As células do cumulus oophorus são firmemente conectadas umas às outras e ao oócito e participam ativamente do amadurecimento oocitário. Essas células apresentam abundância de receptores para o FSH. Os carboidratos da molécula do FSH podem terminar em resíduos de ácido siálico, permitindo que ele exista em numerosas isoformas. As isoformas mais ácidas do FSH contêm mais resíduos de ácido siálico. Os níveis dessas isoformas variam na fase folicular do ciclo menstrual e possuem diferentes capacidades de estímulo ovariano, sendo as menos ácidas mais potentes e de curta meia-vida plasmática. Objetivo: padronizar a técnica de registro eletrofisiológico intracelular para as células do cumulus oophorus humanas e verificar a ação de uma isoforma menos ácida do FSH, a Folitropina Beta (Puregon®) sobre o potencial de membrana dessas células, comparando com a ação de um FSH com menor grau de pureza e mais ácido (FSH ovino). Metodologia: o potencial de membrana foi registrado utilizando células de cumulus oophorus de pacientes encaminhadas ao procedimento de injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI). As células do cumulus foram cultivadas em placas de cultura com meio HTF (Life Global® - Guilford, CT USA) acrescido de 10% de Soro Sintético (SSS- Life Global® - Guilford, CT USA) por 24 a 48 horas. Durante o experimento eletrofisiológico, a placa foi perfundida com o fluxo de 1 mL/min de meio de Hank´s acrescido de Hepes com 10% de Soro Sintético (SSS- Life Global® - Guilford, CT USA) mantido a 37º C. O registro intracelular foi realizado com microeletrodos preenchidos com KCl 3 M com uma resistência de 15 a 25 MΩ e acoplados a um eletrômetro. A resistência da membrana ao fluxo de cargas foi avaliada com a aplicação de pulsos quadrados de corrente (0,5 nA, 0,5 Hz e 200 ms) através do eletrodo de registro. Os hormônios testados (FSH ovino e Folitropina Beta) foram aplicados topicamente na placa. Para a análise estatística foi utilizado o teste de Anova de duas vias (seguido do pós-teste de Bonferroni) ou o teste exato de Fischer. Resultados: Foi realizada a padronização da técnica de registro eletrofisiológico para as células do cumulus e o potencial de membrana médio em repouso obtido foi de -34,02 mV, com desvio-padrão de ± 6,46 e erro-padrão da média de ± 2,04. A resistência média das membranas ao fluxo de íons foi de 16,5 MΩ, com desvio-padrão de ± 4,03 e erro-padrão da média de ± 1,8. A aplicação do FSH Ovino (1 μM) causou uma lenta despolarização, estatisticamente significativa 180 segundos após a aplicação do hormônio (P<0,01). A aplicação da Folitropina Beta (Puregon® 1 μM) causou uma lenta despolarização, estatisticamente significativa 120 e 180 segundos após a aplicação do hormônio (P<0,001). O padrão de despolarização foi semelhante entre as duas isoformas, sendo o efeito da Folitropina Beta mais imediato que o do FSH Ovino aos 120 segundos. Conclusões: A partir da padronização da técnica de registro eletrofisiológico intracelular para as células do cumulus oophorus humanas, registrou-se o potencial médio de membrana em repouso (-34,02 mV) e a resistência média da membrana ao fluxo de íons (16,5 MΩ). O FSH Ovino (1 μM) e a Folitropina Beta (Puregon®) (1 μM) possuem uma ação despolarizante sobre o potencial de membrana das células do cumulus. Para o FSH Ovino, essa despolarização foi significativa 180 segundos após a aplicação do hormônio e para a Folitropina Beta, a despolarização foi significativa já aos 120 segundos após a aplicação. Há uma semelhança no padrão de despolarização produzida pelo FSH Ovino e pela Folitropina Beta. Um melhor entendimento das diferenças no funcionamento das isoformas do FSH pode proporcionar o desenvolvimento de melhores protocolos de tratamento para as pacientes, com menos efeitos colaterais. Esse conhecimento também pode ser utilizado para o aprimoramento das técnicas de maturação in vitro dos oócitos, que podem poupar as pacientes dos efeitos colaterais e dos altos custos da estimulação exógena com gonadotrofinas. / The cumulus oophorus cells are firmly connected to each other and to the oocyte and they take an important part on the oocyte maturation. These cells present numerous FSH receptors. The carbohydrates present in the FSH molecule may end in sialic acid residues, allowing FSH to exist in various isoforms. The more acidic isoforms present more sialic acid residues in their carbohydrate moieties. These isoforms exhibit fluctuations in the follicular phase of the menstrual cycle and possess different capabilities of ovarian stimulation, with the least acidic isoform having higher potency and lower plasmatic half-life. Objective: The aim of this study was to standardize the intracellular electrophysiology register technique to the human cumulus oophorus cells and to investigate the membrane potential action of a less acidic FSH isoform (Puregon™), comparing with the membrane action using a less purified, more acidic FSH isoform (sheep FSH). Methods: The membrane potential was registered in cumulus oophorus cells from patients assigned to the intracytoplasmatic sperm injection (ICSI) technique. The cumulus cells were cultured in plates with HTF medium for 24 to 48 hours. During the electrophysiological experiment, the plate was superfused with 1 mL/min of Hank`s medium supplemented with Hepes, maintained at 37º C. The intracellular register was performed with microcapillaries filled with 3 M KCl with resistance ranging between 15 and 25 MΩ, and coupled to an electrometer. The membrane resistance to the ion flow was assessed by the application of square current pulses (0,5 nA, 0,5 Hz and 200 ms) through the register