (1.34) das tentativas testadas para cada suspens?o. Para a avalia??o do desempenho da PCR, "primers" e sonda para o gene da citocromo-C oxidase subunidade 1 foram desenhados para a amplifica??o do DNA de S. mansoni. Para a extra??o do DNA foram avaliados 4 protocolos diferentes. Foram preparadas suspens?es de ovos em ?gua destilada e fezes, contendo 1, 10, 20, 40 e 80 ovos. E amostras de 1000 ovos foram extra?das para a constru??o de uma curva padr?o da estimativa de concentra??o de DNA, para verifica??o do limite de detec??o da rea??o. A amplifica??o do DNA do parasito pode ser vista em todas as suspens?es testadas, inclusive a que continha 1 ovo. Dos 4 protocolos de extra??o avaliados, o Illustra Tissue and Cell GenomicPrep Mini Spin Kit (GE Healthcare), um kit de extra??o comercial, foi o que apresentou o melhor rendimento. A curva padr?o constru?da a partir de 1000 ovos apresentou um limite de detec??o de 1 pg com reprodutibilidade de 13,8%. Considerando 100% de reprodutibilidade, a rea??o apresentou limite de detec??o de 100 pg. O novo m?todo Helmintex descrito neste trabalho representa grande avan?o no diagn?stico da esquistossom?se em infec??es com baixas cargas parasit?rias, al?m disso, apresentam-se 2 op??es de m?todos de detec??o (visualiza??o microsc?pica e amplifica??o de DNA dos ovos pela PCR em tempo real). Estes avan?os contribuem para o esfor?o em curso de reduzir mundialmente a morbidade e a dissemina??o das ?reas de transmiss?o das esquistossom?ases

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:08:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341115.pdf: 850841 bytes, checksum: fc50feef6db1a22bda86f5ef243d4f44 (MD5) Previous issue date: 2005-10-11 / A esquistossomose mans?nica foi detectada no Rio Grande do Sul pela primeira vez em 1997, constituindo o foco mais meridional das Am?ricas. A partir daquela data, v?rios trabalhos foram desenvolvidos para caracterizar epidemiologicamente este foco de transmiss?o de ultra baixa endemicidade e de recente introdu??o. O objetivo desse trabalho ? caracterizar morfologicamente o parasito e analisar a estrutura populacional atrav?s de marcadores microssat?lites, comparando com as cepas de laborat?rio LE e MAP. Dois isolados de campo chamados de Esteio e JV foram obtidos, respectivamente, a partir de fezes e moluscos naturalmente infectados e de um paciente. Os vermes adultos, obtidos de camundongos experimentalmente infectados, foram fixados, clarificados e corados para as mensura??es com aux?lio de um microsc?pio ?ptico. A an?lise molecular foi realizada com 4 marcadores microssat?lites. Morfologicamente, o parasito, quando comparado com dados obtidos da bibliografia, n?o apresentou diferen?as not?veis. As pequenas varia??es observadas podem ser atribu?das ? plasticidade fenot?pica das popula??es desse tremat?deo. O uso de 4 marcadores microssat?lites nos permitiu encontrar um n?mero menor de alelos nos isolados de campo quando comparado com as cepas de laborat?rio. H? uma grande diverg?ncia gen?tica encontrada (RST<0,253) quando comparados os isolados de campo e as cepas de laborat?rio.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:09:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 424923.pdf: 645382 bytes, checksum: 25070e3ec621e54c54f5013c978ddf8d (MD5) Previous issue date: 2010-02-19 / A esquistossomose mans?nica ? uma infec??o parasit?ria cr?nica end?mica que ocorre em pa?ses na ?frica, Am?rica do Sul, no Caribe e no Mediterr?neo Oriental. A principal patologia ? o granuloma, uma resposta imune contra os ant?genos secretados pelos ovos do parasito principalmente no f?gado e intestinos. Estes ant?genos est?o crucialmente envolvidos na modula??o das respostas imunol?gica celular e humoral do hospedeiro e podem estar envolvidos na estrat?gia de passagem do ovo atrav?s da mucosa intestinal. Este trabalho teve origem nos resultados de um experimento realizado por Candida Fagundes Teixeira do Grupo de Parasitologia Biom?dica da PUCRS, cujas tentativas de se obter anticorpos do ovo que interagissem com part?culas paramagn?ticas, revelaram alguma dificuldade em obter n?veis elevados de anticorpos contra a superf?cie do ovo. O objetivo principal do presente trabalho foi verificar a produ??o de anticorpos contra a superf?cie do ovo de Schistosoma mansoni. O S. mansoni, isolado Esteio, foi mantido em laborat?rio atrav?s de passagens em Biomphalaria glabrata e camundongos da cepa Swiss. Os vermes foram recuperados, lavados com tamp?o e utilizados para a produ??o de ant?geno sol?vel de membrana de vermes adultos. Os ovos foram coletados de fezes humanas infectadas e utilizados para a imuniza??o de camundongos e produ??o de ant?genos secretados pelo ovo (SEA). Os grupos experimentais foram divididos em 4 grupos com 6 camundongos cada, da seguinte forma: grupo 1 imunizado com solu??o salina 0,9%; grupo 2 imunizado com ovos sonicados e adjuvante; grupo 3 imunizado com ovos sonicados sem adjuvante e grupo 4 imunizado com ovos inteiros. Atrav?s da t?cnica de ELISA e imunofluoresc?ncia indireta foi verificada reatividade na imuniza??o com ovos sonicados, e n?o foi verificada reatividade na imuniza??o com ovos inteiros. A abordagem sist?mica e complexa da intera??o parasito-hospedeiro ? uma proposta interessante de estudo e permanece aberta para futuras investiga??es que poder?o auxiliar na compreens?o e tratamento da patogenia.