electrode. The tested hormones (sheep FSH and Beta Follitropin Puregon™) were applied topically onto the plate. Statistical analysis was performed using the ANOVA test for repeated measures (with Bonferroni post-test) or Fischer´s exact test. Results: the standardization of the electrophysiological register technique for the cumulus cells was successfully achieved and the mean resting membrane potential obtained was -34,02 ± 2,04 mV (SEM). The mean resistance of the membrane to the ion flow was 16,5 ± 1,8 MΩ (SEM). The sheep FSH application (1 μM) led to a slow depolarization, statistically significant 180 seconds after the hormone application (P<0,01). Beta Follitropin administration (1 μM) led to a slow depolarization, statistically significant 120 and 180 seconds after the hormone application (P<0,001). The depolarization pattern was similar between both isoforms, being that Beta Follitropin`s effect was more immediate than sheep FSH`s. Conclusion: With the electrophysiological intracellular register technique standardization to the human cumulus cells, the mean resting membrane potential was registered (-34,02 mV) and the mean membrane resistance to the ion flow was obtained (16,5 MΩ). Sheep FSH (1 μM) and Beta Follitropin (Puregon™) (1 μM) prompted a depolarizing action in the membrane potential of cumulus cells. Sheep FSH depolarization was significant at 180 seconds after the hormone application and Beta Follitropin depolarization was significant at 120 seconds after its application. Both isohormones have similar depolarization patterns. A better understanding of the differences in the action of both FSH isoforms shall make it possible to develop better hormone induction protocols in fertility treatments, with less side effects for the patients. This knowledge will potencially also make it possible to improve the in vitro oocyte maturation techniques, sparing patients of the hormone treatment side effects and of the high financial costs of the exogenous gonadotrophins administration.

As células do cumulus oophorus são firmemente conectadas umas às outras e ao oócito e participam ativamente do amadurecimento oocitário. Essas células apresentam abundância de receptores para o FSH. Os carboidratos da molécula do FSH podem terminar em resíduos de ácido siálico, permitindo que ele exista em numerosas isoformas. As isoformas mais ácidas do FSH contêm mais resíduos de ácido siálico. Os níveis dessas isoformas variam na fase folicular do ciclo menstrual e possuem diferentes capacidades de estímulo ovariano, sendo as menos ácidas mais potentes e de curta meia-vida plasmática. Objetivo: padronizar a técnica de registro eletrofisiológico intracelular para as células do cumulus oophorus humanas e verificar a ação de uma isoforma menos ácida do FSH, a Folitropina Beta (Puregon®) sobre o potencial de membrana dessas células, comparando com a ação de um FSH com menor grau de pureza e mais ácido (FSH ovino). Metodologia: o potencial de membrana foi registrado utilizando células de cumulus oophorus de pacientes encaminhadas ao procedimento de injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI). As células do cumulus foram cultivadas em placas de cultura com meio HTF (Life Global® - Guilford, CT USA) acrescido de 10% de Soro Sintético (SSS- Life Global® - Guilford, CT USA) por 24 a 48 horas. Durante o experimento eletrofisiológico, a placa foi perfundida com o fluxo de 1 mL/min de meio de Hank´s acrescido de Hepes com 10% de Soro Sintético (SSS- Life Global® - Guilford, CT USA) mantido a 37º C. O registro intracelular foi realizado com microeletrodos preenchidos com KCl 3 M com uma resistência de 15 a 25 MΩ e acoplados a um eletrômetro. A resistência da membrana ao fluxo de cargas foi avaliada com a aplicação de pulsos quadrados de corrente (0,5 nA, 0,5 Hz e 200 ms) através do eletrodo de registro. Os hormônios testados (FSH ovino e Folitropina Beta) foram aplicados topicamente na placa. Para a análise estatística foi utilizado o teste de Anova de duas vias (seguido do pós-teste de Bonferroni) ou o teste exato de Fischer. Resultados: Foi realizada a padronização da técnica de registro eletrofisiológico para as células do cumulus e o potencial de membrana médio em repouso obtido foi de -34,02 mV, com desvio-padrão de ± 6,46 e erro-padrão da média de ± 2,04. A resistência média das membranas ao fluxo de íons foi de 16,5 MΩ, com desvio-padrão de ± 4,03 e erro-padrão da média de ± 1,8. A aplicação do FSH Ovino (1 μM) causou uma lenta despolarização, estatisticamente significativa 180 segundos após a aplicação do hormônio (P<0,01). A aplicação da Folitropina Beta (Puregon® 1 μM) causou uma lenta despolarização, estatisticamente significativa 120 e 180 segundos após a aplicação do hormônio (P<0,001). O padrão de despolarização foi semelhante entre as duas isoformas, sendo o efeito da Folitropina Beta mais imediato que o do FSH Ovino aos 120 segundos. Conclusões: A partir da padronização da técnica de registro eletrofisiológico intracelular para as células do cumulus oophorus humanas, registrou-se o potencial médio de membrana em repouso (-34,02 mV) e a resistência média da membrana ao fluxo de íons (16,5 MΩ). O FSH Ovino (1 μM) e a Folitropina Beta (Puregon®) (1 μM) possuem uma ação despolarizante sobre o potencial de membrana das células do cumulus. Para o FSH Ovino, essa despolarização foi significativa 180 segundos após a aplicação do hormônio e para a Folitropina Beta, a despolarização foi significativa já aos 120 segundos após a aplicação. Há uma semelhança no padrão de despolarização produzida pelo FSH Ovino e pela Folitropina Beta. Um melhor entendimento das diferenças no funcionamento das isoformas do FSH pode proporcionar o desenvolvimento de melhores protocolos de tratamento para as pacientes, com menos efeitos colaterais. Esse conhecimento também pode ser utilizado para o aprimoramento das técnicas de maturação in vitro dos oócitos, que podem poupar as pacientes dos efeitos colaterais e dos altos custos da estimulação exógena com gonadotrofinas. / The cumulus oophorus cells are firmly connected to each other and to the oocyte and they take an important part on the oocyte maturation. These cells present numerous FSH receptors. The carbohydrates present in the FSH molecule may end in sialic acid residues, allowing FSH to exist in various isoforms. The more acidic isoforms present more sialic acid residues in their carbohydrate moieties. These isoforms exhibit fluctuations in the follicular phase of the menstrual cycle and possess different capabilities of ovarian stimulation, with the least acidic isoform having higher potency and lower plasmatic half-life. Objective: The aim of this study was to standardize the intracellular electrophysiology register technique to the human cumulus oophorus cells and to investigate the membrane potential action of a less acidic FSH isoform (Puregon™), comparing with the membrane action using a less purified, more acidic FSH isoform (sheep FSH). Methods: The membrane potential was registered in cumulus oophorus cells from patients assigned to the intracytoplasmatic sperm injection (ICSI) technique. The cumulus cells were cultured in plates with HTF medium for 24 to 48 hours. During the electrophysiological experiment, the plate was superfused with 1 mL/min of Hank`s medium supplemented with Hepes, maintained at 37º C. The intracellular register was performed with microcapillaries filled with 3 M KCl with resistance ranging between 15 and 25 MΩ, and coupled to an electrometer. The membrane resistance to the ion flow was assessed by the application of square current pulses (0,5 nA, 0,5 Hz and 200 ms) through the register electrode. The tested hormones (sheep FSH and Beta Follitropin Puregon™) were applied topically onto the plate. Statistical analysis was performed using the ANOVA test for repeated measures (with Bonferroni post-test) or Fischer´s exact test. Results: the standardization of the electrophysiological register technique for the cumulus cells was successfully achieved and the mean resting membrane potential obtained was -34,02 ± 2,04 mV (SEM). The mean resistance of the membrane to the ion flow was 16,5 ± 1,8 MΩ (SEM). The sheep FSH application (1 μM) led to a slow depolarization, statistically significant 180 seconds after the hormone application (P<0,01). Beta Follitropin administration (1 μM) led to a slow depolarization, statistically significant 120 and 180 seconds after the hormone application (P<0,001). The depolarization pattern was similar between both isoforms, being that Beta Follitropin`s effect was more immediate than sheep FSH`s. Conclusion: With the electrophysiological intracellular register technique standardization to the human cumulus cells, the mean resting membrane potential was registered (-34,02 mV) and the mean membrane resistance to the ion flow was obtained (16,5 MΩ). Sheep FSH (1 μM) and Beta Follitropin (Puregon™) (1 μM) prompted a depolarizing action in the membrane potential of cumulus cells. Sheep FSH depolarization was significant at 180 seconds after the hormone application and Beta Follitropin depolarization was significant at 120 seconds after its application. Both isohormones have similar depolarization patterns. A better understanding of the differences in the action of both FSH isoforms shall make it possible to develop better hormone induction protocols in fertility treatments, with less side effects for the patients. This knowledge will potencially also make it possible to improve the in vitro oocyte maturation techniques, sparing patients of the hormone treatment side effects and of the high financial costs of the exogenous gonadotrophins administration.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-15T12:45:15Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO NATHALIA RAPHAELA PESSOA VAZ CURADO.pdf: 2114885 bytes, checksum: bbdb24b76becdcb87f1965ef56df1336 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T12:45:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO NATHALIA RAPHAELA PESSOA VAZ CURADO.pdf: 2114885 bytes, checksum: bbdb24b76becdcb87f1965ef56df1336 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Os testes objetivos são capazes de dar valiosas contribuições para o diagnóstico da perda auditiva em neonatos ou lactentes uma vez que não há necessidade de resposta do paciente, porém ainda precisam ser melhores estudados. Este estudo teve como objetivo, verificar as respostas eletrofisiológicas dessa população, através dos registros dos potenciais evocados auditivos de tronco encefálico por Frequência Específica por condução óssea. A pesquisa (transversal, observacional, analítica) foi realizada no serviço de triagem auditiva neonatal de um hospital universitário, na cidade do Recife. Participaram 10 neonatos ou lactentes que apresentaram presença de emissões otoacústicas e sincronia neural. Os mesmos foram submetidos ao registro do Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefálico por condução óssea com o estímulo tone burst, nas frequências de 1000 e 4000 Hz, nas quais foram encontradas médias do nível mínimo de resposta de 20,25 dB NAn e 27,25 dB NAn, respectivamente. As médias das latências para a maior e menor intensidade utilizada foram respectivamente de 11,19 ms e 15,28 em 1000 Hz e de 10,80 ms e 12,60 ms em 4000 Hz. Foram encontradas significâncias na frequência de 4000 Hz na presença do indicador de risco ao analisar a média do nível mínimo de resposta; E em 1000 Hz, o sexo na análise da latência para a intensidade de 20 dB NAn. Este estudo mostra que é possível predizer os limiares auditivos por condução óssea em 1000 e 4000 Hz na população avaliada.

Orientadores: Jose Manoel Balthazar, Helder Anibal Hermini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica / Made available in DSpace on 2018-08-06T09:09:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Chavarette_FabioRoberto_D.pdf: 4150246 bytes, checksum: 9d985ec5ea9fe6e142b97323e3bcc2d9 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Nesta tese de doutorado, estuda-se o comportamento da membrana plasmática modelada através de um circuito elétrico. O modelo elétrico foi desenvolvido por Hodgkin e Huxley em 1952 e trata da variação do tempo em relação à condutância de íons de potássio e sódio no axônio da lula gigante, este modelo serviu como um arquétipo para modelos comportamentais da eletrofisiologia das membranas biológicas. Hodgkin e Huxley desenvolveram um conjunto de equações diferenciais para a propagação de sinais elétricos, que foram modificados posteriormente para descrever o comportamento dos neurônios em outros animais e para outros tipos de fibras excitáveis, como por exemplo às fibras de Purkinjie. Assim a dinâmica do modelo de Hodgkin-Huxley foi estudada extensivamente com uma visão para as implicações biológicas e com testes para métodos numéricos que podem ser aplicados a modelos matemáticos mais complexos. Recentemente, um movimento irregular caótico do potencial de ação da membrana foi observado com diversas técnicas de controle com o objetivo de estabilizar a variação deste potencial. Na tese de doutorado, analisa-se a dinâmica não-linear do modelo matemático de Hodgkin-Huxley, a existência de soluções quase periódicas para este modelo com os seus parâmetros originais, apresenta-se ainda modificações no modelo para acrescentar-se comportamento não ideal, isto é, quando se considera a ação de uma fonte de energia sob o sistema e sua interação supostamente limitada onde ela é mais intensa, e desenvolve-se um projeto de controle linear ótimo para o potencial de ação da membrana / Abstract: In this work it is studied the plasmatic membrane behavior through an electric circuit. The electric model was developed by Hodgkin and Huxley at 1952 and it treats of the variation of the amount of time related with the potassium and sodium conductance's in the squid axon, this model has served as an archetype for mannering mathematical model of eletrophysiology of biological membranes. Hodgkin and Huxley developed differential equations for the propagation of electric signals, and later they had been modified to describe the behavior of neurons in other animals and for other excitable types of as pancreatic cells, cardio paths and staple fibres of Purkinje. Thus the dynamics of the Hodgkin-Huxley model have been extensively studied both with a view to their biological implications and as a test bed for numerical methods that can be applied to more complex models. Recently, a chaotic irregular movement of the potential of action of the membrane was observes through several techniques of control with the objective to stabilize the variation of this potential. This Phd dissertation deals with an analysis of the nonlinear dynamics in the Hodgkin-Huxley mathematical model, namely, the existence of quasi-periodic solutions in the model with its original parameters, and still we present modifications in the system to demonstrate the non-ideal dynamics behavior, that is when one consider the interaction between the energy source and the dynamical system and we developed an optimal linear control design for the action potential of membrane. They had been disclosed the conditions that allow using a controllinear feedback for non-linear system / Doutorado / Mecanica dos Sólidos e Projeto Mecanico / Doutor em Engenharia Mecânica

Orientador: Jose Wilson Magalhães Bassani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Eletrica e de Computação / Made available in DSpace on 2018-07-22T20:14:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Puglisi_JoseLuis_D.pdf: 3693274 bytes, checksum: 1e7135b48bbbbd7f376a818cb7f7b0d1 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Foram avaliados os fluxos de cálcio que ocorrem durante o acoplamento excitação - contração no miócito isolado de coelho. O influxo de cálcio através dos canais de cálcio durante o potencial de ação foi medido usando a técnica de fixação de voltagem. A contribuição da troca Na/Ca para a entrada de cálcio foi calculada usando um modelo matemático. A participação relativa dos mecanismos de extrusão de cálcio (ATPase de cálcio do retÍculo sarcoplasmático, troca Na/Ca da membrana plasmática, bomba de cálcio do sarcolema e uniporter mitocondrial de cálcio) foram quantificadas usando contraturas de cafeína. Finalmente o efeito da temperatura sobre os mecanismos de transporte de cálcio foi analisado repetindo as medições a 25 e 35°C. Os resultados mostram que, no miócito ventricular de coelho, a maior parte do influxo de cálcio provem dos canais de cálcio, enquanto que a troca Na/Ca fornece aproximadamente25% do fluxo total de entrada. Durante o relaxamento o retículo sarcoplasmático recapta cerca de 70% do cálcio, a troca Na/Ca extrui aproximadamente 25% e o restante é transportado pela bomba de cálcio do sarcolema e a mitocôndria. A temperatura acelera todos estes processos de transporte porém não afeta as suas contribuições relativas / Abstract: Ca fluxes during Excitation-Contraction Coupling were analyzed in rabbit ventricular myocytes. Ca influx through Ca channels during an action potential was measured using the voltage-clamp technique. The contribution ofNa/Ca exchange to Ca influx was calculated using a mathematical mode!. The relative participation of the mechanisms by which Ca is extruded (Sarcoplasmic Reticulum Ca-ATPase, Na/Ca exchange, SarcolemmalCa-ATPase and mitochondrial Ca uptake) were quantified using caffeine contractures. Finally the effect of temperature on these transport mechanisms was determined by repeating the measurements at 25 and 35°C. The results show that, in rabbit ventricular myocytes, most of the Ca influx occurs via the Ca channels, whilst influx via Na/Ca exchange supplies approximately 25%. During relaxation SR reuptake accounts for about 70% and Na/Ca exchange for approximately25% of the total amount of Ca removed, with the remainder transported via the Sarcolemmal Ca pump and the mitochondria. Although temperature accelerates all of these processes, their relative contributions to cellular Ca flux are not greatly altered. / Doutorado / Doutor em Engenharia Elétrica

Orientador: Lea Rodrigues-Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T14:03:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Galbiatti_Charlene_M.pdf: 3708573 bytes, checksum: eb349f7f5062bd08e487dc8ae3c13167 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: No presente trabalho foram estudados os efeitos neuromusculares da toxina Bmaj-9 isolada do veneno de Bothrops marajoensis no laboratório de química de proteínas da Unicamp. Esta toxina foi ensaiada: nas preparações biventer cervicis de pintainho, nervo frênico diafragma de camundongo e no músculo gastrocnêmio de camundongo. Em preparações de ave, a Bmaj-9 causou bloqueio neuromuscular completo irreversível nas concentrações de 5, 10 e 20 µg/mL, sem afetar as contraturas evocadas pela adição exógena de ACh (110 µM). Além disso mostrou-se pouco ativa na preparação nervo frênico diafragma de camundongo. A Bmaj -9 não interferiu na resposta muscular a estímulos elétricos direto em preparações de biventer cervicis de pintainho previamente curarizadas. Ensaios bioquímicos mostraram que a Bmaj-9 exibiu uma pronunciada atividade fosfolipásica quando comparada a do veneno bruto. Assim, submetendo-se preparações incubadas com a toxina a baixa temperatura (22 °C), observou-se a ausência do seu característico efeito bloqueador neuromuscular. A análise histológica in vitro mostrou que esta fração em baixas concentrações não causou alteração morfológica significativa embora tenha determinado um leve aumento na liberação da enzima creatinoquinase. Em altas concentrações, no entanto, foi observado algum dano muscular na região periférica do músculo. In vivo, a Bmaj-9 causou uma discreta alteração morfológica e também um leve aumento nos níveis de CK após injeção intramuscular, mostrando uma correlação positiva entre os efeitos dos parâmetros estudados - lesão muscular e liberação de CK, esses dados, em nada se comparam aos efeitos de venenos ou toxinas tipicamente botrópicas. O registro do PM mostrou que a Bmaj-9 (10 µg/mL) não produziu despolarização da membrana muscular, e a medida do conteúdo e do tamanho quânticos, em preparação nervo frênico-diafragma de camundongo, mostrou que houve um leve aumento nos valores do conteúdo quânticos após 15 minutos de incubação. Após 60 minutos de incubação, o efeito da Bmaj-9 sobre os valores do conteúdo e tamanho quânticos foram, respectivamente: 70,5 ± 11 e 0,21 ± 0,06 mV. Estes não foram significativamente diferentes quando comparados com os valores controle (68,0 ± 8,9 e 0,17 ± 0,04 mV). Estes resultados sugerem que o bloqueio da transmissão neuromuscular, causado por esta toxina em baixas concentrações, seja muito provavelmente devido a uma ação pré-sináptica, resultado de sua interação com a membrana do terminal nervoso motor. / Abstract: In the present work, the neuromuscular effects of the toxin Bmaj-9 isolated from the venom of Bothrops marajoensis in the laboratory of chemistry of proteins at Unicamp were studied. This toxin was assayed in biventer cervicis preparations of little chicken, phrenic diaphragm nerve of mice and in gastrocnemius muscles of mice. In birds preparation, Bmaj-9 caused irreversible complete neuromuscular blockade in the concentrations of 5, 10 and 20 µg/mL not affecting the contractures caused by the exogenous addition of Ach (110 µM). Moreover, Bmaj-9 was not very active in the phrenic diaphragm preparation of mice. It has not interfered in the muscular response to direct electrical stimuli in biventer cervicis preparations of little chicken previously curarized. Biochemical assays showed that Bmaj-9 exhibited pronounced phospholipase activity when compared to crude venom. Thus, when preparations incubated with the toxin were submitted to low temperatures (22°C), the absence of the characteristic neuromuscular blocking effect of the fraction was observed. The histological analysis in vitro showed that even having determined a low increase on the release of the creatino-kinase enzyme, low concentrations of this fraction did not cause significant morphological alteration. Nevertheless, in high concentrations some muscular damages in the peripheral region of the muscle were observed. In vivo, Bmaj-9 caused a slight morphological alteration and also a discrete increase on the CK levels after intramuscular injection, showing a positive correlation among the effects of the parameters studies - muscular lesion and CK release. These data obtained with Bmaj-9 are extremely inferior to the ones obtained with bothropic venoms or toxins. The registration of the resting membrane potential showed that Bmaj-9 (10 µg/mL) did not produce depolarization of the muscular membrane and the measurement of the content and quantum size, in phrenic diaphragm preparation of mice, showed that a slight increase on the quantum amount was detected after 15 minutes of incubation. After 60 minutes of incubation, the effect of Bmaj-9 over the content and quantum size values was 70.5 ± 11 and 0.21 ± 0.06 mV, respectively; these values were not significantly different when compared to control values (68.0 ± 8.9 and 0.17 ± 0.04 mV). These values suggest that the blockade of the neuromuscular transmission caused by this toxin in low concentrations is probably due to a pre-synaptic action resulting from the interaction of the toxin with the membrane of the motor nerve terminal. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores: Maria Francisca Colella dos Santos, Andrea Trevas Maciel Guerra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T10:05:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Casali_RaquelLeme_M.pdf: 1957097 bytes, checksum: 0478a353098aaec7ddb8d41b65685008 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Introdução: O Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefálico (PEATE) é um exame objetivo de extrema importância no diagnóstico precoce de alterações auditivas em neonatos e lactentes, devido à dificuldade de se obter respostas audiológicas subjetivas fidedignas nessa população. Os dados normativos das respostas da população adulta para esse teste já estão bem estabelecidos na literatura. No entanto, os dados obtidos na população pediátrica, em especial referente aos prematuros, precisam ser mais estudados. O uso de critérios de normalidade para adultos na análise do PEATE de crianças pode levar a interpretação equivocada dos resultados devido à influência do processo de maturação do sistema auditivo. Nos últimos anos com o avanço da triagem auditiva neonatal e seguindo a preconização da detecção precoce de alterações auditivas houve um aumento da demanda de crianças muito novas para a conclusão do diagnóstico audiológico. Dessa forma, faz-se necessária a obtenção de dados normativos de neonatos e lactentes termos e prematuros para esse teste, os quais poderão ser utilizados como referência na interpretação dos resultados e, portanto, possibilitarão o aumento da precisão diagnóstica. Objetivos: Analisar o padrão de respostas de recém nascidos termos e prematuros para o PEATE, considerando os fatores gênero e orelha, e analisar a influência da maturação do sistema auditivo nas respostas eletrofisiológicas dessa população. Material e Métodos: Estudo de corte transversal e prospectivo. Foram avaliados 36 lactentes termos e 30 prematuros que permaneceram no alojamento conjunto, passaram no teste Emissões Otoacústicas Transientes, apresentaram curva timpanométrica tipo A e, com exceção da prematuridade, não apresentaram nenhum outro indicador de risco para perda auditiva. As avaliações ocorreram entre a alta hospitalar e o terceiro mês de vida, sendo constituídas por anamnese, medidas de imitância acústica e avaliação eletrofisiológica por meio do PEATE. Resultados: Na comparação das latências absolutas e interpicos das ondas I, III e V quanto às orelhas direita e esquerda foi observada diferença estatisticamente significante para o interpico I-III. Ao considerarmos o gênero masculino e feminino, não houve diferença significante para as latências absolutas e interpicos, tanto para os termos quanto para os prematuros. Na comparação das latências absolutas e interpicos entre prematuros e termos observou-se diferenças estatisticamente significantes para as latências absolutas das ondas I, III e V em 80 dB e da onda V em 60 e 20 dB. Verificou-se correlação inversa entre idade gestacional e latências absolutas. Foi observado que com o aumento da idade gestacional e consequentemente da maturação do sistema auditivo central ao nível do tronco encefálico ocorre uma diminuição contínua das latências absolutas de todas as ondas nos lactentes termos e prematuros. Essa diminuição está relacionada à progressiva mielinização das estruturas do sistema nervoso central. Conclusão: A maturação do sistema auditivo influencia as respostas do PEATE de neonatos e lactentes. Para evitar a interpretação equivocada dos resultados deve-se considerar a idade gestacional na análise do PEATE na população pediátrica / Abstract: Introduction: The Auditory Brainstem Response (ABR) is a very important objective test in early diagnosis of hearing impairment in newborns and infants due to the difficulty of obtaining reliable subjective auditory responses in this population. Normative data of the adult population's responses for this test are well established in the literature. However, the data for pediatric population, in particular concerning premature need to be further studied. The use of normality criteria for adults in the analysis of ABR in children can lead to misinterpretation of the results due to the influence of the auditory system's maturation. Nowadays, with the advance of newborn hearing screening and following the proposal of early detection of hearing impairment, there is an increased demand of very young children to complete the audiological diagnosis. Therefore, it is necessary to obtain normative data for term and premature newborns and infants for this test. These data can be used as a reference when interpreting the results and thus enable to increase the diagnostic accuracy. Objectives: To compare the ABR responses between full-term and premature children, considering gender and ear factors, and to analyze the influence of the auditory system maturation in the electrophysiological responses of this population. Methods: Transversal and prospective cohort study. We evaluated 36 full-term and 30 premature infants, who remained in the nursery, passed the Transient Otoacoustic Emissions test, presented tympanometric curve type A and, besides prematurity, did not have any other risk factors for hearing loss. The evaluations occurred between the discharge from the hospital and the third month of life, and consisted of history, acoustic immittance measures and evaluation of ABR. Results: Comparison of absolute and interpeak latencies of waves I, III and V on the right and left ears showed statistically significant difference in interpeak I-III, for which the values in the right ear were lower than in the left ear. In the comparison of absolute and interpeak latencies in relation to gender, there was no significant difference for the absolute and interpeak latencies for both full-term and premature infants, at all intensities evaluated. In the comparison of absolute and interpeak latencies between full-term and premature infants we observed statistically significant differences for absolute latencies of waves I, III and V at 80 dB and of wave V at 60 and 20 dB; for all intensities we observed longer latencies in premature. Inverse correlation was found between age and absolute latencies. It was observed that with gestational age increase, and hence of central auditory system's maturation at the brain stem, there is a continuous decrease of absolute latencies of all waves in terms and preterm infants. This decrease is related to the progressive myelination of the structures of central nervous system. Conclusions: Maturation of the auditory system influences the responses of the ABR of neonates and infants. To avoid misinterpretation of results, gestational age must be considered in the analysis of ABR in the pediatric population / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

A Desordem do Espectro da Neuropatia Auditiva (DENA) é uma patologia que vem sendo foco de pesquisas e relatos de caso devido sua complexidade. A compreensão da fisiopatologia da DENA ainda não é precisa, o que proporciona desafios na prática médica, principalmente em relação à conduta mais adequada a ser adotada nestes casos. Neste contexto, a compreensão da anatomia do nervo vestibulococlear por meio do estudo de imagens, contribui para o diagnóstico das deficiências auditivas. Entretanto, apesar dos avanços tecnológicos e científicos nesta área, ainda existem inúmeros questionamentos quanto à localização da alteração em casos de DENA. Diante disso, o objetivo deste estudo foi descrever a correlação do quadro clínico audiológico e exame por imagem em indivíduos com diagnóstico de Desordem do Espectro da Neuropatia Auditiva dissociado de doenças pré-existentes por meio de uma revisão sistemática. A revisão sistemática foi realizada nas bases de dados LILACS, PubMed, Scopus e Web of Science. Foram identificados 1.966 artigos com a estratégia de busca, sendo 50 selecionados para leitura na integra e 20 textos analisados para a discussão. A ressonância magnética (RM) é um exame extremamente útil para diagnósticos de alterações do nervo coclear, possibilitando diagnóstico diferencial e auxilia na topografia da lesão. A avaliação da imagem no plano sagital permite avaliar o diâmetro do nervo coclear (NC) e suas características. O diâmetro do NC está relacionado com doenças durante a gestação e perinatal, contudo, na prática clínica a avaliação do diâmetro dos nervos é subjetiva. Não há padronização universal de análise e de uso quotidiano de mensurar o nervo coclear em pacientes submetidos a RM, quando em investigação etiológica para perdas auditivas sensorioneural. / Auditory Neuropathy Spectrum Disorder (ANSD) is a pathology that has been the focus of research and case reports, owing to its complexity. The understanding of ANSD pathophysiology is not yet precise, thus, presenting challenges in medical practice, especially regarding the most appropriate conduct to be adopted in these cases. In this context, the understanding of the anatomy of the vestibulocochlear nerve through the study of images contributes to the diagnosis of auditory deficiencies. However, despite the technological and scientific advances in this area, many questions about the location of the alteration, in cases of ANSD, still remain. Thus, this study aimed at describing, through a systematic review, the correlation of the clinical condition and the imaging examination in individuals diagnosed with Auditory Neuropathy Spectrum Disorder, dissociated from pre-existing diseases. The systematic review was carried out in the LILACS, PubMed, Scopus and Web of Science databases, identifying 1966 articles with the search strategy, 50 being selected for integral reading and 20 texts analyzed for discussion. Magnetic resonance imaging (MRI) is an extremely useful exam for the diagnosis of cochlear nerve alterations, allowing a differential diagnosis and aiding in the topography of the lesion. The evaluation of the image in the sagittal plane allows the assessment of cochlear nerve (CN) diameter and its characteristics. CN diameter is related to diseases during gestation and perinatal period, however, in clinical practice the evaluation of the diameter of the nerves is subjective. There is no analysis universal standardization of daily use to measure the cochlear nerve in patients submitted to MRI, in terms of etiological investigation for sensorineural hearing loss.

Introdução: A principal questão que envolve o diagnóstico audiológico infantil é a determinação de procedimentos que configurem resultados confiáveis e objetivos, que possam ser utilizados na predição dos limiares auditivos por freqüência específica. Objetivo: Correlacionar os achados do potencial evocado auditivo de estado estável (PEAEE) com outros exames em crianças com perda auditiva neurossensorial. Método: Vinte e três crianças de ambos os gêneros e com idades entre 1 e 7 anos realizaram PEAEE, audiometria, potencial evocado auditivo de tronco encefálico (PEATE) click e tone burst e medida do reflexo acústico para aplicação da regra de predição do limiar auditivo a partir do reflexo acústico. Resultados: A correlação entre o PEAEE e audiometria variou de 0.70 a 0.93, para o PEATE click (2k e 4kHz) variou de 0.83 a 0.89, para o tone burst variou de 0.73 a 0.93. A concordância entre o PEAEE e a regra de predição do limiar auditivo foi considerada moderada. Conclusão: Houve correlação significativa entre o PEAEE e audiometria, assim como para o PEATE click (2k e 4kHz) e para o PEATE tone Burst. O reflexo acústico pode ser usado para acrescentar informações ao diagnóstico infantil / Introduction: The mainly question regarding pediatric audiolological diagnosis is determining procedures to configure reliable results and objectives, which can be use to predict hearing thresholds by frequencyspecifics. Objective: The purpose of this study was to study the correlation between auditory steady-state response (ASSR) with other exams in children with sensorineural hearing loss. Methods: Twenty-three children (age 1 to 7; mean, 3 yr) were submitted to ASSR, behavioral audiometry, click audiometry brain stem response (ABR), tone burst ABR, and predicting hearing level from the acoustic reflex. Results: the correlation between behavioral thresholds and ASSR was (0.70- 0.93), for the ABR tone burst it was (0.73 -0.93), for the ABR click it was (0.83-0.89) only at 2k and 4kHz. The conformity between the hearing loss degree the ASSR and acoustical reflex was moderate. Conclusion: There was significant correlation between ASSR, behavioral audiometry, click ABR only for 2k and 4kHz, tone burst ABR. The acoustic reflex can be use to add accuracy in the infant diagnosis

A habilidade de se preparar para futuros eventos é essencial para o comportamento. No presente trabalho, investigamos como diferentes formas de expectativa temporal podem modular o processamento de estímulos sensoriais. Por meio de 4 experimentos psicofísicos, sendo 2 com registro eletroencefalográfico (EEG) concomitante, nós estudamos o efeito da ação motora voluntária e da expectativa temporal em diferentes estágios do processamento sensorial. Nossos resultados sugerem que mecanismos ligados à preparação motora influenciam a percepção temporal das consequências desta ação. Além disso, nossos resultados mostraram que a atenção temporal pode modular estágios motores e sensoriais do processamento. Em conjunto, nossos resultados sugerem que expectativas temporais podem influenciar diferentes estágios do processamento principalmente por meio do controle de excitabilidade cortical de regiões do sistema nervoso central ligadas àquela tarefa. / The ability to anticipate future events is essential for behavior. On the present work, we investigated how different forms of temporal expectations can modulate stimuli processing. In four psychophysical experiments (two of them with EEG) we studied how voluntary action and temporal attention can influence processing at different stages. Our results suggest that mechanisms related to motor preparation can bias the temporal perception of the consequences of this action. Moreover, we found that temporal attention can modulate perceptual and motor stages of stimulus processing. Altogether, our results suggest that temporal expectations can influence different levels of target processing, mainly by controlling cortical excitability of task-relevant regions of the central nervous system.